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水稻(Oryza sativa L·)捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长cDNA的克隆和特性分析 被引量:22
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作者 向太和 王利琳 庞基良 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1227-1232,共6页
根据捕光叶绿素a/b结合蛋白基因(cab)家族中的保守序列设计PCR引物,扩增出的约310bpcDNA小片段为分子杂交探针,对构建的水稻cDNA文库进行杂交筛选,并结合PCR分析确定阳性克隆中cDNA片段的大小。通过对插入的cDNA片段最长的阳性克... 根据捕光叶绿素a/b结合蛋白基因(cab)家族中的保守序列设计PCR引物,扩增出的约310bpcDNA小片段为分子杂交探针,对构建的水稻cDNA文库进行杂交筛选,并结合PCR分析确定阳性克隆中cDNA片段的大小。通过对插入的cDNA片段最长的阳性克隆进行测序分析验证,克隆了水稻中1个cab基因全长cDNA,命名为cab-n8(GenBank登记号:AY445626)。cab-n8长为1128bp,从第55bp开始至789bp含有1个开放阅读框和1个终止密码子,编码244个氨基酸(GenBank登记号为AAR19267.1);在3’端含有330bp的非编码区和Poly(A)18;在5’端有45bp的非编码区,在转录起始位点附近有TCA序列。通过序列分析,cab-n8编码的蛋白质在第54—216位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域(chlorophll a/b binding domain);在第141—158位含有无名指结构功能域(ring finger structure domain),该位点可能与捕光叶绿素结合蛋白与叶绿素a/b的结合有关;在第194—231位含有甘油醛-3-磷酸脱氢酶C端功能域(C-terminal domain of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase-like)。cab-n8编码的蛋白质预测的等电点和分子量分别为6.52和26955.80 Da。通过比较分析,cab-n8DNA序列(AY445626)和编码的氨基酸序列(AAR19267.1)与cab27DNA序列(AF094775.1)和编码的氨基酸序列(AAC67557.1)相似性最高,均为97%,显示cab家族基因在进化过程中是相当保守的。Northern blot分析表明,该基因在水稻叶和茎中表达没有差异,但光对其表达有明显的诱导促进作用。 展开更多
关键词 水稻 叶绿素a/b结合蛋白基因 基因克隆 分析
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玉米叶片cDNA文库构建及Cah墓因克隆 被引量:7
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作者 刘长征 张正钫 +2 位作者 张国珍 陈劲春 程炳嵩 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第4期447-451,共5页
从玉米叶片中提取总RNA后,再利用oligo(d7)-纤维素亲合层析往,从中分离出mRNA,然后以oligo(d7)-XbaIadaptor作为引物,mRNA作为模板,合成相应的cDNA.并定向克隆进λGEM-4载体... 从玉米叶片中提取总RNA后,再利用oligo(d7)-纤维素亲合层析往,从中分离出mRNA,然后以oligo(d7)-XbaIadaptor作为引物,mRNA作为模板,合成相应的cDNA.并定向克隆进λGEM-4载体,构建出滴度为2×105pfu的玉米叶片CDNA文库、最后,利用寡核苷酸探针,从cDNA文库中筛选到8个阳性克隆。 展开更多
关键词 玉米 叶片 CDNA文库 cab基因 克隆
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茶树叶片黄化变异相关的CAB基因家族鉴定及关键基因挖掘
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作者 钟思彤 张亚真 +6 位作者 游小妹 陈志辉 孔祥瑞 林郑和 伍慧妮 金珊 陈常颂 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期175-192,共18页
捕光叶绿素a/b结合蛋白(Light-harvesting chlorophyll a/b binding protein,CAB)基因家族成员在植物叶片黄化变异中具有重要作用。本研究利用铁观音(Camellia sinensis Tieguanyin)基因组数据对CAB基因家族进行了筛选,并进行了生物信... 捕光叶绿素a/b结合蛋白(Light-harvesting chlorophyll a/b binding protein,CAB)基因家族成员在植物叶片黄化变异中具有重要作用。本研究利用铁观音(Camellia sinensis Tieguanyin)基因组数据对CAB基因家族进行了筛选,并进行了生物信息学和表达模式分析;进一步以不同黄化、绿叶茶树品种(系)为材料,通过基因克隆和qRT-PCR,分析CABs基因的表达特性,结合叶色参数和叶绿素SPAD值的相关性分析筛选出与茶树黄化变异相关的关键CAB基因。结果表明,共鉴定到25个CAB基因家族成员,其氨基酸长度为167~337个,蛋白分子质量为18.5~37.1 kDa,大部分CAB成员属于稳定性蛋白和疏水性蛋白,并且亚细胞定位预测在叶绿体上;根据进化关系25个CAB家族成员分为13个亚家族,Lhcb1亚族的成员数量最多;启动子分析显示,CAB家族成员启动子中包含大量的光响应元件,还有其他与植物生长发育、激素和逆境胁迫响应相关的元件。从茶树中克隆Lhcb1亚家族成员,通过序列比对筛选出CAB1、CAB6和CAB7基因;表达分析显示,CAB1、CAB6和CAB7基因都具有组织表达特异性,在芽、叶和果实中表达量较高,并能响应多种逆境胁迫。qRT-PCR分析发现,CAB1、CAB6和CAB7基因在黄、绿茶树的叶片中具有一致的表达特性:与正常绿叶相比,黄化叶片中的CABs基因表达均显著下调;通过与叶色参数和叶绿素SPAD值的相关性分析,发现CAB1、CAB6和CAB7表达量与叶色参数a、b、L值以及叶绿素SPAD值均呈极显著相关(P<0.01),其中CAB1的基因表达量与叶色相关参数和叶绿素SPAD值的相关性最显著;烟草亚细胞定位结果显示,CAB1在细胞核、细胞膜和叶绿体上均有分布。以上研究初步解析了茶树CAB家族成员的基本特征,挖掘出与茶树叶色变异紧密相关CAB基因,后续可作为候选关键基因进行深入研究,以期为茶树叶色变异的分子调控机制的研究提供理论基础。 展开更多
关键词 茶树 捕光叶绿素a/b结合蛋白 叶色黄化变异 基因克隆 表达分析
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The ethanol response gene Cab45 can modulate the impairment elicited by ethanol and ultraviolet in PC12 cells
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作者 Yunfeng Zhu Quanli Wang +1 位作者 Wangru Xu Sha Li 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期153-161,共9页
High consumption of ethanolic beverages facilitates neurodegeneration, but the mechanism of this process still remained elusive. Suppression subtractive hybridization (SSH) is a technique for detection of rare trans... High consumption of ethanolic beverages facilitates neurodegeneration, but the mechanism of this process still remained elusive. Suppression subtractive hybridization (SSH) is a technique for detection of rare transcripts. With SSH approach, we identified one ethanol response gene Cab45, which was down-regulated by ethanol with time-dependent manner in B104 cells. The full-length sequence of Cab45 gene was obtained by 5'-RACE (5'Rapid Amplification of cDNA Ends) for the first time in rat. Based on the sequence of deduced amino acid of rat Cab45, the alignment was conducted with its counterparts in different species and displayed a high conservation. Using different tissues in rat and cell lines, Cab45 was characterized by a ubiquitous expression and differentiation dependent down-regulation. Given that ethanol facilitates some cell differentiation, we hypothesize that Cab45 is involved in ethanol-mediated differentiation. With transient transfection, the function of Cab45 was investigated by up-regulation and down-regulation in PC12 cells. Ethanol treatment and UV exposure were conducted subsequently and cell proliferations were detected by MTT (Methyl Thiazolyl Tetrazolium) approach. It revealed that the up-regulation of Cab45 modulated the impairment elicited by ethanol and UV in transfected cells. As a member of new calcium binding protein family, the exact role of Cab45 still remains unclear. 展开更多
关键词 ETHANOL cab45 calcium-binding protein gene identification subtractive hybridization
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Expression Profiles of <i>psbA, ALS, EPSPS</i>, and Other Chloroplastic Genes in Response to PSII-, ALS-, and EPSPS-Inhibitor Treatments in <i>Kochia scoparia</i>
5
作者 Vijay K. Varanasi Shahniyar Bayramov +1 位作者 P. V. Vara Prasad Mithila Jugulam 《American Journal of Plant Sciences》 2017年第3期451-470,共20页
Kochia (Kochia scoparia L. Schrad.), also known as tumbleweed, is an economically important annual C4 broadleaf weed found throughout the US Great Plains. Several herbicides with different modes of action are used in ... Kochia (Kochia scoparia L. Schrad.), also known as tumbleweed, is an economically important annual C4 broadleaf weed found throughout the US Great Plains. Several herbicides with different modes of action are used in the management of kochia. The effect of commonly used herbicides on the expression of their target site(s) and photosynthetic/chloroplastic genes is poorly understood in weed species, including kochia. The objective of this research was to characterize the expression profiles of herbicide target-site genes, KspsbA, KsALS, and KsEPSPS upon treatment with PSII- (e.g. atrazine), ALS- (e.g. chlorsulfuron), and EPSPS- (e.g. glyphosate)-inhibitors, respectively, in kochia. Furthermore, the expression of genes involved in photosynthesis (e.g. KsRubisco, KsCAB, and KsPPDK) was also determined in response to these herbicide treatments. KspsbA was strongly upregulated (>200-fold) 24 h after atrazine treatment. Transcript levels of the KsALS or KsEPSPS genes were 7 and 3-fold higher 24 h after chlorsulfuron or glyphosate treatment, respectively. KsRubisco, a Calvin cycle gene important for CO2 fixation, was upregulated 7 and 2.6-fold 8 and 24 h after glyphosate and chlorsulfuron treatments, whereas it downregulated 8 and 24 h after atrazine treatment. The transcript levels of KsPPDK remained unchanged after glyphosate treatment but increased 1.8-fold and decreased 2-fold at 24 h after chlorsulfuron and atrazine treatments, respectively. KsCAB remained unchanged after chlorsulfuron treatment, but was downregulated after glyphosate and atrazine treatments. The results show that herbicide treatments not only affect the respective target-site gene expression, but also influence the genes involved in the critical photosynthetic pathway. 展开更多
关键词 Kochia scoparia L. Schrad. C4 Herbicide Stress gene Expression PSBA ALS EPSPS Photosynthesis Rubisco PPDK cab
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竹子捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长的克隆和序列分析 被引量:14
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作者 高志民 李雪平 +1 位作者 彭镇华 岳永德 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期34-38,共5页
采用RT-PCR技术与RACE技术,从绿竹中克隆到捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长eDNA,命名为cab-BO1(GenBank登记号:EF061137)。该基因长1102bp,从第64—861bp含有1个开放阅读框,编码265个氨基酸。cab-BO1编码的氨基酸中第64-232位包... 采用RT-PCR技术与RACE技术,从绿竹中克隆到捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长eDNA,命名为cab-BO1(GenBank登记号:EF061137)。该基因长1102bp,从第64—861bp含有1个开放阅读框,编码265个氨基酸。cab-BO1编码的氨基酸中第64-232位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域,第9—11位为蛋白激酶c的磷酸化位点,第27~52位为泛素结构功能域信号,第55~58位为酪氨酸激酶(CK2)磷酸化位点O序列相似性分析结果表明:cab-BO1 DNA序列和编码的氨基酸序列与玉米、小果野蕉、小麦、水稻等的cab基因及其氨基酸序列的相似性分别在85%和89%以上,显示了cab家族基因在进化过程中的保守性。 展开更多
关键词 绿竹 叶绿素a/b结合蛋白基因(cab) 基因克隆 序列分析
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绿竹cab-BO2基因的克隆及其表达载体的构建 被引量:7
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作者 高志民 李雪平 +1 位作者 岳永德 彭镇华 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第3期431-435,共5页
捕光叶绿素a/b结合蛋白基因是绿色植物光合系统中的重要基因,其编码的蛋白与色素所形成的蛋白复合体在光化学反应、光保护等方面都起着重要的作用。采用RT-PCR技术和与RACE-PCR技术,从绿竹中克隆到捕光叶绿素a/b结合蛋白基因的全长cDNA... 捕光叶绿素a/b结合蛋白基因是绿色植物光合系统中的重要基因,其编码的蛋白与色素所形成的蛋白复合体在光化学反应、光保护等方面都起着重要的作用。采用RT-PCR技术和与RACE-PCR技术,从绿竹中克隆到捕光叶绿素a/b结合蛋白基因的全长cDNA编码区,命名为cab-BO2(GenBank登记号:EF088668)。该基因编码区长为792bp,编码263个氨基酸。通过加酶切位点的方法,将基因的编码区直接构建到载体pBI121多克隆位点。经过酶切检测,获得了包含35S启动子、cab基因、GUS报告基因和NOS终止区域的植物表达载体。 展开更多
关键词 绿竹(Dendrocalamopsis oldhami) 捕光叶绿素a/b结合蛋白基因 cab-BO2基因 植物表达载体
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叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab基因转录研究 被引量:7
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作者 张年辉 杜林方 +2 位作者 赵云 林宏辉 梁厚果 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第3期484-487,共4页
与野生型油菜相比 ,叶绿素缺乏油菜突变体 Cr35 2 9L HC 多肽组成并未发生改变 ,但其含量却都明显降低 .RNA印迹及点杂交结果都显示出 Cr35 2 9cab基因的转录增加 .这些结果表明 :该叶绿素缺乏突变体仅影响L HC 多肽的蛋白含量 ;并未影... 与野生型油菜相比 ,叶绿素缺乏油菜突变体 Cr35 2 9L HC 多肽组成并未发生改变 ,但其含量却都明显降低 .RNA印迹及点杂交结果都显示出 Cr35 2 9cab基因的转录增加 .这些结果表明 :该叶绿素缺乏突变体仅影响L HC 多肽的蛋白含量 ;并未影响其组成 ;突变体 L HC 蛋白量的减少并非 cab基因转录降低所致 .可见转录水平的调节仅对 L HC 在类囊体膜上的积累起有限作用 ; 展开更多
关键词 叶绿素缺乏突变体 油菜 捕光色素蛋白复合物 cab基因表达 质体信号
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鱼类干扰素系统基因的克隆鉴定及其特征分析(英文) 被引量:7
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作者 张义兵 桂建芳 《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 2004年第3期418-426,共9页
干扰素 (IFN)系统是脊椎动物抵抗病毒入侵的第一道防御系统 .除了哺乳类 ,有关低等脊椎动物的IFN系统基因知之甚少 .在鱼类 ,近 40年来能证明IFN系统存在的证据主要有两个 :一是检测经病毒诱导后的多种鱼类机体和细胞 ,证明能产生类似... 干扰素 (IFN)系统是脊椎动物抵抗病毒入侵的第一道防御系统 .除了哺乳类 ,有关低等脊椎动物的IFN系统基因知之甚少 .在鱼类 ,近 40年来能证明IFN系统存在的证据主要有两个 :一是检测经病毒诱导后的多种鱼类机体和细胞 ,证明能产生类似哺乳类IFN的抗病毒活性物质 ;二是近年来 ,已经证明在少数几种鱼类中存在与哺乳类IFN系统基因Mx同源的基因 .以前的研究结果表明 ,紫外线灭活的草鱼出血病病毒 (GCHV)能够诱导鲤科鱼类培养细胞 ,如鲫鱼囊胚细胞 (CAB)产生类IFN活性物质 ,并建立宿主细胞的抗病毒状态 .为了揭示鱼类培养细胞抗病毒免疫的分子机制 ,首先建立了一个研究鱼类抗病毒免疫相关基因的细胞模型系统 ,通过用灭活GCHV诱导CABIFN并进行理化、生物学特性鉴定的基础上 ,成功建立了一个囊括鱼类细胞抗病毒基因在内的差减cDNA文库 .其次 ,筛选文库揭示了一批与哺乳类IFN系统基因同源以及找不到同源性的EST ,表达分析证实它们也是IFN刺激基因 .再次 ,根据哺乳类IFN系统研究的最新进展 ,从该细胞模型系统中克隆、鉴定了 1 9个IFN系统基因的全长cDNA序列 ,包括鲫鱼IFN基因 ,IFN信号传导通路基因STAT1 ,IFN诱导表达调控基因IRF7,IFN行使抗病毒作用的效应基因Mx1、Mx2、PKR、Viperin、IFI5 6。 展开更多
关键词 鲫鱼囊胚培养细胞 IFN系统 抗病毒免疫相关基因 基因克隆 抗病毒机制
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祝氏麻鸡(Gallus gallus)终端父本CAB39L基因克隆和生物信息学及组织表达分析
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作者 柴睿堂 祝春三 +2 位作者 李和鸣 黄永欢 杨秀荣 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期393-399,共7页
为了探究钙结合蛋白样39(calcium binding protein 39 like,CAB39L)的蛋白结构及其基因的组织表达规律,本研究以祝氏麻鸡(Gallus gallus)终端父本为试验材料,克隆CAB39L基因并进行生物信息学分析和组织表达分析。通过克隆获得CAB39L基因... 为了探究钙结合蛋白样39(calcium binding protein 39 like,CAB39L)的蛋白结构及其基因的组织表达规律,本研究以祝氏麻鸡(Gallus gallus)终端父本为试验材料,克隆CAB39L基因并进行生物信息学分析和组织表达分析。通过克隆获得CAB39L基因的CDS(conding sequence)全长序列,应用实时定量PCR检测CAB39L基因在祝氏麻鸡终端父本各组织中的表达水平。结果表明:祝氏麻鸡终端父本CAB39L基因的编码区长度为1005 bp,共编码334个氨基酸;与参考序列(索引号:NM_001006272)进行序列比对,存在两处同义突变(c.852G>T,c.874T>C)。物种间同源性分析显示,祝氏麻鸡终端父本CAB39L基因与原鸡(Gallus gallus)、雉鸡(Phasianus colchicus)、中国家鹅(Anser cygnoiders domesticus)、鸽(Columba livia)、人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes)、家鼠(Mus musculus)、猴子(Macaca mulatta)、斑马鱼(Danio rerio)CAB39L基因的相似性分别为99.8%、97.5%、93.7%、92.6%、83.6%、83.6%、83.5%、82.5%、75.4%;系统进化树分析显示,祝氏麻鸡终端父本与原鸡的亲缘关系最近,其次是与雉鸡的亲缘关系比较近,与斑马鱼的亲缘关系最远,这表明CAB39L基因在禽类和非禽类之间有明显的遗传距离。CAB39L蛋白的等电点为7.69,为碱性蛋白;亲疏水性分析显示该多肽链氨基酸序列的平均亲疏水性为-0.320,为亲水蛋白;蛋白功能结构域预测结果显示该蛋白只含有Mo25结构域,且不属于跨膜蛋白和分泌蛋白。实时定量PCR结果显示,CAB39L基因在睾丸中的表达量最高,这表明CAB39L基因可能与公鸡睾丸组织的生长发育或功能有关,进而影响公鸡的生长情况。本研究结果为进一步研究鸡CAB39L基因的生物功能奠定了理论基础。 展开更多
关键词 祝氏麻鸡 cab39L基因 克隆 生物信息学 组织表达分析
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绿竹光系统Ⅰ捕光叶绿素a/b结合蛋白基因的cDNA全长克隆及分析 被引量:6
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作者 李雪平 彭镇华 +1 位作者 高志民 牟少华 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期643-648,共6页
为了从分子水平研究竹子光合作用的机理,采用RT-PCR及RACE方法从绿竹中分离了cab家族的一个基因,命名为BoLhca4-1(GenBank注册号为EF690303)。BoLhca4-1的cDNA序列全长931 bp,含有一个735 bp的开放阅读框,编码了一个244 aa的蛋白,分子... 为了从分子水平研究竹子光合作用的机理,采用RT-PCR及RACE方法从绿竹中分离了cab家族的一个基因,命名为BoLhca4-1(GenBank注册号为EF690303)。BoLhca4-1的cDNA序列全长931 bp,含有一个735 bp的开放阅读框,编码了一个244 aa的蛋白,分子量大小约为26.8 ku。序列分析结果表明,BoLhca4-1是光系统Ⅰ的一个捕光叶绿素复合蛋白基因,编码肽链与禾本科植物水稻的cab蛋白有着很高的同源性,达到86.1%。系统进化树分析表明,BoLhca4-1编码蛋白与水稻的cab蛋白亲缘关系较近。另外,对绿竹不同组织中BoLhca4-1基因的表达进行RT-PCR检测发现,其在叶片中的表达量较鞘和茎中要高。 展开更多
关键词 绿竹 光系统Ⅰ 捕光叶绿素a/b结合蛋白 基因克隆 表达分析
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转玉米PEPC基因水稻的创建及其农艺性状分析
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作者 王振 魏珂 +3 位作者 周豫 辛世文 刘巧泉 李钱峰 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2021年第3期90-96,共7页
将水稻Cab基因启动子与来自玉米的PEPC基因融合后通过农杆菌介导的转化法转入粳稻品种武香粳9号中,经分子鉴定和表达分析明确PEPC基因成功转入水稻并获表达。对pCab::PEPC转基因水稻的产量和品质性状进行了系统分析,发现其具有较好的增... 将水稻Cab基因启动子与来自玉米的PEPC基因融合后通过农杆菌介导的转化法转入粳稻品种武香粳9号中,经分子鉴定和表达分析明确PEPC基因成功转入水稻并获表达。对pCab::PEPC转基因水稻的产量和品质性状进行了系统分析,发现其具有较好的增产潜力,且对稻米品质有一定的改良作用。此外,pCab::PEPC转基因水稻在苗期和种子萌发阶段均表现出良好的非生物胁迫抗性。综上所述,通过选择合适的启动子驱动PEPC基因在水稻中特异性表达,可显著增强水稻产量、品质和抗逆性,具有良好的育种应用前景。 展开更多
关键词 水稻 PEPC基因 cab启动子 产量 稻米品质 非生物胁迫 种子萌发
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毛竹cab-PhE11基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 刘颖丽 高志民 彭镇华 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期19-23,共5页
采用RT-PCR技术和RACE-PCR技术,从毛竹(Phyllostachys edulis)中分离了捕光叶绿素a/b结合蛋白基因cDNA编码区全长,命名为cab-PhE11(GenBank登记号:EU327783)。该基因全长1154 bp,编码区cDNA全长753 bp,编码250个氨基酸。生物信息学分析... 采用RT-PCR技术和RACE-PCR技术,从毛竹(Phyllostachys edulis)中分离了捕光叶绿素a/b结合蛋白基因cDNA编码区全长,命名为cab-PhE11(GenBank登记号:EU327783)。该基因全长1154 bp,编码区cDNA全长753 bp,编码250个氨基酸。生物信息学分析表明,在cab-PhE11编码的蛋白第62~239位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域,还包含1个N-糖基化位点、1个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点、5个N-肉豆蔻酸化位点以及1个丙氨酸富集区。序列相似性分析结果表明,cab-PhE11编码的氨基酸序列与玉米、绿豆、拟南芥、烟草等的cab基因有较高的相似性,都在80%以上,该基因属于lhcb6类基因。 展开更多
关键词 毛竹 捕光叶绿素a/b结合蛋白基因 序列分析
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