期刊文献+
共找到14篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
甘菊BADH基因cDNA的克隆及在盐胁迫下的表达 被引量:16
1
作者 刘振林 曹华雯 +2 位作者 夏新莉 尹伟伦 戴思兰 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-7,共7页
利用PCR、RT-PCR和PCR-RACE技术,从菊科植物甘菊(Dendranthema lavandulifolium)中克隆到2个甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的同源基因,分别命名为D lBADH1和D lBADH2,GenBank登录号分别为DQ011151和DQ011152... 利用PCR、RT-PCR和PCR-RACE技术,从菊科植物甘菊(Dendranthema lavandulifolium)中克隆到2个甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的同源基因,分别命名为D lBADH1和D lBADH2,GenBank登录号分别为DQ011151和DQ011152。D lBADH1的cDNA全长1821 bp,其开放阅读框编码503个氨基酸的蛋白质;D lBADH2全长1918 bp,编码506个氨基酸的蛋白质。两个基因核苷酸序列的同源性为97%,推导的氨基酸序列的同源性为98%。与已发表的其它植物BADH基因氨基酸序列的同源性在64%以上。在推导的氨基酸序列中,均含有醛脱氢酶所具有的高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。在推导的氨基酸序列的系统关系中,甘菊位于其它双子叶植物和单子叶植物之间,与其植物分类的系统关系相吻合。RT-PCR-Southern半定量表达分析表明,甘菊BADH基因家族中存在表达受盐诱导的成员。 展开更多
关键词 甜菜碱醛脱氢酶基因 甘菊 cdna克隆 盐胁迫表达
下载PDF
丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义 被引量:5
2
作者 史宣玲 曹凤 +3 位作者 季阳 杜勇 侯利华 王海涛 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2001年第1期1-3,共3页
目的 对丙型肝炎病毒 (HCV)包膜区E2基因进行克隆与表达 ,并将纯化的E2蛋白用于对HCV感染者血清中E2抗体的检测。方法 首先从HCV感染者血清中经随机引物反转录和聚合酶链反应 (PCR)获得E2区基因片段 ,然后克隆入原核表达系统pQE 30中... 目的 对丙型肝炎病毒 (HCV)包膜区E2基因进行克隆与表达 ,并将纯化的E2蛋白用于对HCV感染者血清中E2抗体的检测。方法 首先从HCV感染者血清中经随机引物反转录和聚合酶链反应 (PCR)获得E2区基因片段 ,然后克隆入原核表达系统pQE 30中进行蛋白表达、纯化 ,并检测表达蛋白的抗原性。结果 获得一段具有正确读码框架的E2区基因 ,全长 984bp ,表达蛋白分子量为 38kD。经与HCV感染者血清进行ELISA检测 ,证明其具有一定的抗原性。结论 本实验为研究HCV外膜蛋白的基本特点。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 克隆 cdna 表达 纯化 蛋白 抗体 检测 丙型肝炎
下载PDF
雌、雄驯鹿鹿茸顶端表皮组织Morf4l1基因cDNA克隆与表达分析 被引量:3
3
作者 王强辉 翟健程 +1 位作者 夏彦玲 李和平 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期77-84,共8页
为探索驯鹿(Rangifer tarandus)Morf4l1基因的生物学特性以及雌、雄驯鹿茸顶端表皮组织表达差异,揭示Morf4l1对鹿茸生长的重要生物学意义,采用RT-PCR技术和分子克隆技术成功获得驯鹿Morf4l1基因cDNA,以驯鹿Morf4l1基因cDNA为依据,展开... 为探索驯鹿(Rangifer tarandus)Morf4l1基因的生物学特性以及雌、雄驯鹿茸顶端表皮组织表达差异,揭示Morf4l1对鹿茸生长的重要生物学意义,采用RT-PCR技术和分子克隆技术成功获得驯鹿Morf4l1基因cDNA,以驯鹿Morf4l1基因cDNA为依据,展开生物信息分析和雌、雄驯鹿鹿茸表皮组织中表达差异的研究。结果表明:1)驯鹿Morf4l1基因CDS区全长为972bp,共编码323个氨基酸。2)驯鹿Morf4l1蛋白是一种相对分子量为37.20ku的不具跨膜结构的亲水性蛋白质,其二级结构主要以β转角为主。3)驯鹿Morf4l1编码蛋白氨基酸序列与其他18个物种该蛋白氨基酸序列发现相似度介于85%~100%,其中与白尾鹿相似度最高为100%,与原鸡相似度最低为85%,与其他亲缘关系较近物种(如牛、羊)的相似度能达到99%;结合系统进化树发现驯鹿Morf4l1基因在进化中高度保守,各物种之间的遗传距离不超过0.035。4)荧光定量结果显示雌性驯鹿茸顶端表皮组织Morf4l1基因相对表达量是雄性的2.127±0.032倍。本研究发现驯鹿Morf4l1基因在进化中高度保守,是鹿茸生长发育的关键基因,其在驯鹿鹿茸表皮组织中相对表达量受性别影响较为明显。 展开更多
关键词 驯鹿 Morf4l1基因 cdna克隆 生物信息分析 基因表达
原文传递
鹅豁眼性状H基因座候选基因FREM1的验证分析 被引量:2
4
作者 于金成 于宁 +1 位作者 赵辉 李喆 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2371-2379,共9页
【目的】鹅豁眼性状呈隐性伴性遗传,其遗传基础有待揭示。基因FRAS-related extracellular matrix 1(FREM1)编码区的一些隐性突变导致了人类及模型小鼠上眼睑部分或完全缺失。本试验以鹅豁眼性状资源群为主要材料,通过对鹅基因FREM1的... 【目的】鹅豁眼性状呈隐性伴性遗传,其遗传基础有待揭示。基因FRAS-related extracellular matrix 1(FREM1)编码区的一些隐性突变导致了人类及模型小鼠上眼睑部分或完全缺失。本试验以鹅豁眼性状资源群为主要材料,通过对鹅基因FREM1的克隆、表达及基因多态性分析,验证FREM1是影响鹅上眼睑性状候选基因的假设,为深入研究眼睑性状的分子遗传机制奠定基础。【方法】采集鹅豁眼性状F2资源群中成年纯种豁眼鹅母鹅(3只)、四川白鹅(6只,雌雄各半)、♂豁眼×♀四川白鹅F1代公鹅(3只)的眼睑和肾组织,提取其总RNA,以鹅FREM1(XM_013193557)全长转录序列为参考设计引物,利用反转录RT-PCR克隆鹅FREM1基因,对其进行生物信息学分析,进而,采用实时荧光定量PCR法研究鹅眼睑和肾组织FREM1基因的表达特性。采集成年纯种豁眼鹅公鹅、四川白鹅公鹅和♂豁眼×♀四川白鹅正反交F1代公鹅各30只的血液,提取全血DNA,以鹅FREM1(Anser cygnoides domesticus breed Zhedong scaffold203_32,NCBI)序列设计引物,利用直接测序法检测FREM1基因变异位点在不同鹅群体中的分布情况。【结果】(1)经测序和拼接,获得鹅FREM1基因c DNA序列7 305bp,该序列包含一个完整的CDS(Coding Sequences)区,编码2 184个氨基酸。与四川白鹅和浙东白鹅相比,在豁眼鹅FREM1基因CDS序列上发现第4 515bp:T>C是错义突变,导致第1 505aa:Val>Ala变化,位于FREM1蛋白的CSPG重复结构域中第10个CSPG上。利用在线工具SIFT预测该氨基酸替换对蛋白功能的影响较小。通过I-MutantΔΔG和MUPro程序分析,p.1505V>A位点氨基酸替换大幅度降低了FREM1蛋白的稳定性。(2)FREM1基因在四川白鹅公、母鹅的眼睑和肾脏2个组织中均有表达,但肾脏表达水平远远高于眼睑,更为重要的是,公鹅FREM1基因的组织表达水平正好接近母鹅的2倍。ZHW(正常眼睑)和ZhW(上眼睑部分缺失)基因型鹅FREM1基因相对表达 展开更多
关键词 FREM1基因 豁眼性状 c DNA克隆 豁眼鹅 基因表达
下载PDF
鸡IL-1βcDNA片段的克隆及序列分析
5
作者 张键 徐晓静 +1 位作者 哈斯.阿古拉 马学恩 《内蒙古农牧学院学报》 CAS 1999年第3期30-34,共5页
本文以鸡外周血单个核细胞总 R N A 为模板,据已报道的8 种哺乳动物 I L—1β核酸序列保守区设计合成1 对引物,反转录合成c D N A 链,经 P C R 扩增,回收扩增后的 D N A 片段,用klenow 酶处理,与 Pu c... 本文以鸡外周血单个核细胞总 R N A 为模板,据已报道的8 种哺乳动物 I L—1β核酸序列保守区设计合成1 对引物,反转录合成c D N A 链,经 P C R 扩增,回收扩增后的 D N A 片段,用klenow 酶处理,与 Pu c1 9 / Sm a I 连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌 J M1 0 9 ,筛选出含有插入片段的重组质粒,用 P C R 及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡 I L- 1β片段的c D N A 克隆;再经序列分析测定,得知此片段长为270bp ,与人及小鼠 I L—1β基因核苷酸序列同源性分别为45 % 和30 % 。 展开更多
关键词 IL-1Β PCR cdna克隆 序列分析
原文传递
中国庚型肝炎病毒河南株非结构基因(NS)3区cDNA的克隆及序列分析
6
作者 陈刚 谭文杰 +1 位作者 王淑萍 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期7-11,共5页
目的为了研究中国庚型肝炎病毒(HGV)非结构(NS3)区基因结构特征。方法利用逆转录半巢式聚合酶链反应从河南1份HGVRNA阳性血清获得覆盖HGVNS3全长cDNA的4个片段,并克隆到pcDNAⅡ载体中,采用Sa... 目的为了研究中国庚型肝炎病毒(HGV)非结构(NS3)区基因结构特征。方法利用逆转录半巢式聚合酶链反应从河南1份HGVRNA阳性血清获得覆盖HGVNS3全长cDNA的4个片段,并克隆到pcDNAⅡ载体中,采用Sanger双脱氧末端终止法测定全部cDNA序列。结果发现克隆到的包括HGVNS3区在内的cDNA序列长度为2137个核苷酸,编码711个氨基酸。与国内外已测定的5侏全序列的相应序列进行同源性比较,其核苷酸同源性在857%~938%之间,根据核苷酸序列推导的氨基酸序列的同源性为961%~973%,3株中国HGVNS3区氨基酸存在3个共同变异位点,此外在河南株NS3区还发现了一个与其他5株全序列共同的糖基化位点。结论河南株HGVNS3区的核苷酸及氨基酸序列相对比较保守,其基因特征的阐明为NS3区基因的生物学功能研究及HGV诊断试剂的研制提供了基础。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 cdna克隆 病毒基因 序列分析
原文传递
人淋巴毒素cDNA克隆及顺序分析
7
作者 张津利 朱锡华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期493-495,共3页
目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的人T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增人淋巴毒素cDNA,并定向克隆于pUC18、pUC19质粒载体,Sanger双脱氧链终止法... 目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的人T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增人淋巴毒素cDNA,并定向克隆于pUC18、pUC19质粒载体,Sanger双脱氧链终止法测序。结果:RT-PCR扩增出一个541bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示,该541bp片段为编码人淋巴毒素成熟肽的cDNA,与公布的人淋巴毒素cDNA序列完全一致。结论:本实验成功地克隆了人淋巴毒素cDNA,为在大肠杆菌表达人淋巴毒素并进一步研究其功能,以及淋巴毒素的开发与临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 淋巴毒素 cdna 克隆 TNF-Β LT MA-LT
下载PDF
油桐油体蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:16
8
作者 龙洪旭 谭晓风 +2 位作者 陈洪 张琳 胡姣 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期31-38,共8页
油桐油体蛋白与油桐脂肪酸储藏密切相关。通过构建油桐cDNA文库和EST文库,用分子生物学手段分离克隆出两个油桐油体蛋白基因的全长cDNA序列。通过分析表明,两个油体蛋白基因的全长cDNA分别为738 bp、838 bp,各包含1个完整的CDS,分别编码... 油桐油体蛋白与油桐脂肪酸储藏密切相关。通过构建油桐cDNA文库和EST文库,用分子生物学手段分离克隆出两个油桐油体蛋白基因的全长cDNA序列。通过分析表明,两个油体蛋白基因的全长cDNA分别为738 bp、838 bp,各包含1个完整的CDS,分别编码137个、154个氨基酸。分别命名为VF_oleⅠ,VF_oleⅡ。通过与其它物种的19条油体蛋白氨基酸序列比对,油桐油体蛋白基因分别与麻疯树oleosin 3和麻疯树oleosin 2的相似性最高,分别为84%、82%。通过软件预测表明,油桐油体蛋白等电点分别为10.315、10.335,都存在跨膜结构域,且存在信号肽剪切位点,中部都存在一个较长的疏水区,C末端都是以α-螺旋为主。 展开更多
关键词 油桐 油体蛋白基因 全长cdna克隆 序列分析 结构预测
下载PDF
日本血吸虫童虫cDNA文库免疫学筛选及H1基因的克隆 被引量:5
9
作者 卞茂红 沈际佳 《临床输血与检验》 CAS 2002年第3期18-20,共3页
目的 获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的 c DNA克隆。 方法 利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫 c DNA文库 ,获得一批阳性克隆 ,并对 H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定。根据结果 ,一方面进行同源性分析 ;另一... 目的 获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的 c DNA克隆。 方法 利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫 c DNA文库 ,获得一批阳性克隆 ,并对 H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定。根据结果 ,一方面进行同源性分析 ;另一方面设计合成引物 ,应用 PCR法进行扩增 ,并将其克隆入 p GEM-T载体。 结果 用抗血清初筛约 7.2× 1 0 3个重组的噬菌体 ,得到 1 2个持续阳性反应克隆 ,其中 H1克隆的插入片段长度为 1 1 86bp,具有一个 5 91 bp的完整开放阅读框 ,与现有的基因无任何同源性。利用 PCR法成功地扩增了该基因 ,并克隆入载体 p GEM-T。 结论 从 c DNA文库中筛选的对血吸虫感染可能具有保护作用的分子克隆是可行的 ,为进一步研究提供了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 免疫学筛选 cdna克隆 基因克隆 H1基因
下载PDF
Molecular cloning of a cDNA related to vernalization(verc203) in winter wheat 被引量:1
10
作者 种康 谭克辉 +1 位作者 黄华梁 梁厚果 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第7期799-806,共8页
A cDNA clone related to the vernalization in winter wheat(verc203)was harvested from the en-riched cold-induced cDNA library of 10~4 pfu with differential screening.The insert of verc203 in λ gt10 vector wassubcloned... A cDNA clone related to the vernalization in winter wheat(verc203)was harvested from the en-riched cold-induced cDNA library of 10~4 pfu with differential screening.The insert of verc203 in λ gt10 vector wassubcloned into the sites between BamH Ⅰ and Hind Ⅲ in pUC19 plasmid after being amplified with PCR.the analysis of the Northern blotting with a probe of verc203 indicated that the verc203 has a negative signalfor the control and the devernalized mRNA and a positive signal for the vernalized winter wheat and non-vernalized spring wheat at about 2.6 kb. 展开更多
关键词 WINTER wheat VERNALIZATION gene molecular cloning of cdna.
原文传递
小菜蛾细胞色素P450基因的cDNA片段克隆及其序列分析 被引量:1
11
作者 李洪山 戴华国 王娟 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
以小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]3龄幼虫(对氰戊菊酯的LC50为38.75 mg/L)的总RNA为模板,利用简并引物,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)方法扩增出1个长度为240 bp的cDNA片段。序列分析结果表明,扩增出的cDNA片段与细胞色素P450的C... 以小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]3龄幼虫(对氰戊菊酯的LC50为38.75 mg/L)的总RNA为模板,利用简并引物,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)方法扩增出1个长度为240 bp的cDNA片段。序列分析结果表明,扩增出的cDNA片段与细胞色素P450的Cyp6基因有较高的同源性。 展开更多
关键词 小菜蛾 细胞色素P450基因 cdna片段克隆 序列分析
下载PDF
生物信息学在新基因全长cDNA电子克隆中的应用 被引量:34
12
作者 胡皝 萧浪涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第4期93-96,共4页
新基因全长cDNA序列的获得常常是生物学工作者面临的难题,电子克隆是利用生物信息学手段得到新基因全长cDNA序列的新方法。介绍了电子克隆的方法及其生物信息学在其间的具体应用,并概述了一些生物信息学在序列分析中的应用。
关键词 生物信息学 电子克隆 全长cdna
下载PDF
肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较 被引量:1
13
作者 易濒 常宏 曹毅 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期520-526,共7页
该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法。比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(OligodT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合... 该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法。比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(OligodT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LAtaq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响。新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高。RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要。部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆。 展开更多
关键词 肝癌组织及细胞系 总RNA抽提 反转录 Q-RT-PCR 长片段基因克隆
下载PDF
人B7.2 cDNA的克隆及其真核表达 被引量:1
14
作者 郭建芬 司履生 +3 位作者 王一理 赵永同 巩岩 孙向乐 《西安医科大学学报》 CSCD 1999年第4期441-444,共4页
为克隆人 B7.2 c DNA,构建 B7.2真核表达质粒 ,并在哺乳动物细胞中表达。分离正常人淋巴结淋巴细胞 ,经 LPS诱导后 ,以 RT- PCR,克隆 B7.2 c DNA;构建真核表达质粒 p BCMGSNeo- B7.2 ,转染哺乳细胞 ,进行表达。结果成功克隆了 B7.2c DNA... 为克隆人 B7.2 c DNA,构建 B7.2真核表达质粒 ,并在哺乳动物细胞中表达。分离正常人淋巴结淋巴细胞 ,经 LPS诱导后 ,以 RT- PCR,克隆 B7.2 c DNA;构建真核表达质粒 p BCMGSNeo- B7.2 ,转染哺乳细胞 ,进行表达。结果成功克隆了 B7.2c DNA,并经测序证实 :所构建的 B7.2抗原真核表达质粒可在哺乳动物细胞中高效表达。表明经 LPS诱导的人淋巴细胞可表达 B7.2 m RNA,所建立的 p BCMGSNeo-B7.2哺乳动物真核表达质粒 ,可供进一步研究 B7.2结构和功能。 展开更多
关键词 克隆 B7.2 cdna RT-PCR 真核表达
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部