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从细胞中萃取特定物质机理的研究 被引量：40
1
作者 贾贵儒 杨海燕 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第2期68-72,共5页
完成了激光辐射、微波辐射、交变电场和不同温度中溶剂萃取实验。研究了超声溶剂萃取。结果发现，为了得到相同的萃取量，不同方法的提取时间相差几倍、甚至几十倍。分析了各种条件下萃取过程，从细胞中萃取特定物质过程的主要问题是如... 完成了激光辐射、微波辐射、交变电场和不同温度中溶剂萃取实验。研究了超声溶剂萃取。结果发现，为了得到相同的萃取量，不同方法的提取时间相差几倍、甚至几十倍。分析了各种条件下萃取过程，从细胞中萃取特定物质过程的主要问题是如何打破细胞壁这层势垒，让特定的物质从细胞中释放出来与溶剂直接接触。并提出微波辐射溶剂萃取在天然香料提取和中药西制领域有很好的应用前景。 展开更多
关键词 细胞 萃取机理 微波 超声波 辐射 植物细胞
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猪胸主动脉脱细胞血管基质的制备 被引量：11
2
作者 顾春虎 刘维永 +3 位作者 张近宝 易定华 潭红梅 王云雅 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1040-1041,i001,共3页
目的 完全去除猪胸主动脉的细胞,制备成血管脱细胞基质。方法 采用胰酶和TritonX-100制备猪胸主动脉脱细胞基质。根据TritonX-100的浓度将实验分为0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％等6组。标本进行大体、光镜、电镜观察,并进行... 目的 完全去除猪胸主动脉的细胞,制备成血管脱细胞基质。方法 采用胰酶和TritonX-100制备猪胸主动脉脱细胞基质。根据TritonX-100的浓度将实验分为0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％等6组。标本进行大体、光镜、电镜观察,并进行DNA含量的测定。结果0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％浓度的TritonX-100能分别在(104.0±3.8)h、(89.6±3.4)h、(74.4±3.9)h、(72.8±2.5)h、(72.0±0.0)h、(72.0±0.0)h内完全脱除猪胸主动脉的细胞,同时较好地保持了胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布。TritonX-100的脱细胞作用呈浓度依赖性,最佳脱细胞浓度为0.5％。结论 本方法可以成功制备大血管脱细胞基质,可以进一步用于组织工程带瓣管道或瓣膜的研究。 展开更多
关键词 胸主动脉 脱细胞基质 大血管 瓣膜 带瓣管道 光镜 胶原纤维 TRITONX-100 胰酶 标本
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基于细胞萃取及分子对接的淫羊藿中雌激素样作用成分分析 被引量：9
3
作者 杨珍 王媛 +5 位作者 张艳军 李爱主 田梦 范思邈 杨珅珅 李遇伯 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期62-66,共5页
目的:利用T47D细胞/液质联用及分子对接筛选淫羊藿中具有雌激素样作用的成分。方法:采用溶有淫羊藿提取物的培养基培养T47D细胞,具有雌激素样作用的成分选择性地与T47D细胞结合,培养一定时间后,清洗并破碎细胞,释放出与其结合的成分,最... 目的:利用T47D细胞/液质联用及分子对接筛选淫羊藿中具有雌激素样作用的成分。方法:采用溶有淫羊藿提取物的培养基培养T47D细胞,具有雌激素样作用的成分选择性地与T47D细胞结合,培养一定时间后,清洗并破碎细胞,释放出与其结合的成分,最后利用液质联用技术进行分析鉴定。对于鉴定出的可与细胞结合的成分,采用分子对接的方法研究其与雌激素受体的相互作用。结果:初步检测出淫羊藿中可与T47D细胞结合的7个成分,分别为淫羊藿苷,朝藿定B,宝藿苷-Ⅱ,淫羊藿次苷-I,宝藿苷-I,朝藿苷甲,脱水淫羊藿素,其中宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与雌激素受体发生相互作用。结论:宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与T47D细胞结合,且均可与2种雌激素受体发生作用,提示两者可能具有雌激素样作用。 展开更多
关键词 细胞萃取 分子对接 淫羊藿 雌激素样作用
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提取人骨髓间充质干细胞的新方法与传统方法比较 被引量：7
4
作者 李石旦 邢伟 +3 位作者 谢晓瑜 李又彬 王绍川 费军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第24期3814-3820,共7页
背景:提取人骨髓间充质干细胞主要有全骨髓贴壁培养法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选及免疫磁珠分选等方法。流式分选及磁珠分选等方法对设备及试剂要求高,应用局限。全骨髓贴壁培养法及密度梯度离心法较为常用,但仍有全骨髓贴壁法... 背景:提取人骨髓间充质干细胞主要有全骨髓贴壁培养法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选及免疫磁珠分选等方法。流式分选及磁珠分选等方法对设备及试剂要求高,应用局限。全骨髓贴壁培养法及密度梯度离心法较为常用,但仍有全骨髓贴壁法细胞长出速度较慢、密度梯度离心法所需离心时间较长等不足。若发现一种更简便、且能够短时间提取骨髓间充质干细胞的方法则可进一步提高实验效率。目的:介绍一种新的提取人骨髓间充质干细胞的方法,并与传统方法进行比较,证明新方法的可行性及实用性。方法:将磷酸缓冲盐溶液与人骨髓组织等比例混匀后离心使骨髓组织分层,取白膜层提取人骨髓间充质干细胞,与全骨髓贴壁法提取的人骨髓间充质干细胞进行对比。采用流式细胞分析及诱导多向分化实验进行鉴定。通过细胞计数、结晶紫染色、细胞骨架染色、划痕实验、Transwell迁移实验、RT-PCR等方法,分析两组细胞的原代细胞数目、传代后细胞形态、大小、细胞骨架、表面标志物表达、多向分化潜能、集落形成、增殖、迁移及成骨分化能力。结果与结论:①离心后磷酸缓冲盐溶液能够使人骨髓分层,并能够提取出人骨髓间充质干细胞;磷酸缓冲盐溶液法所提取的原代细胞数目较全骨髓贴壁法多,培养体系中漂浮脂肪组织少,原代细胞长出速度更快;②两种方法所提取细胞均呈梭形,表达标志物CD90、CD105、CD73,不表达CD45、CD34、CD11b、CD19及HLA-DR,具有多向分化潜能,符合间充质干细胞标准;③两种方法所提取细胞在形态、大小、细胞骨架方面没有显著差异,均能形成集落,且具有迁移能力,诱导成骨分化后两组细胞均表达成骨细胞标志物;④结果表明,在特定条件下利用磷酸缓冲盐溶液提取人骨髓间充质干细胞具有可行性及实用性。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 磷酸缓冲盐溶液 全骨髓贴壁 细胞提取 细胞鉴定
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脂肪来源的间充质干细胞分离方法的改进 被引量：6
5
作者 李冬艳 宇丽 +2 位作者 李发涛 刘红 罗京资 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期585-589,共5页
目的:从供体年龄、取材部位、提取方法3方面来研究稳定的脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分离提取方法。方法:从兔颈背部皮下、肌间以及腹股沟皮下的脂肪组织取材,分别采用一次消化收集法和多次消化收集法分离提取ADMSCs,单层传代培养。分别... 目的:从供体年龄、取材部位、提取方法3方面来研究稳定的脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分离提取方法。方法:从兔颈背部皮下、肌间以及腹股沟皮下的脂肪组织取材,分别采用一次消化收集法和多次消化收集法分离提取ADMSCs,单层传代培养。分别比较不同提取方法,老年兔、壮年兔与幼年兔,同一供体不同部位的脂肪组织,所分离的ADMSCs产量和生物学特性。结果:运用多次消化收集法能从脂肪组织中稳定分离出生长旺盛的ADM-SCs,与一次消化收集法相比能显著提高所获取的的细胞产量。从老年兔、壮年兔、幼年兔以及同一供体的不同部位脂肪组织中所提取的ADMSCs生长增殖活性无明显差异,但从单位体积脂肪组织提取得到的ADMSCs产量显著不同。结论:多次消化收集法能显著提高分离获得的ADMSCs产量,是对传统的一次消化收集法的改进。选择不同供体年龄和取材部位提取ADMSCs,对细胞的生物学活性影响不大,但对细胞产量有明显影响。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 原代细胞 细胞分离提取 组织工程
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神经干细胞提取与培养方法的比较研究 被引量：7
6
作者 吴增 李媛 +2 位作者 靳晓飞 周晓红 高维娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期729-734,共6页
目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方... 目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果 (1)胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。(2)采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。(3)以1.0×109·L^(-1)密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。(4)悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。(5)半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。(6)原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。(7)14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×10~9·L^(-1)1的密度接种于25 cm^2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3 d加液1~1.5m L,每6~7 d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞提取 悬浮培养法:无血清培养基 细胞活性 巢蛋白
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SD大鼠乳鼠原代皮质神经元和小胶质细胞同时提取并培养的实验方法
7
作者 何龙才 宋文学 +5 位作者 明江 陈光唐 王军浩 廖益东 崔君拴 徐卡娅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第7期1395-1400,共6页
背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质... 背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质神经元及小胶质细胞的方法。方法:取24 h内新生SD大鼠乳鼠,将大脑取出放入装有DMEM的培养皿中,去除软脑膜后备用。同一脑组织,先提取原代神经元,再将剩余脑组织用于提取小胶质细胞,整个过程在冰上操作。原代皮质神经元提取培养步骤:镊子夹取2.0-3.0 mm厚度大脑皮质组织置于培养皿,用木瓜蛋白酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈互相粘连的组织悬液,吸上清细胞悬液,过滤、分装到15 mL离心管中,离心并重悬后将细胞接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板爬片上放入细胞培养箱,每隔1 d观察神经元形态,第7天进行MAP2和β-Tubulin免疫荧光染色鉴定。小胶质细胞提取培养步骤:夹取上一步取皮质后剩余脑组织,厚度8-10 mm,置于培养皿,用胰酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈匀浆,然后将匀浆转移到培养瓶中培养,第14天将培养瓶封口后进行恒温水平摇床振荡2 h,小胶质细胞脱落于上清中;取纯化后的小胶质细胞继续培养3 d进行Iba1免疫荧光染色鉴定。结果与结论:(1)神经元培养24 h后贴壁、胞体变大,部分神经元长出突触;培养到第3,5天时胞体进一步增大,大部分神经元已呈突触形态,部分神经元成团生长;第7天时,神经元突触延长增粗并互相连接成网。经β-Tubulin、MAP2免疫荧光染色鉴定为神经元。(2)小胶质细胞培养第1天换液后可见细胞贴壁生长;第3,5,7天时细胞密度均较小,细胞形态呈高亮椭圆或圆形,但已基本成团块状生长于其他细胞上层;第10天时小胶质细胞密度明显增大;第14天时小胶质细胞呈致密团块状生长于其他细胞上层, 展开更多
关键词 原代皮质神经元 小胶质细胞 SD大鼠 细胞提取 细胞培养
三种大鼠椎间盘细胞提取、鉴定及在单层和微团培养中的基质表达
8
作者 胡思远 陈建权 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2528-2535,共8页
背景:目前获得椎间盘原代细胞的方法大多较繁琐,且缺少同时提取纤维环、终板与髓核原代细胞的相关报道,因此找到同时提取3种细胞的方法十分关键。目的:探索一种同时提取并培养大鼠来源3种椎间盘细胞(纤维环、终板与髓核)的方法,对之进... 背景:目前获得椎间盘原代细胞的方法大多较繁琐,且缺少同时提取纤维环、终板与髓核原代细胞的相关报道,因此找到同时提取3种细胞的方法十分关键。目的:探索一种同时提取并培养大鼠来源3种椎间盘细胞(纤维环、终板与髓核)的方法,对之进行鉴定并探究单层与微团培养对细胞外基质的影响。方法:取材自3周龄雄性SD大鼠椎间盘组织,从其中分离出软骨终板、髓核与纤维环组织。针对髓核及纤维环组织,先使用0.1%链酶蛋白酶E于37℃消化30 min,然后使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化4 h来释放其中的细胞;针对终板组织,直接使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化4 h来释放其中的细胞。将去除消化酶后的细胞接种于含有培养基的培养皿中,并观察细胞形态;通过实时定量荧光PCR与蛋白印迹实验检测各细胞标记物的表达水平;单层或微团培养大鼠原代纤维环细胞与软骨终板细胞,并采用阿尔新蓝与番红染色检测细胞外基质的表达能力。结果与结论:①3种椎间盘细胞均在培养4 d后开始贴附在皿底,并逐渐展现出增殖的活力;培养至第8天时,3种细胞增殖显著,形态均呈梭形,其中髓核细胞中存在多囊泡的脊索样细胞;②通过实时定量荧光PCR和/或蛋白免疫印迹实验发现原代髓核细胞中K19与Car3表达较高,原代纤维环细胞中Sparc与Bgn表达较高,原代软骨终板细胞中Pth1r与Lars2表达较高;③原代纤维环、软骨终板细胞微团培养后,经阿尔新蓝与番红染色证明这种培养方式相较于单层培养能够提高细胞外基质的表达能力;④结果表明,通过此次实验方法提取并培养获得的原代椎间盘细胞形态较好并具有较高的胞外基质表达水平,这一成果有望为科研人员提供一种新的科研工具,帮助科研人员更好地理解椎间盘生物学。 展开更多
关键词 原代髓核细胞 原代纤维环细胞 原代终板细胞 细胞提取 细胞鉴定 微团培养
糖尿病肾病大鼠原代肾小管上皮细胞的提取及体外培养
9
作者 王慧玲 黄国东 +3 位作者 陈宇 刘少芳 王龙龙 范氏泰和 《广西医学》 CAS 2024年第4期535-542,共8页
目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)的提取及体外培养方法。方法取SD雄性大鼠25只,随机分为正常组(n=5)和模型组(n=20)。对模型组大鼠构建DN大鼠模型,不给予正常组任何处理。获取两组大鼠双肾组织,一部分组织用于HE... 目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)的提取及体外培养方法。方法取SD雄性大鼠25只,随机分为正常组(n=5)和模型组(n=20)。对模型组大鼠构建DN大鼠模型,不给予正常组任何处理。获取两组大鼠双肾组织,一部分组织用于HE染色及Masson染色以观察肾组织结构,另一部分用于RTECs的提取及培养。RTECs的提取、培养方法:将肾皮质组织在80目筛网上研磨,经100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min后,使用含10%胎牛血清、1%胰岛素⁃转铁蛋白⁃硒⁃乙醇胺添加剂和1%青链霉素双抗溶液的DMEM/F-12完全培养基培养细胞。用免疫荧光染色法检测细胞角蛋白18的表达情况以鉴定所获得的细胞。结果(1)建模后模型组大鼠出现多饮、多食、多尿、体重下降、血糖升高等特征,尿蛋白定性呈阳性,肾组织病理检测提示肾小球结构不完整且出现明显缺损,RTECs明显肿胀、变性,肾小管管腔萎缩,肾小管间质纤维化严重。(2)培养72 h后,两组RTECs均已经贴壁并呈岛屿状聚集生长,培养5~8 d后细胞呈多边鹅卵石样。模型组RTECs高表达细胞角蛋白18,阳性率>95%。结论采用在80目筛网上研磨、100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min的方法可以得到数量较多、活性良好、纯度较高的DN大鼠模型RTECs,且在形态与贴壁情况方面与正常大鼠RTECs无明显差异。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 原代细胞 细胞提取 细胞鉴定 大鼠
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从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨 被引量：3
10
作者 熊仁平 刘苹 +2 位作者 周元国 陈星云 王华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期256-260,共5页
为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯... 为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 。 展开更多
关键词 微量蛋白 RNA 提取方法 细胞培养 同时提取
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小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定
11
作者 吴航飞 王康淳 +1 位作者 潘崎 程颖 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期67-73,共7页
目的探讨小鼠羊水间充质干细胞(AF-MSC)的分离、培养及鉴定。方法在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代。观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测... 目的探讨小鼠羊水间充质干细胞(AF-MSC)的分离、培养及鉴定。方法在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代。观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测AF-MSC的三系分化能力及冷冻复苏后的细胞活力。结果小鼠AF-MSC呈典型的梭形,融合度>80%时会出现典型的漩涡状结构。小鼠AF-MSC传代培养无明显潜伏期,培养2~3 d进入对数增长期,增长速度最快,之后增殖速度减慢,进入平台期。AF-MSC表达干细胞抗原(Sca)-1、CD29、CD44,不表达CD34、CD45。小鼠AF-MSC成骨分化后,矿化结晶被茜素红染成深红色的点状;成软骨分化后,分泌的酸性粘多糖被阿利新蓝染成淡蓝色;成脂分化后,胞质脂滴被油红O染成红色。细胞冷冻复苏后存活率>95%,生长状态良好,6 d时增殖能力高于冻存前(P<0.05),其他时间增殖能力与冻存前比较,差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论本实验成功分离了小鼠AF-MSC,过程简便、成本低,且分离的细胞可随传代次数的增加而纯化,冻存不影响其增殖能力。 展开更多
关键词 间充质干细胞 羊水 细胞提取 细胞鉴定 细胞增殖 细胞冻存 小鼠 成骨分化 成软骨分化 成脂分化 干细胞抗原
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神经干细胞提取及培养方法的体会 被引量：3
12
作者 吴增 董贤慧 +3 位作者 李媛 靳晓飞 周晓红 高维娟 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第8期881-885,共5页
神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的... 神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的选择、培养方法、换液方法、传代时机、传代方法,最终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞,并将其应用于相关方面的基础研究。 展开更多
关键词 干细胞 神经元 培养基 连续传代 细胞提取 悬浮培养法
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适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化 被引量：1
13
作者 陈纳淳 吴汉森 +12 位作者 邓仲豪 廖哲霆 冯舒皓 骆梓恒 楚玉豪 邱耿韬 李啸宇 金昱 戎圣炜 王富华 甘露 陈如歌 赵亮 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1310-1318,共9页
目的优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统... 目的优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法(短时间消化和长时间消化)和优化提取法;通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性;通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集,分析优化提取法的可靠性。结果在3次重复实验中,优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液,细胞数量超过105,且细胞活率最高,平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34^(+),MCAM+细胞以及COL1A1^(+)胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现,优化提取法也能捕获COL3A1^(+)细胞,COL1A1^(+)细胞,MYLK^(+)细胞,BMP2^(+)细胞,CD93^(+)细胞和CDK1^(+)细胞。结论优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。 展开更多
关键词 半月板 细胞提取 单细胞悬液 单细胞测序
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一种获取细胞免疫信息的图像分析方法
14
作者 杨大刚 窦万春 +1 位作者 张习文 蔡士杰 《软件学报》 EI CSCD 北大核心 2005年第9期1551-1559,共9页
细胞免疫信息在医学和生物学上有着广泛的用途.通过分析彩色免疫荧光图像获此信息.给出一种动态种子值像素生长算法,在均匀颜色空间中提取荧光区域;提出了椭圆匹配方法,从得到的区域中提取细胞;提出了预计算和离散化的方法,计算并分解... 细胞免疫信息在医学和生物学上有着广泛的用途.通过分析彩色免疫荧光图像获此信息.给出一种动态种子值像素生长算法,在均匀颜色空间中提取荧光区域;提出了椭圆匹配方法,从得到的区域中提取细胞;提出了预计算和离散化的方法,计算并分解细胞颜色,以得到免疫信息.讨论了提出的图像分析方法对细胞免疫信息获取的影响.实验表明,获得的免疫信息满足实际医学分析的需要. 展开更多
关键词 颜色分解 椭圆匹配 区域提取 细胞提取 图像分析
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小型化细胞检测计数系统设计
15
作者 刘国华 杨树蔚 +3 位作者 邢静 张晗 刘叶楠 闫克丁 《国外电子测量技术》 北大核心 2022年第5期144-148,共5页
细胞检测计数在细胞研究中有着重要的研究意义,可以区分并提取正常和非正常细胞个数,使得医生可以有效的观察到病情的状态。但当前的细胞计数仪器普遍体积大、造价昂贵。因此基于显微成像技术设计了一套小型的细胞检测计数系统,系统整... 细胞检测计数在细胞研究中有着重要的研究意义,可以区分并提取正常和非正常细胞个数,使得医生可以有效的观察到病情的状态。但当前的细胞计数仪器普遍体积大、造价昂贵。因此基于显微成像技术设计了一套小型的细胞检测计数系统,系统整体结构由UG设计3D模型并打印组装,并设计一款直流稳压电源为系统各模块供电。系统体积不超过25 cm^(3),重量不超过2 kg,可以实时细胞图像采集、计数。有成本低、便携带、适用性广等的优点。并对系统进行分辨率测试以及细胞分类提取功能进行测试,平均准确率达到了94%以上,证明设计的细胞计数系统可以实现高准确度的对细胞提取与计数,为细胞计数行业的发展学提供了新设计思路。 展开更多
关键词 小型化 显微成像 直流稳压电源 细胞提取 细胞计数
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深低温保存的猪二尖瓣去细胞处理后的生物学特征 被引量：1
16
作者 朱亚彬 黄楠 +3 位作者 刘志勇 陈凡 吴喜 杨丹宁 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期191-193,共3页
目的研究深低温保存的猪二尖瓣经去细胞处理后生物学特征的变化.方法在含细胞保护剂二甲亚砜的保护液中深低温保存3个月的猪二尖瓣经高渗冲击、胰蛋白酶、核酸酶等交替处理后,行组织切片和扫描电镜观察细胞外基质的变化,对血液相容性变... 目的研究深低温保存的猪二尖瓣经去细胞处理后生物学特征的变化.方法在含细胞保护剂二甲亚砜的保护液中深低温保存3个月的猪二尖瓣经高渗冲击、胰蛋白酶、核酸酶等交替处理后,行组织切片和扫描电镜观察细胞外基质的变化,对血液相容性变化进行研究,在小鼠皮下移植2～8周后测定钙含量,并比较其生物力学特征的变化.结果经去细胞处理后瓣膜细胞外基质完整,而细胞成分被去除,小鼠皮下移植后钙含量降低,而血液相容性和生物力学性质改变不明显.结论深低温保存的猪二尖瓣叶经去细胞处理后,减少了瓣叶细胞成分,对减少异种二尖瓣移植物失功衰败,提高远期效果具有重要意义. 展开更多
关键词 深低温保存 二尖瓣 去细胞处理 生物学特征 血液相容性 人工瓣膜替换物
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银杏细胞提取物的药理作用研究 被引量：1
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作者 方佳茂 《现代食品科技》 EI CAS 2009年第12期1396-1399,1403,共5页
采用化学比色法,研究了银杏细胞提取物在体外对人LDL的氧化抑制和对DPPH自由基清除的作用。对LDL氧化反应潜伏期大小依次为:EGBC>BHT>>Control,EGBC、BHT对DPPH自由基的氧化抑制率分别为53.8%和42.7%。体内实验表明:EGBC可降... 采用化学比色法,研究了银杏细胞提取物在体外对人LDL的氧化抑制和对DPPH自由基清除的作用。对LDL氧化反应潜伏期大小依次为:EGBC>BHT>>Control,EGBC、BHT对DPPH自由基的氧化抑制率分别为53.8%和42.7%。体内实验表明:EGBC可降低肝中MDA含量,提高肝中SOD和GSH-Px的活力。肿瘤对照组小鼠的胸腺明显缩小,胸腺平均湿重、红细胞Hb平均含量、红细胞及胸腺与肝中SOD活性均明显低于正常对照组。而EGBC组小鼠胸腺平均湿重、红细胞Hb平均含量、红细胞及胸腺与肝中SOD活性明显高于肿瘤对照组,Hb的含量接近正常对照组,SOD活性比正常对照组要高。结论:在实验条件下,EGBC对人LDL的氧化具有抑制作用,对DPPH自由基具有一定的清除作用,对乙醇诱导的肝损伤具有保护作用,对荷S180小鼠的肿瘤生长有抑制作用。 展开更多
关键词 银杏 细胞提取物 LDL DPPH 抗肿瘤
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基于边界轮廓的区域生长算法在RBC提取中的应用
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作者 王瑞胡 Brendan McCane 尹章群 《计算机应用》 CSCD 北大核心 2008年第3期785-786,789,共3页
提出一种基于边界轮廓的区域生长算法提取各个细胞的图像,并运用阴影恢复技术进一步得到每个细胞的三维高度场数据,这些三维数据可用于计算细胞表面曲率。整个提取算法分为三个步骤:轮廓跟踪、区域生长、基于SEM成像条件的三维形状重建... 提出一种基于边界轮廓的区域生长算法提取各个细胞的图像,并运用阴影恢复技术进一步得到每个细胞的三维高度场数据,这些三维数据可用于计算细胞表面曲率。整个提取算法分为三个步骤:轮廓跟踪、区域生长、基于SEM成像条件的三维形状重建。考虑到重叠细胞的统计特征,只需提取处在最上层的细胞。实验结果表明,该方法具有很强的可行性和实用性。 展开更多
关键词 边界轮廓 区域生长 细胞提取 阴影恢复.
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单纯去细胞猪角膜基质穿透性角膜移植治疗兔角膜溃疡
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作者 孟浩 惠延年 +3 位作者 林旭初 陆伟 方军 金岩 《国际眼科杂志》 CAS 2007年第2期350-353,共4页
目的:探讨单纯去细胞猪角膜基质材料诱导兔自体角膜细胞再生及修复兔角膜溃疡的可行性。方法:新西兰白兔10只制作成角膜溃疡模型,接受单纯去细胞猪角膜材料的穿透性角膜移植术,排除发生手术并发症眼(2只),剩余8只术后进行大体观察(裂隙... 目的:探讨单纯去细胞猪角膜基质材料诱导兔自体角膜细胞再生及修复兔角膜溃疡的可行性。方法:新西兰白兔10只制作成角膜溃疡模型,接受单纯去细胞猪角膜材料的穿透性角膜移植术,排除发生手术并发症眼(2只),剩余8只术后进行大体观察(裂隙灯检查),观察植片透明度、新生血管、上皮修复情况。分别于3,6,8,16和24wk取材进行组织学观察,并取16wk兔行超声生物显微镜(UBM)检查、32wk兔行透射电镜检查。结果:角膜溃疡修复,眼表重建8只。初期角膜上皮反复糜烂,荧光素纳染色有荧光堆积,HE组织学检查提示4wk时上皮细胞复层化。角膜基质细胞沿材料板层生长,排列规律;3～7d角膜缘新生血管发生,位于浅基质层,1～20d达高峰,深入植片或沿缝线环形生长,拆线后逐渐消退,32wk后闭锁仅余3～4支微血管;UBM提示角膜恢复自然曲率,植床与植片尚未修复完善。TEM提示成纤维细胞分泌胶原原纤维,参与材料改建。结论:CACM支持细胞3D生长,促进自体细胞长入,参与角膜修复改建。 展开更多
关键词 组织工程 角膜 支架材料 去细胞处理
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内皮细胞提取和高效液相色谱－电喷雾飞行时间质谱联用预测玄参中的活性成分 被引量：11
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作者 祝艳斐 毕志明 +3 位作者 刘承伟 任美婷 吴斐华 李萍 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期228-231,共4页
目的:应用内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOF MS)预测玄参的活性成分。方法:应用内皮细胞作为靶细胞,中药提取液中的活性成分可选择性地与其结合,洗去未结合的成分,用HPLC-ESI/TOF MS对细胞解离液中的成... 目的:应用内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOF MS)预测玄参的活性成分。方法:应用内皮细胞作为靶细胞,中药提取液中的活性成分可选择性地与其结合,洗去未结合的成分,用HPLC-ESI/TOF MS对细胞解离液中的成分进行分析。结果:从玄参提取液中检测出6个可与内皮细胞结合的成分,其中3个鉴定为安格洛苷C(angoroside C)、肉桂酸(cinnamic acid)和哈巴俄苷(harpagoside)。结论:细胞解离液中检测到的成分为玄参中与内皮细胞有结合作用的成分,本方法可用于预测中药中与内皮细胞相结合的活性成分。 展开更多
关键词 内皮细胞提取 高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用法 玄参 活性成分
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