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题名东亚钳蝎钙通道样毒素的克隆与其在大肠杆菌中的表达
被引量：2
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作者
覃媛
顾少菊
孔天翰
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机构
广州医学院蛇毒研究所
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出处
《广州医学院学报》
2006年第1期5-8,共4页
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基金
广东省科技攻关课题(2003A3080302)
广东省科技厅课题(粤科基办(2005)04号-5002714)
广州医学院课题(04-K-49)
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文摘
目的:克隆东亚钳蝎钙通道样毒素(BmCa)基因,并构建原核表达质粒,在大肠杆菌中重组表达该毒素蛋白。方法:以东亚钳蝎尾毒腺的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增并克隆BmCa的cDNA基因,并将该基因重组到PET-GST表达载体中,转化入大肠杆菌BL21并诱导表达,采用N i-SuperChelating Resin柱亲和层析纯化,用小白鼠毒性实验检测融合蛋白的活性。结果:成功克隆BmCa基因并构建原核表达质粒,IPTG诱导后表达分子质量约为33KD的融合蛋白,含量为大肠杆菌总蛋白的25%,经亲和层析得较高纯度的融合蛋白,小白鼠毒性实验表明融合蛋白具有活性。结论:在大肠杆菌中成功表达了有活性的东亚钳蝎钙通道样毒素蛋白,为其功能研究奠定基础。
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关键词
东亚钳蝎
钙通道毒素
融合表达
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Keywords
Buthus martensii Karsch
^ ca^2＋. channel toxin
fused expression
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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