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欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建 被引量:8
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作者 张守攻 张勇 +4 位作者 刘博 李秀兰 宋文芹 韩素英 齐力旺 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期794-800,共7页
以欧洲山杨(Populus tremula)根尖细胞为材料,采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头,进行两轮PCR扩增,得到了200~3000bp的... 以欧洲山杨(Populus tremula)根尖细胞为材料,采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头,进行两轮PCR扩增,得到了200~3000bp的DNA扩增片段。以DIG-dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交,结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源,从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交,发现荧光信号较密集的分布于一号染色体,但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆,构建单条染色体DNA文库,经分析,该微克隆文库包含约3×10^5个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定,证明该文库的插入片段主要介于230~2200bp之间,平均800bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 欧洲山杨 染色体 显微分离 特异性文库 荧光原位杂交
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染色体特异DNA文库的构建与鉴定
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作者 孙雷 刘新雄 +5 位作者 陈哲 张明 陆阳清 卓永光 符可鹏 樊祖茜 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期824-828,共5页
为构建人类21号染色体特异DNA文库,以应用于人类遗传疾病的鉴定和研究,文章采用循环温度梯度法溶解释放微分离的人外周血细胞21号染色体DNA,将其进行简并寡核苷酸引物PCR(Degenerate oligo nu-cleotide primer-PCR,DOP-PCR)扩增后,利... 为构建人类21号染色体特异DNA文库,以应用于人类遗传疾病的鉴定和研究,文章采用循环温度梯度法溶解释放微分离的人外周血细胞21号染色体DNA,将其进行简并寡核苷酸引物PCR(Degenerate oligo nu-cleotide primer-PCR,DOP-PCR)扩增后,利用100~500 bp和500~2 000 bp分段回收纯化的两种不同片段大小的DOP-PCR产物构建染色体特异DNA文库,并分别采用荧光原位杂交(Florescence in situ hybridization,FISH)和斑点杂交对DOP-PCR产物的来源和随机取样的文库克隆进行检测以评估所构建DNA文库的特异性。结果表明:循环温度梯度法能有效溶解释放微分离的21号染色体DNA;通过对DOP-PCR产物的分段回收纯化和克隆,增加了大片段DNA的连接效率;利用FISH技术和斑点杂交双重鉴定实验证明了文库的特异性,从而构建了21号染色体特异的DNA文库,并建立了构建染色体特异DNA文库及检测其特异性的方法,为21号染色相关遗传疾病的鉴定和研究奠定了基础。 展开更多
关键词 21号染色体 染色体微分离与微切割 DOP-PCR 染色体特异dna文库
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广西巴马小型猪1号染色体DNA文库的构建和鉴定
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作者 孙雷 路毅 +5 位作者 庄新杰 曾有权 张明 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期13-15,共3页
研究利用玻璃针显微分离了巴马小型猪外周血淋巴细胞有丝分裂中期的1号染色体,然后将显微分离的染色体进行简并寡核苷酸引物PCR(DOP—PCR)扩增,通过PCR技术和荧光原位杂交(Florescence in situ hybridization,FISH)技术对扩增产... 研究利用玻璃针显微分离了巴马小型猪外周血淋巴细胞有丝分裂中期的1号染色体,然后将显微分离的染色体进行简并寡核苷酸引物PCR(DOP—PCR)扩增,通过PCR技术和荧光原位杂交(Florescence in situ hybridization,FISH)技术对扩增产物来源进行鉴定后,将DOP—PCR产物与pMD18-T载体连接、转化以构建1号染色体微克隆文库。结果表明:DOP—PCR扩增产物与猪的1号染色体DNA同源,并且得到了插入片段为100~600bp的巴马小型猪的1号染色体微克隆DNA文库。 展开更多
关键词 染色体微分离 DOP—PCR 染色体dna 文库
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