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人Cdc25B基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析 被引量：4
1
作者 丁立新 赵现哲 +3 位作者 姜晓燕 刘晓丹 周平坤 丁库克 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期261-265,270,共6页
目的构建人细胞分裂周期25家族蛋白B(Cdc25B)基因启动子(promoter)荧光素酶报告基因载体p GL3-Cdc25B-promoter,并检测其转录活性。方法应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得人Cdc25B基因5'端非编码区处包含转录起始位点在内的-2000^+... 目的构建人细胞分裂周期25家族蛋白B(Cdc25B)基因启动子(promoter)荧光素酶报告基因载体p GL3-Cdc25B-promoter,并检测其转录活性。方法应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得人Cdc25B基因5'端非编码区处包含转录起始位点在内的-2000^+100的DNA序列。以正常人全血基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,并插入到p GL3-Basic荧光素酶报告基因载体上。通过设计不同引物,进一步构建系列缺失体,共获得7个不同长度启动子序列的报告基因载体。将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染He La细胞,通过双荧光素酶报告基因活性测定实验检测不同缺失体的转录活性。利用定点突变及RNA干扰(RNAi)探究预测的转录因子对Cdc25B转录活性的影响。结果构建的人Cdc25B基因启动子荧光素酶报告基因载体p GL3-Cdc25B-promoter经酶切鉴定及测序结果比对完全正确,将其转染He La细胞后,检测到荧光素酶高表达(P<0.05)。启动子系列缺失分析显示-160^-53片段包含基本核心启动子,与生物信息学的预测结果一致。定点突变及RNA干扰显示NF-YB转录因子对Cdc25B起正调控作用。结论成功构建了7个具有转录活性的人Cdc25B启动子缺失片段,确定了NF-YB是Cdc25B转录的一个重要调控因子,为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础。 展开更多
关键词 cdc25b基因 启动子 转录因子 碱基序列 聚合酶链反应
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小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达 被引量：3
2
作者 赵鸿梅 滕秋艳 +1 位作者 张哲 于秉治 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期976-977,共2页
目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达。方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达... 目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达。方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达。结果通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Westernblot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致。结论成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据。 展开更多
关键词 cdc25b 基因表达 谷胱甘肽转移酶(GST) 聚合酶链式反应
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微小RNA-148a对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响及机制研究 被引量：3
3
作者 邱光庭 王遂函 +1 位作者 李大鹏 李继坤 《中华胃肠外科杂志》 CAS CSCD 2014年第10期1036-1039,共4页
目的：探讨微小RNA（miR）-148a对人胃癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR技术检测60例胃癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN45细胞系为转染组，未转染的MKN45细胞系为对照... 目的：探讨微小RNA（miR）-148a对人胃癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR技术检测60例胃癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN45细胞系为转染组，未转染的MKN45细胞系为对照组。 CCK8法检测MKN45细胞的增殖情况，通过targetscan预测miR-148a的靶基因，Western-blot检测靶基因的表达水平。结果54例（90．0％，54/60）胃癌组织中miR-148a的表达量较癌旁组织下调，其中37例（61．7％，37/60）下降2倍以上；淋巴结转移、有无癌旁血管浸润及TNM分期Ⅲ～Ⅴ期者其表达量明显降低（P＜0．05）。转染miR-148a后3 d，MKN45细胞生长明显受抑，转染组吸光度值（0．978±0．091）明显低于对照组（1．182±0．074，P＝0．000）。转染组CDC25B（通过targetscan发现的miR-148a靶基因）蛋白表达较对照组明显降低。结论 miR-148a在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织；其具有抑制胃癌细胞增殖的作用，CDC25B可能是miR-148a发挥抑癌作用的靶基因。 展开更多
关键词 胃肿瘤 微小RNA 细胞增殖 cdc25b基因
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辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系 被引量：2
4
作者 赵现哲 刘晓丹 +2 位作者 周平坤 姜晓燕 丁库克 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2017年第6期405-410,417,共7页
目的:探索辐射介导下He La细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系。方法:用4 Gyγ射线分别照射正常He La细胞和IER5-si RNA-He La细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36 h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组。采用q PCR法检测照射... 目的:探索辐射介导下He La细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系。方法:用4 Gyγ射线分别照射正常He La细胞和IER5-si RNA-He La细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36 h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组。采用q PCR法检测照射后Cdc25B m RNA的表达;Western blot检测细胞内IER5和Cdc25B蛋白的表达;流式细胞术检测照射后G2期细胞周期阻滞情况。结果:q PCR结果显示,照射后0.5~24 h内,与对照组相比,正常He La细胞内Cdc25B m RNA在0.5 h先下降2 h再上升之后再下降,差异均有统计学意义(P均<0.05);在IER5-si RNA-He La细胞内Cdc25B m RNA在0.5 h先下降后再上升,差异均有统计学意义(P均<0.05,2 h组除外)。Western blot结果显示,照射后0.5~24 h内,与对照组相比,正常He La细胞内Cdc25B蛋白从2 h开始上升8 h开始下降,差异有统计学意义(P均<0.01);IER5-si RNA-He La细胞内Cdc25B蛋白从0.5 h开始下降8 h开始逐渐上升,差异有统计学意义(P均<0.01,24 h除外)。照射后0~36 h内,与对照组相比,正常He La细胞与IER5-si RNA-He La细胞的IER5蛋白表达水平分别在照后8 h与0 h后开始出现明显上升,差异均具有统计学意义(P均<0.05);而Cdc25B蛋白表达水分别在照射后8 h与0 h后开始出现下降,差异均具有统计学意义(P均<0.05),正常He La细胞与IER5-si RNA-He La细胞中Cdc25B蛋白与IER5蛋白的表达分别从8 h与0 h后开始呈现负相关关系(r分别为-0.740和-0.669,P均<0.01),当两种细胞中Cdc25B蛋白表达量下降时,G2期细胞周期阻滞比例升高(P<0.05)。结论:辐射介导下He La细胞中Cdc25B蛋白表达变化是由Cdc25B m RNA变化引起的,并且Cdc25B与IER5蛋白表达呈负相关关系。 展开更多
关键词 辐射 基因 cdc25b 细胞周期阻滞
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儿童神经母细胞瘤患者cdc25BmRNA与原癌基因N-myc表达水平的相关性 被引量：2
5
作者 丁锋 黄姗 杨星海 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1266-1267,共2页
目的探讨儿童神经母细胞瘤患者cdc25BmRNA与原癌基因N-myc表达水平相关性。方法通过使用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）观察15例神经母细胞瘤患者肿瘤细胞cdc25B和N．mycmRNA表达水平，探讨患者临床表征。结果cdc25B的表达水平... 目的探讨儿童神经母细胞瘤患者cdc25BmRNA与原癌基因N-myc表达水平相关性。方法通过使用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）观察15例神经母细胞瘤患者肿瘤细胞cdc25B和N．mycmRNA表达水平，探讨患者临床表征。结果cdc25B的表达水平在不同临床分期患者之间差异无统计学意义（P〉0．05）；cdc25B和N-mycmRNA表达水平间呈正相关（P〈0．01）；cde25B表达量不同两组患者中的存活率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论cde25B的表达水平与患者的年龄、性别、临床分期无明显相关，但和N-myc的mRNA表达水平明显相关。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 cdc25b N—myc 原癌基因 基因表达
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Galectin-3与CDC25B在胃癌中的表达及意义 被引量：1
6
作者 张秀明 姚根有 +2 位作者 张布衣 王玲玲 赵敏 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-292,共5页
目的探讨半乳糖凝集素3mRNA（Galectin-3）和细胞分裂周期蛋白25BmRNA（celldivisioncycle25B，CDC25B）在胃癌中的表达及其与临床病理参数及预后的关系。方法应用组织微阵列技术和原位杂交法检测220例胃癌组织和31份正常胃黏膜组织中Ga... 目的探讨半乳糖凝集素3mRNA（Galectin-3）和细胞分裂周期蛋白25BmRNA（celldivisioncycle25B，CDC25B）在胃癌中的表达及其与临床病理参数及预后的关系。方法应用组织微阵列技术和原位杂交法检测220例胃癌组织和31份正常胃黏膜组织中Galectin3mRNA和CDC25BmRNA的表达情况。结果220例胃癌中Galectin3tuRNA和CDC25BtuRNA的阳性表达率分别为58．6％、54．1％；Galectin-3mRNA表达与肿瘤大小、TNM（tumor，lymphnode，metastasis）分期、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移及远处转移呈正相关；CDC25BmRNA表达也与肿瘤大小、TNM分期、脉管侵犯、淋巴结转移及远处转移呈正相关；Galectin3mRNA表达与CDC25BmRNA表达呈正相关；Galectin-3mRNA和CDC25BmRNA阳性表达病例的平均生存时间和5年生存率均明显低于阴性表达的病例。结论Galectin3和CDC25B基因的表达促进了胃癌的发生和发展，是指导临床治疗及评估预后的有效指标。 展开更多
关键词 胃癌 组织微阵列 GALECTIN 3基因 cdc25b基因 原位杂交
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微小RNA-429在人胃癌前病变组织的表达 被引量：1
7
作者 谌雁冰 徐洪 +1 位作者 王从俊 李继坤 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1961-1964,共4页
目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-429在人胃癌前病变中的表达及其作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（PCR）技术检测50例胃癌组织、60例慢性萎缩性胃炎组织以及60例正常胃组织中miR-429表达水平；采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人... 目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-429在人胃癌前病变中的表达及其作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（PCR）技术检测50例胃癌组织、60例慢性萎缩性胃炎组织以及60例正常胃组织中miR-429表达水平；采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人胃黏膜上皮细胞株（GES-1）转化成胃癌前病变（PLGC）细胞模型，利用包装好的miR-429慢病毒以及慢病毒阴性对照感染PLGC细胞，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测PLGC细胞的增殖，通过Targetscan预测miR-429的靶基因，Western blot检测靶基因的表达水平。结果54例（90.0%，54/60）慢性萎缩性胃炎组织中miR-429的表达量较正常胃组织下调，其中37例（61.7%，37/60）下降2倍以上，伴有肠上皮化生、不典型增生者表达量降低更为显著（P＝0.012）。所有胃癌组织中miR-429的表达量均低于正常胃组织及慢性萎缩性胃炎组织（均P＝0.003），且与肿瘤有无淋巴结转移、癌旁血管浸润及TNM分期呈负相关。转染miR-429后5 d，PLGC细胞生长明显受抑，转染组吸光度值（0.852±0.023）明显低于对照组（1.488±0.031，P＝0.000）。转染组CDC25B（通过Targetscan发现的miR-429靶基因）蛋白表达较对照组明显降低。结论miR-429在慢性萎缩性胃炎组织、胃癌组织中表达均明显低于正常胃组织，具有抑制胃癌前病变发展、影响胃癌侵袭转移的作用。 展开更多
关键词 胃癌前病变 胃癌 慢性萎缩性胃炎 微小RNA cdc25b基因
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CDC25B基因在肝细胞肝癌的表达 被引量：1
8
作者 石欣 高乃荣 +2 位作者 卫文俊 程张军 汤永辉 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 2007年第1期38-40,共3页
目的探讨CDC25B基因在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达，以探讨其在HCC发生和发展中的作用。方法联合应用激光显微切割和实时定量PCR技术检测24例正常肝脏组织和24例HCC组织中CDC25B基因的表达，PCR产物的定量方法采用比较Ct法；应用West... 目的探讨CDC25B基因在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达，以探讨其在HCC发生和发展中的作用。方法联合应用激光显微切割和实时定量PCR技术检测24例正常肝脏组织和24例HCC组织中CDC25B基因的表达，PCR产物的定量方法采用比较Ct法；应用Western blot检测其蛋白的表达水平；应用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PC—NA）的表达。结果在显微镜下用激光显微切割机，将单个肝细胞成功切下，提取RNA后，逆转录成cDNA，实时定量PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常肝脏组织中为0．0006350±0．00021，HCC组织中为0．001988±0．00065，上调约3倍（P〈0．01）。CDC25B mRNA的表达与PCNA明显相关（r=0．45，P〈0．05）。HCC组织中CDC25B蛋白也过度表达，正常肝脏组织CDC25B蛋白表达为1．02±0．43，HCC组织为6．01±1．66，上调约6倍（P〈0．01）。结论CDC25B在HCC组织中表达明显上调，该基因的高表达与细胞周期调节机制的关系以及在HCC细胞的恶性转化中的作用还有待进一步探讨。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 cdc25b基因 激光显微切割 实时定量PCR
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CDC25B1对人胰腺癌细胞株Patu8988的生物学行为的影响
9
作者 肖志 石欣 +4 位作者 杨正平 张齐 孔波 严伟 葛梓 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2008年第5期401-405,共5页
目的探讨CDC25B1基因在人胰腺癌细胞株Patu8988中的表达情况,并将真核表达重组载体pcDNA-CDC25B1转染至细胞中,观察CDC25B1基因对细胞生物学行为的影响,以了解它在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用,为研究胰腺癌的发病机制与... 目的探讨CDC25B1基因在人胰腺癌细胞株Patu8988中的表达情况,并将真核表达重组载体pcDNA-CDC25B1转染至细胞中,观察CDC25B1基因对细胞生物学行为的影响,以了解它在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用,为研究胰腺癌的发病机制与治疗提供理论依据。方法利用Lipofectamine2000将CDC25B1转染至人胰腺癌细胞株Patu8988中,通过RT-PCR和Westernblot在mRNA和蛋白水平验证质粒转染成功,通过MTT实验、侵袭实验和细胞周期检测,观察CDC25B1对细胞生物学行为的影响。结果RT-PCR发现在胰腺癌细胞株Patu8988和转染空质粒的细胞株中,CDC25B1在mRNA水平表达很弱;转染pcDNA-CDC25B1组中CDC25B1高表达。Westernblot发现在胰腺癌细胞株Patu8988中,CDC25B蛋白有少量表达;转染pcDNA-CDC25B1组CDC25B蛋白高表达。MTT实验显示,转染pcDNA-CDC25B1组的细胞生长在72h受到明显抑制(P(0.05)。侵袭实验显示,转染pcDNA-CDC25B1的细胞其穿透Matrigel胶的能力明显增强(P(0.05)。流式细胞计量术显示,转染了pcDNA-CDC25B1组中,G1期的细胞明显增多(P(0.05);同时转染了pcDNA-CDC25B1组中,G2期的细胞明显减少,与未处理组比较有统计学意义(P(0.05)。结论在胰腺癌细胞株Patu8988中的CDC25B1转录水平很弱,存在少量CDC25B蛋白表达。转染的CDC25B1基因提高CDC25B1蛋白的表达,使细胞停滞在G1期,对细胞的生长有抑制作用,但能够增强细胞的侵袭能力;CDC25B1可能不是通过单一的调控细胞周期而实现其对细胞的影响,还存在其它多种途径。 展开更多
关键词 cdc25b基因 基因转染 胰腺癌细胞株Patu8988
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大肠癌中CDC25B的表达与预后
10
作者 刘光军 张丹 +4 位作者 王继红 姜彦多 张力 刘丹 金成兰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期638-639,655,I004,共4页
为了探讨CDC2 5B在大肠癌发生、发展中的作用及其表达与大肠癌临床病理特征、病人预后的关系。采用免疫组化染色 (S P法 )对 168例大肠癌、2 5例大肠腺瘤、2 0例正常组织中CDC2 5B进行了检测。结果显示 ,大肠腺瘤、正常组织中均未见CDC2... 为了探讨CDC2 5B在大肠癌发生、发展中的作用及其表达与大肠癌临床病理特征、病人预后的关系。采用免疫组化染色 (S P法 )对 168例大肠癌、2 5例大肠腺瘤、2 0例正常组织中CDC2 5B进行了检测。结果显示 ,大肠腺瘤、正常组织中均未见CDC2 5B表达。大肠癌组织中CDC2 5B基因表达阳性占 71 4% ( 12 0 /168)。CDC2 5B基因表达与癌有无远处脏器转移、血清CEA水平相关 (P <0 0 5 ) ,而与临床病理分期、组织分级、淋巴结转移、肿瘤大小、性别、年龄均无关(P >0 0 5 )。CDC2 5B基因阳性表达者 ,5年生存率明显降低。提示大肠癌组织中CDC2 5B基因表达可能加速细胞周期转化 ,促进大肠癌向远处脏器转移 ,在大肠癌发展中可能起一定作用 。 展开更多
关键词 结肠直肠肿瘤 基因 cdc 基因表达
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