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软骨形态发生蛋白1诱导犬真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的实验研究 被引量：3
1
作者 赵贵庆 崔磊 曹谊林 《组织工程与重建外科杂志》 2011年第3期139-142,150,共5页
目的探讨软骨形态发生蛋白1(Cartilage-derived morphogenetic protein-1,CDMP1)诱导体外培养的犬真皮成纤维细胞(Dermal fibroblasts,DFs)向软骨细胞表型分化的可行性。方法应用CDMP1细胞诱导液对体外扩增至第4代的犬DFs进行诱导培养,... 目的探讨软骨形态发生蛋白1(Cartilage-derived morphogenetic protein-1,CDMP1)诱导体外培养的犬真皮成纤维细胞(Dermal fibroblasts,DFs)向软骨细胞表型分化的可行性。方法应用CDMP1细胞诱导液对体外扩增至第4代的犬DFs进行诱导培养,观察细胞的形态变化,以免疫荧光染色和RT-PCR检测细胞中软骨特异蛋白的表达情况。结果诱导培养6 d后,实验组部分DFs呈星形或多角形,免疫组化染色显示有软骨特异的II型胶原分泌,RT-PCR检测也表明有Ⅱ型胶原、aggrecan和SOX9表达。但是诱导培养10 d后,均转为阴性。结论 CDMP1可以诱导犬DFs向软骨细胞表型分化,有可能成为组织工程化纤维软骨的种子细胞。 展开更多
关键词 真皮成纤维细胞 纤维软骨细胞 软骨形态发生蛋白-1 组织工程
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CDMP和TGF联合诱导BMSCs修复软骨缺损 被引量：2
2
作者 崔颖 马林祥 +3 位作者 朱丽明 潘欣宇 王雪峰 张本 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第2期155-160,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在软骨源性形态发生蛋白1(CDMP1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)联合诱导前后成软骨能力的差异。方法采用免疫组织化学和阿新蓝染色的方法,检测BMSCs与聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)构筑的三维立体培养体系... 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在软骨源性形态发生蛋白1(CDMP1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)联合诱导前后成软骨能力的差异。方法采用免疫组织化学和阿新蓝染色的方法,检测BMSCs与聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)构筑的三维立体培养体系在CDMP1和TGF-β1联合诱导前后,产生特异性软骨基质Ⅱ型胶原和蛋白多糖(GAG)能力的差异;将诱导前后的培养体系移植入兔甲状软骨全层缺损处,从大体、组织学方面观察其对软骨缺损的修复作用。结果 BMSCs在PLGA上生长良好,CDMP1和TGF-β1诱导后的培养体系可表达Ⅱ型胶原和GAG;将诱导前后的培养体系移植入动物体内,可更加有效地修复喉软骨缺损。结论 BMSCs在CDMP1和TGF-β1联合诱导后比单独应用其中一种修复软骨缺损更加有效。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 软骨源性形态发生蛋白1 转化生长因子-Β1 聚乳酸/羟基乙酸共聚物 软骨分化
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软骨源性形态发生蛋白1转基因细胞片的初步探讨
3
作者 姚梅 崔颖 +2 位作者 王月田 张本 付文举 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期142-148,共7页
目的探讨软骨源性形态发生蛋白1（cartilage．derivedmorphogeneticprotein1，CDMPl）转基因细胞片的构建及其活性鉴定。方法取1月龄新西兰白兔骨髓分离培养BMSCs，取第3～6代细胞进行实验。实验分为3组，A组：腺病毒（adenovirus，Ad... 目的探讨软骨源性形态发生蛋白1（cartilage．derivedmorphogeneticprotein1，CDMPl）转基因细胞片的构建及其活性鉴定。方法取1月龄新西兰白兔骨髓分离培养BMSCs，取第3～6代细胞进行实验。实验分为3组，A组：腺病毒（adenovirus，Ad）．巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-人CDMP1（humanCDMPl，hCDMP1）-内部核糖体进入位点（internalribosomeentrysite，IRES）．增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）转染BMSCs，B组：Ad-CMV-EGFP（空载体腺病毒）转染BMSCs，C组：未转染的BMSCs。倒置荧光显微镜观察3组细胞荧光表达情况，MTT法检测3组细胞增殖活力。将3组处于对数生长期的细胞接种于温度敏感性6孔板获得细胞片，行形态学及HE染色观察，RT-PCR及Westemblot检测3组细胞片hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白表达，阿利新蓝染色检测糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）表达。结果倒置荧光显微镜下观察示转染细胞在72h表达明亮荧光，转染效率达90％；MTT法检测示，3组细胞生长曲线基本呈S形，培养1～9d吸光度（A）值比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。通过温度敏感性6孔板体外可成功收获完整的三维立体细胞片结构，RT-PCR及Westemblot检测示，A组细胞片中hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白均呈阳性表达，B、C组均为阴性。HE染色和阿利新蓝染色示，A组纤维组织丰富，细胞外基质较多，蓝色异染颗粒多；B、C组细胞外基质相对较少，无明显特异性蓝染颗粒；A组GAG阳性染色面积明显低于B、C组，灰度值明显高于B、C组（P〈0．05）。结论hCDMPl基因转染的BMSCs细胞片能表达II型胶原和GAG，具有成软骨活性，其克服了传统组织工程中细胞利用率低、支架异质性等缺点，有望构建出致密的组织工程软骨，为软骨组织工程进一步发展提供了新思路。 展开更多
关键词 软骨组织工程 细胞片 软骨源性形态发生蛋白1 BMSCS 腺病毒基因转染
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负载CDMP-1和DEX的盘状脂质纳米粒对膝关节炎新西兰兔血清和滑膜组织中炎性因子的影响观察
4
作者 吴晓东 李朋朋 +2 位作者 程建 霍维玲 李国栋 《山东医药》 CAS 2021年第33期44-47,共4页
目的观察膝关节腔内注射负载软骨衍生形态发生蛋白1(CDMP-1)和地塞米松(DEX)的盘状脂质纳米粒(DLNPs)对膝关节炎新西兰兔血清和滑膜组织中炎性因子的影响,并探讨其治疗关节炎的作用机制。方法健康新西兰兔35只,随机分为5组:对照组、模... 目的观察膝关节腔内注射负载软骨衍生形态发生蛋白1(CDMP-1)和地塞米松(DEX)的盘状脂质纳米粒(DLNPs)对膝关节炎新西兰兔血清和滑膜组织中炎性因子的影响,并探讨其治疗关节炎的作用机制。方法健康新西兰兔35只,随机分为5组:对照组、模型组、DEX组、CDMP-1组、DLNPs组,每组7只,其中模型组、DEX组、CDMP-1组、DLNPs组新西兰兔采用Hulth改良法制备膝关节炎新西兰兔模型。造模成功后,分别在第1、4、7、10天于膝关节腔内注射药物,DEX组注射9.8%的DEX,CDMP-1组注射CDMP-1,DLNPs组注射负载CDMP-1和DEX的纳米颗粒DLNPs,对照组、模型组不给药。造模成功后第13天处死,取腹主动脉血,采用ELISA法检测血清中炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素2(PGE2);取膝关节滑膜组织,采用BCA法检测滑膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-13(MMP13)。结果模型组、DEX组、CDMP-1组、DLNPs组新西兰兔血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2水平和滑膜组织中IL-1β、TNF-α、MMP-13相对表达量与对照组相比均显著升高(P均<0.05),DEX组、CDMP-1组、DLNPs组新西兰兔血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2水平和滑膜组织中IL-1β、TNF-α、MMP-13相对表达量与模型组相比均显著降低(P均<0.05),DEX组、CDMP-1组、DLNPs组新西兰兔血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2水平和滑膜组织中IL-1β、TNF-α、MMP-13相对表达量组间相比,P均<0.05,且CDMP-1组最高、DLNPs组最低(P均<0.05)。结论与单独注射DEX或CDMP-1相比,膝关节腔内注射负载CD‐MP-1和DEX的盘状脂质纳米粒DLNPs可以显著降低膝关节炎新西兰兔血清和滑膜组织中炎性因子的水平。 展开更多
关键词 盘状脂质纳米粒 软骨衍生形态发生蛋白1 地塞米松 膝关节炎 炎性因子 白介素-1β 白介素-6 肿瘤坏死因子-α 前列腺素2 基质金属蛋白酶-13
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软骨形态发生蛋白1诱导的瘢痕成纤维细胞体内成软骨能力的实验研究
5
作者 沈聪聪 柴岗 +3 位作者 曲淼 侯亦康 许祐荣 张艳 《组织工程与重建外科杂志》 2014年第6期324-328,共5页
目的探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)诱导的瘢痕成纤维细胞在体内环境下的软骨构建能力。方法取瘢痕切除术后丢弃的增生性瘢痕组织,提取瘢痕成纤维细胞。将瘢痕成纤维细胞与PGA/PLA支架复合,CDMP1软骨诱导液(CDMP1终浓度为100 ng/m L)进... 目的探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)诱导的瘢痕成纤维细胞在体内环境下的软骨构建能力。方法取瘢痕切除术后丢弃的增生性瘢痕组织,提取瘢痕成纤维细胞。将瘢痕成纤维细胞与PGA/PLA支架复合,CDMP1软骨诱导液(CDMP1终浓度为100 ng/m L)进行诱导培养2周,设为诱导组(n=10);将常规培养液培养的瘢痕成纤维细胞-材料复合物植入裸鼠体内作为阴性对照,设为非诱导组(n=4);将软骨细胞-材料复合物植入裸鼠体内作为阳性对照,设为软骨组(n=4)。分别于4周和8周后取材,进行各组湿重、糖胺聚糖(GAG)含量测定,HE染色、Safranine-O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果体内培养4周、8周后各组湿重、GAG含量测定显示,诱导组均高于非诱导组(P<0.05)。体内培养4周后,诱导组HE染色结果显示,瘢痕成纤维细胞诱导后出现软骨细胞陷窝结构;Safranine-O染色结果示,GAG均匀分布于基质;免疫组织化学染色示部分瘢痕成纤维细胞基质中COLⅡ阳性表达。8周时,诱导组的类软骨结果相对4周时更加成熟,更加符合软骨结构分布。结论在CDMP1诱导下,瘢痕成纤维细胞与PGA/PLA材料复合,在体内可以形成类软骨组织,具备一定的成软骨能力。 展开更多
关键词 瘢痕成纤维细胞 软骨细胞 软骨形态发生蛋白1 诱导分化
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软骨形态发生蛋白1诱导SD仔鼠脂肪干细胞修复兔膝关节软骨缺损的研究 被引量：2
6
作者 杨亚军 朱庆生 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1363-1366,共4页
目的:应用软骨形态发生蛋白1(CDMP1),以诱导SD仔鼠脂肪干细胞(ADSCs)以修复兔膝关节软骨缺损,探讨异种细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:自SD仔鼠腹股沟脂肪组织分离、培养ADSCs,复合于自制牛松质骨支架上,经CDMP1诱导,体外... 目的:应用软骨形态发生蛋白1(CDMP1),以诱导SD仔鼠脂肪干细胞(ADSCs)以修复兔膝关节软骨缺损,探讨异种细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:自SD仔鼠腹股沟脂肪组织分离、培养ADSCs,复合于自制牛松质骨支架上,经CDMP1诱导,体外继续培养2周,免疫组化鉴定后备用。建立兔双侧髌骨关节缺损模型。左侧缺损处植入ADSCs-支架复合物,为实验侧;右侧缺损处植入空支架,为对照侧。术后8、16、24和48周各处死9只兔子,缺损处行H-E染色和番红O染色。结果:实验侧8周时可见缺损周围表面充填有薄层白色半透明组织,与周围软骨的界线清楚;16周时缺损表面界限连接较8周时模糊,但仍可辨,24周时,修复良好,修复区新生软骨细胞与周围正常软骨细胞形态相近,呈球形,可见软骨陷窝,H-E染色和番红O染色阳性;48周时,能较容易分清缺损处与修复区的界限,修复效果不及24周时。对照侧8、16、24和48周4个时期标本基本相同,软骨缺损处与周围正常组织边界清楚,缺损处凹陷空洞,被肉芽组织填充,新生细胞呈长梭形,H-E染色和番红O染色阴性。结论:利用CDMP1诱导SD仔鼠ADSCs复合自制牛松质骨支架可较好修复兔膝关节软骨缺损,为异种软骨细胞成为软骨组织工程的种子细胞提供可能。 展开更多
关键词 膝关节缺损 脂肪干细胞 异种移植 软骨细胞 组织工程 软骨形态发生蛋白1
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多巴胺表面修饰/负载软骨源性形态发生蛋白1的3D打印聚己内酯-羟基磷灰石三维多孔支架促进人BMSCs成软骨分化的实验研究 被引量：6
7
作者 徐燕 魏波 +3 位作者 周进 姚庆强 王黎明 那键 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期215-222,共8页
目的探讨利用3D打印技术制备、经多巴胺表面修饰及负载软骨源性形态发生蛋白1(cartilage derived morphogenetic protein 1,CDMP1)的聚己内酯(polycaprolactone,PCL)-羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)三维多孔支架,体外诱导人BMSCs(human ... 目的探讨利用3D打印技术制备、经多巴胺表面修饰及负载软骨源性形态发生蛋白1(cartilage derived morphogenetic protein 1,CDMP1)的聚己内酯(polycaprolactone,PCL)-羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)三维多孔支架,体外诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成软骨分化的可行性。方法采用3D打印技术制备PCL-HA支架,经多巴胺表面修饰后,将CDMP-1负载于支架上,扫描电镜观察支架表面微结构,并检测孔隙率和水静态接触角。体外成软骨分化实验:分为A、B、C 3组,A组为PCL-HA支架,B组为多巴胺表面修饰的PCL-HA支架,C组为多巴胺表面修饰及负载CDMP-1的PCL-HA支架;将h BMSCs植入3组支架,成软骨诱导培养后比较细胞黏附率、细胞增殖(MTT法)和细胞活性(Live/Dead染色法),并采用实时荧光定量PCR检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的基因表达。结果 3组支架均呈三维多孔圆柱体状,孔洞相互联通,孔径为400~500μm,孔隙率为56%,材料纤维走向为0°/90°。经多巴胺表面修饰后,支架颜色由初始的白色变为棕色;水静态接触角也由76°降为0°。体外培养24 h,A、B、C组细胞黏附率分别为34.3%±3.5%、48.3%±1.5%、57.4%±2.5%,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Live/Dead染色显示3组细胞均有较好的细胞活性。MTT检测显示各组h BMSCs均生长良好,吸光度(A)值随培养时间延长而增大;培养4、7、14、21 d时,C组A值显著高于A、B组,B组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随培养时间延长,3组Ⅱ型胶原mRNA和Aggrecan mRNA表达均持续增加;培养7、14、21 dⅡ型胶原mRNA相对表达量及培养14、21 d Aggrecan mRNA相对表达量,C组均显著高于A、B组,B组高于A组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用3D打印技术制备、经多巴胺表面修饰及负载CDMP-1的PCL-HA三维多孔支架,体外与hB MSCs共培养,可促进细胞黏附、增殖及成软骨分化。 展开更多
关键词 3D打印技术 多巴胺 聚己内酯 羟基磷灰石 复合支架 软骨源性形态发生蛋白1 BMSCS 软骨组织工程
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CDMP-1促进成人骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究 被引量：6
8
作者 张波 杨述华 +2 位作者 张宇坤 夏天 孙志博 《中国骨与关节损伤杂志》 2011年第3期217-220,共4页
目的探讨软骨源性形态发生蛋白1(CDMP-1)诱导成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的可行性及最佳诱导浓度。方法分离培养BMSCs,免疫荧光法检测BMSCs表面CD34,CD45,CD105表达。采用含0、10、50、100 ng/ml CDMP-1的软骨诱导液诱... 目的探讨软骨源性形态发生蛋白1(CDMP-1)诱导成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的可行性及最佳诱导浓度。方法分离培养BMSCs,免疫荧光法检测BMSCs表面CD34,CD45,CD105表达。采用含0、10、50、100 ng/ml CDMP-1的软骨诱导液诱导培养BMSCs 21 d,倒置显微镜观察细胞形态变化;RT-PCR检测不同浓度CDMP-1组细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan表达;免疫组化检测Ⅱ型胶原表达;番红O和阿利新蓝染色检测蛋白多糖表达。结果成人BMSCs呈梭形漩涡状生长,CD44、CD105表达阳性,CD34呈阴性表达。CDMP-1诱导7 d后细胞形态逐渐由长梭形向多边形、多角形转化。不同浓度CDMP-1诱导21 d,Ⅱ型胶原表达量各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);Aggrecan的表达CM组和10 ng组之间差异无统计学意义(P>0.05),其他各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测Ⅱ型胶原表达阳性,阿利新蓝和番红O染色均为阳性。结论含100 ng/ml CDMP-1软骨诱导液能有效促进成人BMSCs向软骨表型分化。 展开更多
关键词 软骨源性形态发生蛋白1 骨髓基质干细胞 软骨细胞 分化
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CDMP-1诱导骨髓间充质干细胞分化成髓核细胞的实验研究
9
作者 徐斌武 邵斌 +10 位作者 朱世杰 叶志炜 彭龙海 李晨 艾江波 陈伟才 程细高 殷明 周荣平 罗军 顾玉荣 《中国骨与关节损伤杂志》 2018年第11期1153-1156,共4页
目的 探讨软骨衍生形态发生蛋白-1（CDMP-1）能否诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）向髓核细胞分化,并检测其诱导的细胞是否具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。方法 BMSCs采用0 ng/ml（对照组）以及10 ng/ml（观察组）的CDMP-1处理,将正... 目的 探讨软骨衍生形态发生蛋白-1（CDMP-1）能否诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）向髓核细胞分化,并检测其诱导的细胞是否具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。方法 BMSCs采用0 ng/ml（对照组）以及10 ng/ml（观察组）的CDMP-1处理,将正常椎间盘髓核细胞作为阳性对照组。BMSCs诱导后采用PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因水平表达,用Western Blot法检测Ⅱ型胶原蛋白水平的表达。采用阿尔辛蓝染色及定量比较蛋白多糖含量的变化。结果 PCR检测结果发现,观察组和对照组中Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原均有增加,而阳性对照组中Ⅱ型胶原明显比观察组更少。基因水平检测结果发现,CDMP-1诱导BMSCs分化后Ⅱ型胶原基因表达比正常髓核细胞还高。观察组中Ⅱ型胶原的蛋白水平表达明显比阳性对照组和对照组细胞更高,对照组中Ⅱ型胶原蛋白水平表达几乎很少。阿尔辛蓝染色结果发现,观察组蛋白多糖含量稍高于阳性对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）;阳性对照组与观察组蛋白多糖含量均高于对照组,差异有统计学意义（P 〈0.05）。结论 CDMP-1能够诱导BMSCs向髓核细胞分化,具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。 展开更多
关键词 软骨衍生形态发生蛋白-1 骨髓间充质干细胞 髓核细胞 Ⅱ型胶原 蛋白多糖
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