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拟南芥LFY cDNA的克隆及转化菊花的研究 被引量：80
1
作者 邵寒霜 李继红 +1 位作者 郑学勤 陈守才 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第3期268-271,共4页
以野生型拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）为材料，克隆并测序了Ｌｅａｆｙ（ＬＦＹ）基因的全长ｃＤＮＡ；同时构建了ＬＦＹｃＤＮＡ以ＣａＭＶ３５Ｓ为启动子的植物表达载体，并转化菊花（Ｃｈ... 以野生型拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）为材料，克隆并测序了Ｌｅａｆｙ（ＬＦＹ）基因的全长ｃＤＮＡ；同时构建了ＬＦＹｃＤＮＡ以ＣａＭＶ３５Ｓ为启动子的植物表达载体，并转化菊花（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ（Ｒａｍａｔ．）Ｔｚｖｅｌ．）。该ｃＤＮＡ全长１２６３ｂｐ，共编码４２０个氨基酸残基，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＬＦＹｃＤＮＡ整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比，转基因植株中有３株分别提早６５、６７、７０ｄ开花，２株分别推迟７８、９０ｄ开花。 展开更多
关键词 LFYcDNA 序列分析 转化 菊花 拟南芥
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小尾寒羊4个微卫星座位的克隆及序列分析 被引量：69
2
作者 储明星 王吉振 +2 位作者 王爱国 李宁 傅金恋 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期402-405,共4页
小尾寒羊是我国优良的地方绵羊品种 ,具有极高的繁殖力 ,平均每胎产羔 2 6只。利用与Booroola绵羊高繁殖力主效基因 FecB连锁的 4个微卫星座位 OarAE10 1、OarHH35、BM14 3和BMS2 5 0 8对小尾寒羊、多赛特羊、多赛特公羊×小尾寒... 小尾寒羊是我国优良的地方绵羊品种 ,具有极高的繁殖力 ,平均每胎产羔 2 6只。利用与Booroola绵羊高繁殖力主效基因 FecB连锁的 4个微卫星座位 OarAE10 1、OarHH35、BM14 3和BMS2 5 0 8对小尾寒羊、多赛特羊、多赛特公羊×小尾寒羊母羊杂一代羔羊 3个绵羊群体 15 9只绵羊进行了遗传检测 ,证实了微卫星DNA的共显性遗传特性。用非变性 (中性 )聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物。对小尾寒羊 4个微卫星座位 6个克隆的PCR扩增片段测序获得的序列已被GenBank接受 ,登录号分别为AF394 4 4 5、AF394 4 4 6、AF394 4 4 7、AF394 4 4 8、AF394 4 4 9、AF394 4 5 0。本研究中小尾寒羊微卫星OarAE10 1的测序结果与GenBank登录的绵羊OarAE10 1序列的同源性为 98% ,小尾寒羊微卫星OarHH35的测序结果与GenBank登录的绵羊OarHH35序列的同源性为 99% ,小尾寒羊微卫星BM14 3的测序结果与GenBank登录的牛BM14 3序列的同源性为 95 % ,小尾寒羊微卫星BMS2 5 0 8的测序结果与GenBank登录的牛BMS2 5 0 8序列的同源性为 95 %。测得的小尾寒羊微卫星OarAE10 1、OarHH35、BM14 3和BMS2 5 0 8均为完全的微卫星 (TG) n。 展开更多
关键词 小尾寒羊 微卫星座位 克隆 序列分析
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三个品种家鸡催乳素基因cDNA的克隆及序列分析 被引量：41
3
作者 周敏 张细权 +1 位作者 施振旦 曹永长 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第7期614-620,共7页
从粤黄鸡、丝毛乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总ＲＮＡ，根据国外已发表的肉用仔鸡催乳素基因ｃＤＮＡ的序列，设计并合成了能与特定载体末端互补的１对引物，经反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。... 从粤黄鸡、丝毛乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总ＲＮＡ，根据国外已发表的肉用仔鸡催乳素基因ｃＤＮＡ的序列，设计并合成了能与特定载体末端互补的１对引物，经反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒 ｐＢＳＳＫ连接，克隆后进行序列分析，与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较。结果表明，不同品种间核苷酸同源性介于９３．９７％～９９．８７％之间，其中丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高，为９９．８７％。推导的相应氨基酸序列的同源性在９８．２５％～１００％之间，也是丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高，为１００％。在粤黄鸡、丝毛乌骨鸡和伊莎蛋鸡中，发现前两者的催乳素前体的ｃＤＮＡ片段推导的氨基酸序列中信号肽裂解位点跟肉用仔鸡、矮脚鸡及火鸡的一样，为 Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ，而伊莎蛋鸡的信号肽裂解位点则不一样，为Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ。此位点的差异可能导致催乳素前体翻译加工的不同，使伊莎蛋鸡无就巢性。这３个家鸡品种与国外的肉用仔鸡、矮脚鸡催乳素氨基酸序列还在以下位置出现差异：７１、１４１、１５０、１７５。在肉用仔鸡、丝毛乌骨鸡? 展开更多
关键词 家鸡 催乳素 基因克隆 序列分析 CDNA
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人类SR蛋白超家族新成员——SFRS12(SRrp508)的基因克隆和特性分析 被引量：43
4
作者 张德礼 孙晓静 +2 位作者 凌伦奖 陈润生 马大龙 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期377-383,共7页
采用生物信息学方法克隆出全长 3811bp的人类RC5 0 8cDNA片段 ,经核酸和蛋白质分析为人类新基因 (Gen Bank登记号 :AF4 5 90 94 ) ,利用RT PCR方法从人类胰脏组织中扩增出包含编码 5 0 8个氨基酸残基最大开放读码框架 (ORF)的 16 80bpc... 采用生物信息学方法克隆出全长 3811bp的人类RC5 0 8cDNA片段 ,经核酸和蛋白质分析为人类新基因 (Gen Bank登记号 :AF4 5 90 94 ) ,利用RT PCR方法从人类胰脏组织中扩增出包含编码 5 0 8个氨基酸残基最大开放读码框架 (ORF)的 16 80bpcDNA片段 ,经核酸测序证明与电子克隆结果完全一致。该基因具有启动子和TATA box,ORF前同一相位有多个终子码 ,后有加尾信号 ,显示为客观存在基因。该基因含有 12个外显子 (96～ 2 0 93bp)和 11个内含子 (14 0～ 5 15 3bp) ,定位于人类 5号染色体 5q11.2～q12 .1,无任何连锁基因存在。该基因ORF 342～ 186 8(15 2 7)横跨10个外显子 ,所编码 5 0 8氨基酸蛋白的全长序列与大鼠丝氨酸 精氨酸二肽富含性 (SR)剪切调控蛋白 86 (SRrp86 )高度同源 ,在核酸和蛋白水平的同源性分别为 84 %和 86 % ,与其他已知蛋白无论在核酸水平还是在氨基酸水平几乎均无整体的同源性。结果表明 ,所克隆的 5 0 8氨基酸蛋白才是大鼠SRrp86的人类同源物 ,从而修正了Barnard(2 0 0 0 )所指出的人类同源物为人类精氨酸富含性核蛋白 5 4 (p5 4 )这一论断 ,并提示它是日益增长的SR蛋白超家族的又一个新成员。该基因组织表达谱广泛 ,有可能具有转录因子活性 ,暂命名为SR相关剪切调控蛋白 5 0 8(SRrp5 0 展开更多
关键词 人类SR蛋白超家族 SRrp508 基因克隆 特性分析
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脂肪酶分子生物学的研究进展 被引量：21
5
作者 邬显章 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期94-98,共5页
迄今为止已克隆了包括微生物和动植物在内的众多脂肪酶基因 ,测定了它们的核苷酸序列 ,从而确定了这些酶的一级结构 .作者重点就有关微生物脂肪酶的基因克隆。
关键词 脂肪酶 克隆 基因 氨基酸序列 表达 分子生物学
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MBR中微生物群落结构的演变与分析 被引量：37
6
作者 张斌 孙宝盛 +1 位作者 季民 赵祖国 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2192-2199,共8页
为了揭示膜-生物反应器中微生物群落结构多样性的演变过程,通过细胞裂解法直接提取不同时期污泥中的基因组DNA,利用基于16S rDNA的PCR-DGGE技术获得了微生物群落的DNA特征指纹图谱,并对条带进行了统计分析和切胶测序,使用序列数据进行... 为了揭示膜-生物反应器中微生物群落结构多样性的演变过程,通过细胞裂解法直接提取不同时期污泥中的基因组DNA,利用基于16S rDNA的PCR-DGGE技术获得了微生物群落的DNA特征指纹图谱,并对条带进行了统计分析和切胶测序,使用序列数据进行了同源性分析并建立了系统发育树.DGGE分析表明,在反应器运行前17d内污泥中微生物群落结构变化很大,与接种污泥的相似性系数下降到了29.2%,从而说明MBR中处理工艺和进水水质的改变导致微生物群落结构多样性降低.在试验过程中,Pseudomonas和Aeromonas hydrophila等种群一直保持着较为稳定的优势地位,也有原始种群如Bacillus sp.的消亡和以Enterococcus faecalis、Comamonassp.、Fusobacteriumsp.等为代表的次级种群的强化和演变.UPGMA聚类分析将DGGE图谱区分为3大类群并对应于各自的运行时期.测序结果表明,MBR中微生物菌群间进化距离较大,其中Proteobacteria纲和Bacillus属细菌较多.在反应器运行后期演变为优势地位的菌群(如Comamonassp.)加剧了膜污染物的产生和积累. 展开更多
关键词 膜-生物反应器 微生物多样性 PCR-DGGE 克隆测序
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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 被引量：33
7
作者 刘新光 梁念慈 +1 位作者 马涧泉 刘文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页
蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／... 蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础． 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2 Β亚基 DNA测序 重组 CDNA
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中国人庚型肝炎病毒全基因cDNA克隆及序列测定 被引量：33
8
作者 周育森 陈薇 +4 位作者 赵秋敏 赵惠柳 张京生 徐静 王海涛 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1996年第4期249-254,共6页
首次报道了中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）全基因ｃＤＮＡ的克隆及序列测定。中国庚型肝炎病毒（ＨＧＶＣ９６４）基因全长为９１２８个核苷酸，编码一个长度为２８７０个氨基酸残基的多聚前体蛋白。５端有一个３６７ｂｐ的非翻译区，３... 首次报道了中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）全基因ｃＤＮＡ的克隆及序列测定。中国庚型肝炎病毒（ＨＧＶＣ９６４）基因全长为９１２８个核苷酸，编码一个长度为２８７０个氨基酸残基的多聚前体蛋白。５端有一个３６７ｂｐ的非翻译区，３端长度为１４７个核苷酸。基因组中Ｇ＋Ｃ占５９．９３％。该株病毒（ＨＧＶＣ９６４）与国外报道的３株ＨＧＶ序列比较，核苷酸同源性为８４．０％～８９．９％，氨基酸同源性均大于９１％。 展开更多
关键词 庚型肝炎 病毒 CDNA 克隆 序列测定
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百合查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆与分析 被引量：28
9
作者 杨丽 刘雅莉 +1 位作者 王跃进 徐伟荣 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期933-936,共4页
以东方百合“索邦”基因组DNA为模板进行PCR扩增,将得到的目的片段克隆至pGEM-T easy载体后进行测序.结果表明,目的序列全长1 307 bp,经BLA ST分析,与鸢尾、玉米、水稻等植物的查尔酮合成酶(CHS)基因核苷酸同源性在70%以上;与已经克隆的... 以东方百合“索邦”基因组DNA为模板进行PCR扩增,将得到的目的片段克隆至pGEM-T easy载体后进行测序.结果表明,目的序列全长1 307 bp,经BLA ST分析,与鸢尾、玉米、水稻等植物的查尔酮合成酶(CHS)基因核苷酸同源性在70%以上;与已经克隆的CHS cDNA序列相比,CHS DNA序列中包含2个外显子和1个内含子,内含子全长82 bp,符合TG-AG特征.将得到的序列提交G enB ank,序列号为DQ 471951. 展开更多
关键词 百合 CHS 基因克隆 序列分析
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产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因的克隆与核苷酸序列分析 被引量：25
10
作者 许崇波 朱平 +4 位作者 姚湘燕 王卓 冯书章 马从林 孟锐奇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期140-143,共4页
将含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒ｐＫＭＡ１００用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，经１．５％琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收０．９５ｋｂα毒素基因片段，再将载体ｐＥＴ－２８ｂ（＋）用ＢａｍＨＩ和Ｈｉ... 将含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒ｐＫＭＡ１００用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，经１．５％琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收０．９５ｋｂα毒素基因片段，再将载体ｐＥＴ－２８ｂ（＋）用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，然后将处理好的ｐＥＴ－２８ｂ（＋）与０．９５ｋｂ的α毒素基因片段通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行粘性末端连接，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切分析和核苷酸序列分析，证明重组质粒ｐＸＥＴＡ１含有产气荚膜梭菌α毒素基因。确定了α毒素基因的全部核苷酸序列，并证明其具有正确的阅读框架。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素基因 基因克隆 核苷酸序列
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桃果实ACC合酶cDNA的克隆 被引量：15
11
作者 金勇丰 张耀洲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期257-262,共6页
根据其它植物ACC合酶氨基酸保守区设计两组简并引物 ,用套式PCR技术从桃成熟果实cDNA中扩增出 1.1kb大小特异性片段 ,将其克隆至pGEM T载体上 ,对重组克隆pPACSI进行全序列测定表明 ,插入片段全长 110 0个碱基 ,编码 36 6个氨基酸 ,该... 根据其它植物ACC合酶氨基酸保守区设计两组简并引物 ,用套式PCR技术从桃成熟果实cDNA中扩增出 1.1kb大小特异性片段 ,将其克隆至pGEM T载体上 ,对重组克隆pPACSI进行全序列测定表明 ,插入片段全长 110 0个碱基 ,编码 36 6个氨基酸 ,该基因与番茄、笋瓜、小西葫芦、康乃馨、苹果ACC合酶cDNA氨基酸序列同源性分别为 72 .7% ,71.3% ,71.1% ,6 9.1% ,6 5.4 %。RNA点杂交表明pPACSI基因随着桃果实成熟表达活性增强 ,乙烯处理能诱导桃果实该基因的表达。 展开更多
关键词 桃 ACC合酶基因 克隆 序列分析 果实成熟
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烟曲霉rRNA基因ITS区的克隆测序分析 被引量：19
12
作者 骆志成 王端礼 +3 位作者 孔繁荣 李冬梅 李若瑜 李世荫 《菌物系统》 CSCD 北大核心 2000年第3期336-341,共6页
对烟曲霉rRNA基因内转录间区（ITS区）进行了克隆测序，并将之与其他几种常见曲霉的相应序列进行了比较。发现3株烟曲霉的ITSⅠ区完全相同，而其中1株烟曲霉的ITSⅡ区与一条已知相应序列仅有2个碱基的变异。提示烟曲霉rRNA基因的两个IT... 对烟曲霉rRNA基因内转录间区（ITS区）进行了克隆测序，并将之与其他几种常见曲霉的相应序列进行了比较。发现3株烟曲霉的ITSⅠ区完全相同，而其中1株烟曲霉的ITSⅡ区与一条已知相应序列仅有2个碱基的变异。提示烟曲霉rRNA基因的两个ITS区序列均十分保守，而且与黄曲霉、黑曲霉、土曲霉及构巢曲霉的相应序列相比较，均有一定程度的变异。 展开更多
关键词 烟曲霉 RRNA 致病菌 ITS区 基因克隆 基因测序
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鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析 被引量：18
13
作者 秘晶玮 王君伟 +1 位作者 许丽娜 李洪涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期359-362,共4页
从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_... 从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN_α93.72%I、FN_γ93.29%。这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅 干扰素(IFN) 基因-克隆 序列分析
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枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达 被引量：20
14
作者 张小青 曹军卫 +1 位作者 翟超 陈建军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期163-168,共6页
用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通... 用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现 ,该片段第 1 2 2～ 1 2 3 5bp核苷酸编码一个由 3 70个氨基酸组成的蛋白质分子 ,其上游存在非典型的 - 1 0区 ,典型的 -3 5区和核糖体结合位点 ,起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较 ,结果表明该片段与枯草杆菌 1 6 8的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为 81 %和 90 %。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较 。 展开更多
关键词 耐盐枯草芽孢杆菌 proB基因 克隆 序列分析 表达 渗透压调节基因
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香石竹ACC氧化酶基因的克隆与植物表达载体构建 被引量：15
15
作者 余义勋 张俊卫 +1 位作者 孙振元 包满珠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2002年第3期256-260,共5页
根据已发表的ACO核苷酸序列 ,设计一对引物 ,以香石竹品种‘American’基因组DNA为模板 ,扩增出香石竹ACC氧化酶基因 ,将其连接到pMD18加T质粒载体上 ,通过中间载体pBluescriptSK ,构建了ACO基因正向和反向插入的植物表达载体 ,并将其... 根据已发表的ACO核苷酸序列 ,设计一对引物 ,以香石竹品种‘American’基因组DNA为模板 ,扩增出香石竹ACC氧化酶基因 ,将其连接到pMD18加T质粒载体上 ,通过中间载体pBluescriptSK ,构建了ACO基因正向和反向插入的植物表达载体 ,并将其导入了农杆菌。酶切检测表明该片段已插入表达载体 ,序列测定结果显示所克隆基因片段含 3个外显子 ,2个内含子 ,其中 展开更多
关键词 植物表达载体 香石竹 ACC氧化酶 基因克隆 重组载体
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中国人MBLc DNA的克隆与序列分析 被引量：17
16
作者 陈政良 朱锡华 谢佩蓉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期83-86,共4页
从中国汉族人胎肝组织提取总ＲＮＡ，以ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了编码含信号顺序的全长甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）肽链的ｃＤＮＡ片段，将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接，转化大肠杆菌ＴＧ１，建立了ＭＢＬ的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明：... 从中国汉族人胎肝组织提取总ＲＮＡ，以ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了编码含信号顺序的全长甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）肽链的ｃＤＮＡ片段，将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接，转化大肠杆菌ＴＧ１，建立了ＭＢＬ的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明：与文献报道的人ＭＢＬｃＤＮＡ序列比较，差异颇大，但与ＧｅｎＢａｎｋ中的人ＭＢＬｍＲＮＡ比较，仅２个位置的核苷酸不同；其编码产物是２０个残基的信号顺序和２２８个残基的成熟ＭＢＬ多肽。 展开更多
关键词 甘露聚糖 结合凝集素 MBL CDNA 克隆 序列分析
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地表覆盖对渭北旱作苹果园土壤细菌群落结构及多样性的影响 被引量：23
17
作者 陈月星 温晓霞 +3 位作者 孙瑜琳 张俊丽 林晓丽 廖允成 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期892-904,共13页
【目的】以渭北旱作苹果园4种覆盖模式为研究对象,探索了不同覆盖措施对土壤细菌群落结构及多样性的影响。【方法】应用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术结合克隆和测序的方法,分析和比较了不同地表覆盖措施及苹果生育期土壤细菌的群落... 【目的】以渭北旱作苹果园4种覆盖模式为研究对象,探索了不同覆盖措施对土壤细菌群落结构及多样性的影响。【方法】应用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术结合克隆和测序的方法,分析和比较了不同地表覆盖措施及苹果生育期土壤细菌的群落结构及组成。【结果】不同覆盖模式下土壤细菌群落结构和多样性存在显著差异,细菌优势种群及其数量受覆盖措施和苹果生育期的共同影响:幼果期和膨大期,生草覆盖和秸秆覆盖显著提高了土壤细菌多样性和丰富度,地膜覆盖细菌多样性和丰富度较对照有所提高但未达到显著水平;成熟期对照的细菌多样性达到峰值(2.78)且与其他处理差异显著,这可能是因为土壤中r-策略生存的细菌在该时期得到迅速生长和繁殖的缘故。聚类分析和除趋势对应分析结果显示,细菌群落结构差异与苹果生育期相关,同时受覆盖措施影响,其中生草覆盖与秸秆覆盖土壤样品多聚为一簇,而地膜覆盖与对照相似度较高,说明生草和秸秆覆盖处理土壤细菌群落结构变化比较显著。代表性序列(共22条)测序分析显示,果园土壤细菌的优势菌群为Proteobacteria(10条)和Bacteroidetes(5条),另外Acidobacteria、Firmicutes、Actinobacteria等也被检测出。其中有些条带只在特定时期某个处理中表现出优势,如Fusobacterium sp.只在幼果期秸秆覆盖处理出现,有些条带则为各处理共有只是亮度有所不同,如Flavobacterium sp.,然而这些共有或者特异性条带所代表的细菌类群在土壤中的生态功能及其生理生化特征有待进一步明确。【结论】植物地表覆盖(生草/秸秆)能够显著改变土壤细菌群落结构,提高土壤细菌多样性和丰富度,具有土壤优化效应,而地膜覆盖在本研究中与对照无显著差异。 展开更多
关键词 果园 地表覆盖 土壤细菌 PCR-DGGE 克隆测序
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甘蔗ACC氧化酶基因片段的克隆与序列分析 被引量：13
18
作者 王自章 李杨瑞 +2 位作者 张树珍 林俊芳 郭丽琼 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-69,共8页
1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通... 1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通过PCR扩增到一个 940bp的基因片段。将片段序列在NCBI的BLAST软件上进行同源性搜寻 ,显示的 63个序列全部是ACC氧化酶基因 ,因而认为克隆到的片段就是甘蔗ACC氧化酶基因的一个成员。经对不同植物来源的ACC氧化酶基因家族进行比较分析 ,去除一个 10 3bp的“内含子”后 ,推导的氨基酸序列为 2 79个残基 ,占推测全长氨基酸残基总数的 86%左右。经同源性分析 ,序列与毛竹和水稻ACC氧化酶的同源率达到 86%。系统进化分析表明 ,该序列最先与水稻、其次和香蕉的ACC氧化酶聚类 ,然后再与双子叶植物的ACC氧化酶聚类 ,符合按形态特征分类的血缘关系。基因的获得对下一步了解乙烯的合成表达与甘蔗生长。 展开更多
关键词 甘蔗 ACC氧化酶基因片段 克隆 序列分析
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梅PGIP基因的克隆及全序列分析 被引量：17
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作者 李广平 房经贵 +2 位作者 蔡斌华 章镇 张长青 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期125-127,共3页
通过PCR扩增,从梅基因组中得到1条全长1 192 bp的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PG IP)基因序列。该序列包含有1个完整的开放阅读框和1个内元。比对结果表明,克隆到的序列与桃、马哈利樱桃中相应序列一致度分别为96%和95%,其蛋白质序列与桃... 通过PCR扩增,从梅基因组中得到1条全长1 192 bp的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PG IP)基因序列。该序列包含有1个完整的开放阅读框和1个内元。比对结果表明,克隆到的序列与桃、马哈利樱桃中相应序列一致度分别为96%和95%,其蛋白质序列与桃、马哈利樱桃的蛋白质序列一致度分别为97%和94%。该蛋白质序列中包含着一段亮氨酸重复序列。 展开更多
关键词 梅 PGIP基因 克隆 序列分析
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不同品种猪HSL基因 5′-UTR和外显子Ⅰ片段的克隆测序及多态性分析 被引量：16
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作者 雷明刚 吴珍芳 +3 位作者 邓昌彦 戴丽荷 张振波 熊远著 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期354-359,共6页
激素敏感脂肪酶(Hormone sensitivelipase,HSL)是负责分解脂肪组织中甘油三酯释放游离脂肪酸的关键和限速酶,也是影响动物脂肪沉积的关键酶。将HSL基因作为影响猪脂肪代谢和沉积相关性状的候选基因,对不同品种猪HSL基因 5′ UTR和外显... 激素敏感脂肪酶(Hormone sensitivelipase,HSL)是负责分解脂肪组织中甘油三酯释放游离脂肪酸的关键和限速酶,也是影响动物脂肪沉积的关键酶。将HSL基因作为影响猪脂肪代谢和沉积相关性状的候选基因,对不同品种猪HSL基因 5′ UTR和外显子Ⅰ片段进行了克隆测序并开展多态性与性状间的关系研究。序列比较发现,在测定的HSL基因靠近起始密码子(ATG)的 419bp中,杜洛克、梅山猪、大白猪和清平猪序列完全一致,与长白猪序列比较,在-13 ^-12bp位置存在GC→CG的碱基变异;梅山猪(3个体)、通城猪(3个体 )、长白猪 (3个体 )、大白猪(3个体)HSL基因外显子Ⅰ的 442bp位置有G→A碱基间的变异,G→A的转换改变了限制性内切酶BsaHⅠ酶识别位点,且导致了编码氨基酸Val→Ile的替换。经PCR RFLP分析,HSL基因外显子ⅠBsaHⅠ位点多态性有AA、AG和GG 3种基因型。“大白×梅山”F2 代资源家系猪BsaHⅠ位点不同基因型个体背膘厚、肌内脂肪等性状协方差统计分析发现,AG基因型和GG基因型在眼肌面积上存在显著差异。 展开更多
关键词 激素敏感脂肪酶 PCR—RFLP 猪 克隆测序
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