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油菜PEP基因的克隆及PEP反义基因的构建 被引量：14
1
作者 陈锦清 黄锐之 +2 位作者 郎春秀 胡张华 刘智宏 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期365-367,共3页
丙酮酸羧化酶（ Ｐ Ｅ Ｐ）是控制油菜蛋白质／油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 Ｐ Ｃ Ｒ 法扩增出了 Ｐ Ｅ Ｐ 基因片段，并将其 克隆到 ｐ Ｂ Ｓ Ｓ Ｋ＋ 的 Ｓｍ ａ Ⅰ位点⒚ Ｄ Ｎ Ａ 序列分析表 明克隆片段 的长度为 ５３... 丙酮酸羧化酶（ Ｐ Ｅ Ｐ）是控制油菜蛋白质／油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 Ｐ Ｃ Ｒ 法扩增出了 Ｐ Ｅ Ｐ 基因片段，并将其 克隆到 ｐ Ｂ Ｓ Ｓ Ｋ＋ 的 Ｓｍ ａ Ⅰ位点⒚ Ｄ Ｎ Ａ 序列分析表 明克隆片段 的长度为 ５３０ｂｐ，其序列与报道序列相同⒚将该 Ｐ Ｅ Ｐ基因 片段反向插入 ｐ Ｉ Ｇ１２１ 质粒，构建了带 Ｐ Ｅ Ｐ 反义基因的超级双元载体并进行油菜的转化。 展开更多
关键词 丙酮酸羧化酶 反义基因 基因克隆 油菜
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一种PCR产物克隆的新方法——T-A克隆法 被引量：23
2
作者 李新波 赵小松 +2 位作者 田德志 朱依纯 姚泰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期187-189,共3页
介绍一种ＰＣＲ产物克隆的新方法———ＴＡ克隆法．用改良碱裂解法抽提ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒，用ＥｃｏＲⅤ将ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒切成平端，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｄＴＴＰ制备ｐＢｌｕｅｓｃ... 介绍一种ＰＣＲ产物克隆的新方法———ＴＡ克隆法．用改良碱裂解法抽提ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒，用ＥｃｏＲⅤ将ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒切成平端，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｄＴＴＰ制备ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）ＴＡ载体．将βａｃｔｉｎｃＤＮＡ片段克隆入自制的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）ＴＡ载体，经ＥｃｏＲⅠ及ＨｉｎｄⅢ双酶切得到与设定长度一致的βａｃｔｉｎｃＤＮＡ片段． 展开更多
关键词 T-A克隆载体 PCR产物 T-A克隆法
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用绿色荧光蛋白基因作为筛选标记的新型克隆载体的构建 被引量：8
3
作者 李寿东 齐义鹏 +1 位作者 胡建红 林宏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期323-325,共3页
用绿色荧光蛋白基因作为筛选标记的新型克隆载体的构建李寿东齐义鹏胡建红林宏（武汉大学病毒研究所武汉４３００７２）目前通常使用的质粒克隆载体，如ｐＵＣ系列、ｐＧＥＭ系列和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ等，都是以ｌａｃＺ’作为筛... 用绿色荧光蛋白基因作为筛选标记的新型克隆载体的构建李寿东齐义鹏胡建红林宏（武汉大学病毒研究所武汉４３００７２）目前通常使用的质粒克隆载体，如ｐＵＣ系列、ｐＧＥＭ系列和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ等，都是以ｌａｃＺ’作为筛选标记的插入失活型载体。ｌａｃＺ’... 展开更多
关键词 载体 克隆载体 绿色荧光蛋白 基因 筛选标记
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杂色云芝漆酶基因(Lcc1)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量：12
4
作者 郭梅 蒲军 +2 位作者 杜连祥 路福平 白东清 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期221-226,共6页
以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合... 以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上,经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母工程菌株。 展开更多
关键词 甲醇毕赤酵母 杂色云芝 酶基因 cDNA片段 RT-PCR PICHIA E1基因 表达质粒 甲醇酵母 电穿孔法 阳性克隆 工程菌株 摇瓶培养 白腐菌 RNA 线性化 染色体 酶活力 漆酶 载体
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 被引量：9
5
作者 诸戌娴 曹广力 +3 位作者 薛仁宇 周文林 刘炜彬 贡成良 《科技通报》 2007年第6期828-834,共7页
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA... 家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝胶蛋白基因 启动子 克隆 表达载体
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牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建 被引量：12
6
作者 任磊 王雁 +1 位作者 周琳 彭镇华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期939-944,共6页
以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码... 以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码区和1个长度为732bp编码243个氨基酸的开放阅读框。序列比对和系统进化分析表明,PsMADS5与葡萄的亲缘关系最近,相似性达83%以上,属于MADS家族SEP亚家族。相对荧光定量PCR分析表明,PsMADS5在花瓣中的表达量最高,其次是心皮,再次是萼片,在雄蕊中表达量最低。成功构建正义和反义表达载体,为牡丹花型改良和品种创新提供基础。 展开更多
关键词 牡丹 基因克隆 表达 载体构建
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T载体克隆在病毒样颗粒表达载体构建中的应用 被引量：12
7
作者 李金明 王忠芳 +2 位作者 王露楠 彭建明 邓巍 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期786-788,共3页
目的提高带某些限制酶切位点聚合酶链反应(PCR)扩增产物克隆入表达载体的效率。方法将带HindⅢ酶切位点的PCR扩增产物与T载体连接,转化BL21DE3EColi,提取质粒后,用HindⅢ酶切,电泳分离并提取纯化的目的片段。然后,与经过相同的限制性酶... 目的提高带某些限制酶切位点聚合酶链反应(PCR)扩增产物克隆入表达载体的效率。方法将带HindⅢ酶切位点的PCR扩增产物与T载体连接,转化BL21DE3EColi,提取质粒后,用HindⅢ酶切,电泳分离并提取纯化的目的片段。然后,与经过相同的限制性酶酶切的表达载体pNCCL1连接。结果经T载体克隆酶切构建的内含严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核酸的病毒样颗粒表达载体,方法简单快速,每次均可获得成功。而采用直接酶切扩增产物的构建方法,未获得成功构建的表达载体。结论T载体克隆可用于对直接酶切效果不好(如HindⅢ)的PCR扩增片段的表达载体的连接构建,方法简便高效。 展开更多
关键词 T载体克隆 病毒样颗粒 表达载体 直接酶切 冠状病毒
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栗疫病菌泛素结合酶基因(CpUBC)全长cDNA的电子克隆(英文) 被引量：9
8
作者 冯友军 张会敏 +1 位作者 姜明国 兰秀万 《生物信息学》 2004年第2期5-9,共5页
电子克隆是一类近来发展起来的,通过有限的部分序列信息探针在Genbank数据库中比对,进而获得全长cDNA的真核基因克隆策略,而且该方法获得的全cDNAD克隆能为RT-PCR所验证。本研究首次应用电子克隆技术从粟疫病菌中克隆到一个1023个核苷... 电子克隆是一类近来发展起来的,通过有限的部分序列信息探针在Genbank数据库中比对,进而获得全长cDNA的真核基因克隆策略,而且该方法获得的全cDNAD克隆能为RT-PCR所验证。本研究首次应用电子克隆技术从粟疫病菌中克隆到一个1023个核苷酸长度的泛素结合酶基因(CpUBC)的全长cDNA。由NCBI提供的免费ORF Finder软件推导的该基因的开放阅读框(ORF)全长444个核苷酸,且起始密码子ATC及终止密码子TAG分别位于该泛素结合酶基因(cpUBC)cDNA的第245个核苷酸和第686个核苷酸。序列分析表明该基因(CpUBC)与稻瘟菌(Maganaporthe grises)、粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)及绿僵菌(Metarhizium anjspliae)在核苷酸水平的同源性分别为80.0％、73.2％和64.95;在氨基酸水平上的相似性分别为93.8％、72.2％和66.9％。 展开更多
关键词 电子克隆 泛素结合酶 BLAST vector NTI
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DREB2A基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量：10
9
作者 李杰 朱延明 +2 位作者 吴迪 杨爱馥 柏锡 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期36-40,共5页
研究提取盐处理的拟南芥植株叶片总RNA,用DREB2A基因特异引物通过RT-PCR扩增出1050bp的片段,并将该片段克隆至pUC18上。序列分析结果表明,该克隆序列与GenBank上的DREB2A基因序列同源性达100%。进一步将DREB2A基因分别克隆至植物表达载... 研究提取盐处理的拟南芥植株叶片总RNA,用DREB2A基因特异引物通过RT-PCR扩增出1050bp的片段,并将该片段克隆至pUC18上。序列分析结果表明,该克隆序列与GenBank上的DREB2A基因序列同源性达100%。进一步将DREB2A基因分别克隆至植物表达载体卡盒pCCE12和pCC29A上,构建了分别由E12启动子、rd29A启动子调控的DREB2A基因植物表达载体pCDRE12和pCDR29A。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为农杆菌介导的DREB2A基因对植物的遗传转化奠定基础。 展开更多
关键词 DREB2A基因 基因克隆 载体构建
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油桐桐酸合成酶基因克隆和植物表达载体构建 被引量：9
10
作者 汪阳东 李元 李鹏 《浙江林业科技》 北大核心 2007年第2期1-5,共5页
α-桐酸合成酶是控制亚油酸向α-桐酸(18:3Δ9cis,11trans,13trans)转化的关键酶。本研究以发育中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α-桐酸合成酶基因FADX的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,... α-桐酸合成酶是控制亚油酸向α-桐酸(18:3Δ9cis,11trans,13trans)转化的关键酶。本研究以发育中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α-桐酸合成酶基因FADX的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,克隆得到FADX基因全长cDNA,长度为1221bp。通过生物信息学分析结果表明,该序列5’端和3’端非编码区序列长度分别为13bp和47bp,含有一个开放阅读框(14～1174bp),编码386个氨基酸,含有典型的脂肪酸脱氢酶结构域。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121fadx。 展开更多
关键词 油桐 FADX基因 克隆 载体构建
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鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达 被引量：5
11
作者 王君伟 李勐 +3 位作者 马波 布日额 刘宝全 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1... 本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1株 NS1基因全长 1884 bp,编码 6 2 7个氨基酸 ,与国外已发表的 B株核苷酸序列同源性为 98.15 %。同时将该目的基因正向插入到 GST融合蛋白原核表达载体 PGEX- 6 P- 1的 Bam H 多克隆位点 ,构建了 GPV NS1的原核表达载体 ,成功的表达了约 97KD的 NS1融合蛋白。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 NS1基因 基因克隆 基因表达 原核表达 小鹅瘟
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百合无症病毒CP基因的克隆及其RNAi载体的构建 被引量：9
12
作者 徐品三 尹雅蕾 李玉花 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期885-890,共6页
以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出了876bp的LSV CP基因,经Blast比对发现该片段与GenBank上发表的LSVCP基因序列高度同源,同源率98%,由该序列推导出的氨基酸序列相似性达到98%。应... 以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出了876bp的LSV CP基因,经Blast比对发现该片段与GenBank上发表的LSVCP基因序列高度同源,同源率98%,由该序列推导出的氨基酸序列相似性达到98%。应用Gateway技术将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201,并进行序列测定,再通过LR反应将目的片段插入到RNAi植物表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了适合农杆菌介导的百合转化的RNAi载体。 展开更多
关键词 百合 无症病毒 CP基因 克隆载体 RNA干扰 GATEWAY技术
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紫花苜蓿柠檬酸合成酶基因的克隆及对烟草的转化 被引量：10
13
作者 靳苗苗 杨青川 +2 位作者 金洪 康俊梅 龙瑞才 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期550-555,共6页
柠檬酸合成酶是调节植物体内有机酸的活性酶之一,增加植物体内的柠檬酸可以提高植物对土壤中磷的吸收以及抗铝毒性。通过从紫花苜蓿(Medicago sativaL.)中克隆柠檬酸合成酶基因(MsCS),以期获得该基因全长,并为将来研究紫花苜蓿耐铝性以... 柠檬酸合成酶是调节植物体内有机酸的活性酶之一,增加植物体内的柠檬酸可以提高植物对土壤中磷的吸收以及抗铝毒性。通过从紫花苜蓿(Medicago sativaL.)中克隆柠檬酸合成酶基因(MsCS),以期获得该基因全长,并为将来研究紫花苜蓿耐铝性以及对磷的吸收方向提供基础。首先利用cDNA末端快速扩增方法(RACE),克隆获得MsCS的cDNA全序列,然后利用pBI121构建植物超表达载体pBI-MsCS,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacumL.)。结果显示:该基因序列全长为2031 bp,开放阅读框1551 bp,编码517个氨基酸,与其他物种的柠檬酸合成酶具有高度的同源性。获得17株卡那抗性植株。经PCR检测有6株为阳性植株,初步表明该基因已整合到烟草的基因组中。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 柠檬酸合成酶基因 基因克隆 载体构建 转化
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蓖麻耐盐基因HKT的克隆及表达载体构建 被引量：8
14
作者 丛娇娇 王晓宇 +3 位作者 李平 李惠根 张丽雪 张继星 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第14期4648-4657,共10页
为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码53... 为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,推测分子量为59.74 kD,等电点(pI)为9.32。多重序列比对和系统发育树分析表明该蛋白与木薯和橡胶树的同源性最高,分别为69.13%和67.03%,且与HKT1蛋白家族成员同源性较高,为S-G-G-G类型蛋白,推测该蛋白为HKT1类蛋白。二级结构预测蓖麻HKT蛋白有9个跨膜结构域,主要定位于内质网上,是典型的跨膜蛋白。根据蓖麻HKT基因序列设计带有Bam HⅠ和PstⅠ酶切位点的引物扩增出全长基因,用限制性内切酶Bam HⅠ和PstⅠ进行双酶切后与表达载体pCHF-3300连接。本研究成功构建了蓖麻HKT基因的表达载体,为进一步研究该基因的转化及功能验证提供参考。 展开更多
关键词 蓖麻 高亲和钾离子转运蛋白 基因克隆 生物信息学分析 表达载体
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花生Δ12脂肪酸脱氢酶基因FAD2的克隆及反义表达载体的构建 被引量：4
15
作者 谢金喜 蔡宁波 +1 位作者 石新国 庄伟建 《花生学报》 2007年第1期1-6,12,共7页
从花生的幼嫩叶片中提取总DNA,应用PCR方法分离到了两个FAD2基因片段,分别命名为FAD2-1和FAD2-2,将反向的FAD2-1和FAD2-2片段分别与所克隆的大豆油体蛋白基因启动子片段oleosin-a与oleosin-b相连,在中间表达载体pSPROK中构建了三个带T-... 从花生的幼嫩叶片中提取总DNA,应用PCR方法分离到了两个FAD2基因片段,分别命名为FAD2-1和FAD2-2,将反向的FAD2-1和FAD2-2片段分别与所克隆的大豆油体蛋白基因启动子片段oleosin-a与oleosin-b相连,在中间表达载体pSPROK中构建了三个带T-nos的融合基因,进而把融合基因构建到植物表达载体pCAMBIA1300中,酶切鉴定后进行测序,结果表明,所构建的三个植物表达载体均分别带有Oleosin启动子和反义FAD2基因序列,FAD2-2的长度为593bps,与引用序列的同源性达到97%,包含一个起始密码子;FAD2-1的长度为1175bp,与引用序列的同源性达到99%,包含一个起始密码子与一个终止密码子。将构建好的植物表达载体已经转化农杆菌LBA4404并用于侵染花生外植体。 展开更多
关键词 △12脂肪酸脱氢酶基因 克隆 反义RNA 载体构建
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陆地棉小GTP结合蛋白基因GhROP3的克隆、表达及VIGS载体的构建 被引量：8
16
作者 胡子曜 代培红 +7 位作者 刘超 玛迪娜·木拉提 王倩 吾尕力汗·阿不都维力 赵燚 孙玲 徐诗佳 李月 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期106-113,共8页
通过对陆地棉小GTP结合蛋白(small GTP-binding protein)基因GhROP3在不同逆境胁迫下的响应表达模式进行研究分析,为棉花抗逆相关基因克隆及棉花抗逆分子机制研究奠定基础。利用同源克隆的方法克隆GhROP3,利用生物信息学的方法分析该基... 通过对陆地棉小GTP结合蛋白(small GTP-binding protein)基因GhROP3在不同逆境胁迫下的响应表达模式进行研究分析,为棉花抗逆相关基因克隆及棉花抗逆分子机制研究奠定基础。利用同源克隆的方法克隆GhROP3,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法分析GhROP3在不同逆境诱导条件下的表达模式及组织表达特异性。同时构建了该基因的VIGS沉默载体,并利用农杆菌介导法转化棉花,qRT-PCR检测沉默效率。结果表明,以陆地棉的cDNA为模板克隆得到GhROP3,其开放阅读框(ORF)为591 bp,编码一个含196个氨基酸的碱性亲水性蛋白,相对分子质量为21.75 kD。qRT-PCR分析结果表明,GhROP3在棉花幼苗根、茎、叶、子叶和下胚轴中均有表达,且在茎中表达水平最高;GhROP3对高盐、干旱、低温和棉花黄萎病菌处理都有一定程度的响应。构建该基因的VIGS沉默载体转化棉花,qRT-PCR检测GhROP3在棉花的叶片和根部沉默,证明VIGS沉默载体构建成功并可以在植物体内正常工作。GhROP3可能在陆地棉的抗逆境胁迫反应中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 棉花 GhROP3 基因克隆 表达分析 载体构建
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甘肃红豆草BAN基因克隆与双标记选择表达载体构建 被引量：8
17
作者 陈春艳 马晖玲 +4 位作者 董文科 杨江伟 李玉珠 姜寒玉 冯玉兰 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1880-1888,共9页
为探讨编码花青素还原酶BAN基因的功能及其与缩合单宁合成的关系,根据BAN基因序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得甘肃红豆草BAN的相似基因;利用生物信息学相关软件分析,预测其c DNA序列编码的蛋白质结构和功能;采用Real-time PCR法检... 为探讨编码花青素还原酶BAN基因的功能及其与缩合单宁合成的关系,根据BAN基因序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得甘肃红豆草BAN的相似基因;利用生物信息学相关软件分析,预测其c DNA序列编码的蛋白质结构和功能;采用Real-time PCR法检测该基因在甘肃红豆草各组织中的表达;构建含有BAN基因的双标记选择载体。结果表明,克隆的BAN基因与报道的BAN基因序列相似性达到99.41%,其ORF长为1 020 bp,可编码339个氨基酸残基,具有花青素还原酶保守结构域和重要功能位点;三级结构预测显示,预测模型与花青素还原酶单体结构(C2RH8A)相似,属于短链脱氢/还原酶超家族成员,表明其可能具有花青素还原酶的功能。BAN基因在各组织中均表达,其表达量依次为荚果、叶、蕾、花、茎。以此为靶序列,构建携带抗除草剂bar和绿色荧光蛋白GFP基因的双标记选择植物表达载体,将为缩合单宁合成、代谢的进一步研究及抗除草剂和抗臌胀病牧草新品种的培育奠定基础。 展开更多
关键词 甘肃红豆草 基因克隆 表达分析 载体构建
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黑曲霉F246的phyA基因克隆及其新型表达载体构建 被引量：5
18
作者 霍丹群 范守城 +2 位作者 张云茹 侯长军 范首君 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期60-64,74,共6页
利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入p... 利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入pMD18T质粒,经DNA测序和氨基酸分析、鉴定正确后,亚克隆入乳酸菌表达质粒pMG36e,构建工程菌LactobacillusMG1363 pMG36e phyA。重组乳酸菌表达载体pMG36e-phyA的构建,可望获得大量、高活性植酸酶,为研制多功能微生态制剂奠定基础。 展开更多
关键词 植酸酶 克隆 表达载体 乳酸菌
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竹子基因工程研究进展 被引量：7
19
作者 毕毓芳 蔡函江 +1 位作者 王安可 王玉魁 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3390-3399,共10页
竹类植物生长快、周期短、用途广泛,而我国是世界上竹类资源最丰富,竹林面积最大,产量最大的国家,开展竹类育种研究对我国经济的发展、生态效益提升和生态环境保护等方面具有重要作用。但竹子开花周期比较长,不易获得种子,杂交育种难度... 竹类植物生长快、周期短、用途广泛,而我国是世界上竹类资源最丰富,竹林面积最大,产量最大的国家,开展竹类育种研究对我国经济的发展、生态效益提升和生态环境保护等方面具有重要作用。但竹子开花周期比较长,不易获得种子,杂交育种难度非常大,如何利用基因工程手段进行竹子遗传改良显得非常迫切。本文主要综述了近年来竹子基因工程如相关基因的克隆、表达、载体构建及遗传转化方面的研究进展,并对今后的发展前景进行展望。 展开更多
关键词 竹类植物 克隆 载体构建 表达 遗传转化
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栽培草莓果实中特异表达的bHLH78基因的克隆及过量表达载体构建 被引量：7
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作者 豆玉娟 曹飞 +3 位作者 马跃 李贺 刘月学 张志宏 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期456-465,共10页
根据二倍体野生森林草莓(Fragaria vesca)预测的bHLH78-like基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从八倍体栽培凤梨草莓(Fragaria×ananassa)品种‘幸香’果实中克隆出FabHLH78基因全长CDS。测序和分析结果表明,FabHLH78基因的CD... 根据二倍体野生森林草莓(Fragaria vesca)预测的bHLH78-like基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从八倍体栽培凤梨草莓(Fragaria×ananassa)品种‘幸香’果实中克隆出FabHLH78基因全长CDS。测序和分析结果表明,FabHLH78基因的CDS全长1 653 bp,编码550个氨基酸残基,在线软件Compute pI/Mw分析编码的蛋白质理论分子量约为59.6 kD、等电点(pI)6.17,经软件DNAMAN分析,核酸序列和氨基酸序列与二倍体草莓FvbHLH78-like基因的一致性分别为98.31%和96.55%。利用半定量PCR检测FabHLH78基因在草莓根、匍匐茎、叶、果实中的表达情况,发现其只在果实中特异表达;实时定量RT-PCR结果显示随着果实发育FabHLH78基因表达量逐渐增加。FabHLH78全长CDS被整合到植物表达载体pRI101-AN上,构建出FabHLH78基因的过量表达载体pRI101-bHLH78,为进一步验证FabHLH78基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 bHLH78 草莓 基因克隆 实时定量PCR 过量表达载体
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