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人肾小球系膜细胞原代培养及鉴定方法的研究 被引量:14
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作者 刘海英 关广聚 +3 位作者 张燕 柳刚 陈兵 李学刚 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第7期685-687,共3页
目的:建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法。方法:取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取最下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞。同时采用... 目的:建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法。方法:取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取最下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞。同时采用形态学观察和免疫荧光技术,对鼠抗人结蛋白,鼠抗人角蛋白进行鉴定,采用MTT、流式细胞仪技术对不同来源肾脏的系膜细胞生长状况进行比较。结果:形态学、免疫荧光法鉴定表明培养细胞为肾小球系膜细胞,胎肾原代培养后8~10 d即可传代,而成年肾脏原代培养后需15~16 d方可传代。成年肾脏培养细胞至第4代细胞生长缓慢,贴壁能力减弱,出现死亡。而胎肾培养细胞则可继续培养至第7~10代。结论:三层滤网法分离人肾小球系膜细胞,方法简单、高效,培养的原代肾小球系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特性,且进一步证明胚胎组织比成年个体肾脏原代细胞培养容易成功。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 细胞原代培养 成人肾脏 胎肾
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机械生长因子对骨骼肌卫星细胞增殖及MGF mRNA表达的影响 被引量:6
2
作者 史仍飞 刘子青 +3 位作者 袁海平 王顺利 魏安奎 张平 《临床医学工程》 2012年第1期18-21,共4页
目的骨骼肌卫星细胞是肌源性干细胞,该细胞的增殖受一系列生长因子的影响。而机械生长因子(mechano growth factor,MGF)是近年来发现的一种对力学信号敏感的自分泌局部生长因子,可以激活肌卫星细胞的增殖。本研究采用不同浓度的MGF干预... 目的骨骼肌卫星细胞是肌源性干细胞,该细胞的增殖受一系列生长因子的影响。而机械生长因子(mechano growth factor,MGF)是近年来发现的一种对力学信号敏感的自分泌局部生长因子,可以激活肌卫星细胞的增殖。本研究采用不同浓度的MGF干预体外培养的骨骼肌卫星细胞,探讨促进卫星细胞增殖的适宜浓度。方法用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞同步化后,分别应用不同浓度的MGF(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml)干预原代培养的骨骼肌卫星细胞96小时,采用RT-PCR技术检测肌卫星细胞MGF mRNA的表达,用CCK-8检测卫星细胞的增殖情况,并检测细胞总蛋白含量。结果与0ng/ml MGF组相比,25ng/ml和50ng/ml组OD值在各时间点均显著性增加,其中25ng/ml组在24h至96h内OD值具有高度显著性(P<0.01),50ng/ml组在24h至72h内也有高度显著性的增加(P<0.01);25ng/ml和50ng/ml组MGF mRNA的表达量均显著高于对照组(P<0.05),其它组的表达与对照组无显著性差异。总蛋白含量也显示,与0ng/ml MGF组相比,25ng/ml和50ng/ml组均有显著性升高(P<0.05)。结论适宜浓度的MGF具有促进肌卫星细胞增殖的作用,其中浓度为25ng/ml和50ng/ml时具有较强的促增殖作用,但有一定的时间差异。 展开更多
关键词 骨骼肌卫星细胞 机械生长因子 细胞原代培养 细胞增殖
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SD乳鼠窦房结细胞原代分散培养的光电镜研究 被引量:4
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作者 张炎 凌凤东 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期237-240,I010,共5页
目的探索体外窦房结细胞原代纯化培养方法,观察培养的窦房结细胞生长状况及光电镜形态学特征。方法(1)用差速贴壁和Brdu处理作细胞培养;(2)观察和记录各类型培养细胞的生长状况;(3)HE染色和Heidenhain苏木... 目的探索体外窦房结细胞原代纯化培养方法,观察培养的窦房结细胞生长状况及光电镜形态学特征。方法(1)用差速贴壁和Brdu处理作细胞培养;(2)观察和记录各类型培养细胞的生长状况;(3)HE染色和Heidenhain苏木素染色;(4)透射电镜观察。结果在培养的窦房结细胞中,至少有3种自发性收缩细胞及少量的星状和不规则细胞。收缩性细胞中,最多的是多边形细胞,其次是梭形,最少的是三角形细胞,且多边形细胞收缩频率最低(75.27±1.73/minx±s),细胞染色和电镜观察结果显示:多边形细胞的细胞器相似于原位窦房结组织中的起搏(P)细胞,梭形细胞相似于移行(T)细胞,P细胞核旁较易见到电子致密颗粒和中心粒,也常见细胞核染色体正处于细胞周期的分裂期的前、中期。结论多边形细胞很幼稚,具有不断分裂增埴的能力。 展开更多
关键词 窦房结 细胞原代培养 光电镜 SD乳鼠
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人胃癌肿瘤相关成纤维细胞的原代培养和鉴定 被引量:5
4
作者 王正彩 翟丽丽 +7 位作者 杨迷玲 韩伟 王瑞芬 单丽辉 齐蕾 柴翠翠 刘明 王立峰 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期860-862,868,共4页
目的探讨人胃癌肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的培养和鉴定方法,并分析其与胃正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)在生物学特性和蛋白表达方面的差异,为其功能研究奠定基础。方法采用组织块法和酶消... 目的探讨人胃癌肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的培养和鉴定方法,并分析其与胃正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)在生物学特性和蛋白表达方面的差异,为其功能研究奠定基础。方法采用组织块法和酶消化法进行人胃癌CAFs和NFs的原代培养,通过酶消化法进行人工纯化,通过形态学观察和多种蛋白的免疫细胞化学染色对其进行鉴定。结果获得纯化的人胃癌CAFs和NFs。胃癌CAFs呈长梭形,大小不等,生长密集,排列紊乱。除表达vimen-tin这一成纤维细胞的标记物外,还表达FAP、SMA,但不表达CK、desmin。结论只要给细胞创造良好的生长条件并规范操作,组织块法和消化法均可成功的培养出人胃癌CAFs和人胃NFs。胃癌CAFs与NFs在形态结构、生长方式和蛋白表达等方面均存在明显差异。 展开更多
关键词 胃肿瘤 原代培养 成纤维细胞 肿瘤相关成纤维细胞
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肿瘤相关成纤维细胞对胆囊癌细胞生长和侵袭的影响 被引量:4
5
作者 陈晨 慎浩鑫 +4 位作者 陶杰 宋虎伟 马丽 王林 耿智敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1149-1154,共6页
目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光... 目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光进行鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测CAFs对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测CAFs对癌细胞侵袭能力的影响。结果酶消化法及组织块法均可获得人胆囊癌CAFs,以酶消化法更为简便、高效;MTT及Transwell侵袭实验证实CAFs可促进胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05),差距具有统计学意义。结论通过酶消化法可较为简便地获得人胆囊癌CAFs,CAFs可显著增强胆囊癌细胞增殖、侵袭能力,表明其在胆囊癌发生、发展中起重要作用。 展开更多
关键词 胆囊癌 原代培养 肿瘤相关成纤维细胞 增殖 侵袭
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大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织原代培养的研究 被引量:4
6
作者 郭莹 李霞 秦艳杰 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期387-391,共5页
应用组织块培养法,研究了大泷六线鱼Hexagrammos otakii鳍、吻端和肾脏细胞在含有体积分数为20%胎牛血清(FBS)的L-15、DMEM和DMEM/F12 3种培养基中的生长情况,以及人碱性成纤维细胞(bFGF)、硫酸软骨素、Ⅰ型胰岛素样(IGF-Ⅰ)3种生长因... 应用组织块培养法,研究了大泷六线鱼Hexagrammos otakii鳍、吻端和肾脏细胞在含有体积分数为20%胎牛血清(FBS)的L-15、DMEM和DMEM/F12 3种培养基中的生长情况,以及人碱性成纤维细胞(bFGF)、硫酸软骨素、Ⅰ型胰岛素样(IGF-Ⅰ)3种生长因子对细胞贴壁率和迁出率的影响。结果表明:大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏细胞适宜的体外培养体系为DMEM/F12培养基+20%FBS,pH为7.2,温度为25℃;在最适培养基中分别添加5.0 ng/mL bFGF、20μg/mL硫酸软骨素、40 ng/mL IGF-Ⅰ时,3种组织的贴壁率和细胞迁出率均最高;鳍、吻端和肾脏组织分别经培养21、15、18 d后长满单层,主要为成纤维样细胞;采用低渗滴片法制备染色体,3种组织原代细胞的染色体数目为48条。本研究为大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织细胞系的构建和生物学特性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大泷六线鱼 培养基 生长因子 原代培养
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小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染 被引量:3
7
作者 谢遂亮 杨达胜 +1 位作者 毕凌云 胡丹 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第11期865-870,共6页
目的探索脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数(MOI),并鉴定其感染后的增殖能力,为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪... 目的探索脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数(MOI),并鉴定其感染后的增殖能力,为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织,差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞。经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶,放置体积分数5%CO2孵箱中培养,24h后换液,以后每3d更换培养基,待细胞融合达到约90%时,传代培养。取第3代ADMSCs用流式细胞术(FCM)检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能;用携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体(LV)感染ADMSCs,FCM检测病毒感染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法检测感染后的细胞活力。结果(1)差速贴壁法培养分离7-11d时细胞融合达80%以上。原代细胞融合达80%~90%进行1:4传代,细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养。第3代及再传代细胞形体趋于一致,细胞呈梭形。细胞连续传代10次,生长速度未见明显减缓;(2)FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98.93%,CD34阳性表达0.17%;(3)第3代细胞成脂诱导14d油红O染色阳性,成骨诱导14d茜红染色阳性;(4)当MOI=25感染第3代细胞72h后,共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60%~70%,细胞活力不受影响;(5)MrIT法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较,细胞增殖能力无差异。结论从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代;差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs;携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs,并且感染后其增殖能力不受影响。 展开更多
关键词 脂肪源间充质干细胞 原代细胞培养 生物学特性 慢病毒转染 小鼠
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壁虎脊髓细胞的原代培养及形态学观察 被引量:3
8
作者 顾芸 刘梅 +1 位作者 刘炎 顾晓松 《南通大学学报(医学版)》 2007年第1期1-3,F0002,共4页
目的:探讨壁虎脊髓细胞分离及培养方法。方法:分离壁虎脊髓,消化接种于细胞培养瓶中,采用不同渗透压、pH值、温度、消化、粘附基质的培养条件。结果:5%CO2、饱和湿度培养条件,在添加10%FBS的DMEM/F12培养基(渗透压200~260mmol/kg,pH7.2... 目的:探讨壁虎脊髓细胞分离及培养方法。方法:分离壁虎脊髓,消化接种于细胞培养瓶中,采用不同渗透压、pH值、温度、消化、粘附基质的培养条件。结果:5%CO2、饱和湿度培养条件,在添加10%FBS的DMEM/F12培养基(渗透压200~260mmol/kg,pH7.2)中,获得了不同细胞类型的细胞,其中包括神经元样和胶质细胞样细胞,神经元样细胞NF染色阳性,GFAP染色阴性,而胶质样细胞GFAP染色阳性。结论:建立了壁虎脊髓细胞分离及培养方法,为壁虎脊髓再生过程中基因的研究提供细胞水平功能平台。 展开更多
关键词 细胞原代培养 传代培养 脊髓损伤 壁虎
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松江鲈脾组织细胞的短期培养及染色体分析 被引量:2
9
作者 单莉娟 向阳 +4 位作者 李霞 王茂林 秦艳杰 吴迪 白丽雯 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期161-164,共4页
采用组织块法对体质量为120~140 g的松江鲈Trachidermus fasciatus脾组织细胞进行短期培养并对染色体进行了分析。结果表明:在p H为7.2、温度为25℃的条件下,松江鲈脾组织细胞在含有20%南美胎牛血清(FBS)、人碱性成纤维样细胞生长因... 采用组织块法对体质量为120~140 g的松江鲈Trachidermus fasciatus脾组织细胞进行短期培养并对染色体进行了分析。结果表明:在p H为7.2、温度为25℃的条件下,松江鲈脾组织细胞在含有20%南美胎牛血清(FBS)、人碱性成纤维样细胞生长因子(b FGF)、硫酸软骨素、Ⅰ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)的培养基中,生长良好,迁出细胞有悬浮和贴壁两种形式;悬浮细胞为圆形和椭圆形,贴壁细胞呈变形细胞样和成纤维细胞样;利用悬浮细胞进行的染色体分析显示,松江鲈的染色体数2n=40,核型公式为14m+10sm+16t。本研究结果为松江鲈脾组织细胞系的构建奠定了基础,并初步建立了利用短期培养的脾组织细胞制备染色体的方法。 展开更多
关键词 松江鲈 脾组织 体外短期培养 染色体
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Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养和鉴定 被引量:2
10
作者 韩伟 李争艳 +7 位作者 刘杨 翟丽丽 杨迷玲 单丽辉 齐蕾 柴翠翠 王正彩 王立峰 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第2期135-137,共3页
目的探讨大鼠骨髓来源的间充质干细胞的培养和鉴定方法,为其功能研究奠定基础。方法采用全骨髓贴壁法进行骨髓来源的间充质干细胞的原代培养,通过酶消化法进行人工纯化,通过形态学观察、细胞周期测定及其自然分化实验进行鉴定。结果获... 目的探讨大鼠骨髓来源的间充质干细胞的培养和鉴定方法,为其功能研究奠定基础。方法采用全骨髓贴壁法进行骨髓来源的间充质干细胞的原代培养,通过酶消化法进行人工纯化,通过形态学观察、细胞周期测定及其自然分化实验进行鉴定。结果获得纯化的大鼠骨髓来源的间充质干细胞,该细胞呈长梭形或多角形,大小不等,生长密集,排列呈流线型。结论只要给细胞创造良好的生长条件并规范操作,全骨髓贴壁法可成功培养出稳定的大鼠骨髓来源的间充质干细胞。 展开更多
关键词 原代培养 骨髓间充质干细胞 WISTAR大鼠
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MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤乳腺癌细胞的分离培养及鉴定
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作者 颜文欣 冯玉梅 《天津医科大学学报》 2023年第1期9-14,共6页
目的:分离培养小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原(MMTV-PyMT)转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞,初步研究其生长特性、分子表型、体内成瘤和转移能力。方法:取MMTV-PyMT小鼠自发成瘤的乳腺癌组织(n=3),采用酶解贴壁培养法进行原代细... 目的:分离培养小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原(MMTV-PyMT)转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞,初步研究其生长特性、分子表型、体内成瘤和转移能力。方法:取MMTV-PyMT小鼠自发成瘤的乳腺癌组织(n=3),采用酶解贴壁培养法进行原代细胞分离并传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态特征;采用CCK-8检测细胞的增殖能力;通过Western印迹检测细胞的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达以鉴定细胞分子亚型。将分离培养的细胞接种于C57BL/6雌性小鼠(n=4)乳腺脂肪垫,观察细胞成瘤能力和生长特性;取肿瘤组织和内脏器官,制备组织切片后采用苏木精-伊红(HE)染色,观察组织形态学特点;采用免疫组织化学(IHC)染色检测ER、PR、HER2及Ki-67蛋白表达,分析分子分型。结果:成功分离得到MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞(MMTV-PyMT细胞)并可稳定生长和传代,细胞倍增时间为56.0 h;MMTV-PyMT细胞可在C57BL/6雌性小鼠乳腺脂肪垫成瘤并生长,但未见远处内脏转移。该细胞在细胞学和组织学中的分子分型皆为HER2过表达亚型,肿瘤组织中Ki-67阳性表达率为34%。结论:成功构建得到可体外稳定传代并具有体内成瘤能力的HER2过表达分子亚型小鼠乳腺癌细胞系,该细胞可作为HER2过表达亚型乳腺癌体内、外实验研究的细胞模型。 展开更多
关键词 小鼠乳腺癌细胞系 原代培养 HER2过表达分子亚型
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人血管内皮细胞体外培养模型的建立 被引量:1
12
作者 张淑雅 陈昕 +3 位作者 单园园 颜贝 芦晓红 裴秀英 《宁夏医科大学学报》 2013年第11期1204-1207,1188,共5页
目的探讨人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)体外原代培养及功能检测的可靠方法。方法采用改良的胶原酶灌注消化法分离HUVEC,用免疫荧光法鉴定细胞纯度;用血清+DMSO冻存HUVEC,用Edu法检测细胞增殖能力,Matr... 目的探讨人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)体外原代培养及功能检测的可靠方法。方法采用改良的胶原酶灌注消化法分离HUVEC,用免疫荧光法鉴定细胞纯度;用血清+DMSO冻存HUVEC,用Edu法检测细胞增殖能力,Matrigel体外成管实验检测血管内皮细胞功能。结果培养得到高纯度(99%)、高数量(1×106~3×106)、高质量(增殖与成管能力均良好)的原代细胞。结论建立了分离、培养、保存HUVEC及对其功能检测的可靠方法,为血管新生研究提供了理想的细胞模型和实验思路。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 原代培养 鉴定 血管功能实验
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肾小管上皮细胞原代培养及鉴定 被引量:6
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作者 廖晓星 唐洪林 +2 位作者 孙庭 侯垒 崔功静 《中国现代医药杂志》 2004年第5期12-14,共3页
目的探讨肾小管上皮细胞体外培养及鉴定方法。方法①采用机械分离结合酶消化法获取肾小管,原代培养肾小管上皮细胞。②利用动态观察、细胞化学染色法及细胞的透射电镜扫描进行鉴定。结果①肾小管段不同换液时间24h、48h、72h、96h、120h... 目的探讨肾小管上皮细胞体外培养及鉴定方法。方法①采用机械分离结合酶消化法获取肾小管,原代培养肾小管上皮细胞。②利用动态观察、细胞化学染色法及细胞的透射电镜扫描进行鉴定。结果①肾小管段不同换液时间24h、48h、72h、96h、120h,贴壁率分别为:0.1378±2.048E-02、0.3300±7.969E-02、0.5411±3.919E-02、0.5344±2.506E-02、0.4389±3.018E-02,以72小时首次换液最佳。②肾小管上皮细胞成功原代培养并于第4~7天处于对数生长期。细胞碱性磷酸酶染色均呈阳性,透射电镜扫描见细胞面向液层的刷状缘有大量微绒毛形成。结论采用机械结合酶消化法可分离到较纯的肾小管,肾小管段培养72h首次换液细胞贴壁最佳,肾小管上皮细胞用化学结合形态学及鉴定。 展开更多
关键词 肾小管 上皮细胞 原代培养 酶消化法 形态学
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小鼠主动脉血管平滑肌原代细胞的分离培养及鉴定 被引量:9
14
作者 张鹏 林福玉 +1 位作者 张迎梅 杨晓 《生物技术通讯》 CAS 2010年第1期54-57,79,共5页
目的:血管平滑肌细胞在人类心血管疾病中具有重要的作用,而作为重要的遗传学研究模式生物的小鼠血管平滑肌材料有限,因此建立一种简单高效的小鼠血管平滑肌原代细胞分离培养方法很重要。方法:分离小鼠主动脉中膜层,胶原酶消化法获得原... 目的:血管平滑肌细胞在人类心血管疾病中具有重要的作用,而作为重要的遗传学研究模式生物的小鼠血管平滑肌材料有限,因此建立一种简单高效的小鼠血管平滑肌原代细胞分离培养方法很重要。方法:分离小鼠主动脉中膜层,胶原酶消化法获得原代平滑肌细胞,免疫荧光方法检测细胞的纯度和分化状态;分离平滑肌细胞特异的报告小鼠的平滑肌细胞,LacZ染色鉴定。结果:用该方法分离的原代平滑肌细胞生长迅速,3d后即可达5×106个。免疫荧光显示,细胞传至第3代后纯度在98%以上,细胞传至8代分化状态没有改变。LacZ染色鉴定报告小鼠分离的3代平滑肌细胞98%以上显示特异的蓝染。两种实验证明,应用此方法分离原代平滑肌细胞可以满足平滑肌体外功能实验的需求。结论:与传统的组织块培养法相比,该方法操作简便、经济,可以获得更多高纯度的血管平滑肌细胞。 展开更多
关键词 血管平滑肌 原代培养 胶原酶 小鼠
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兔原代胸主动脉平滑肌细胞培养方法及不同浓度血清培养基对其增殖的研究 被引量:3
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作者 刘苏健 申庆民 +2 位作者 吴继东 刘宏 赵京 《中国现代医药杂志》 2013年第9期21-23,共3页
目的探讨体外分离培养兔原代胸主动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)技术及在不同浓度血清培养基下生长情况。方法采用组织贴块法进行原代培养,分别用不同浓度血清培养基(10%、15%、20%)对原代VSMCs进行培养... 目的探讨体外分离培养兔原代胸主动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)技术及在不同浓度血清培养基下生长情况。方法采用组织贴块法进行原代培养,分别用不同浓度血清培养基(10%、15%、20%)对原代VSMCs进行培养.胰酶消化法传代,用倒置显微镜对原代培养兔平滑肌细胞进行形态学观察并鉴定,MTT法测定增殖能力。结果体积分数20%血清的DMEM培养液培养的原代细胞生长出现明显对数期。培养5代的兔平滑肌细胞纯度达97%以上:镜下可见平滑肌细胞生长,免疫组化提示平滑肌细胞肌动蛋白阳性表达,细胞生长第4~5d内光密度值变化较明显。结论本法能有效提高兔动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,为研究血管平滑肌细胞生物学行为提供了有效模型。 展开更多
关键词 胸主动脉 平滑肌细胞 原代培养
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Cytotoxicity of Modified Nonequilibrium Plasma with Chlorhexidine Digluconate on Primary Cultured Human Gingival Fibroblasts 被引量:1
16
作者 陈卉 石琦 +2 位作者 青莹 姚怡辰 曹颖光 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2016年第1期137-141,共5页
The aim of this study was to investigate the cytotoxicity of modified nonequilibrium plasma with chlorhexidine digluconate(CHX) on human gingival fibroblasts(HGFs), and to evaluate the biosecurity of modified none... The aim of this study was to investigate the cytotoxicity of modified nonequilibrium plasma with chlorhexidine digluconate(CHX) on human gingival fibroblasts(HGFs), and to evaluate the biosecurity of modified nonequilibrium plasma with 2% CHX as a new method of root canal treatment. Tissue samples taken from human gingiva were primarily cultured and passaged. Cells from passages 3–7 were used. HGFs were treated by modified nonequilibrium plasma with 2% CHX for 0 min(control group), 30 s, 1 min, 1.5 min, 3 min, 5 min, and 10 min, respectively, and then they were incubated for 0, 24, and 48 h. After that, cell counting kit-8(CCK-8) assay was applied to analyze the cytotoxicity of modified nonequilibrium plasma with 2% CHX on HGFs. There was no significant difference between the 0 h group treated with the modified nonequilibrium plasma for 1 min and the control group(P〉0.05). However, there were significant differences between all the other treated groups and the control group(P〈0.05). When treated for 1.5 min or shorter, the cell viability was obviously increased; while treated for 3 min or longer, it was obviously reduced. Moreover, when successively cultured for 0, 24, and 48 h, cell viability was decreased at first and then increased in the 3-min-treated and 5-min-treated groups. The modified nonequilibrium plasma with 2% CHX was of no influence on cell viability in 1.5 min treatment, and it could be safely used on root canal treatment. 展开更多
关键词 human gingival fibroblasts chlorhexidine digluconate nonequilibrium plasma cell primary culture cytotoxicity
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心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性研究
17
作者 杨冬 米立国 王切 《中国医学创新》 CAS 2016年第23期20-23,共4页
目的:初步探讨AngⅡ诱导心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性。方法:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大;通过免疫组织化学染色法检测模型中TNNI3K基因的蛋白表达情况。结果:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大,且实验组细胞中TNNI3K基因的蛋白表... 目的:初步探讨AngⅡ诱导心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性。方法:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大;通过免疫组织化学染色法检测模型中TNNI3K基因的蛋白表达情况。结果:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大,且实验组细胞中TNNI3K基因的蛋白表达增强。结论:TNNI3K基因参与了AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥厚机制。 展开更多
关键词 TNNI3K 心肌细胞原代培养 AngⅡ
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Wistar大鼠晶体上皮细胞原代培养及鉴定
18
作者 杨秀珍 王波 +3 位作者 王淑英 李冬萍 周丽 李涛 《临床中老年保健》 2001年第4期253-254,共2页
目的 探讨Wistar大鼠晶体上皮细胞原代培养方法 ,在形态学方面及晶体蛋白的特异性表达方面 ,对原代和第二代细胞进行鉴定。方法 在无菌条件下 ,取新生Wistar大鼠乳鼠晶体 ,解剖镜下剔除粘附的虹膜及悬韧带 ;室温条件下 ,于终浓度 0 0... 目的 探讨Wistar大鼠晶体上皮细胞原代培养方法 ,在形态学方面及晶体蛋白的特异性表达方面 ,对原代和第二代细胞进行鉴定。方法 在无菌条件下 ,取新生Wistar大鼠乳鼠晶体 ,解剖镜下剔除粘附的虹膜及悬韧带 ;室温条件下 ,于终浓度 0 0 8%的胰蛋白酶液中消化 5~ 10min后离心 ,用 199培养液调细胞至适当浓度 ,37℃ 5 %CO2 条件下培养 ,3~ 4d换液 1次 ;待细胞长成连续单层后 ,以 1∶2或 1∶3传代。结果 原代及第二代细胞形态呈典型的上皮细胞表型 ,从第三代起细胞形态发生了较大变化 ,提示细胞已开始分化。以Northern印渍杂交对培养细胞晶体蛋白的特异性表达进行了鉴定 ,发现原代及第二代细胞内仅存在α晶体蛋白mRNA。结论 原代和第二代细胞尚未进入分化状态 ,可用作进一步实验的材料。 展开更多
关键词 WISTAR大鼠 晶体上皮细胞 原代培养 鉴定 晶体蛋白 细胞形态学
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新生大鼠小肠上皮细胞分离培养研究 被引量:14
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作者 戴定威 吴圣楣 +2 位作者 李敏 廖贤平 刘再涌 《细胞生物学杂志》 CSCD 1997年第1期31-34,共4页
本实验比较了4种分离大鼠IEC的方法,结果显示联合应用粗胶原酶和中性蛋白酶分离效果最好,细胞贴壁生长能力强。胶原涂膜改善玻璃培养瓶或盖玻片表面的性状有利于细胞贴壁生长。细胞的增殖依赖于培养液的质量、成分及细胞间的相互作用。... 本实验比较了4种分离大鼠IEC的方法,结果显示联合应用粗胶原酶和中性蛋白酶分离效果最好,细胞贴壁生长能力强。胶原涂膜改善玻璃培养瓶或盖玻片表面的性状有利于细胞贴壁生长。细胞的增殖依赖于培养液的质量、成分及细胞间的相互作用。培养细胞一般1~2天贴壁,7~8天明显增殖,10~14天汇合成片。培养细胞细胞角质蛋白、碱性磷酸酶染色阳性,光镜和电镜检查均显示为IEC。本文所建立的新生大鼠IEC体外培养方法为研究IEC生理和病理提供了一个十分有用的实验模型。 展开更多
关键词 小肠上皮细胞 分离技术 原代培养
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大鼠脑微血管内皮细胞的分离、培养及不同纯化方法的比较 被引量:14
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作者 田林郁 李胜富 周东 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期869-872,共4页
目的对脑微血管内皮细胞分离、培养方法进行探索性研究,并对目前常用的纯化方法进行比较。方法首先采用两次酶消化、两次梯度离心法对大鼠脑血管内皮原代细胞进行分离,然后分别采用免疫磁珠和Thy1.1抗体杀伤法分别进行纯化。结果采用两... 目的对脑微血管内皮细胞分离、培养方法进行探索性研究,并对目前常用的纯化方法进行比较。方法首先采用两次酶消化、两次梯度离心法对大鼠脑血管内皮原代细胞进行分离,然后分别采用免疫磁珠和Thy1.1抗体杀伤法分别进行纯化。结果采用两次酶消化、两次梯度离心法可以成功分离到脑微血管内皮细胞,磁珠纯化法可得到纯度高但是数量较少的细胞,Thy1.1抗体杀伤法可得到纯度及得率均较高的内皮细胞。结论我们所摸索的方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养。 展开更多
关键词 脑微血管内皮细胞 原代细胞 大鼠
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