三七总皂苷对骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用 被引量：26

1

作者 杨忠奇 冼绍祥 +2 位作者 汪朝晖 李南夷 赵立诚 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2006年第4期239-242,共4页

目的探讨三七总皂苷(PNS)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞。方法采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,用流式细胞仪检测细胞表面标志,用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化,采用相差显微镜、免疫组化及RT-PCR鉴... 目的探讨三七总皂苷(PNS)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞。方法采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,用流式细胞仪检测细胞表面标志,用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化,采用相差显微镜、免疫组化及RT-PCR鉴定心肌细胞。结果大鼠MSCs细胞表面抗原CD44阳性,CD34阴性;经PNS体外诱导后细胞形态发生变化,其细胞免疫组化呈结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnI)阳性;RT-PCR显示诱导后细胞转录肌球蛋白重链mRNA水平增加。结论大鼠MSCs体外在PNS诱导下可分化为心肌样细胞,为应用MSCs治疗心肌损伤提供了动物实验方法。 展开更多

关键词 三七总皂苷 骨髓间充质干细胞 分化 心肌样细胞

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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞 被引量：12

2

作者 王海萍 张雷 李秀华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期70-74,共5页

目的采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化... 目的采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定。在诱导后7d、21d和28d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达。结果MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝。RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱。αMHC在诱导后7d不表达,2ld弱表达,28d表达明显。结论骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 5-氮胞苷 心肌细胞 激光扫描共焦显微镜 大鼠

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microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量：17

3

作者 文通 魏云峰 +4 位作者 王梦洪 汪泱 曾俊义 彭小平 李宾公 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第1期41-46,共6页

目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表... 目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6 d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达。结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 miRNA-1 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞

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养心通脉有效部位方动员骨髓间充质干细胞归巢大鼠梗死心肌的实验研究 被引量：16

4

作者 袁肇凯 黄献平 +7 位作者 李勇华 郑景辉 王丽平 简维雄 孙贵香 王萍 黄勃 喻松仁 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期2321-2325,共5页

目的:观察养心通脉有效部位方(apr-YTF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢梗死心肌的影响。方法:将急性心肌梗死大鼠模型随机分成apr-YTF注射液、rhG-CSF注射液和PBS缓冲液3组,测量各组大鼠干预后在体心功能、心室肌瘢痕面积、瘢痕毛... 目的:观察养心通脉有效部位方(apr-YTF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢梗死心肌的影响。方法:将急性心肌梗死大鼠模型随机分成apr-YTF注射液、rhG-CSF注射液和PBS缓冲液3组,测量各组大鼠干预后在体心功能、心室肌瘢痕面积、瘢痕毛细血管数、心肌CD34+细胞、Brdu与cTn I双染阳性细胞数、Ⅷ因子、VEGF、bFGF、Flk-1、外周血CD34+细胞数,分析组间差异。结果:①与PBS组比较,apr-YTF组和rhG-CSF组的LVSP、LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均有显著改善,心室肌瘢痕面积显著减小,心室肌毛细血管数、心肌边缘区和外周血液CD34+染色阳性细胞数、心肌梗死边缘区中Brdu与cTn I双染阳性细胞数及Ⅷ因子、Flk-1、VEGF、bFGF的表达均显著增加(P<0.01,P<0.05);②与rhG-CSF组比较,apr-YTF组的LVSP显著升高,心肌组织CD34+染色阳性细胞数、心肌梗死边缘区中Brdu与cTn I双染阳性细胞数均显著增高(P<0.01)。结论:apr-YTF能促使BMSCs动员入血、定向归巢并转化为心肌细胞,且优于rhG-CSF。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 归巢 养心通脉片有效部位组方

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心肌微环境对诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的影响 被引量：11

5

作者 王秀力 王洁 宫海滨 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第12期2419-2422,2415,I0001,共6页

目的：探讨体外心肌微环境对骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为心肌样细胞的诱导作用。方法：分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）和心肌细胞并在体外培养纯化。以2×10^4/mL的细胞密度种植心肌细胞,培养72h后收集上清,在BMSCs的培养... 目的：探讨体外心肌微环境对骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为心肌样细胞的诱导作用。方法：分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）和心肌细胞并在体外培养纯化。以2×10^4/mL的细胞密度种植心肌细胞,培养72h后收集上清,在BMSCs的培养基内加入心肌细胞培养上清诱导BMSCs分化为心肌样细胞,实验共分6组：10%、20%、30%、40%及50%心肌细胞培养上清组及含10%胎牛血清的对照组,均诱导BMSCs7d,每天在倒置显微镜下观察细胞的形态变化;应用免疫细胞化学技术检测不同浓度心肌细胞培养上清组诱导7d后BMSCs中a-平滑肌肌动蛋白（a-sMA）、β-肌动蛋白（β-actin）、心肌特异性肌钙蛋白T（Troponin-T）、CD31以及FactorⅧ的表达。结果：心肌细胞培养上清组诱导BMSCs7d后,细胞的形态没有改变。10%、20%、30%、40%及50%心肌细胞培养上清组a-sMA、。-actin以及Troponin-T的表达均呈阳性,以30%心肌细胞培养上清组的蛋白表达量最高（P〈0.01）,而CD31和FactorⅧ的表达呈阴性。结论：心肌细胞的培养上清能够诱导BMSCs分化为心肌样细胞,且30%心肌细胞培养上清是诱导BMSCs向心肌样细胞分化的最适浓度。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 心肌微环境 分化 心肌样细胞

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骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究 被引量：10

6

作者 牛红星 穆军升 +1 位作者 张健群 伯平 《心肺血管病杂志》 CAS 2013年第3期357-360,共4页

目的:研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为心肌样细胞的能力,用于心肌补片治疗心肌梗死的研究。方法:分离C57/BSL小鼠BMSCs,全培养差速贴壁法,经过贴壁培养至第3代,流式细胞仪鉴定细胞表面标志(CD34、CD45、... 目的:研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为心肌样细胞的能力,用于心肌补片治疗心肌梗死的研究。方法:分离C57/BSL小鼠BMSCs,全培养差速贴壁法,经过贴壁培养至第3代,流式细胞仪鉴定细胞表面标志(CD34、CD45、CD73、CD90),经10μmol/L的5-氮杂胞苷诱导细胞,24 h后更换完全培养基培养,2 w后进行免疫荧光染色,荧光显微镜观察心肌钙蛋白T(cTnT)和连接素蛋白43(CX43)的表达。结果:流式鉴定结果显示CD34、CD45阴性,CD73强阳性,CD90弱阳性。免疫荧光染色显示,诱导后细胞高表达心肌细胞特异性蛋白cTnT,连接素蛋白CX43表达水平明显增加。结论:5-aza可以诱导BMSCs大量表达心肌特异性蛋白cTnT和细胞连接素蛋白(CX43),干细胞分化为心肌样细胞,为干细胞移植治疗小鼠心梗提供种子细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 5-氮杂胞苷 免疫荧光

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电刺激促骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量：9

7

作者 严中琴 杨刚 +5 位作者 崔燎 何学令 况薇 吴文超 刘小菁 李良 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期556-561,共6页

观察体外电刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向心肌样细胞分化的影响。选用第3、4代rBMSCs用于实验。实验分为3组:(1)电刺激组,rBMSCs分别暴露于1、2、4、6V电压,频率2Hz,脉宽5ms的电刺激,2h/d,连续刺激10d;(2)5-氮胞苷(5-Aza)组,给... 观察体外电刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向心肌样细胞分化的影响。选用第3、4代rBMSCs用于实验。实验分为3组:(1)电刺激组,rBMSCs分别暴露于1、2、4、6V电压,频率2Hz,脉宽5ms的电刺激,2h/d,连续刺激10d;(2)5-氮胞苷(5-Aza)组,给予10μmol/L 5-Aza诱导24h,然后采用完全培养液培养10d;(3)对照组,采用完全培养液培养10d。通过倒置相差显微镜逐日连续观察细胞的生长状况和形态特征;采用实时荧光定量PCR方法检测GATA4,α-肌动蛋白(α-actin),α-辅肌动蛋白(ACTN2),心肌肌钙蛋白T(TNNT2)的mRNA表达;采用免疫荧光染色技术检测TNNT2的蛋白表达。结果显示:电刺激组、5-Aza组的GATA4、α-actin、ACTN2和TNNT2mRNA表达与TNNT2蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);提示,电刺激可以促进rBMSCs向心肌样细胞分化,电压2V的电刺激效果最佳。 展开更多

关键词 电刺激 大鼠骨髓间充质干细胞 心肌样细胞

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5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究 被引量：4

8

作者 苏立 陈运贞 +2 位作者 张晓刚 张润峰 马旭 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期292-295,共4页

目的 :比较 5 -氮胞苷 ( 5 -azacytidine ,5 -aza)于不同浓度、不同孵育时间对骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)向心肌样细胞分化的影响 ;观察诱导后不同时间点心肌标志物的表达情况。方法 :体外分离培养Wistar大鼠MSC ,传... 目的 :比较 5 -氮胞苷 ( 5 -azacytidine ,5 -aza)于不同浓度、不同孵育时间对骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)向心肌样细胞分化的影响 ;观察诱导后不同时间点心肌标志物的表达情况。方法 :体外分离培养Wistar大鼠MSC ,传代纯化后进行诱导实验。浓度分组 (C1-C4 ) :分别以 3、5、10、2 0 μmol/L5 -aza处理 2 4h ,之后更换新鲜培养基继续培养。时间分组 (T1-T5 ) :以 10 μmol/L分别孵育 6h、12h、2 4h、4 8h、72h ,之后更换新鲜培养基继续培养。各组均于首次加药 4周后行免疫细胞化学染色检测。RT -PCR检测 10 μmol/L5 -aza处理后 2、4、8周细胞GATA4mRNA、cTnTmRNA的表达情况。结果 :经 5 -aza诱导处理后 4周 ,C1-C4组Desmin及α -SarcomericActin染色阳性率各组比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;而T1-T5各组其阳性率比较存在统计学差异 (P <0 .0 1)。RT -PCR显示 ,诱导后 2周 ,GATA4mRNA开始表达 ,持续至 8周 ;cTnTmRNA在诱导后 2周无表达、4周时弱表达 ,8周时更为显著。结论 :成年人鼠MSC在适当浓度 5 -aza处理后可以向心肌样细胞分化 ,在 3μmol/L～ 2 0 μmol/L范围内 ,5 -aza浓度的变化对MSC的分化率影响较小 ;在 4 8h内 ,适当延长 5 -aza的孵育时间可能增加MSC向心肌样细胞的转? 展开更多

关键词 间充质干细胞 心肌样细胞 诱导 分化 5-氮胞苷

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小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化 被引量：8

9

作者 智深深 田杰 +4 位作者 刘官信 鲁荣 林建萍 刘建平 朱静 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第7期740-745,共6页

目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、... 目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。结果 PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。结论 Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。 展开更多

关键词 慢病毒表达载体 Islet-1 干细胞特异性分化 心肌样细胞

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5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究 被引量：7

10

作者 王欢 杨曦 +2 位作者 魏琴 段明军 侯月梅 《新疆医科大学学报》 CAS 2012年第12期1590-1594,共5页

目的探讨体外5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的可行性。方法分离培养骨髓间充质干细胞,传至第3代后,加入5-氮胞苷诱导24h,按照诱导浓度分为对照组、5μmol/L组、10μmol/L组、15μmol/L组4组,培养4w,倒置显微镜观察形... 目的探讨体外5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的可行性。方法分离培养骨髓间充质干细胞,传至第3代后,加入5-氮胞苷诱导24h,按照诱导浓度分为对照组、5μmol/L组、10μmol/L组、15μmol/L组4组,培养4w,倒置显微镜观察形态变化,有无自发搏动,在第1、2、3、4w行细胞免疫组化检测α-Actin、Connexin43表达。结果 5-氮胞苷浓度10μmol/L组为适宜诱导浓度,5μmol/L组浓度不能达到诱导分化作用,15μmol/L组细胞死亡率高。未观察到心肌样细胞的单个搏动或多个同步搏动。结论经过5-氮胞苷诱导后的心肌样细胞在形态和结构特性上均与心肌细胞相似,但由于5-氮胞苷为细胞毒性药物,其应用于临床的安全性有待商榷。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 5-氮胞苷 心肌样细胞

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双相脉冲电刺激可促进脂肪干细胞分化为心肌细胞样细胞 被引量：7

11

作者 李志园 杨刚 +2 位作者 黄华 肖正华 任小梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1200-1204,1210,共6页

目的设计一套用于心肌组织工程的双相脉冲电刺激(BPES)系统,并研究BPES对体外培养的脂肪干细胞(ADSC)向心肌细胞样细胞分化的影响。方法分离和培养SD大鼠ADSC,通过流式细胞术对细胞表型进行鉴定,通过成脂、成骨分化证明其多向分化潜能... 目的设计一套用于心肌组织工程的双相脉冲电刺激(BPES)系统,并研究BPES对体外培养的脂肪干细胞(ADSC)向心肌细胞样细胞分化的影响。方法分离和培养SD大鼠ADSC,通过流式细胞术对细胞表型进行鉴定,通过成脂、成骨分化证明其多向分化潜能。选择第3代细胞随机分为2组:BPES组接种24 h后,给予BPES(脉宽2 ms、幅度2 V、频率2 Hz、刺激时间2 h/d,连续刺激3、7、14 d),每3 d换1次液;对照组培养条件与BPES组相同,但不给予BPES。通过倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光技术检测细胞同源盒蛋白Nkx-2.5和连接子蛋白43(CX43)的水平。结果流式细胞术证明分离的细胞是ADSC,成脂诱导后并用油红O染色,可见细胞内脂滴被染成红色,成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色,可见钙结节特征;细胞增殖无明显变化,BPES组Nkx-2.5和CX43蛋白表达量明显高于对照组。结论成功设计了可用于组织工程的BPES系统,并证明BPES可在体外促进ADSC向心肌细胞样细胞分化。 展开更多

关键词 双相脉冲 双相脉冲电刺激 脂肪干细胞 分化 心肌细胞样细胞

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5-氮胞苷对脂肪间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的影响 被引量：5

12

作者 李国庆 张卫泽 +4 位作者 马凌 陈永清 秦勉 韩娟萍 张耀辉 《西北国防医学杂志》 CAS 2009年第5期357-360,共4页

目的:观察5-氮胞苷(5-aza)对脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌样细胞诱导分化的影响。方法:对第3代细胞以10μmol/L 5-aza诱导作用24 h后,用含体积分数5%胎牛血清的完全培养基继续培养,镜下观察细胞形态学变化。RT-PCR检测NKX2.5、GATA4... 目的:观察5-氮胞苷(5-aza)对脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌样细胞诱导分化的影响。方法:对第3代细胞以10μmol/L 5-aza诱导作用24 h后,用含体积分数5%胎牛血清的完全培养基继续培养,镜下观察细胞形态学变化。RT-PCR检测NKX2.5、GATA4及cTnI基因mRNA表达,免疫组化法检测cTnI蛋白表达。结果:5-aza作用7 d后ADMSCs形态及排列开始发生变化,RT-PCR产物条带见NKX2.5、GATA4基因的表达。4周后见极个别细胞出现细微搏动,免疫细胞化学显示cTnI阳性,RT-PCR产物条带见cTnI基因表达。结论:5-aza可以诱导ADMSCs向自发搏动的心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 干细胞 5-氮胞苷 分化 心肌样细胞

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骨形态蛋白2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究 被引量：6

13

作者 侯婧 吕安林 +4 位作者 刘博武 黄炜 达晶 侯红 侯兆蕾 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2012年第7期27-30,共4页

目的观察骨形态蛋白2体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。方法采用密度梯度离心法分离大鼠BMMSCs,取第4代BMMSCs进行诱导:骨形态蛋白2组(BMP-2,终浓度为10μg/L),空白对照组。诱导24h后更换常规培养液继续培... 目的观察骨形态蛋白2体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。方法采用密度梯度离心法分离大鼠BMMSCs,取第4代BMMSCs进行诱导:骨形态蛋白2组(BMP-2,终浓度为10μg/L),空白对照组。诱导24h后更换常规培养液继续培养4周。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,免疫荧光染色法鉴定诱导后BMMSCs中心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,WesternBlot检测诱导2周和4周后Cx43以及cTnI的表达量,流式细胞计数法计算心肌样细胞诱导分化率。结果原代培养的BMMSCs2周形成集落,呈梭形或星形。传代细胞体积变大,诱导后细胞呈长梭形,呈一致性生长,并出现肌岛样结构。免疫荧光染色结果显示诱导后BMMSCs表达cTnI。WesternBlot检测结果提示诱导后Cx43以及cTnI均明显增多,4周组明显高于2周组。流式细胞计数法显示:BMP-2组心肌样细胞诱导率为(17.9±0.8)%。结论骨形态蛋白2可在体外诱导大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化率高。 展开更多

关键词 间质干细胞 骨形态发生蛋白质类 心肌样细胞

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P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞中的作用 被引量：5

14

作者 田龙 高航 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期37-42,共6页

目的研究P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞中的调控作用,探讨BMSC向心肌样细胞分化的可能信号机制。方法 BMSC分离与体外培养;分3组:对照组、BMP-2组(诱导剂组)和BMP-2+SB203580组(... 目的研究P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞中的调控作用,探讨BMSC向心肌样细胞分化的可能信号机制。方法 BMSC分离与体外培养;分3组:对照组、BMP-2组(诱导剂组)和BMP-2+SB203580组(阻断剂组)。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;免疫细胞化学检测诱导后BMSC心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)和连接蛋白43(Cx43)的表达;Western blot检测诱导后细胞内p-P38MAPK/P38MAPK的变化。结果 BMP-2诱导15 min,p-P38MAPK蛋白呈弱表达,30 min达到高峰,60 min逐渐降低;用P38MAPK阻断剂SB203580预处理细胞后,p-P38MAPK表达明显降低;与诱导剂组比较,阻断剂组的p-P38MAPK蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导4周后,对照组cTnT、Cx43呈阴性表达;诱导剂组和阻断剂组呈阳性表达,且阻断剂组Cx43阳性细胞数多于诱导剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-2可诱导BMSC分化为心肌样细胞,P38MAPK信号通路在诱导过程中发挥负性调节作用。 展开更多

关键词 P38MAPK信号通路 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白2 心肌样细胞

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心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞 被引量：4

15

作者 彭朝权 高雅 +3 位作者 项鹏 杨珂 邹丽媛 吴晓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2061-2066,共6页

目的:探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法:获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza... 目的:探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法:获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果:分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论:适宜浓度的5-Aza(10μmol/L)和CT-1(0.1μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。 展开更多

关键词 心肌营养素1 间充质干细胞 心肌样细胞

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Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化 被引量：4

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作者 林建萍 田杰 +4 位作者 刘官信 鲁荣 刘建平 智深深 朱静 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第4期363-368,共6页

目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法... 目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 C3H10T1/2细胞 Islet-1 心肌样细胞 组蛋白乙酰化

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养心通脉有效部位方对MSCs向心肌样细胞分化的影响 被引量：4

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作者 黄献平 袁肇凯 +7 位作者 郑景辉 李勇华 王丽平 简维雄 孙贵香 王萍 黄勃 喻松仁 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期427-430,共4页

目的观察养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞的诱导作用。方法体外培养大鼠MSCs,设养心通脉有效部位方(YTF)组、5-氮胞苷(5-aza)阳性对照组和低糖DMEM组,体外诱导分化心肌样细胞;用免疫细胞化学方法... 目的观察养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞的诱导作用。方法体外培养大鼠MSCs,设养心通脉有效部位方(YTF)组、5-氮胞苷(5-aza)阳性对照组和低糖DMEM组,体外诱导分化心肌样细胞;用免疫细胞化学方法观测其心肌肌丝蛋白(Desmin)、肌球蛋白重链(MHC)的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达。结果大鼠MSCs体外向心肌样细胞分化诱导后,在DMEM组中未发现Desmin和MHC阳性细胞;而YTF组和5-aza组的Desmin及MHC免疫组化染色均可见阳性免疫复合物,与DMEM组比较,YTF组和5-aza组Desmin、MHC、GATA-4 mRNA表达的相对光密度(IOD)值均明显提高(P<0.01,P<0.05),而且YTF组Desmin、MHC的IOD也明显高于5-aza组(P<0.05),但YTF组GATA-4 mRNA的IOD值与5-aza组比较无统计学差异。结论 YTF在体外可诱导MSCs向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 分化 养心通脉有效部位方

原文传递

miR-148a促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞的分化 被引量：3

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作者 毛庆 庞毅恒 +1 位作者 卢永祥 梁秀琳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第19期2978-2984,共7页

背景:研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。目的:探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:将人诱导... 背景:研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。目的:探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:将人诱导性多能干细胞分为3组向心肌样细胞诱导分化,对照组细胞不做处理,低表达组细胞用miR-148a抑制物处理28 d,高表达组细胞用miR-148a模拟物处理28 d;另取常规培养28 d的人诱导性多能干细胞为空白对照组。CCK-8检测细胞增殖活力,qRT-PCR检测miR-148a mRNA的表达,免疫荧光染色和Western blot检测MHC和cTnT蛋白的表达。结果与结论:①低表达组细胞内miR-148a mRNA表达、细胞增殖活力低于空白对照组和对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);②空白对照组无MHC和cTnT的阳性表达,对照组、低表达组和高表达组均有MHC和cTnT的阳性表达;③低表达组细胞MHC和cTnT蛋白表达低于对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);④以上结果提示,miR-148a可促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 干细胞 人诱导性多能干细胞 心肌样细胞 定向分化 miR-148a 微小RNA 人肌球蛋白重链 心脏肌钙蛋白T

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大鼠骨髓间质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞Cx43通讯连接功能检测 被引量：3

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作者 尹戴佳佳 宋治远 农耀明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1986-1989,共4页

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为心肌样细胞Cx43的分布与通讯连接功能状态。方法:取健康SD大鼠骨髓,用5-氮杂胞苷体外诱导培养。取诱导培养2、3、4周的MSCs为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,另取急性分离的心肌细胞为对照组,用激光共... 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为心肌样细胞Cx43的分布与通讯连接功能状态。方法:取健康SD大鼠骨髓,用5-氮杂胞苷体外诱导培养。取诱导培养2、3、4周的MSCs为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,另取急性分离的心肌细胞为对照组,用激光共聚焦技术检测Cx43的分布及平均荧光漂白恢复率。结果:对Cx43在细胞内分布检测发现,随诱导培养时间的延长,细胞内蛋白颗粒密度逐渐增加;诱导培养4周后MSCs内蛋白颗粒密度与对照组比较无显著差异(63.87±12.43,64.87±12.15,P>0.05)。各组细胞平均荧光漂白率的变化趋势与Cx43分布变化相似,即随诱导培养时间的延长,细胞平均荧光漂白率逐渐增加;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组分别为19.59%±6.08%、37.17%±3.84%、46.82%±2.69%、49.71%±5.53%,Ⅲ组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论:大鼠MSCs在体外诱导培养4周后已分化为心肌样细胞,其细胞Cx43的分布与通讯连接功能与正常心肌细胞相似。 展开更多

关键词 骨髓间质干细胞 大鼠 缝隙接合部 连接蛋白43 心肌样细胞

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人脂肪干细胞诱导分化为心肌样细胞的研究 被引量：2

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作者 宋克东 张超 +3 位作者 刘天庆 郭文华 姜丽丽 张文 《中国科技论文在线》 CAS 2010年第9期677-682,共6页

体外分离培养成人脂肪组织来源的间充质干细胞,探索其基本生物学特性及向心肌样细胞诱导分化的潜能。体外分离培养人脂肪干细胞并诱导其向脂肪、成骨和软骨细胞分化,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学特点,用油红、碱性磷酸酶、von Ko... 体外分离培养成人脂肪组织来源的间充质干细胞,探索其基本生物学特性及向心肌样细胞诱导分化的潜能。体外分离培养人脂肪干细胞并诱导其向脂肪、成骨和软骨细胞分化,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学特点,用油红、碱性磷酸酶、von Kossa和甲苯胺蓝染色鉴定其分化情况,流式细胞仪测定细胞表面抗原CD34、CD44、CD45及HLA-DR的表达,采用血管紧张素Ⅱ诱导人脂肪干细胞向心肌样细胞分化,并与5-氮胞苷诱导结果对比。结果表明:分离培养的脂肪干细胞呈"梭形"生长,核大;流式细胞仪检测阳性表达CD44,CD105,阴性表达CD34,CD45及HLA-DR;脂肪、成骨和软骨的诱导分化证明所分离培养的细胞是间充质干细胞。血管紧张素Ⅱ诱导4周后,心肌肌钙蛋白cTn-I、缝隙连接蛋白43、肌球蛋白重链MHC呈阳性表达,但未见细胞的自发性搏动。脂肪干细胞具有间充质干细胞的特征,在一定条件下能向心肌样细胞分化,是一种有潜力的治疗心肌梗死的细胞源;血管紧张素Ⅱ能诱导人脂肪干细胞向心肌样细胞分化,可以用来替代传统的诱导剂5-氮胞苷。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 心肌细胞 组织工程 细胞分化 血管紧张素Ⅱ 5-氮胞苷

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