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肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较 被引量：1
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作者 易濒 常宏 曹毅 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期520-526,共7页
该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法。比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(OligodT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合... 该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法。比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(OligodT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LAtaq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响。新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高。RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要。部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆。 展开更多
关键词 肝癌组织及细胞系 总RNA抽提 反转录 Q-RT-PCR 长片段基因克隆
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