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核心链霉亲和素的原核表达 被引量：1
1
作者 彭福中 陈雪岚 +1 位作者 徐锋 熊勇华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第23期286-289,共4页
以链霉菌(Streptomyces avidinii)的基因组为模板通过PCR扩增得到354bp的核心链霉亲和素基因Stv13,并将其与pET22b+、pGEX-4T-1连接构建大肠杆菌表达载体,与P43连接构建枯草芽孢杆菌分泌型表达载体。大肠杆菌表达的核心链霉亲和素Stv13... 以链霉菌(Streptomyces avidinii)的基因组为模板通过PCR扩增得到354bp的核心链霉亲和素基因Stv13,并将其与pET22b+、pGEX-4T-1连接构建大肠杆菌表达载体,与P43连接构建枯草芽孢杆菌分泌型表达载体。大肠杆菌表达的核心链霉亲和素Stv13大部分以包涵体的形式存在,而枯草芽孢杆菌则无核心链霉亲和素Stv13分泌表达。 展开更多
关键词 链霉亲和素 核心链霉亲和素 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
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核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达 被引量：2
2
作者 彭佳 王国华 +4 位作者 陈坤 宋晓国 张贺秋 周见远 何竞 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第4期1-3,共3页
目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠... 目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性。结果人工合成的354 bpDNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因。将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物。SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符。在非变性条件下纯化目的蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当。结论成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因。 展开更多
关键词 核心链霉亲和素 克隆 表达
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肺癌靶向通用载体hu3D3／cSA融合蛋白的制备和活性分析
3
作者 王勇军 颜江华 +3 位作者 王阶平 王臻 黄志平 陈彩霞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期114-118,共5页
目的制备一种新型的肺癌靶向通用载体hu3D3与核心链霉亲和素（core-streptavidin，cSA）的融合蛋白hu3D3／cSA，并鉴定其活性。方法PCR扩增cSA基因，克隆至质粒hu3D3／pET-22b（＋）而获得表达载体hu3D3／cSA／pET-22b（＋），并在E.col... 目的制备一种新型的肺癌靶向通用载体hu3D3与核心链霉亲和素（core-streptavidin，cSA）的融合蛋白hu3D3／cSA，并鉴定其活性。方法PCR扩增cSA基因，克隆至质粒hu3D3／pET-22b（＋）而获得表达载体hu3D3／cSA／pET-22b（＋），并在E.coli BL21（DE3）中表达，镍亲和层析柱纯化hu3D3／cSA融合蛋白，采用TEA缓冲液进行复性。SDS-PAGE和Westem blot鉴定融合蛋白四聚体的形成。FTTC标记hu3D3／cSA，通过荧光显微镜分析hu3D3组分的抗原反应性和特异性，流式细胞术比较hu3D3／cSA和hu3D3与靶点的结合能力；ELISA和Westem blot鉴定cSA组分结合生物素（biotin）的能力。结果获得序列正确的hu3D3／cSA／pET-22b（＋）重组子，融合基因在E.coli BL21（DE3）中主要以包涵体的形式表达。纯化复性后的融合蛋白能够形成四聚体复合物，保留了cSA结合生物素的活性，hu3D3组分能与肺癌细胞表面抗原结合，且结合能力与单体hu3D3相比有明显增强。结论成功制备了具有结合靶抗原和生物素活性的hu3D3／cSA融合蛋白，同时改善了hu3D3组分结合其靶点的亲合力（avidity）。因此，hu3D3／cSA可以作为一个通用的肺癌靶向载体，与多种生物素化的抗肿瘤药物或试剂联用，有望为多药物联合靶向治疗肺癌提供一种可行的方法。 展开更多
关键词 通用载体 单域抗体 核心链酶亲和素 肺癌
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核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化 被引量：1
4
作者 訾静 张月娟 万一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期485-488,共4页
目的构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性。方法通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体p PIC9K,重组表达质粒p PIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受... 目的构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性。方法通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体p PIC9K,重组表达质粒p PIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,甲醇诱导表达CSA蛋白。利用硫酸铵沉淀、2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶亲和层析法纯化CSA蛋白,紫外光谱测定法检测CSA蛋白与生物素的结合活性。结果构建的CSA基因工程菌能有效表达目的蛋白,经硫酸铵沉淀、亲和层析两步法纯化后得到纯度约95%的CSA重组蛋白,其具有与生物素结合的活性,活性为13.6 U/mg。结论利用毕赤酵母表达系统能够有效分泌表达CSA蛋白,该重组蛋白具有良好的生物学活性,为CSA发酵产品的大规模纯化提供了依据。 展开更多
关键词 核心链霉亲和素 毕赤酵母 表达 纯化 活性
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原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定
5
作者 许静 刁世勇 +2 位作者 张磊 徐洁 孟磊 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期18-22,共5页
利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌... 利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。 展开更多
关键词 链亲和素 单链抗体 融合蛋白 表达载体
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抗对硫磷基因工程新型抗体的制备及鉴定 被引量：2
6
作者 乔亚奇 潘家荣 +4 位作者 王磊 于海英 陈明 张维 张付凯 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期670-675,共6页
【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sa),并将该融合基因(scfv-sa)插入... 【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sa),并将该融合基因(scfv-sa)插入到表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,制备融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sa的表达,Ni+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力。【结果】结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中该融合基因能表达出分子量约为46kDa的融合蛋白,形成了四价结构域-四价聚合抗体。ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合,抗体效价在1:1×106以上,亲和常数为4.25×107L/mol。【结论】制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合,与单克隆抗体相比,抗原结合位点显著增加,ELISA检测灵敏度显著提高。 展开更多
关键词 对硫磷 链霉亲和素 四价抗体 原核表达
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抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达 被引量：1
7
作者 杨卫东 李彪 +2 位作者 朱承谟 杨冠珍 吴祥甫 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期333-336,共4页
制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠... 制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。 展开更多
关键词 癌胚抗原 单链抗体 链霉亲和素 基因表达
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抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因在昆虫细胞中的表达
8
作者 杨卫东 李彪 +2 位作者 朱承谟 杨冠珍 吴祥甫 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期11-13,24,共4页
将抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTa VH Cr3 CS。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分... 将抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTa VH Cr3 CS。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中都表达产生一条特异性蛋白质 ,其相对分子质量约为 75 0 0 0左右 ,以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH Cr3 CS蛋白。SDS PAGE和Westernblot分析结果表明 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在相对分子质量 75 0 0 0处可见表达条带 ,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合 ,RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH Cr3 CS蛋白能与CEA有较高的结合力。 展开更多
关键词 癌胚抗原 嵌合重链抗体 链霉亲和素 昆虫杆状病毒 表达
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核心链霉亲和素基因的克隆及表达
9
作者 李彪 杨卫东 +1 位作者 朱承谟 吴祥甫 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期194-196,200,共4页
文章采用PCR方法 ,以链霉亲和素菌 (Streptmycesavidinii)基因组DNA为模板 ,克隆出 384bp的DNA片段并以BamHI及XhoI位点装入PSK载体 ,经测序确证为核心链霉亲和素基因 (core strepavidin )。将该基因重组到质粒pET 2 4a ( + ) ,构建重... 文章采用PCR方法 ,以链霉亲和素菌 (Streptmycesavidinii)基因组DNA为模板 ,克隆出 384bp的DNA片段并以BamHI及XhoI位点装入PSK载体 ,经测序确证为核心链霉亲和素基因 (core strepavidin )。将该基因重组到质粒pET 2 4a ( + ) ,构建重组表达质粒pET 2 4a CS。转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导后得到高效表达。SDS PAGE图谱显示表达产物相对分子质量为15 0 0 0 ,与其基因编码蛋白的理论值相符。HRP标记的生物素作为抗体进行Westernblot,结果在 15 0 0 0处可见特异性条带 。 展开更多
关键词 克隆 表达 核心链霉亲和素基因
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