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肿瘤坏死因子-α和NF-κB在单核巨噬细胞促煤焦沥青烟气提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化中的作用 被引量:4
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作者 冯斐斐 张巧 +2 位作者 周凡静 吴拥军 吴逸明 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期38-43,共6页
目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NF.KB在人单核巨噬细胞系(THP-1)细胞促煤焦沥青烟气提取物(CTPE)诱导人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)细胞恶性转化中的作用。方法在第10代BEAS-2B和THP-1细胞共培养组中分别加入NF—KB的抑制... 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NF.KB在人单核巨噬细胞系(THP-1)细胞促煤焦沥青烟气提取物(CTPE)诱导人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)细胞恶性转化中的作用。方法在第10代BEAS-2B和THP-1细胞共培养组中分别加入NF—KB的抑制剂一吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)和TNF-α中和抗体,用细胞周期检测、染色体核型分析和软琼脂集落形成实验检测第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组BEAS-2B细胞的恶性转化情况,并与第10代、第20代共培养组进行比较;采用实时定量PCR和免疫印迹法(Westernblot)法检测各组BEAS.2B细胞中TNFR相关因子2(TRAF2)和细胞周期蛋白D1(CyclinDl)基因及其蛋白的表达。结果第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组BEAS.2B细胞中S期细胞的比例分别为(33.97%±2.16%)和(34.29%±2.04%),明显低于第20代共培养组(44.46%±0.83%%),差异有统计学意义(P〈0.05)。第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组100个细胞中出现异常染色体核型的细胞数量为40个和37个,而第20代共培养组为75个,差异有统计学意义(P〈0.05)。第20代PDTC组软琼脂集落形成数(15.17±2.48)个,集落形成率为(1.51‰±0.25‰),第20代TNF—α中和抗体组集落形成数为(13.33±2.58)个;集落形成率为(1.33‰±0.26‰),均明显低于20代共培养组[集落形成数:(172.33±12.09)个和集落形成率:(17.23‰±1.20‰)],差异有统计学意义(P〈0.05);PDTC组和TNF.d中和抗体组TRAF2和CyclinD1基因及其蛋白的表达明显低于第20代共培养组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论TNF.仅和NF-KB在THP-1细胞促进煤焦沥青烟气提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化的早期阶段发挥重要的作用,并可能通过影响TRAF2和CyelinD1的表达促使细胞恶性变发生。 展开更多
关键词 肺肿瘤 煤焦沥青烟气提取物 巨噬细胞 肿瘤坏死因子 NF-KB
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煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2及NQO1表达的影响 被引量:1
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作者 郝艳红 吴拥军 +1 位作者 秦利娟 吴逸明 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2010年第1期10-13,共4页
目的:研究煤焦沥青烟提取物对人肺支气管上皮细胞(BEAS_2B)Nrf2、NQO1mRNA及Nrf2蛋白表达的影响。方法:煤焦沥青烟提取物以0.00、1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml分别染毒BEAS_2B细胞24h后,提取细胞总RNA和总蛋白。采用RT_PCR检测Nrf2、N... 目的:研究煤焦沥青烟提取物对人肺支气管上皮细胞(BEAS_2B)Nrf2、NQO1mRNA及Nrf2蛋白表达的影响。方法:煤焦沥青烟提取物以0.00、1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml分别染毒BEAS_2B细胞24h后,提取细胞总RNA和总蛋白。采用RT_PCR检测Nrf2、NQO1mRNA的相对表达量,Westernblot测定Nrf2蛋白相对表达量。结果:染毒组BEAS_2B细胞Nrf2mRNA及蛋白相对表达量均低于对照组,差别均有统计学意义(P均<0.05),在1.25~5.00μg/ml浓度范围内,随着染毒浓度的增加,Nrf2mRNA和蛋白表达呈递增趋势,而当染毒浓度为10.00μg/ml时,Nrf2mRNA和蛋白表达量均有所减少(P<0.05)。随着染毒浓度的增加,NQO1基因表达水平升高,在5.00、10.00μg/ml时NQO1基因相对表达量比对照组高(P<0.05)。结论:在煤焦沥青烟提取物浓度较低时(1.25~5.00μg/ml),随染毒浓度增加Nrf2表达水平升高,可能上调NQO1基因的表达,增强BEAS_2B细胞氧化应激能力。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟 BEAS-2B NF-E2-related factor2 醌氧化还原酶1
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人单核细胞对煤焦沥青烟提取物诱导人永生化支气管上皮细胞c-Jun mRNA表达的影响
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作者 刘文佳 宋金燕 +6 位作者 杨维超 晋乐飞 王威 姚武 吴卫东 吴逸明 燕贞 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期786-789,共4页
[目的]探讨人单核细胞对煤焦沥青烟提取物(CTPE)处理人永生化支气管上皮细胞中c-Jun m RNA表达的影响。[方法]用3μg/m L CTPE刺激人永生化支气管上皮细胞(CTPE组),及人单核细胞共培养的人永生化支气管上皮细胞(CC组),设立二甲基亚砜对... [目的]探讨人单核细胞对煤焦沥青烟提取物(CTPE)处理人永生化支气管上皮细胞中c-Jun m RNA表达的影响。[方法]用3μg/m L CTPE刺激人永生化支气管上皮细胞(CTPE组),及人单核细胞共培养的人永生化支气管上皮细胞(CC组),设立二甲基亚砜对照组;分别收集各组1、5、10、15、20代细胞。将CC组第9代细胞分别常规培养至10代(CC10组)、15代(CC15组),加入100μg/m L肿瘤坏死因子-α中和抗体培养至15代(中和抗体组)。应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞中c-Jun m RNA的表达水平。[结果]15、20代CC组人永生化支气管上皮细胞c-Jun m RNA相对表达水平高于CTPE组和二甲基亚砜对照组(均P<0.05);中和抗体组c-Jun m RNA的相对表达水平高于CC10组,低于CC15组(均P<0.05)。[结论]人单核细胞可能通过肿瘤坏死因子-α调控CTPE诱导人永生化支气管上皮细胞c-Jun m RNA的表达。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟提取物 C-JUN MRNA 人单核细胞 肿瘤坏死因子-Α
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煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞环氧化酶-2mRNA表达的影响
4
作者 杨维超 逯洋 +4 位作者 李娟 晋乐飞 刘文佳 燕贞 吴卫东 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第4期491-493,共3页
目的:探讨煤焦沥青烟提取物(CTPE)对人支气管上皮细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响。方法:应用RT-PCR方法测定不同质量浓度(2、4、8 mg/L)CTPE作用不同时间(2、4、8 h)对人支气管上皮BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达水平影响。使用放线菌... 目的:探讨煤焦沥青烟提取物(CTPE)对人支气管上皮细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响。方法:应用RT-PCR方法测定不同质量浓度(2、4、8 mg/L)CTPE作用不同时间(2、4、8 h)对人支气管上皮BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达水平影响。使用放线菌素(Act)D(1 mg/L)作用于BEAS-2B细胞,观察其对2 mg/L CTPE作用30 min后的BEAS-2B细胞COX-2基因转录的影响。利用ZnSO4溶液刺激BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达,去除ZnSO4后,加入1 mg/L的Act D 30 min,检测CTPE作用不同时间点(0、2、4 h)的COX-2 mRNA表达的变化。结果:2、4、8 mg/L CTPE刺激均可以使BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达水平升高(F组间=71.750,F时间=93.120,F交互=17.300,P<0.001),2 mg/L是最佳剂量。用Act D(1 mg/L)预处理细胞30 min,可降低CTPE对COX-2 mRNA表达的诱导作用(FAct D=174.203,FCTPE=260.312,F交互=188.521,P<0.001)。使用ZnSO4刺激,然后使用Act D终止COX-2 mRNA合成后,不同时间点,CTPE组和对照组COX-2 mRNA的表达差异有统计学意义(F组间=365.700,F时间=37.780,F交互=6.240,P<0.001)。结论:CTPE可以通过转录水平和转录后水平诱导人支气管上皮细胞COX-2 mRNA的表达。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟提取物 人支气管上皮细胞 环氧化酶-2
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煤焦沥青烟提取物致人支气管上皮细胞BEAS-2B染色体不稳定性研究 被引量:5
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作者 李智涛 冯艳铭 +5 位作者 王威 王丽霞 赵勇 祝寒松 吴卫东 吴逸明 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期129-136,共8页
目的建立煤焦沥青烟提取物诱导的人支气管上皮细胞BEAS-2B株的恶化模型;观察不同时期细胞的染色体不稳定性与细胞恶性转化之间的关系。方法用四唑蓝(MTT)法测定煤焦沥青烟提取物的细胞毒性,以煤焦沥青烟提取物诱导并观察BEAS-2B细胞传... 目的建立煤焦沥青烟提取物诱导的人支气管上皮细胞BEAS-2B株的恶化模型;观察不同时期细胞的染色体不稳定性与细胞恶性转化之间的关系。方法用四唑蓝(MTT)法测定煤焦沥青烟提取物的细胞毒性,以煤焦沥青烟提取物诱导并观察BEAS-2B细胞传代转化过程中的形态学改变;软琼脂克隆形成实验检测细胞恶性转化能力,流式细胞术检测细胞增殖周期变化,核型分析观察细胞染色体不稳定性。结果煤焦沥青烟提取物的半数致死浓度(LC50)为8.64 mg/L。以诱导剂量(2.0 mg/L)诱导细胞转化,经过30代传代培养,细胞形态发生恶性变化。第30代时,诱导组细胞即能在软琼脂上形成阳性克隆,细胞克隆形成率为21.50‰,明显高于正常对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测诱导组G1期细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加。煤焦沥青诱导组从第10代开始细胞二倍体核型的比例明显下降,非整倍体细胞的比例明显增加。随着传代次数增加,染色体不稳定性更明显。细胞克隆形成率和染色体变异的细胞百分比两者呈正相关。结论煤焦沥青烟提取物可以在体外诱导BEAS-2B细胞产生染色体不稳定性并发生恶化。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟提取物 细胞恶性转化 染色体不稳定
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煤焦沥青烟提取物对THP-1细胞炎性因子表达影响 被引量:3
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作者 宋金燕 冯斐斐 +5 位作者 李娟 王威 姚武 吴卫东 吴逸明 燕贞 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1624-1626,共3页
目的探讨煤焦沥青烟提取物(CTPE)对人单核细胞株(THP-1)炎性因子表达的影响。方法用2μg/mL CTPE处理THP-1细胞24、48、72 h,并设立阴性对照组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,real-time PCR检测各组细胞中白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL... 目的探讨煤焦沥青烟提取物(CTPE)对人单核细胞株(THP-1)炎性因子表达的影响。方法用2μg/mL CTPE处理THP-1细胞24、48、72 h,并设立阴性对照组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,real-time PCR检测各组细胞中白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养上清中TNF-α含量。结果染毒CTPE 24 h时,染毒组IL-1βmRNA表达水平为(2.22±0.33),均高于阴性对照组和溶剂对照组(P<0.05);染毒CTPE 72 h时,染毒组IL-8和TNF-αmRNA表达水平分别为(4.64±3.03)、(3.15±0.22),均高于阴性对照组和溶剂对照组(P<0.05);与对照组比较,染毒72 h时染毒组细胞培养上清中TNF-α含量[(538.44±53.88)pg/mL]升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CTPE刺激单核细胞后可使TNF-α、IL-1β、IL-8表达水平增加。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟提取物(CTPE) 肿瘤坏死因子-α(TNF—α) 白介素1β(IL-1β) 白介素8(IL-8) 单核细胞
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RNAi沉默Nrf2基因增强煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞的毒性作用 被引量:3
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作者 曹会敏 倪静 +2 位作者 玉崧成 冯斐斐 吴拥军 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第1期25-29,共5页
目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Nrf2基因对煤焦沥青烟提取物(CTPE)致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)发生恶性转化过程中的作用,为肺癌的发生机制提供线索。方法:应用RNAi技术建立Nrf2基因沉默的BEAS-2B细胞稳定表达株;设立二甲基亚砜(DMSO... 目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Nrf2基因对煤焦沥青烟提取物(CTPE)致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)发生恶性转化过程中的作用,为肺癌的发生机制提供线索。方法:应用RNAi技术建立Nrf2基因沉默的BEAS-2B细胞稳定表达株;设立二甲基亚砜(DMSO)阴性对照组、苯并(a)芘[B(a)P]阳性对照组、CTPE组、RNAi组;采用软琼脂克隆形成实验分析细胞恶变情况;采用RT-PCR法检测Nrf2和NQO1 mRNA的表达;Western blot法检测Nrf2和NQO1蛋白的表达。结果:20代以后,B(a)P组、CTPE组和RNAi组的克隆形成率高于DMSO组(P<0.001);而RNAi组的克隆形成率高于B(a)P组和CTPE组(P<0.001)。B(a)P组和CTPE组Nrf2 mRNA和蛋白表达水平均较DMSO组增加(P<0.001),B(a)P组、CTPE组和RNAi组NQO1 mRNA和蛋白水平均较DMSO组上调,RNAi组的表达量低于B(a)P组和CTPE组(P<0.001);诱导后(CTPE组)第10代、20代、30代细胞中Nrf2与NQO1的蛋白表达呈正相关(r=0.913,P<0.001)。结论:Nrf2可能通过上调NQO1的表达对抗CTPE对BEAS-2B细胞的毒性作用从而抑制细胞恶化;Nrf2和NQO1在BEAS-2B细胞癌前病变阶段已呈现较明显表达,这可能有助于接触CTPE高危人群罹患肺癌的预警及筛查。 展开更多
关键词 RNAI 煤焦沥青烟提取物 BEAS-2B细胞 NRF2 NQO1
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煤焦沥青烟提取物对人支气管上皮细胞的脂质过氧化作用 被引量:2
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作者 洪丽娟 李娟 +3 位作者 杨维超 刘文佳 姚武 燕贞 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2014年第3期223-225,共3页
[目的]研究煤焦沥青烟提取物(CTPE)刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的脂质过氧化作用。[方法]用不同浓度(0、1、3μg/mL)的CTPE刺激BEAS-2B细胞4 h后,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平。刺激BEAS-2B细胞8 h后,用丙二醛(MDA)试剂盒和超... [目的]研究煤焦沥青烟提取物(CTPE)刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的脂质过氧化作用。[方法]用不同浓度(0、1、3μg/mL)的CTPE刺激BEAS-2B细胞4 h后,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平。刺激BEAS-2B细胞8 h后,用丙二醛(MDA)试剂盒和超氧化物歧化酶(SOD)活力测定试剂盒分别检测细胞裂解液中的MDA含量和SOD活力。[结果]与对照组相比,CTPE(1、3μg/mL)作用细胞4 h后,ROS含量均显著升高(P<0.05)。1、3μg/mL CTPE刺激细胞8 h后,MDA含量均升高,SOD活力均明显降低(P<0.05);MDA/SOD值升高(P<0.05)。[结论]煤焦沥青烟提取物刺激BEAS-2B细胞后ROS水平和MDA含量增高,SOD活力降低,发生了脂质过氧化作用。 展开更多
关键词 煤焦沥青烟提取物 脂质过氧化 活性氧 丙二醛 超氧化物歧化酶 人支气管上皮细胞
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