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CHK1和CHK2 shRNA转染对食管癌细胞照射后G_2期阻滞的影响 被引量：15
1
作者 王玉祥 祝淑钗 +3 位作者 封巍 李娟 苏景伟 李任 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期572-577,共6页
目的观察RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响。方法CHK1和CHK2基因各选择4段序列分别设计合成短发卡状RNA (shRNA),分别与pENTRTM／U6质粒连接后转染Eca109食管癌细胞。采用Western blotting检测... 目的观察RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响。方法CHK1和CHK2基因各选择4段序列分别设计合成短发卡状RNA (shRNA),分别与pENTRTM／U6质粒连接后转染Eca109食管癌细胞。采用Western blotting检测CHK1和CHK2蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,流式细胞仪检测5 Gy照射后细胞周期变化,克隆法检测5 Gy照射后细胞存活率。结果CHK1和CHK2基因各成功建立4个序列的shRNA连接质粒,转染Eca109细胞后均使其蛋白表达降低。用抑制效果最好的CHK1和CHK2 shRNA转染Eca109细胞后,其mRNA表达下降;在转染后72 h,子一代细胞CHK1和CHK2蛋白仍明显降低,并使5 Gy照射后1 h的CHK2-T68磷酸化水平降低,而对CHK1-S345磷酸化水平无明显影响。CHK1 shRNA转染的Eca109细胞在5 Gy照射后12 h时,明显减轻G2期阻滞程度;转染后72 h和5 Gy照射后12 h,子一代Eca109细胞G2期阻滞仍明显低于单纯5 Gy照射组;而CHK2 shRNA转染不影响照射后G2期阻滞。CHK1和CHK2 shRNA转染可降低5 Gy照射后Eca109细胞存活率。结论shRNA转染对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制效应至少可以持续3 d,且可传递给子代细胞;CHK1 shRNA转染可以减轻Eca109细胞照射后G2期阻滞,增加放射敏感性。 展开更多
关键词 食管癌 RNA干扰 细胞周期 chk1 chk2
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Chk1/2和Plk1蛋白在子宫内膜癌中的表达 被引量：12
2
作者 马全富 黄晓园 +5 位作者 高庆蕾 庄亮 曹阳 卢运萍 周剑锋 马丁 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期424-426,共3页
目的Chk1/2(checkpoint kinase1、2)和Plk1(polo-like kinase1)是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶,本研究检测3种激酶在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达,探讨3种蛋白在两者之间的表达差异、与子宫内膜癌临床病理特征... 目的Chk1/2(checkpoint kinase1、2)和Plk1(polo-like kinase1)是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶,本研究检测3种激酶在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达,探讨3种蛋白在两者之间的表达差异、与子宫内膜癌临床病理特征的关系及3种蛋白表达的相关性。方法应用免疫组化SP法检测44例子宫内膜癌组织和21例正常子宫内膜组织中Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达情况。结果Chk1、Chk2和Plk1蛋白在子宫内膜癌患者中的阳性率分别为47.7%、75.0%和31.8%,在正常子宫内膜中的阳性率分别为61.9%、61.9%和4.8%;Plk1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达显著高于正常子宫内膜组织(P<0.01),而Chk1、Chk2的表达差异无统计学意义(P>0.05)。Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达在不同年龄、病理类型和临床分期的子宫内膜癌患者中差异无统计学意义(P>0.05);但Chk1的表达在不同分化程度的子宫内膜癌患者中差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关分析,在44例子宫内膜癌患者中,Chk2与Plk1间的表达呈正相关(r=0.482,P=0.001)。结论Plk1可能成为子宫内膜癌比较理想的治疗靶点,而CHK1/2在子宫内膜癌中表达及意义还有待进一步研究。 展开更多
关键词 chk1 chk2 PLK1 子宫内膜癌
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Chk1/2和Plk1蛋白在宫颈良恶性病变组织中的表达及其意义 被引量：12
3
作者 黄晓园 高庆蕾 +4 位作者 庄亮 曹阳 马全富 周剑峰 马丁 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第6期429-432,共4页
背景与目的:Chk1/2(checkpoint kinase 1/2)和Plk1(polo-like kinase 1)是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶。本研究主要探讨3种激酶蛋白在宫颈良恶性病变中的表达差异、与宫颈癌临床病理特征的关系及3种激酶在宫颈癌组织中... 背景与目的:Chk1/2(checkpoint kinase 1/2)和Plk1(polo-like kinase 1)是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶。本研究主要探讨3种激酶蛋白在宫颈良恶性病变中的表达差异、与宫颈癌临床病理特征的关系及3种激酶在宫颈癌组织中表达之间的相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测43例宫颈癌组织和20例慢性宫颈炎性组织中Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达情况。结果:Chk1、Chk2和Plk1蛋白在宫颈癌患者中的阳性率分别为76.7%、60.5%和32.6%,在慢性宫颈炎患者中的阳性率分别为30.0%、35.0%和0;Chk1和Plk1蛋白在宫颈癌组织中的表达显著高于慢性宫颈炎组织(P<0.01),而Chk2的表达差异无显著性(P>0.05)。Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达在不同年龄、病理类型和临床分期的宫颈癌患者中差异无显著性(P>0.05);但Chk1和Plk1的表达在不同分化程度的宫颈癌患者中差异有显著性(P<0.05)。Spearman等级相关分析,在43例宫颈癌患者中,Chk1与Chk2的表达呈正相关(r=0.492,P=0.001)。结论:Chk1和Plk1可能成为比较理想的宫颈癌治疗靶点。 展开更多
关键词 chk1 chk2 PLK1 宫颈癌
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Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响 被引量：10
4
作者 黄伟 张瑶珍 +1 位作者 周剑锋 刘文励 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期563-567,共5页
为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1 2反义寡核苷酸转染K5 6 2细胞后对顺铂诱导凋亡的影响 ,采用流式细胞术检测顺铂作用下K5 6 2细胞周期变化 ;以脂质体作为载体 ,转染Chk1 2反义寡核苷酸于K5 6 2细胞 ,用Westernblot和共聚焦... 为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1 2反义寡核苷酸转染K5 6 2细胞后对顺铂诱导凋亡的影响 ,采用流式细胞术检测顺铂作用下K5 6 2细胞周期变化 ;以脂质体作为载体 ,转染Chk1 2反义寡核苷酸于K5 6 2细胞 ,用Westernblot和共聚焦显微镜检测转染Chk1 2反义寡核苷酸后Chk1 2蛋白表达 ;用流式细胞术检测转染Chk1 2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率。结果发现 ,10 μmol L顺铂作用下K5 6 2细胞出现S期阻滞 ,Chk1 2反义寡核苷酸对K5 6 2细胞中Chk1 2蛋白表达有明显抑制作用 ,转染Chk1 2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K5 6 2细胞凋亡率 ,Chk1和Chk2联合转染作用优于单独转染。结论 :Chk1 2可作为白血病增敏治疗的有效靶点。 展开更多
关键词 K562细胞 chk1 chk2 顺铂 细胞凋亡
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吸烟对男性精液质量、精子DNA完整性及Chk1基因表达的影响 被引量：10
5
作者 李强 崔向荣 +3 位作者 井宣 王振强 义建伟 武学清 《生殖医学杂志》 CAS 2015年第12期1019-1024,共6页
目的探讨吸烟对男性精液质量、精子DNA完整性Chk1基因表达的影响。方法将1 128例研究对象分为不吸烟组及吸烟组,且依据每日吸烟支数将吸烟组划分为轻度吸烟组、中度吸烟组、重度吸烟组,依据吸烟年限将吸烟组划分为:短烟龄组、中烟龄组... 目的探讨吸烟对男性精液质量、精子DNA完整性Chk1基因表达的影响。方法将1 128例研究对象分为不吸烟组及吸烟组,且依据每日吸烟支数将吸烟组划分为轻度吸烟组、中度吸烟组、重度吸烟组,依据吸烟年限将吸烟组划分为:短烟龄组、中烟龄组、长烟龄组。对各组患者行精液常规参数、精子形态、精子DNA完整性及精子Chk1基因mRNA相对表达量检测。同时就精子DNA完整性及精子Chk1基因mRNA相对表达量与精液常规参数的相关性进行分析。结果(1)吸烟组与不吸烟组总体比较:吸烟组前向运动精子率及DNA双链精子百分率较不吸烟组显著下降(P<0.05)。(2)不同烟量的影响:轻度、中度及重度吸烟组与不吸烟组相比,前向运动精子均显著下降(P<0.05),且重度吸烟组头部精子缺陷率较不吸烟组显著增高(P<0.05)。(3)不同烟龄的影响:长烟龄组精液量、浓度、总数及前向运动精子率较不吸烟组均下降显著(P<0.05),中烟龄组较不吸烟组,仅前向运动精子率显著下降(P<0.05)。长烟龄组头部精子缺陷率较不吸烟组显著增高(P<0.05)。(4)相关性分析:精子DNA损伤程度与男性精液浓度及前向运动精子率间存在相关性(P<0.05)。吸烟组患者较不吸烟组患者Chk1基因mRNA相对表达量降低(P<0.05),且精子Chk1基因mRNA表达水平与男性精液浓度及前向运动精子率间存在相关性(P<0.05)。结论吸烟可引起男性精液质量下降,且随着吸烟时间的延长及日吸烟量的增加,精液质量下降更为显著。而且,吸烟引发的精液质量下降不仅与精子DNA完整性存在一定的相关性,同时与DNA损伤修复相关基因Chk1下调相关。 展开更多
关键词 吸烟 精液质量 DNA损伤 chk1 男性不育
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一种新的抗辐射性相关蛋白AA12和CHK1相互作用研究 被引量：7
6
作者 胡宝成 薛恒刚 +3 位作者 刘爽 田媛 黄翠芬 王亚 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第5期345-348,366,共5页
目的 :研究AA12蛋白与CHK1蛋白的相互作用。方法 :用在大肠杆菌中表达纯化的AA12 (LG2 1)蛋白制备多克隆抗体 ,Western印迹检测抗体的特异性 ;用自制的抗体在A1_5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验 ;同时将AA12与Chk1基因克隆入酵母双杂... 目的 :研究AA12蛋白与CHK1蛋白的相互作用。方法 :用在大肠杆菌中表达纯化的AA12 (LG2 1)蛋白制备多克隆抗体 ,Western印迹检测抗体的特异性 ;用自制的抗体在A1_5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验 ;同时将AA12与Chk1基因克隆入酵母双杂交载体中 ,将重组质粒导入酵母菌AH10 9中 ,检测报告基因的表达情况。结果 :Western印迹结果表明该抗体可以与AA12蛋白特异结合 ;并用免疫共沉淀实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用。同时用酵母双杂交实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在酵母体内的相互作用 ,β_半乳糖苷酶活性分析和α_半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性。结论 :AA12蛋白和CHK1蛋白之间存在相互作用 ,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 抗辐射性相关蛋白 AAL2 chkl 相互作用 免疫共沉淀 酵母双杂交
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细胞周期检测点激酶1/2在相关肿瘤诊断治疗中的研究进展 被引量：4
7
作者 牛朝霞 陈洁 +1 位作者 王黎 杨红梅 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2018年第1期73-76,共4页
细胞周期检测点激酶(Checkpoint kinase)的主要作用是在细胞DNA损伤后,通过及时阻滞细胞周期有效介导受损DNA的检测与修复,进而维持细胞基因组的稳定。当前细胞周期检测点激酶主要包括细胞周期检测点激酶1(Checkpoint kinase 1,Chk1)和... 细胞周期检测点激酶(Checkpoint kinase)的主要作用是在细胞DNA损伤后,通过及时阻滞细胞周期有效介导受损DNA的检测与修复,进而维持细胞基因组的稳定。当前细胞周期检测点激酶主要包括细胞周期检测点激酶1(Checkpoint kinase 1,Chk1)和细胞周期检测点激酶2(Checkpoint kinase 2,Chk2),二者均为蛋白激酶,具有相似的化学结构和重叠的底物谱,但在不同肿瘤的组织细胞中有不同的表达。本文就Chk1和Chk2的基本结构、生理功能及相应分子生物学机制,分析总结Chk1和Chk2作为肿瘤细胞的重要靶点与人类相关肿瘤诊断治疗的关系,旨在为今后相关肿瘤的临床治疗提供新思路。 展开更多
关键词 DNA损伤 chk1 chk2 肿瘤 诊断治疗
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二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2／M期检查点Chk1与Chk2的影响 被引量：5
8
作者 陆丽峰 苏波 +5 位作者 姜浩 戴文香 向姝霖 唐海林 凌晖 苏琦 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期79-84,共6页
目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞... 目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。 展开更多
关键词 二烯丙基二硫 人胃癌MGC803细胞 G2/M期 检查点 chk1 chk2
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电离辐射诱导G_2期阻滞的机制 被引量：3
9
作者 苑晓燕 《国外医学（放射医学核医学分册）》 2002年第6期278-280,284,共4页
电离辐射损伤后,细胞通过若干关卡来调控细胞周期的进程,使细胞有时间进行DNA修复,确保染色体组的完整性和遗传稳定性,减少突变的发生。不同的电离辐射使不同细胞产生G1、G2和S期等不同时相的变化,但电离辐射后G2期阻滞的现象十分普遍... 电离辐射损伤后,细胞通过若干关卡来调控细胞周期的进程,使细胞有时间进行DNA修复,确保染色体组的完整性和遗传稳定性,减少突变的发生。不同的电离辐射使不同细胞产生G1、G2和S期等不同时相的变化,但电离辐射后G2期阻滞的现象十分普遍。近年来,对G2期阻滞机制的研究多集中在Chk1、Chk2和p53上。 展开更多
关键词 电离辐射 G2期阻滞 chk1 chk2 p53 信号转导途径 辐射损伤
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人脑胶质瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因表达研究 被引量：4
10
作者 周雪梅 乔健 +4 位作者 王娆 黄建萍 王慧博 邱裕友 陈永珍 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期653-657,共5页
目的研究ATM、ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生的关系。方法采用SYBR^TMGreen实时定量PCR技术检测35例人原发脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中的ATM、ATR、Chk1和Chk2的表达水平。结果ART、Chk1和Chk2基因在各级脑胶... 目的研究ATM、ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生的关系。方法采用SYBR^TMGreen实时定量PCR技术检测35例人原发脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中的ATM、ATR、Chk1和Chk2的表达水平。结果ART、Chk1和Chk2基因在各级脑胶质瘤中表达较正常脑组织升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。其中，ATR和Chk2基因表达在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤组织之间差异均无统计学意义（P〉0．05），而Chk1在Ⅳ级胶质瘤中的表达较Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。ATM基因表达量在正常脑组织和各级脑胶质瘤中差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中表达上调，说明这些基因可能与人脑胶质瘤的发生有关。其中，Chk1表达与肿瘤恶性程度有关，可作为判别胶质瘤病理级别的辅助指标。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 DNA损伤 细胞周期检控点 ATM ATR chk1 chk2
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shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G_2/M期阻滞的影响 被引量：1
11
作者 祝淑钗 王玉祥 +3 位作者 李任 韩春 邱嵘 沈文斌 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期127-131,共5页
背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 ... 背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 shRNA,分别提取质粒DNA并采用脂质体转染TE13细胞并传代;采用Westernblot、RT-PCR和流式细胞仪分别检测CHK1和CHK2蛋白和mRNA表达、以及5Gy60Coγ射线照射后细胞周期变化,克隆形成实验检测5Gyγ射线照射后细胞存活率。结果:采用CHK1和CHK2shRNA转染TE13细胞后,其mRNA和蛋白表达均明显降低。单纯5Gyγ射线照射后24h,TE13细胞G2/M期比例由未照射组的32.17%增至61.47%;shRNA转染的TE13细胞在5Gyγ射线照射后24h,G2/M期比例由单纯照射组的61.47%降至28.13%(CHK1)和42.80%(CHK2),P<0.05。5Gyγ射线、CHK1shRNA加5Gyγ射线、以及CHK2shRNA加5Gyγ射线照射后,细胞存活率分别为27.0%、13.0%和21.0%。shRNA转染的子一代TE13细胞在转染后120h,对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制作用已基本消失;转染120h后以5Gyγ射线照射24h,CHK1或CHK2 shRNA转染组G2/M期比例高于单纯照射组,P<0.05;至转染后144h和5Gyγ射线照射后48h,转染组与单纯照射组比较G2/M期比例无明显差别,P>0.05。结论:采用质粒连接的人CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,可以明显抑制其mRNA和蛋白表达并消除照射后G2/M期阻滞,增加放射敏感性;提示TE13细胞γ射线照射后G2/M期检测点可能受CHK1和CHK2激酶双重调节,但以CHK1为主。 展开更多
关键词 食管肿瘤 TE13细胞 Γ射线照射 细胞周期 chk1 chk2 RNA干扰
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特异性shRNA干扰人慢病毒载体抑制U251细胞株Chk1、Chk2基因的表达 被引量：2
12
作者 吴俊 赖国政 +1 位作者 叶飞 雷霆 《临床神经外科杂志》 CAS 2012年第1期11-14,共4页
目的构建针对细胞周期检测点激酶1和2(Chk1和Chk2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,包装成慢病毒,建立稳定转染的细胞株,为探讨抑制Chk1和Chk2基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Chk1和C... 目的构建针对细胞周期检测点激酶1和2(Chk1和Chk2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,包装成慢病毒,建立稳定转染的细胞株,为探讨抑制Chk1和Chk2基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Chk1和Chk2基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,命名为Chk1-shRNA和Chk2-shRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为blank-shRNA。并与pLKO.1-TRC质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑取阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶EcoRⅠ、NcoⅠ酶切电泳,DNA测序鉴定,包装慢病毒。3组重组表达慢病毒载体转染胶质瘤细胞系U251,用嘌呤霉素筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶连反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测Chk1和Chk2的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。嘌呤霉素对U251细胞的筛选浓度为4ug/ml,筛选出稳定转染三种质粒的U251细胞,Chk1-shRNA和Chk2-shRNA组细胞各自Chk1和Chk2的mRNA和蛋白表达水平明显低于blank-shRNA组。结论成功构建了针对Chk1和Chk2基因的shRNA慢病毒表达载体,转染后可抑制ChK1和Chk2基因的表达,为进一步研究Chk1和Chk2基因在脑胶质瘤细胞中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 chk1 chk2 RNA干扰 短发夹RNA
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Ch1/2对肿瘤细胞凋亡的调节作用 被引量：3
13
作者 黄伟 张瑶珍 +1 位作者 周剑锋 刘文励 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第4期252-256,共5页
目的:观察顺铂作用下K562细胞及白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)的细胞周期变化和转染Chk1／2反义寡核 苷酸对顺铂诱导下K562细胞及白血病BMMNC凋亡的影响。方法:用流式细胞仪检测顺铂作用下。K562细胞及白血病 BMMNC的细胞周期变化。转染C... 目的:观察顺铂作用下K562细胞及白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)的细胞周期变化和转染Chk1／2反义寡核 苷酸对顺铂诱导下K562细胞及白血病BMMNC凋亡的影响。方法:用流式细胞仪检测顺铂作用下。K562细胞及白血病 BMMNC的细胞周期变化。转染Chk1和Chk2反义寡核苷酸于K562细胞及白血病BMMNC,检测顺铂作用下转染细胞的凋亡 率。结果:10μmol／L顺铂作用下K562细胞和白血病BMMNC均出现S期阻滞,转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂 诱导下K562细胞凋亡,转染Chk1反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下白血病BMMNC的凋亡率,但转染Chk2反义寡核苷酸 未增加白血病BMMNC的凋亡率。结论:Chk1在肿瘤细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肿瘤增敏治疗的有效靶点,Chk2在 肿瘤细胞凋亡中的作用需进一步研究。 展开更多
关键词 K562细胞 白血病 chk1 chk2 凋亡
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Chk1基因在人类精子中的表达及其意义 被引量：4
14
作者 刘德风 李斌 +7 位作者 姜辉 马潞林 洪锴 赵连明 袁人培 陈茜 柳建明 李翀 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期811-815,共5页
目的:探讨Chk1基因在人精子中的表达及其临床意义。方法:收集正常组、少精子组、弱精子组和少弱精子组的标本各20份,分别采用Western印迹和RT-PCR方法检测各组精子中Chk1的表达,并计算其相对表达量;采用DNA梯度法检测4组精子中DNA的损... 目的:探讨Chk1基因在人精子中的表达及其临床意义。方法:收集正常组、少精子组、弱精子组和少弱精子组的标本各20份,分别采用Western印迹和RT-PCR方法检测各组精子中Chk1的表达,并计算其相对表达量;采用DNA梯度法检测4组精子中DNA的损伤和梯度变化,用Annexin V/PI双染色法检测各组精子的凋亡情况。结果:Chk1基因在正常组和其他3组的精子中均有表达,Chk1在各组中表达有差异,在正常组、少精子组、弱精子组和少弱精子组的Chk1 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.22、0.76±0.10、0.45±0.08、0.37±0.07,各组间比较差异有显著性(P<0.01)。CHK1蛋白的相对表达量与mRNA类似。DNA梯度检测显示弱精子组和少弱精子组中DNA呈现梯状条带;Annexin V/PI双染色法检测发现,与正常组相比,少精子组、弱精子组、少弱精子组和100%d级精子组中精子凋亡率明显增加[分别为(7.6±0.34)%、(8.3±0.60)%、(11.6±0.92)%、(12.5±1.43)%和(17.0±1.98)%,各组间比较P<0.05]。结论:实验证实Chk1在人类精子中有表达,且在不同患者中的表达显著不同,Chk1的表达与DNA损伤和精子凋亡之间存在相关性。即Chk1表达的减少可能导致精子DNA损伤修复功能的下降,精子凋亡增加,从而影响精液质量。 展开更多
关键词 chk1 男性不育 精子 RT-PCR DNA损伤 凋亡
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CK5/6、Chk1表达在乳腺癌诊断及预后评估中的价值分析
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作者 范婧婧 陈众 +1 位作者 谷军星 王新帅 《实用癌症杂志》 2023年第8期1345-1348,共4页
目的 探讨CK5/6、Chk1表达在乳腺癌诊断及预后评估中的价值。方法 选取乳腺癌患者90例为研究组,另选取20例乳腺良性病变患者作为对照组。收集患者临床资料,免疫组化法检测乳腺癌及乳腺良性病变组织中CK5/6、Chk1的表达水平,分析与其临... 目的 探讨CK5/6、Chk1表达在乳腺癌诊断及预后评估中的价值。方法 选取乳腺癌患者90例为研究组,另选取20例乳腺良性病变患者作为对照组。收集患者临床资料,免疫组化法检测乳腺癌及乳腺良性病变组织中CK5/6、Chk1的表达水平,分析与其临床病理特征、诊断和预后的关系。结果 CK5/6、Chk1表达与乳腺癌组织学分级有关(P<0.05),与乳腺癌患者年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、组织学分级无关(P>0.05)。CK5/6、Chk1表达阴性患者的总生存率均显著高于阳性表达患者(P<0.05)。乳腺癌患者CK5/6、Chk1表达阳性率显著高于乳腺良性病变组(P<0.05)。ROC曲线分析可知,CK5/6、Chk1诊断乳腺癌AUC分别是0.701,0.729,联合检测AUC为0.803。结论 CK5/6、Chk1表达与乳腺癌临床病理特征有关,可能是影响患者预后的因素,且具有一定的诊断意义。 展开更多
关键词 乳腺癌 CK5/6 chk1 诊断 预后
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活化Chk1引起的G_2/M期阻滞在调节K562/A02细胞耐药中的机制探讨 被引量：4
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作者 王海燕 张敏 +5 位作者 邹萍 游泳 郭静明 唐晓琼 赵智刚 吴耀辉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1105-1109,共5页
本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制。以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA... 本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制。以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Westernblot检测转染前后Chk1磷酸化水平;靶向Chk1shRNA抑制细胞内Chk1的表达后,用流式细胞术检测阿霉素作用后细胞的凋亡情况。结果表明阿霉素致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞(36.99±1.28)%;Chk1mRNA表达水平在K562与K562/A02细胞间无显著差异;Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为0.79±0·56,在K562细胞为0.27±1·47,其差异有统计学意义。转染Chk1shRNA后,两株细胞的Chk1磷酸化水平显著下降。转染组K562、K562/A02细胞凋亡率分别是空载体转染组的1.30倍和3.84倍。结论Chk1的活化水平调控着K562/A02细胞对阿霉素的敏感性。 展开更多
关键词 chk1 G2/M期阻滞 K562细胞 K562/A02细胞 RNA干扰 白血病细胞耐药
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Chk1蛋白激酶及其抑制剂的研究进展 被引量：1
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作者 袁会军 张秋菊 +2 位作者 范钰 李晶晶 刘斌 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第17期2797-2800,共4页
Chk1(checkpoint kinase 1,Chk1)属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员,在DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)中是细胞周期检测点的核心蛋白。很多研究表明,Chk1蛋白激酶具有促进肿瘤细胞增生的功能,它的缺乏能使肿瘤细胞对放疗或化疗更... Chk1(checkpoint kinase 1,Chk1)属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员,在DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)中是细胞周期检测点的核心蛋白。很多研究表明,Chk1蛋白激酶具有促进肿瘤细胞增生的功能,它的缺乏能使肿瘤细胞对放疗或化疗更加敏感,且其抑制剂与其它分子靶向药物联合应用具有"合成致死"的效应,因此Chk1可作为今后肿瘤治疗的新靶点。本文就Chk1蛋白激酶及其在肿瘤治疗中的作用作一综述。 展开更多
关键词 chk1 DDR 细胞周期 chk1抑制剂
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南蛇藤多萜通过抑制Chk1介导胃癌细胞DNA损伤并诱导其凋亡 被引量：5
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作者 姜壮壮 游越 +2 位作者 赵阳 陶丽 刘延庆 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期417-423,共7页
目的从DNA损伤应答角度探讨南蛇藤多萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对胃癌细胞的抑制作用。方法CCK-8实验考察不同浓度(0、20、40、80、160、320 mg·L^(-1))的南蛇藤多萜对胃癌细胞的毒性影响;克... 目的从DNA损伤应答角度探讨南蛇藤多萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对胃癌细胞的抑制作用。方法CCK-8实验考察不同浓度(0、20、40、80、160、320 mg·L^(-1))的南蛇藤多萜对胃癌细胞的毒性影响;克隆形成率实验检测TTC对胃癌细胞的克隆形成的影响;彗星实验分析南蛇藤多萜对胃癌细胞DNA的影响;Western blot实验检测DNA损伤相关蛋白γH2AX、Poly-PAR、p-Chk1以及cleaved-PARP1的影响。结果TTC在24 h,48 h,72 h对AGS和MKN-45细胞的IC 50分别是421.1、99.68、58.57 mg·L^(-1)和308.2、124.1、68.21 mg·L^(-1);克隆形成实验表明5、10 mg·L^(-1)的TTC对AGS和MKN-45细胞的克隆形成抑制率分别为29.67%、61.46%和42.73%、64.39%;TTC能够加重胃癌细胞DNA损伤而同等剂量对正常胃粘膜上皮细胞GES-1细胞DNA几乎无损伤;TTC能够增加DNA单双链断裂Poly-PAR、γH2AX蛋白的表达;抑制Chk1的磷酸化水平表达,并增加cleaved-PARP1的蛋白表达。结论TTC能够抑制DNA损伤应答激酶Chk1的激活,从而诱导胃癌细胞DNA单双链断裂加剧最终诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 南蛇藤多萜 胃癌细胞 chk1 DNA双链断裂 DNA损伤应答 细胞凋亡
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沉默细胞周期检测点激酶1（Chkl）对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响 被引量：5
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作者 刘艳杰 顾浩 +7 位作者 乔玉环 史惠蓉 张梦真 边爱平 纪妹 郭红军 常青 郭瑞霞 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期102-106,共5页
目的 探讨siRNA沉默细胞周期检测点激酶1（Chk1）基因对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法 合成Chk1基因的小分子干扰RNA（si-Chk1），将si-NC或者si-Chk1分别转染到宫颈癌HeLa细胞中，0、2、4、6、8、10 Gy剂量的X射线照射细胞，RT... 目的 探讨siRNA沉默细胞周期检测点激酶1（Chk1）基因对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法 合成Chk1基因的小分子干扰RNA（si-Chk1），将si-NC或者si-Chk1分别转染到宫颈癌HeLa细胞中，0、2、4、6、8、10 Gy剂量的X射线照射细胞，RT-qPCR和Western blot检测转染后Chk1的mRNA水平和蛋白水平的表达，MTT方法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡，克隆形成实验检测转染后HeLa细胞放射敏感性，Western blot检测转染后P21蛋白和抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平。结果 si-Chk1转染到HeLa细胞后，HeLa细胞Chk1基因的mRNA和蛋白表达水平均显著下降（t=2.12-5.86，P〈0.05），沉默Chk1的表达抑制了宫颈癌HeLa细胞的增殖（t=3.15-6.36，P〈0.05），同时降低宫颈癌HeLa细胞克隆形成能力（t=1.58-6.36，P〈0.05），上调P21（t=4.35，P〈0.05）、下调Bcl-2蛋白（t=2.37，P〈0.05）的表达水平。结论 siRNA沉默Chk1表达能够增强HeLa细胞放射敏感性。 展开更多
关键词 RNA干扰 chk1 宫颈癌 放射敏感性
原文传递
口腔黏膜癌变过程中Chk1和Chk2的表达及意义 被引量：1
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作者 金刚石 蔡扬 周瑛 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期649-652,共4页
目的探讨Chk1和Chk2在口腔黏膜癌变过程中的作用及意义。方法采用免疫组化SABC法检测10例口腔正常黏膜组织、29例口腔黏膜癌前病变组织及40例口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中Chk1和Chk2蛋白的表达,分析二者表... 目的探讨Chk1和Chk2在口腔黏膜癌变过程中的作用及意义。方法采用免疫组化SABC法检测10例口腔正常黏膜组织、29例口腔黏膜癌前病变组织及40例口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中Chk1和Chk2蛋白的表达,分析二者表达的相关性及二者在口腔黏膜癌变过程中的作用及意义。结果 (1)Chk1和Chk2在口腔黏膜癌前病变组织及OSCC组织中的阳性率明显低于口腔正常黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)Ⅰ+Ⅱ期OSCC组织中Chk1的阳性率明显高于Ⅲ+Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05);Chk2在伴有淋巴结转移的OSCC组织中的阳性率明显低于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Chk1在Chk2阳性的OSCC组织中的阳性率为60%(6/10),在Chk2阴性的OSCC组织中阳性率为20%(6/30),Chk1和Chk2表达呈正相关(r=0.378,P<0.05)。结论细胞周期调控因子Chk1和Chk2表达下调是口腔黏膜癌变过程中的早期事件,可能是口腔黏膜上皮发生癌变的重要因素之一;Chk1和Chk2在OSCC组织中的失表达有可能作为临床评估OSCC预后的参考指标之一。 展开更多
关键词 口腔肿瘤 鳞状细胞癌 癌前病变 chk1 chk2 免疫组织化学
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