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通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达 被引量：10
1
作者 白银 王琰 +3 位作者 张海荣 周丽君 吕英谦 俞莉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-64,67,共4页
目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量... 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。 展开更多
关键词 载体 DHFR基因 真核表达 抗体 CHO细胞
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抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达 被引量：10
2
作者 瞿秋霞 陈永井 +4 位作者 葛彦 王勤 陈成 杨明峰 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期189-192,共4页
目的:通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体。方法:从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA,用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAbVH和VL的DNA编码区基因。根据序列分析的结果,设计引物扩... 目的:通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体。方法:从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA,用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAbVH和VL的DNA编码区基因。根据序列分析的结果,设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。利用基因重组技术,将mAb5C11的VH、VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、Cκ链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11。用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达。利用流式细胞术对表达产物进行鉴定。结果:NCBI基因数据库Blast的结果显示,克隆的基因序列符合小鼠VH、VL基因及其信号肽序列的特征。表达质粒pIRES/h5C11的构建正确,并在293T细胞株中获得瞬时表达。表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb5C11具有相同的抗原结合位点。结论:成功地克隆了鼠抗人CD40mAbV区编码基因,并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达。 展开更多
关键词 单克隆抗体 嵌合抗体 CD40
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抗CD20治疗性单克隆抗体的研究进展 被引量：10
3
作者 邓承莲 邹佳 宋海峰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1515-1520,共6页
作为治疗B细胞淋巴瘤的靶向药物,抗CD20单克隆抗体在治疗性抗体中占有重要的一席之地。经历十几年的研究发展,该类药物结构不断改进,适应症也随之增多。如今,该类抗体不仅可以用于治疗淋巴细胞来源的肿瘤,也逐步应用于一些自身免疫性疾... 作为治疗B细胞淋巴瘤的靶向药物,抗CD20单克隆抗体在治疗性抗体中占有重要的一席之地。经历十几年的研究发展,该类药物结构不断改进,适应症也随之增多。如今,该类抗体不仅可以用于治疗淋巴细胞来源的肿瘤,也逐步应用于一些自身免疫性疾病的治疗,其新型适应症还在不断探索中;同时,该类抗体临床给药方案不断优化,药物反应性不断提高,疗效和毒副作用都得以进一步改善,但和其他化疗药物联合治疗的确切作用机制尚仍有待进一步的深入研究。本文就近年来具有代表性的抗CD20治疗性单克隆抗体的研究新进展做一概述。 展开更多
关键词 治疗性单克隆抗体 嵌合抗体 人源化抗体 人源抗体 Fc修饰
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CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究 被引量：10
4
作者 徐耀瑜 胡玲玲 +7 位作者 陈永井 程钢 罗先富 孙杰 刘玉华 王艳茹 陈明心 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期114-117,共4页
目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转... 目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;ProteinG亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用。结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖。结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性。 展开更多
关键词 CD80 嵌合抗体 瞬时表达 稳定表达 阻断作用
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抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达 被引量：9
5
作者 白银 王琰 +3 位作者 周丽君 黄啸 丁义 俞莉章 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期402-406,共5页
目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行... 目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。 展开更多
关键词 人-鼠嵌合抗体 真核表达 单克隆抗体 药物载体 膀胱肿瘤 治疗 膀胱癌
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基因工程抗体研究进展 被引量：8
6
作者 王秀红 周素芳 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期304-306,共3页
临床治疗中人抗鼠抗体反应的出现使鼠源性单克隆抗体的应用受到了极大的限制。为降低其免疫原性,人们利用基因工程技术对鼠源抗体进行改造,以减少其鼠源成分。简要概述了目前研究比较多的几种基因工程抗体及其临床应用。
关键词 基因工程抗体 嵌合抗体 CDR移植抗体
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人鼠嵌合抗肿瘤细胞核单抗-空间稳定脂质体的制备及其体外靶向(英文) 被引量：10
7
作者 潘弘 牛国琴 +1 位作者 潘俊 陆伟跃 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期506-512,共7页
目的研究人鼠嵌合抗肿瘤细胞核单抗(chTNT-3)-空间稳定脂质体的制备方法、免疫活性及体外靶向性。方法合成聚乙二醇末端带吡啶二硫丙酰基的磷脂衍生物(PDP-PEG-HSPE),制备含PDP-PEG-HSPE的空间稳定脂质体,经二巯基苏糖醇还原后共价连接... 目的研究人鼠嵌合抗肿瘤细胞核单抗(chTNT-3)-空间稳定脂质体的制备方法、免疫活性及体外靶向性。方法合成聚乙二醇末端带吡啶二硫丙酰基的磷脂衍生物(PDP-PEG-HSPE),制备含PDP-PEG-HSPE的空间稳定脂质体,经二巯基苏糖醇还原后共价连接马来酰亚胺衍生化抗体。荧光胺法和钼蓝法测定脂质体与抗体的连接效率及抗体密度,激光散射粒度仪测定其粒径分布,ELISA法检测脂质体表面的抗体免疫活性。体外实验考察该免疫脂质体与固定Raji细胞的结合活性。结果chTNT-3-空间稳定脂质体的粒径分布为(115±33)nm。当初始Ab/PDP-PEG-HSPE=1∶10时,脂质体与抗体的连接效率为71%,抗体密度为106μgAb/μmolPL。chTNT-3经化学修饰后连接到脂质体表面,其免疫活性基本保留。chTNT-3-空间稳定脂质体能特异性地结合固定Raji细胞。结论通过PDP-PEG-HSPE法共价连接抗体制备的chTNT-3-空间稳定脂质体能基本保留chTNT-3的免疫活性,具有体外靶向细胞核抗原的能力。 展开更多
关键词 嵌合抗体 免疫脂质体 空间稳定脂质体 免疫活性 体外靶向
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CD80人-鼠嵌合抗体对B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用 被引量：9
8
作者 王艳茹 马泓冰 +6 位作者 陈永井 朱华亭 刘玉华 杜阳阳 孙杰 陈明心 邱玉华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期615-618,共4页
目的:研究CD80人-鼠嵌合抗体(命名为ch-4E5)对天然高表达CD80分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用。方法:采用免疫荧光及流式细胞术(FCM)分析ch-4E5对Raji及Daudi细胞膜型CD80分子的识别;将ch-4E5分别加入到Raji... 目的:研究CD80人-鼠嵌合抗体(命名为ch-4E5)对天然高表达CD80分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用。方法:采用免疫荧光及流式细胞术(FCM)分析ch-4E5对Raji及Daudi细胞膜型CD80分子的识别;将ch-4E5分别加入到Raji及Daudi中共培养,终浓度为10mg/L。在培养的第0、4、10、16、24及48h,采用FCM检测细胞表面Fas及FasL的表达;培养至72h,MTT法检测细胞的增殖;以人外周血PBMC为效应细胞,Raji与Daudi为靶细胞,效靶比为20∶1,加入ch-4E5,终浓度为10mg/L。培养至24h,MTT法分析ADCC效应。结果:ch-4E5与Raji及Daudi的阳性结合率分别为98.6%和96.4%。ch-4E5分别与Raji及Daudi共培养至4h,Raji细胞表面FasL的表达开始上调,16h的阳性表达率为16.8%,与人IgG1对照组1.5%比较明显升高(P<0.01);Fas的表达从10h起逐渐增高,24h达高峰,阳性表达率为15.6%,与人IgG1对照组4.5%比较具有统计学意义(P<0.01)。Daudi的FasL及Fas的变化趋势与Raji一致。ch-4E5分别与Raji及Daudi共培养至72h,细胞增殖的抑制率分别为34.60%和32.64%(P<0.01);ch-4E5介导PBMC对Raji及Daudi的杀伤率分别为55.61%及54.42%(P<0.01)。结论:CD80人-鼠嵌合抗体能够通过其Fab段及Fc段发挥双重的抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 CD80 嵌合抗体 抑制作用 Fas FASL ADCC
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抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达 被引量：5
9
作者 冉宇靓 孔健 +4 位作者 赵泽国 孙立新 遇珑 刘军 杨治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期407-410,共4页
目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴... 目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。 展开更多
关键词 结肠癌 CHO细胞 免疫治疗 抗CEA嵌合抗体
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抗人CD86人-鼠嵌合抗体的构建及在CHO细胞的表达 被引量：6
10
作者 胡玲玲 徐耀瑜 +7 位作者 陈永井 马泓冰 程钢 刘玉华 王艳茹 孙杰 陈明心 邱玉华 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期104-109,共6页
从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因。通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人... 从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因。通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人IgG1的CH基因、Cκ链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/1D1。转染293T细胞进行瞬时表达,采用流式细胞术分析,转染上清与L929-CD86基因转染细胞的阳性结合率为97.6%。既而转染CHO细胞,经G418筛选,获取稳定分泌嵌合抗体的基因转染细胞株(CHO-ch1D1)。收集无血清培养基的培养上清,采用Protein G亲和层析柱分离纯化,经Lowr法定量。从上清中获取的嵌合抗体蛋白的得率为3.066 mg/L。经进一步间接免疫荧光及流式细胞术分析,纯化嵌合抗体与L929-CD86基因转染细胞,及Daudi细胞膜型CD86分子的阳性结合率分别为98.5%和95.7%。将嵌合抗体(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,嵌合抗体对Daudi细胞的生长具有抑制作用(P<0.05)。本研究获取的嵌合抗体在CD86分子的基础和应用研究中具有重要的价值。 展开更多
关键词 CD86 单克隆抗体 嵌合抗体 瞬时表达 稳定表达
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CD86嵌合抗体对系统性红斑狼疮患者自身反应性B细胞的作用及影响研究 被引量：9
11
作者 刘玉华 陈兆军 +5 位作者 韩杰 潘峰 鄢巨振 张腊红 郑小银 刘杨 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期481-486,共6页
目的：探讨CD86嵌合抗体ch1D1对系统性红斑狼疮（ systemic lupus erythematosus, SLE）患者自身反应性B细胞的作用及影响。方法利用流式细胞术分析SLE患者B细胞表面CD86的表达水平及ch1D1对SLE患者CD4＋T细胞活化的影响；利用磁珠法分... 目的：探讨CD86嵌合抗体ch1D1对系统性红斑狼疮（ systemic lupus erythematosus, SLE）患者自身反应性B细胞的作用及影响。方法利用流式细胞术分析SLE患者B细胞表面CD86的表达水平及ch1D1对SLE患者CD4＋T细胞活化的影响；利用磁珠法分选出健康志愿者和SLE患者外周血单个核细胞（ PBMC）中的B细胞、NK细胞以及CD4＋T细胞用于后续实验；利用LDH释放法检测ch1D1介导对SLE患者B细胞的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ antibody dependent cell medi-ated cytotoxicity,ADCC）及补体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ complement dependent cell mediated cy-totoxicity,CDC）,利用ELISA法检测ch1D1对SLE患者B细胞分泌自身抗体的影响,利用3H掺入法分析ch1D1对SLE患者CD4＋T细胞增殖的影响。结果 SLE患者B细胞上CD80（68.08±14.28 vs 46.10±12.14,n=24,P〈0.0001）和CD86（44.72±14.90 vs 13.99±10.74,n=24,P〈0.0001）的表达水平显著高于健康志愿者,提示B细胞异常活化；与对照组相比,ch1D1能更有效介导对SLE患者B细胞的ADCC和CDC作用（P=0.0172,P=0.0388）；活化的T细胞显著增强SLE患者B细胞产生自身抗体,ch1D1显著抑制了SLE患者自身抗体的分泌（P=0.0019）；SLE患者CD4＋T细胞活化和增殖水平显著高于健康志愿者,而ch1D1显著抑制 SLE患者 CD4＋T细胞的增殖和活化（ P=0.0024,P=0.0495）。结论 CD86嵌合抗体能更有效地介导对SLE患者自身反应性B细胞的ADCC和CDC作用,抑制其自身抗体的分泌,抑制自身反应性CD4＋T细胞的增殖和活化,有望成为治疗SLE的新型免疫制剂。 展开更多
关键词 CD86 嵌合抗体 SLE 自身反应性B细胞 自身抗体
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TP-PCR法构建抗人CD28嵌合抗体双启动子昆虫杆状病毒重组转移载体 被引量：6
12
作者 朱艳 陈永井 +2 位作者 邱玉华 郑峰丰 朱江 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期832-836,共5页
为构建能同时表达抗人CD28嵌合重链和嵌合轻链基因的双启动子杆状病毒转移载体,利用PCR法扩增出抗人CD28鼠源性单抗的可变区基因和人IgG1的恒定区基因,再采用一种不需要限制性核酸内切酶和连接酶的新方法———三引物PCR(TP_PCR)法将两... 为构建能同时表达抗人CD28嵌合重链和嵌合轻链基因的双启动子杆状病毒转移载体,利用PCR法扩增出抗人CD28鼠源性单抗的可变区基因和人IgG1的恒定区基因,再采用一种不需要限制性核酸内切酶和连接酶的新方法———三引物PCR(TP_PCR)法将两者拼接后分别插入杆状病毒转移载体pAcUW3的ph和p10启动子后,并通过酶切、电泳、PCR扩增和测序对重组体进行了鉴定。研究结果表明,TP_PCR法快速、方便、准确,无需设计外源的DNA序列,就能构建完好的融合表达基因。该转移载体的构建成功为嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达奠定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒 转移载体 CD28单克隆抗体 嵌合抗体 TP-PCR
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抗rh-bFGF嵌合抗体真核表达载体的构建与表达 被引量：5
13
作者 向军俭 李洪庆 +3 位作者 邓宁 杨红宇 童贻刚 李建民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-167,共5页
目的 :构建并在真核细胞中表达抗人重组碱性成纤维生长因子 (rh bFGF)人 鼠嵌合抗体。方法 :从分泌抗rh bFGF鼠单抗(mAb) 1F11的杂交瘤细胞中扩增、克隆VL、VH 基因 ,从质粒pMDHC和pMDLC中扩增、克隆CL、CH 基因 ,测序鉴定后插入真核... 目的 :构建并在真核细胞中表达抗人重组碱性成纤维生长因子 (rh bFGF)人 鼠嵌合抗体。方法 :从分泌抗rh bFGF鼠单抗(mAb) 1F11的杂交瘤细胞中扩增、克隆VL、VH 基因 ,从质粒pMDHC和pMDLC中扩增、克隆CL、CH 基因 ,测序鉴定后插入真核表达载体 ,并转化二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢(CHO dhfr- )细胞进行表达。采用间接ELISA检测表达产物的人源性和其抗原结合活性。结果 :序列测定表明所克隆的抗体基因是功能性抗体的V区基因 ,在转化细胞的培养上清中可检测到抗rh bFGF嵌合抗体的表达。ELISA试验证实 ,该嵌合抗体具有人源C区 ,并具有鼠mAb 1F11的抗原结合活性。结论 :在真核细胞中成功地表达抗rh bFGF的人 鼠嵌合抗体 。 展开更多
关键词 碱性成纤维生长因子 嵌合抗体 基因表达 CHO细胞
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抗CD20嵌合抗体的构建与表达 被引量：6
14
作者 王玉刚 黄英 +5 位作者 谷欣 于鸣 冯健男 孙瑛勋 黎燕 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期363-367,共5页
目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-2... 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。 展开更多
关键词 杂交瘤 质谱分析 嵌合抗体
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抗HER-2嵌合抗体chA21对SKBR3细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用 被引量：5
15
作者 薛花 吴强 +4 位作者 胡向阳 凌晓光 杨枫 程联胜 刘兢 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1463-1466,共4页
目的探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术(FCM)、原位末端标记技术(TUNEL)等方法观察和检测chA21对人乳腺癌SKBR3细胞增殖的... 目的探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术(FCM)、原位末端标记技术(TUNEL)等方法观察和检测chA21对人乳腺癌SKBR3细胞增殖的抑制和凋亡的诱导。结果chA21(0.2～5.4mg.L^(-1))可抑制SKBR3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论chA21在体外可抑制SKBR3细胞的增殖,诱导其凋亡是其主要作用途径之一。 展开更多
关键词 HER-2 嵌合抗体 CHA21 乳腺癌 SKBR3 增殖 凋亡
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B7-2基因工程抗体的制备及体内外抗B淋巴瘤作用研究 被引量：5
16
作者 刘玉华 孙杰 +7 位作者 陈明心 郭静雅 胡玲玲 王艳茹 陈昌友 高增燕 朱晓燕 邱玉华 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期107-112,共6页
构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体(命名为ch3C8)。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig的Fc段可介导高效的A... 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体(命名为ch3C8)。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 B7-2 嵌合抗体 淋巴瘤 凋亡 ADCC效应 CDC效应
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^(188)Re标记CEA嵌合人源化抗体在荷人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究 被引量：4
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作者 赵泽国 冉宇靓 +4 位作者 郑蓉 孔健 陈盛祖 遇珑 杨治华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期460-463,共4页
背景与目的:癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)在多种肿瘤,尤其是在结肠癌中高表达,抗CEA抗体在人结肠癌的诊断治疗中具有良好的应用前景。本研究采用188Re标记CEA嵌合抗体,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物分布及放射免疫显像。... 背景与目的:癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)在多种肿瘤,尤其是在结肠癌中高表达,抗CEA抗体在人结肠癌的诊断治疗中具有良好的应用前景。本研究采用188Re标记CEA嵌合抗体,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物分布及放射免疫显像。方法:用氯化亚锡还原法标记CEA嵌合抗体及其亲本鼠单抗C50,薄层层析法鉴定标记抗体的标记率、放化纯度及体外稳定性,ELISA鉴定标记后的免疫活性,研究188Re-CEA嵌合抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的分布及放射免疫显像效果,并与C50鼠单抗的显像效果进行比较。结果:188Re-CEA嵌合抗体的放化纯度大于95%;比活为356MBq/mg;免疫活性为61%;薄层层析示其在体外稳定。188Re-CEA嵌合抗体的生物学分布显示:注射后24h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为0.75、0.99,与其余各脏器的放射性比值均大于1.78;48h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为1.02、1.12,与其余各脏器的放射性比值均大于2.08。20h后,肿瘤显影清晰。CEA嵌合抗体的放射生物学特性及显像效果与C50鼠单抗基本相同。结论:188Re-CEA嵌合抗体在裸鼠体内放射免疫显像显示出良好的肿瘤特异性,且显像速度较快,可显示的肿瘤最小可达0.5cm。CEA嵌合抗体降低了免疫原性,在人体内显像更优于其亲本鼠单抗C50。 展开更多
关键词 癌胚抗原 嵌合抗体 放射免疫显像 结肠癌 免疫原性 诊断
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家蚕细胞和虫体产生抗人小细胞肺癌抗体 被引量：2
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作者 杨冠珍 吴祥甫 +1 位作者 刘健 张中华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期41-45,共5页
用重组昆虫病毒表达系统，在家蚕细胞和虫体表达了抗人小细胞肺癌人鼠嵌合抗体。重组病毒ｒＮＰＶＬ２，ｒＮＰＶＨ１７及双重组病毒ｒＮＰＶＬＨ１９感染的家蚕细胞和虫体血淋巴中都检测到抗体分子的表达。双重组病毒的双基因共表达... 用重组昆虫病毒表达系统，在家蚕细胞和虫体表达了抗人小细胞肺癌人鼠嵌合抗体。重组病毒ｒＮＰＶＬ２，ｒＮＰＶＨ１７及双重组病毒ｒＮＰＶＬＨ１９感染的家蚕细胞和虫体血淋巴中都检测到抗体分子的表达。双重组病毒的双基因共表达部分产物可装配。ＥＬＩＳＡ分析表明抗体重轻链基因共表达产物具有比单基因表达产物高得多的与小细胞肺癌细胞免疫结合功能。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 嵌合抗体 双重组家蚕病毒 基因表达
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靶向SARS-CoV-2受体结合结构域的嵌合抗体表达及功能研究
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作者 石慧春 焦凡珂 +3 位作者 徐巍 陈永康 陆路 邹鹏 《微生物与感染》 CAS 2023年第1期2-12,共11页
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-... 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-2有效的治疗方法仍有限,因此寻找广谱中和抗体阻断SARS-CoV-2感染具有重要的意义。本文成功表达并纯化了3株靶向SARS-CoV-2的受体结合结构域(receptor-binding domain,RBD)的人鼠嵌合抗体,并且检测了这几株抗体对多种SARS-CoV-2假病毒和活病毒的中和活性。本研究表明这3株抗体能特异性地中和SARS-CoV-2野生型假病毒,IC 50分别为0.03μg/mL、0.06μg/mL、0.03μg/mL。此外,这3株抗体对Alpha株假病毒、Delta株假病毒和Lambda株假病毒也具有广谱中和活性,并可以抑制SARS-CoV-2 Delta株活病毒的复制。机制研究表明,这些抗体可以阻断SARS-CoV-2的S蛋白介导的细胞-细胞融合,且RBD上的K417、E484和N501位点可能是其与这3株抗体结合的关键位点。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 受体结合结构域 嵌合抗体 中和抗体
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轻链单个氨基酸改变可增强新冠病毒嵌合抗体的中和能力
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作者 殷姿 廉朝阳 +3 位作者 高波 田莹 郝茜 叶菱秀 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期718-727,共10页
目的·筛选对新冠病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)具有中和能力的人鼠嵌合抗体,并分析其轻链上的关键氨基酸位点变化。方法·以SARS-CoV-2刺突蛋白作为免疫原,免疫抗体重链基因人源化的小鼠... 目的·筛选对新冠病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)具有中和能力的人鼠嵌合抗体,并分析其轻链上的关键氨基酸位点变化。方法·以SARS-CoV-2刺突蛋白作为免疫原,免疫抗体重链基因人源化的小鼠,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和假病毒中和实验检测小鼠血清抗体水平,应用流式细胞术分选小鼠脾脏和淋巴结中的浆细胞和生发中心(germinal center,GC)B细胞并分析各类B细胞比例。提取细胞的RNA构建鼠源抗体轻链基因文库,与固定的人源抗体重链基因配对表达抗体,并采用ELISA筛选高亲和力嵌合抗体。与鼠源胚系抗体轻链基因比对,分析高亲和力嵌合抗体轻链的氨基酸变化位点。分别构建并表达轻链单个氨基酸位点改变的嵌合抗体,通过ELISA和假病毒中和实验检测其亲和力及中和能力;比较上述位点改变前后嵌合抗体的亲和力及中和能力,并分析具有关键作用的氨基酸位点变化。结果·与未免疫小鼠相比,免疫后小鼠血清中针对SARS-CoV-2的特异性抗体的滴度增加,脾脏和淋巴结中的浆细胞和GC B细胞的比例亦有增加。ELISA的结果显示,从小鼠脾脏的GC B细胞中筛选到具有高亲和力的嵌合抗体。该抗体轻链的第76位苏氨酸替换成了异亮氨酸,且第98位苯丙氨酸发生缺失。随后,ELISA结果显示,该嵌合抗体具有较强的亲和力,轻链氨基酸没有变化的抗体和轻链仅携带第98位氨基酸缺失的抗体的亲和力较弱,而轻链仅携带第76位氨基酸替换的抗体的亲和力介于嵌合抗体和轻链氨基酸没有变化的抗体之间。假病毒中和实验的结果显示,该嵌合抗体的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为0.995 ng/μL;轻链仅携带第76位氨基酸替换的抗体的IC_(50)为1.724 ng/μL,中和能力有所减弱;轻链仅携带第98位氨基酸缺失的抗体的IC_(50)为71.05 ng/μL,轻链� 展开更多
关键词 嵌合抗体 中和抗体 新冠病毒 轻链 体细胞高频突变
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