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癌胚抗原(CEA)启动子在肿瘤细胞中的特异表达及介异bak基因诱发凋亡 被引量：4
1
作者 杨涛 祝华斌 齐义鹏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期723-730,共8页
构建由癌胚抗原 (CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)表达的重组表达质粒pCEA EGFP .用转染细胞后检测荧光的方法对CEA阳性细胞进行简便、直观的检测 ,并结合流式细胞计数对CEA启动子在人结直肠腺癌细胞LS 1 74T、结肠癌... 构建由癌胚抗原 (CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)表达的重组表达质粒pCEA EGFP .用转染细胞后检测荧光的方法对CEA阳性细胞进行简便、直观的检测 ,并结合流式细胞计数对CEA启动子在人结直肠腺癌细胞LS 1 74T、结肠癌细胞SW 4 80、肺腺癌细胞A5 49、人宫颈癌细胞HeLa和人喉癌细胞HEp 2中的活性进行了分析 ,发现其在SW4 80、LS 1 74T、A5 49中活性较强 ,而在HeLa和HEp 2中无活性 .构建由CEA启动子控制凋亡基因bak表达的重组表达质粒pCEA bak ,转染HeLa及SW 4 80细胞 ,用Hoechst332 5 8染色及PI染色 流式细胞计数分析的方法证明 ,pCEA bak转染能够特异性引起SW 4 80细胞的凋亡 .结果表明 ,CEA启动子具有很好的特异性 ,CEA介导bak基因的方法可望用于CEA阳性癌细胞的靶向性基因治疗 . 展开更多
关键词 癌胚抗原启动子 增强型绿色荧光蛋白 细胞凋亡 基因治疗 肿瘤细胞
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5HRE联合CEAp靶向调控RASSF1A基因对SGC7901胃癌细胞株抑制作用的研究 被引量：1
2
作者 周培华 孙学军 +8 位作者 郑见宝 王炜 王孝珑 陈南征 魏光兵 范渊 李孝彬 王训凯 禄韶英 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2015年第10期1201-1208,共8页
目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及West... 目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及Western blot法检测SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株中癌胚抗原(CEA)mRNA及其蛋白,以及RASSF1A蛋白的表达水平,以确定实验细胞和阴性对照细胞。2构建p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体以转染SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株,将各细胞株分为2组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较各细胞株中缺氧组和常氧组细胞的启动活性。3将重组慢病毒载体(p LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)及相应空病毒载体包装成病毒颗粒LV-5HC-RASSF1A(感染组)和LV-NC(阴性对照组),感染SGC7901细胞。以未感染任何病毒的SGC7901细胞作为空白对照组,将该3组细胞再分为2个亚组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较缺氧组和常氧组细胞中RASSF1A蛋白的表达水平和细胞增殖抑制率。结果 1 q RT-PCR结果显示:SGC7901细胞株中CEA m RNA的表达水平高于MKN28及MCF-10A细胞株(P<0.05);免疫组织化学染色结果显示:CEA的表达水平在SGC7901、MKN28及MCF-10A细胞株中依次递减,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示:在SGC7901及MKN28细胞株中未检测到RASSF1A蛋白的电泳条带,而在MCF-10A细胞株中可检测到。据此确定SGC7901细胞株为实验细胞,MKN28细胞株为阴性对照细胞。2转染p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体后,在SGC7901及MKN28细胞株中,同种细胞株内与常氧组比较,缺氧组细胞的活性倍数均升高(P<0.01);而在MCF-10A细胞株中,常氧组和缺氧组细胞的活性倍数比较差异无统计学意义(P>0.05)。在不加入CoCl2条件和加入CoCl2条件下,同等条件下与SGC7901细胞株比较,MKN28及MCF-10A细胞株的活性倍数均较低(P<0.05);与MKN28细胞株比较,MCF-10A细胞株的活性倍数� 展开更多
关键词 5拷贝低氧反应元件 癌胚抗原启动子 RAS相关区域家族1A基因 胃癌 基因治疗
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慢病毒介导5HRE-CEAp调控RASSF1A表达对胃癌细胞SGC7901抑制的研究 被引量：1
3
作者 周培华 赵玉生 +6 位作者 郑新 宋鸣 朱委 王威 王志 冯伟 孙学军 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第13期1989-1993,共5页
目的:探讨5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控抑癌基因RAS相关域家族1A(RASSF1A)的慢病毒载体(LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)对胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用。方法:采用qRT-PCR方法检测空白对照组细胞SGC7901、阴性对照组... 目的:探讨5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控抑癌基因RAS相关域家族1A(RASSF1A)的慢病毒载体(LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)对胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用。方法:采用qRT-PCR方法检测空白对照组细胞SGC7901、阴性对照组细胞SGC7901/NC及慢病毒载体感染的实验组细胞SGC7901/5HRE-CEAp-RASSF1A中RASSF1A mRNA表达水平;通过CCK-8实验检测各组细胞的生长曲线;通过流式细胞技术检测各细胞的凋亡及细胞周期。结果:qRT-PCR结果显示,与其他组比较,实验组细胞的RASSF1A mRNA水平在低氧条件下明显升高(P<0.01);CCK-8实验结果显示从第3天开始,低氧条件下实验组细胞的OD值开始低于其它各组细胞(P<0.05);流式细胞检测结果显示与其它各组细胞比较,低氧条件下实验组细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),并且其细胞周期G1期的细胞百分比明显增加(P<0.05)。结论:慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A具有在低氧诱导下显著抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的作用。 展开更多
关键词 5拷贝低氧反应元件 癌胚抗原启动子 RAS相关域家族1A基因 胃癌 基因治疗
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癌胚抗原启动子控制基因靶向表达研究
4
作者 邱源 何建行 +3 位作者 李富骊 刘启才 陈汉章 钟琰 《现代临床医学生物工程学杂志》 2006年第6期484-487,共4页
目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴... 目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴定。通过脂质体介导重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP体外分别转染A549细胞(CEA阳性)和16HBE(CEA阴性)细胞,进行绿色荧光蛋白检测分析基因表达的靶向性。结果CMVE-pCEA-IRES-EGFP分别用VSPⅠ,VSPⅠ/NheⅠ酶切后电泳分别出现大小约405bp,372bp和4110bp的片断,与预计各片断大小相符。以CMVE-pCEA-IRES-EGFP为模板PCR扩增得到CMV和CEA片段,分别连于T载体(pMD18-T)并测序,结果正确。嵌合启动子CMVE-pCEA能特异地驱动下游报告基因在CEA阳性肺癌细胞株绿色荧光表达阳性,而CEA阴性细胞株16HBE表达阴性。结论成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA驱动的CMVE-pCEA-IRES-EGFP重组质粒,并能在转染的CEA阳性细胞株中表达,为靶向启动双基因表达载体构件提供了实验依据。 展开更多
关键词 癌胚抗原启动子 肿瘤 靶向表达 巨细胞病毒增强子
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组织专一性表达自杀基因治疗人结肠癌的研究 被引量：6
5
作者 蒋琼 戈凯 +2 位作者 许德华 郑仲承 刘新垣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第4期376-378,共3页
构建了以癌胚抗原（ＣＥＡ）基因启动子控制的ＨＳＶ－ＴＫ和ＥＣＣＤ的表达质粒ＰＣＥＡ－ＴＫ和ｐＣＥＡ－ＣＤ．将它们分别与ｐＳＶ２－ｎｅｏ共转染人结肠癌细胞株ＬｏＶｏ和人宫颈癌细胞株ＨｅＬａ，Ｇ４１８筛选得到细胞克隆Ｌｏ... 构建了以癌胚抗原（ＣＥＡ）基因启动子控制的ＨＳＶ－ＴＫ和ＥＣＣＤ的表达质粒ＰＣＥＡ－ＴＫ和ｐＣＥＡ－ＣＤ．将它们分别与ｐＳＶ２－ｎｅｏ共转染人结肠癌细胞株ＬｏＶｏ和人宫颈癌细胞株ＨｅＬａ，Ｇ４１８筛选得到细胞克隆ＬｏＶｏ／ＣＥＡ－ＴＫ、ｔｏＶｏ／ＣＥＡ－ＣＤ、ＨｅＬａ／ＣＥＡ－ＴＫ和ＨｅＬａ／ＣＥＡ－ＣＤ．与野生型ＬｏＶｏ细胞相比，ＬｏＶｏ／ＣＥＡ－ＴＫ和ＬｏＶｏ／ＣＥＡ－ＣＤ形态无明显改变，生长曲线也相似，但对ＧＣＶ或５－ＦＣ的细胞毒的敏感性分别提高了２０００倍或７００信而ＨｅＬａ／ＣＥＡ－ＴＫ（或ＨｅＬａ／ＣＥＡ－ＣＤ）仍对低浓度ＧＣＶ（或５－ＦＣ）不敏感．以上结果显示了应用组织专一性表达的自杀基因治疗人结肠癌的可能性． 展开更多
关键词 结肠肿瘤 癌 自然基因 基因治疗
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