抑制ATM表达致鼻咽癌细胞CNE1辐射增敏的细胞周期阻滞研究 被引量：10

1

作者 王宏梅 陈龙华 +2 位作者 郑小康 伍新尧 夏云飞 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期466-470,共5页

背景与目的:细胞周期调控是决定细胞辐射敏感性的决定性因素之一。共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant,ATM)功能与细胞DNA损伤修复、细胞周期检查点调控密切相关。我们前期研究通过反义RNA抑制ATM基因表达可... 背景与目的:细胞周期调控是决定细胞辐射敏感性的决定性因素之一。共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant,ATM)功能与细胞DNA损伤修复、细胞周期检查点调控密切相关。我们前期研究通过反义RNA抑制ATM基因表达可增加鼻咽癌细胞系CNE1辐射敏感性,本研究拟探讨其辐射增敏的细胞周期阻滞调控机制。方法:ATM反义组细胞CNE1/pDOR-atm及对照组细胞CNE1/pDOR经2Gy、5GyX线照射后不同时间点(1h、4h、8h、24h、48h)收获,应用流式细胞仪(flowcytometer,FCM)检测各细胞周期百分比及凋亡率。结果:两组细胞X线照射后均未出现明显G1期阻滞和细胞凋亡,但分别在照射后1h、4h、8h出现明显S期阻滞,24h、48h出现明显G2期阻滞,其中反义组S期细胞百分率总均数水平低于对照组(P<0.05),而G2/M期细胞百分率总均数水平高于对照组(P<0.05)。结论:反义RNA抑制ATM表达致CNE1辐射增敏的细胞周期调控机制可能与减少S期细胞比例,增加G2/M期细胞比例有关,与G1期阻滞和细胞凋亡的调控无关。 展开更多

关键词 ATM基因 cnel细胞 细胞周期 调控 鼻咽肿瘤

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抑制ATM/PI3K功能区表达对鼻咽癌细胞CNE1辐射增敏的研究 被引量：9

2

作者 王宏梅 陈龙华 +3 位作者 郑小康 李启生 伍新尧 夏云飞 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1097-1101,共5页

背景与目的:共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasiamutant,ATM)与细胞辐射敏感性密切相关,已有报道,ATM蛋白(ATM基因编码产物)表达抑制可引起多种恶性肿瘤细胞辐射敏感性的改变。本研究观察ATM/PI3K区反义RNA对鼻咽癌... 背景与目的:共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasiamutant,ATM)与细胞辐射敏感性密切相关,已有报道,ATM蛋白(ATM基因编码产物)表达抑制可引起多种恶性肿瘤细胞辐射敏感性的改变。本研究观察ATM/PI3K区反义RNA对鼻咽癌细胞系CNE1ATM蛋白的抑制作用及辐射增敏作用。方法:构建含反义ATM/PI3K区序列逆转录病毒重组体pDOR-atm,经阳离子脂质体转染入CNE1细胞,并命名为CNE1/pDOR-atm。应用半定量RT-PCR法分析反义组和对照组细胞中ATMmRNA的水平,应用流式细胞仪检测表达ATM蛋白的阳性细胞百分率及平均荧光强度,应用集落形成实验及线性二次模型(linear-quadraticmodel,L-Q模型)检测细胞辐射敏感性的变化。结果:在反义组细胞CNE1/pDOR-atm中ATMmRNA指数(mRNAindex,RI)平均为0.23±0.02,在对照组细胞CNE1/pDOR中RI平均为0.51±0.03(P<0.05)。在反义组中ATM蛋白阳性细胞百分率平均为70.8%,ATM蛋白平均荧光强度为1.81±0.12;而对照组中分别为99.3%,4.51±0.18(P<0.01),提示反义组细胞中ATMmRNA水平及蛋白表达抑制。反义组细胞α值为0.40Gy-1,对照组为0.36Gy-1,2Gy辐射增敏比达3.0,提示反义组细胞辐射敏感性增加。结论:抑制CNE1细胞的ATM/PI3K区表达可以达到有效的辐射增敏目的。 展开更多

关键词 ATM基因 P13K 鼻咽肿瘤 cne1细胞 辐射敏 感性

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苦参碱改构体X调控Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9蛋白表达诱导人鼻咽癌CNE1凋亡的研究 被引量：9

3

作者 陈俊 唐安洲 +3 位作者 梁钢 王立升 谢貌 张俊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1136-1140,共5页

目的研究苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的机制。方法用不同剂量改构体X处理CNE1细胞48h,透射电镜观察CNE1细胞超微结构变化;Westernblot检测改构体X对CNE1细胞内Caspase-3,-8,-9蛋白表达的影响。结果苦参碱改构体X作用CNE1... 目的研究苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的机制。方法用不同剂量改构体X处理CNE1细胞48h,透射电镜观察CNE1细胞超微结构变化;Westernblot检测改构体X对CNE1细胞内Caspase-3,-8,-9蛋白表达的影响。结果苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,细胞出现皱缩,核内异染色质明显增多,核周隙增大,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态,高剂量组较低剂量组细胞凋亡程度更加明显;Western blot检测显示,与阴性对照组相比,除低剂量改构体X对Caspase-8无上调作用外,其他剂量组可上调凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9的表达(P<0.01),且具有剂量依赖性。结论苦参碱改构体X可通过上调促凋亡蛋白Caspase-3,-8,-9的表达诱导CNE1细胞凋亡。 展开更多

关键词 苦参碱改构体X 鼻咽癌 cne1细胞 凋亡 调控 免疫印迹 Caspase-3、-8、-9

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高丽槐素对鼻咽癌CNE1细胞增殖、迁移、凋亡的影响及机制 被引量：8

4

作者 苏雯清 杨晓男 +5 位作者 何文栋 韦坤华 王硕 龚小妹 奎玲 缪剑华 《广西医科大学学报》 CAS 2021年第2期258-264,共7页

目的:探讨高丽槐素对鼻咽癌(NPC)细胞CNE1增殖、单克隆、迁移和凋亡的影响及潜在的作用靶点。方法:将培养的CNE1细胞随机分为空白对照组和高丽槐素给药组。采用CCK8法检测不同浓度的高丽槐素作用24 h、48 h、72 h后的增殖抑制率,单克隆... 目的:探讨高丽槐素对鼻咽癌(NPC)细胞CNE1增殖、单克隆、迁移和凋亡的影响及潜在的作用靶点。方法:将培养的CNE1细胞随机分为空白对照组和高丽槐素给药组。采用CCK8法检测不同浓度的高丽槐素作用24 h、48 h、72 h后的增殖抑制率,单克隆试验检测各组细胞的克隆形成能力,细胞划痕试验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术试验检测细胞的凋亡情况,利用高通量测序技术,分析CNE1细胞转录组的变化,得到差异表达基因,筛选潜在基因靶点,采用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行验证。结果:CCK8结果显示,高丽槐素能显著抑制CNE1细胞的增殖,且具有时间和浓度依赖性(P<0.05);与对照组比较,高丽槐素能抑制CNE1细胞的克隆能力和迁移能力(P<0.05),且CNE1细胞克隆形成能力与迁移能力随着高丽槐素浓度的增加而减弱;Annexin V-FITC/PI染色结果显示,高丽槐素可使CNE1细胞凋亡率升高(P<0.05);高通量测序结果显示,共有4 232个差异表达基因,表达程度显著升高的基因数有1 060个,表达程度显著降低的基因数有3 172个,高丽槐素可使抑癌基因(P53)、细胞周期依赖激酶抑制剂(P21)、成纤维细胞生长因子(Fgf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(Pi3k)、丝裂原活化蛋白激酶8(Mapk8)等基因下调(P<0.05);RT-qPCR显示高丽槐素能下调P53、P21、Fgf2、Pi3k、Mapk8 mRNA表达水平(P<0.05),检测结果显示与测序结果相一致。结论:高丽槐素可抑制CNE1细胞的增殖、克隆与迁移能力并促进细胞凋亡,其作用机制可能与P53、P21、Fgf2、pi3k、Mapk8等多组基因的转录变化有关。 展开更多

关键词 高丽槐素 鼻咽癌 cne1细胞 高通量测序

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苦参碱改构体X对人鼻咽癌CNE1细胞的凋亡诱导作用 被引量：5

5

作者 陈俊 唐安洲 +4 位作者 谢貌 王立升 张俊 孙恺 廖婷 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第17期266-270,共5页

目的:探讨苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的作用与机制。方法:用0,29,58,116,232,464μmol.L-1不同剂量改构体X处理对数生长期CNE1细胞48 h,采用MTT法检测苦参碱改构体X对CNE1细胞增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测改构体X... 目的:探讨苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的作用与机制。方法:用0,29,58,116,232,464μmol.L-1不同剂量改构体X处理对数生长期CNE1细胞48 h,采用MTT法检测苦参碱改构体X对CNE1细胞增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测改构体X对CNE1凋亡率和细胞周期的影响,Western blot法检测改构体X对CNE1细胞内Bcl-2、Bax及p53等凋亡过程中相关蛋白表达的影响。结果:苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,MTT结果显示,改构体X对CNE1细胞增殖有抑制作用并具有浓度依赖性;流式细胞仪分析结果显示,改构体X 58,116μmol.L-1浓度组细胞凋亡率高出苦参碱组70.02%,75.73%,高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01);细胞周期测定结果显示改构体X各剂量组均可不同程度地将CNE1细胞周期抑制在G1期,与阴性对照组相比具差异显著性(P<0.05,P<0.01);Western blot检测表明,苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,凋亡相关蛋白Bcl-2降低,Bax,p53增加,与阴性对照组相比有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:苦参碱改构体X在体外可诱导CNE1细胞凋亡,其促凋亡机制可能与阻滞细胞周期、增加促凋亡蛋白Bax和p53表达并降低抑制凋亡蛋白Bcl-2表达有关。 展开更多

关键词 苦参碱改构体X 鼻咽癌 cne1细胞 凋亡 MTT 流式细胞仪 免疫印迹

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NP9对鼻咽癌细胞系CNE1基因表达谱的影响 被引量：3

6

作者 刘启才 李晓艳 +2 位作者 彭燕 李晓岩 李冰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期982-985,共4页

目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差... 目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差异。结果:所分析的14500个基因中,266个检测出有表达差异,其中82个基因呈现表达上调(RA>1),184个基因显示表达下调(RA<1)。显著上调和下调的基因分别为34个(RA>1.5)和75个(RA<1.5)。结论:NP9基因的表达导致了CNE1细胞中与细胞周期调控、细胞增殖和分化、细胞信号转导、细胞黏附相关基因表达的改变,为NP9的功能及分子机制研究提供了新的线索。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 基因 NP9 基因表达 cne1细胞

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紫草素对鼻咽癌CNE1细胞免疫逃逸的影响 被引量：3

7

作者 王祥香 吴李仲 吴祥基 《广州中医药大学学报》 CAS 2022年第12期2897-2903,共7页

【目的】探讨紫草素对鼻咽癌细胞的治疗作用及机制。【方法】(1)体外研究:将人鼻咽癌CNE1细胞分为阴性对照组,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组。采用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测CNE1细胞活性,Hoechst法检测CNE1细胞凋... 【目的】探讨紫草素对鼻咽癌细胞的治疗作用及机制。【方法】(1)体外研究:将人鼻咽癌CNE1细胞分为阴性对照组,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组。采用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测CNE1细胞活性,Hoechst法检测CNE1细胞凋亡情况,Western Blot法检测CNE1细胞叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)蛋白表达。(2)体内研究:将48只裸鼠分为正常组,模型组,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组,每组8只。除正常组外,其余各组裸鼠建立鼻咽癌模型。紫草素低、中、高剂量组分别给予1.0、2.0、3.0 mg/kg紫草素灌胃,紫杉醇组腹腔注射2.0 mg/kg的紫杉醇。测量瘤体质量,计算抑瘤率,提取巨噬细胞采用流式细胞仪检测程序性死亡受体1配体(PD-L1)表达,Western Blot法检测Foxp3、RORγt蛋白表达。【结果】与阴性对照组比较,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组的细胞活性均降低,细胞凋亡率增加(均P<0.05),并存在紫草素浓度依赖性,且Foxp3蛋白表达水平升高、RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组裸鼠巨噬细胞中PD-L1、肿瘤组织RORγt蛋白表达水平升高,肿瘤组织Foxp3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组肿瘤质量减小,PD-L1、RORγt蛋白表达水平降低,Foxp3蛋白表达水平升高(均P<0.05);紫草素高剂量组各指标与紫杉醇组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】紫草素可以抑制鼻咽癌细胞增殖,抑制瘤体生长,其机制可能与降低肿瘤微环境巨噬细胞的PD-L1活性,激活Foxp3并抑制RORγt表达,进而减少肿瘤细胞免疫逃逸有关。 展开更多

关键词 紫草素 鼻咽癌 程序性死亡受体1配体 叉头样转录因子3 转录因子维A酸相关孤独受体γt cne1细胞 祼鼠

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高剂量X射线对人鼻咽鳞癌CNE1细胞株HIF-1α表达影响的研究 被引量：3

8

作者 郭瑞娟 王若雨 +1 位作者 杜伟一 刘勇 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2011年第18期1436-1439,共4页

目的:探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况。方法:体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6MV X射线照射,照射方法为2Gy/次,隔日1次,共25次,累积剂量50Gy,收集照射前... 目的:探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况。方法:体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6MV X射线照射,照射方法为2Gy/次,隔日1次,共25次,累积剂量50Gy,收集照射前后细胞采用免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测高剂量X线照射前后CNE1细胞株中HIF-1α基因及其蛋白的表达。结果:照射前后HIF-1α基因的表达的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04,t=-5.422,P=0.006;其蛋白的表达的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01,t=-3.674,P=0.021;X线照射50Gy后HIF-1α在CNE1细胞中的表达比照前明显增高,P<0.05;共聚焦显微镜观察到X线照射50Gy后的CNE1细胞中绿色荧光强度高于照射前。结论:X射线照射可以引起HIF-1α在CNE1细胞中表达升高。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 cne1细胞 X射线照射 低氧诱导因子-1Α

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干扰长链编码RNA FOXCUT能抑制鼻咽癌细胞上皮间质转化及诱导线粒体损伤 被引量：2

9

作者 高莉莉 张雄 +2 位作者 窦思雨 岳小丁 杨捷玲 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1334-1341,共8页

目的探讨干扰长链编码RNAFOXCUT对鼻咽癌细胞上皮间质转化及线粒体功能的影响。方法RT-PCR检测50例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织和NP69、CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞株中FOXCUT表达水平;将shRNA FOXCUT转染至CNE1细胞,随机分组为C... 目的探讨干扰长链编码RNAFOXCUT对鼻咽癌细胞上皮间质转化及线粒体功能的影响。方法RT-PCR检测50例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织和NP69、CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞株中FOXCUT表达水平;将shRNA FOXCUT转染至CNE1细胞,随机分组为Control组、shRNA-NC组和FOXCUT-shRNA3组。采用CCK8法和克隆形成实验检测细胞增殖;显微镜观察细胞形态;免疫荧光检测Vimentin+含量;试剂盒检测氧化应激标记物SOD、MDA、LDH的水平;流式检测线粒体膜电位的变化;Western blot法检测E-cad、N-cad、Vimentin、Bax、Bcl-2、caspase-3和c-Myc蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中FOXCUT表达水平均升高(P<0.001)。与NP69细胞相比,CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞FOXCUT表达水平均升高(P<0.001)。与Control组相比较,FOXCUT-shRNA3组细胞增殖倍数及克隆形成率降低(P<0.001),细胞形态呈短梭形、扁平型或圆形,细胞间的连接较为紧密,具有铺路石样特征;N-cad、Vimentin的表达水平降低,E-cad的表达水平升高(P<0.05),Vimentin+含量降低(P<0.001),MDA、LDH的含量明显升高(P<0.05),SOD的活性明显降低(P<0.05),红色荧光细胞向绿色荧光细胞转变较明显,绿色荧光细胞百分比增加,Bax/Bcl2、Cleaved cas3/cas3表达显著上升,c-Myc表达显著降低(P<0.001)。结论干扰长链非编码RNAFOXCUT能够抑制鼻咽癌细胞增殖,减少上皮间质转化,增强氧化应激、降低膜电位,诱导CNE1细胞线粒体功能损伤,促进凋亡;干扰长链非编码RNAFOXCUT对CNE1细胞抑制效果显著,具有靶向治疗鼻咽癌的潜力。 展开更多

关键词 鼻咽癌 cne1细胞 长链非编码RNAFOXCUT 上皮间质转化 氧化应激 线粒体损伤

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EB病毒潜伏膜蛋白1通过蛋白激酶C调节AnnexinⅠ的丝氨酸磷酸化 被引量：1

10

作者 晏光荣 罗威 +1 位作者 罗湘建 曹亚 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期679-682,共4页

背景与目的:在利用磷酸化蛋白质富集结合蛋白质组学技术分析EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)调节的磷酸化蛋白质分子时,我们发现了包括AnnexinⅠ在内的25个新的受EB病毒LMP1调节的磷酸化蛋白质分子。本实验探讨LMP1调... 背景与目的:在利用磷酸化蛋白质富集结合蛋白质组学技术分析EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)调节的磷酸化蛋白质分子时,我们发现了包括AnnexinⅠ在内的25个新的受EB病毒LMP1调节的磷酸化蛋白质分子。本实验探讨LMP1调节AnnexinⅠ磷酸化的信号通路。方法:采用鼻咽癌细胞系CNE1和LMP1稳定表达的细胞系CNE1-LMP1,Western blot检测AnnexinⅠ的蛋白表达水平;免疫沉淀结合Western blot检测AnnexinⅠ的丝氨酸和酪氨酸磷酸化;激酶分析实验检测蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的活性。结果:LMP1对AnnexinⅠ的蛋白表达水平没有影响,LMP1上调AnnexinⅠ的丝氨酸磷酸化水平,而对酪氨酸磷酸化水平没有影响。在CNE1细胞中PKC的相对活性为0.97±0.05,CNE1-LMP1细胞中的PKC相对活性为1.22±0.10,CNE1与CNE1-LMP1细胞之间PKC的活性差异有统计学意义(P<0.01,n=6),表明LMP1可以上调PKC活性。AnnexinⅠ的丝氨酸磷酸化水平随PKC活性的变化而变化。结论:EB病毒LMP1通过PKC信号通路调节AnnexinⅠ丝氨酸磷酸化。 展开更多

关键词 EB病毒 鼻咽癌细胞系cne1 潜伏膜蛋白1 蛋白激酶C 信号通路 磷酸化 ANNEXIN Ⅰ

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X线诱导人鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞株MDR-1及P-gP的表达研究 被引量：1

11

作者 皇婷 宋学薇 +2 位作者 安书芬 王志斌 廖和和 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2018年第6期321-324,共4页

目的 检测X线照射前后鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞株中多药耐药基因（MDR）-1及P-糖蛋白（P-gp）的表达情况.方法 对CNE1细胞进行X线照射,在X线照射后、CNE1细胞培养24h后进行检测,半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测X线照射前后CNE1... 目的 检测X线照射前后鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞株中多药耐药基因（MDR）-1及P-糖蛋白（P-gp）的表达情况.方法 对CNE1细胞进行X线照射,在X线照射后、CNE1细胞培养24h后进行检测,半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测X线照射前后CNE1细胞中MDR-1 mRNA的表达;Western blotting检测X线照射前后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达;共聚焦显微镜观察照射前后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达情况.结果 RT-PCR检测结果显示,X线照射前后CNE1细胞中MDR-1mRNA的吸光度（A）值分别为0.17 ±0.01和0.34±0.03,差异具有统计学意义（t=16.541,P＜0.001）.Western blotting检测结果显示,X线照射前后CNE1细胞中P-gp蛋白的A值分别为0.02±0.01和0.04±0.01,差异具有统计学意义（t=4.612,P=0.016）.共聚焦显微镜观察X线照射后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达绿色荧光强度高于照射前.结论 X线照射可引起CNE1细胞中MDR-1及P-gp表达的升高,提示X线照射可使鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞产生多药耐药性. 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 cne1细胞 抗药性 多药 X射线照射

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X射线照射对MRE11在鼻咽癌细胞株CNE1中表达的影响 被引量：1

12

作者 王靖淞 王慧 +1 位作者 谢敏 王若雨 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2014年第22期111-115,共5页

目的 研究X射线照射后肿瘤细胞中MRE11基因及其蛋白表达的规律,并探讨其与肿瘤放疗失败的相关性,为提高肿瘤放射治疗疗效开辟新途径,提供新的靶点。方法 选取人鼻咽癌CNE1细胞株进行体外培养及X线照射。按单次照射0 Gy、2 Gy、4 Gy、6... 目的 研究X射线照射后肿瘤细胞中MRE11基因及其蛋白表达的规律,并探讨其与肿瘤放疗失败的相关性,为提高肿瘤放射治疗疗效开辟新途径,提供新的靶点。方法 选取人鼻咽癌CNE1细胞株进行体外培养及X线照射。按单次照射0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy剂量分组,照射后4 h收集,利用RT-PCR技术检测MRE11 m RNA的表达;CNE1细胞株单次照射4 Gy于0 h、1.5 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h时间点收集固定,利用免疫荧光技术检测MRE11蛋白的表达,并采用Image-Pro Plus 5.0软件分析测定各组荧光的平均光密度值(m OD)。结果 RT-PCR检测CNE1细胞株分别经0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy X线照射后4 h,各组之间MRE11 m RNA表达无统计学差异。免疫荧光技术检测CNE1细胞株经4 Gy X线照射后0 h、1.5 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h时间点MRE11蛋白的表达,荧光强度先增强后减弱,4 h荧光强度最强。结论 CNE1细胞株MRE11 m RNA的表达与X线照射剂量递增无相关性。但CNE1细胞株经X线照射后MRE11蛋白的表达随时间的延长先增强后减弱,且在照射4 h表达最强,24 h后恢复到未照射水平。 展开更多

关键词 X线照射 cne1细胞 DNA双链损伤 MRE11基因

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组蛋白H3Ser10磷酸化对人鼻咽癌细胞增殖和转化的调控作用 被引量：1

13

作者 李彬彬 万郑 +2 位作者 王槐高 陈华 何志巍 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期894-901,共8页

目的 :探讨组蛋白H3第10位丝氨酸(serine 10,Ser10)磷酸化在调控鼻咽癌CNE1细胞增殖和恶性转化中的作用及可能的作用机制。方法 :采用蛋白质印迹法检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作用下鼻咽癌CNE1细胞中组蛋白H3Ser10... 目的 :探讨组蛋白H3第10位丝氨酸(serine 10,Ser10)磷酸化在调控鼻咽癌CNE1细胞增殖和恶性转化中的作用及可能的作用机制。方法 :采用蛋白质印迹法检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作用下鼻咽癌CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的改变;构建组蛋白H3野生型(H3WT)和突变型(H3S10A)真核表达质粒,转染CNE1细胞,采用杀稻瘟菌素筛选获得稳定过表达野生型或突变型组蛋白H3细胞株;蛋白质印迹法检测转染组蛋白H3野生型和突变型重组质粒后对CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的影响;采用CCK-8(cell counting kit-8)法和软琼脂集落形成实验检测过表达野生型和突变型组蛋白H3对CNE1细胞增殖和克隆形成能力的影响;分别采用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告基因系统检测过表达野生型和突变型组蛋白H3对CNE1细胞中c-Jun、c-Fos和Bcl-2蛋白表达以及激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)转录活性的影响。结果 :EGF可诱导CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的上调;成功构建了稳定过表达野生型和突变型组蛋白H3的CNE1细胞株,组蛋白H3Ser10位点的突变可明显抑制EGF作用下组蛋白H3的磷酸化水平;与转染空质粒细胞相比,过表达野生型组蛋白H3可促进EGF作用下CNE1细胞增殖和软琼脂克隆形成能力,并且上调c-Jun和c-Fos蛋白的表达以及提高AP-1的转录活性,但过表达突变型组蛋白H3则没有引起上述明显的改变。结论 :组蛋白H3,尤其是组蛋白H3Ser10磷酸化,在调控EGF诱导的CNE1细胞增殖和恶性转化中具有重要作用,其机制与促进c-Jun和c-Fos基因的转录,进而增强AP-1的活性有关。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 组蛋白类 表皮生长因子 磷酸化 cne1细胞

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SGK3对鼻咽癌细胞系CNE1生物学行为的影响及机制研究

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作者 杨强 刘春苗 《重庆医学》 CAS 2020年第1期33-38,共6页

目的探讨血清和糖皮质激素调节激酶3(SGK3)对鼻咽癌细胞系CNE1生物学行为的影响及机制。方法选取鼻咽癌细胞系CNE1,分为空白对照组、阴性转染组及SGK3-siRNA转染组,其中阴性转染组转染空白siRNA,SGK3-siRNA转染组转染SGK3-siRNA,采用CC... 目的探讨血清和糖皮质激素调节激酶3(SGK3)对鼻咽癌细胞系CNE1生物学行为的影响及机制。方法选取鼻咽癌细胞系CNE1,分为空白对照组、阴性转染组及SGK3-siRNA转染组,其中阴性转染组转染空白siRNA,SGK3-siRNA转染组转染SGK3-siRNA,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞SGK3、p-细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达。结果SGK3-siRNA组培养24、48 h时吸光度(OD)值分别为0.462±0.081和0.615±0.106,明显低于空白对照组和阴性转染组(P<0.05);SGK3-siRNA组细胞凋亡率为(16.84±1.20)%,明显高于空白对照组和阴性转染组(P<0.05);SGK3-siRNA组细胞相对迁移率、侵袭数目分别为(0.212±0.084)%和(56.87±19.87)个,明显低于空白对照组和阴性转染组(P<0.05);SGK3-siRNA组SGK3、p-ERK蛋白相对表达分别为0.422±0.104和0.415±0.101,明显低于空白对照组和阴性转染组(P<0.05)。结论SGK3影响CNE1细胞生物学行为,与调控ERK通路有关。 展开更多

关键词 血清和糖皮质激素调节激酶3 鼻咽肿瘤 cne1细胞 生物学行为

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萤光素酶报告基因细胞模型在筛选靶向调控RAC1的大黄酸衍生物中的应用 被引量：2

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作者 李钊全 粟正英 +6 位作者 梁丹丹 王春苗 蓝富 李俊莹 田炜 黎丹戎 侯华新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1025-1030,共6页

目的 构建含RAC1启动子萤光素酶报告基因CNE1-RAC1-Luc2稳转细胞模型,探讨其在转录水平筛选靶向调控RAC1抗肿瘤活性的大黄酸衍生物中的应用。方法 利用RAC1启动子序列,设计合成萤光素酶报告基因-慢病毒重组载体,感染鼻咽癌CNE1细胞,获... 目的 构建含RAC1启动子萤光素酶报告基因CNE1-RAC1-Luc2稳转细胞模型,探讨其在转录水平筛选靶向调控RAC1抗肿瘤活性的大黄酸衍生物中的应用。方法 利用RAC1启动子序列,设计合成萤光素酶报告基因-慢病毒重组载体,感染鼻咽癌CNE1细胞,获得稳定表达萤光素酶的细胞;采用萤光素酶报告基因检测试剂盒,检测RAC1激活剂PMA和抑制剂NSC23766刺激该细胞后的萤光素酶发光值,并观察系列大黄酸衍生物对RAC1启动子萤光素酶活性的影响,Western blot验证细胞RAC1蛋白表达的变化。结果 双酶切实验显示,含RAC1启动子萤光素酶报告基因的慢病毒表达载体构建成功;经嘌呤霉素筛选,获稳定表达萤光素酶的CNE1-RAC1-Luc2细胞,转染效率达90%以上;RAC1萤光素酶报告基因检测系统对RAC1激活剂和抑制剂反应灵敏,萤光素酶活性与Western blot实验中RAC1蛋白表达结果一致;系列大黄酸衍生物对CNE1-RAC1-Luc2细胞萤光素酶活性的调控作用与Western blot结果基本一致。结论 成功构建了含RAC1启动子的萤光素酶报告系统的细胞模型,为高通量进行靶向RAC1药物的筛选提供一个实用的平台。 展开更多

关键词 RAC1 萤光素酶报告基因 鼻咽癌cne1细胞 大黄酸衍生物 细胞模型 药物筛选

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染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用及靶点预测 被引量：1

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作者 何文栋 苏雯清 +5 位作者 韦坤华 奎玲 王硕 龚小妹 杨晓男 缪剑华 《中国药房》 CAS 北大核心 2021年第10期1196-1204,共9页

目的:研究染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用并预测其可能的作用靶点。方法:采用CCK-8法检测0(空白对照)、12.5、25、50、100、150μmol/L染料木素分别作用24、48、72 h对CNE1细胞增殖的影响;分别采用流式细胞术检测0(空白对照)... 目的:研究染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用并预测其可能的作用靶点。方法:采用CCK-8法检测0(空白对照)、12.5、25、50、100、150μmol/L染料木素分别作用24、48、72 h对CNE1细胞增殖的影响;分别采用流式细胞术检测0(空白对照)、15、30、60μmol/L染料木素作用24 h对CNE1细胞周期、凋亡的影响;采用划痕实验检测0(空白对照)、10、20、30μmol/L染料木素作用24 h对CNE1细胞迁移能力的影响。采用高通量测序法挖掘0(空白对照)、30μmol/L染料木素作用24 h后CNE1细胞中的差异基因,并通过实时荧光定量-聚合酶链式反应法(RT-qPCR)对上述细胞实验相关差异基因mRNA的表达情况进行验证。结果:与空白对照比较,12.5、25、50、100、150μmol/L染料木素对细胞的增殖均有显著的抑制作用(P<0.01),且呈浓度-时间-效应趋势;15、30μmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05或P<0.01),30、60μmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G2/M期并显著促进其凋亡(P<0.05或P<0.01);10、20、30μmol/L染料木素可显著抑制细胞的迁移能力(P<0.01)。高通量测序共挖掘出2271个差异基因(padj<0.05),其中1154个基因上调、1117个基因下调;结合细胞实验结果共筛选出p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIN D、PI3K、AKT等8个潜在靶点差异基因。经RT-qPCR法验证,其中p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIN D、AKT等7个潜在靶点差异基因mRNA的表达均显著下调(P<0.05),与转录组测序结果基本一致。结论:染料木素能有效抑制人鼻咽癌CNE1细胞的生长;其抗鼻咽癌机制可能与抑制突变型p53基因的表达,恢复野生型P53蛋白功能以及抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路的活性有关。 展开更多

关键词 染料木素 人鼻咽癌cne1细胞 高通量测序 突变型P53基因 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路

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不同辐射抗拒鼻咽癌细胞微小RNA差异表达的研究 被引量：25

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作者 王旭丹 杨惠玲 +7 位作者 郭禹标 梁志慧 赵睿颖 夏云飞 苏勇 Mong-Hong Lee 王瑾 郑芹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1045-1048,共4页

目的:在验证鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上,探索微小RNA(miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达差异。方法:通过观察X线照射对CNE-1和CNE-2细胞克隆形成数目的影响,利用SigmaPlot软件进行分析及线性... 目的:在验证鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上,探索微小RNA(miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达差异。方法:通过观察X线照射对CNE-1和CNE-2细胞克隆形成数目的影响,利用SigmaPlot软件进行分析及线性二次模型拟合存活曲线,比较CNE-1和CNE-2细胞剂量存活曲线及其生物学参数;采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测,用激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3·1数据库资料(http:∥www·targetscan·org),预测CNE-1和CNE-2细胞microRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果:发现在CNE-1和CNE-2细胞中miRNA的差异表达,即与CNE-2细胞比,在检测的326个microRNA中,CNE-1细胞中有20个miRNA上调,13个miRNA下调,其中检测量的绝对值在2000以上且两者相差在3倍以上的miRNA有hsa-miR-152、hsa-miR-7、hsa-miR-205和hsa-miR-572;分析结果提示明显差异表达的miRNA与放疗敏感性密切相关。结论:不同辐射抗拒NPC细胞株CNE-1和CNE-2细胞的microRNA的表达有差异;差异表达的miRNA与放疗敏感有关。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 cne-1细胞 cne-2细胞 MICRORNA 辐射

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新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响 被引量：17

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作者 晏烽根 李庆林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期355-359,共5页

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0... 目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。 展开更多

关键词 新藤黄酸 cne-1细胞 细胞凋亡 P-P38 P-ERK1/2 p38 ERK1/2

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黄芪多糖对人鼻咽癌CNE-1细胞的放疗增敏及上皮间质转化的作用 被引量：13

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作者 张树聪 蔡治祥 +2 位作者 王学涛 李志英 宋慧胜 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第20期59-66,共8页

目的:采用黄芪多糖(APS)与放射治疗(IR)联用,研究APS对人鼻咽癌CNE^-1细胞的放疗敏感性及上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:采用细胞计数(CCK-8)法检测不同质量浓度APS(0,6.25,12.5,25,50,100,200 g·L^-1)对CNE^-1细胞的细胞毒性... 目的:采用黄芪多糖(APS)与放射治疗(IR)联用,研究APS对人鼻咽癌CNE^-1细胞的放疗敏感性及上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:采用细胞计数(CCK-8)法检测不同质量浓度APS(0,6.25,12.5,25,50,100,200 g·L^-1)对CNE^-1细胞的细胞毒性;克隆形成实验计算12.5 g·L^-1APS与不同放射剂量(0,2,4,6 Gy)联用后对CNE^-1细胞的存活分数(SF),利用线性二次方程数学模型(LQ)根据SF值绘制放射敏感曲线;细胞划痕和transwell小室实验分别检测各组细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞的EMT标记物、凋亡标记物以及蛋白激酶B/细胞外调节蛋白激酶(Akt/ERK)通路蛋白的表达水平。结果:克隆形成实验和放射敏感曲线结果表明,非毒性剂量12.5 g·L^-1APS与4 Gy放射剂量联合给药可以明显增加CNE^-1细胞的放疗敏感性;与空白组及IR组比较,APS与IR联用可以抑制CNE^-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),明显增加CNE^-1细胞的凋亡率(P<0.05)。与空白组及IR组比较,APS与IR联用可以显著下调间质型钙黏蛋白(N-cadherin),p-Akt和p-ERK蛋白表达水平,明显上调上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平(P<0.05)。结论:APS与IR联用可以抑制CNE^-1细胞的迁移和侵袭,增加放疗引起的细胞凋亡,其可能通过抑制EMT和Akt/ERK通路有关。 展开更多

关键词 黄芪多糖 cne-1细胞 放疗增敏 上皮间质转化 迁移 细胞凋亡

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microRNA98靶向N-RAS对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响 被引量：6

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作者 宋辉 赵鹤 +2 位作者 边志刚 顾兆伟 曹志伟 《解剖科学进展》 2019年第3期252-255,共4页

目的探讨miR-98对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响及可能机制。方法利用脂质体介导的miR-98模拟物或阴性对照转染鼻咽癌CNE-1细胞,并通过实时定量PCR进行验证。MTT实验检测CNE-1细胞增殖能力的变化,划痕实验检测CNE-1迁移能力变化,采... 目的探讨miR-98对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响及可能机制。方法利用脂质体介导的miR-98模拟物或阴性对照转染鼻咽癌CNE-1细胞,并通过实时定量PCR进行验证。MTT实验检测CNE-1细胞增殖能力的变化,划痕实验检测CNE-1迁移能力变化,采用生物信息学软件预测N-RAS是否为miR-98潜在的靶基因,并以双荧光素酶报告基因实验验证。Western blot检测miR-98过表达后CNE-1细胞N-RAS蛋白的表达变化以及下游ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的表达变化。结果 MiR-98过表达能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的体外增殖与迁移能力;生物信息学软件分析结果显示N-RAS是miR-98的靶基因之一,双荧光素酶报告基因证实N-RAS为miR-98的下游靶基因。miR-98过表达后,CNE-1细胞中N-RAS表达下调,ERK与Akt蛋白的表达水平不变,但pERK与p-Akt蛋白的表达水平下调。结论 miR-98通过靶向调控N-RAS抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移。 展开更多

关键词 鼻咽癌 miR-98 cne-1细胞 增殖 迁移

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