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青蒿琥酯引起骨髓瘤细胞RPMI8226 G_2/M期阻滞 被引量:3
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作者 王素云 刘志妙 +8 位作者 郝洪岭 成志勇 杨晓阳 李杰 王瑞仓 李燕 杨洁 袁军 王超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期794-796,共3页
目的研究青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞周期的影响及可能机制。方法分别以浓度为0、25、50μg/mL的青蒿琥酯作用于RPMI8226细胞,用透射电镜观察细胞变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyc... 目的研究青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞周期的影响及可能机制。方法分别以浓度为0、25、50μg/mL的青蒿琥酯作用于RPMI8226细胞,用透射电镜观察细胞变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin B1和p34cdc2的变化。结果 50μg/mL青蒿琥酯处理48h后,多数细胞显示出凋亡细胞的特征性形态。随着青蒿琥酯浓度增加,G0/G1期细胞的比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞的比例逐渐上升(P<0.05),细胞明显阻滞于G2/M期。细胞周期蛋白cyclin B1表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而增加,p34cdc2表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而降低。结论青蒿琥酯能将RPMI8226细胞阻滞于G2/M期,其机制可能与cyclin B1的升高及p34cdc2的降低有关。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 多发性骨髓瘤 细胞周期 细胞周期蛋白B1 cdc2蛋白激酶
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小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响 被引量:1
2
作者 师秀艳 付伟 +4 位作者 赵咏梅 刘莹 刘奕 宗志红 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期746-749,共4页
为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小... 为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2 展开更多
关键词 小鼠 受精卵 早期发育过程 PKC cdc2 cdc25C 活性 蛋白激酶
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舌鳞癌中p34cdc2与cyclin B1的表达及相关研究 被引量:2
3
作者 陈新 周健 +2 位作者 王元银 何家才 王银龙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第6期620-623,共4页
目的研究舌鳞癌组织中p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,探讨它们阳性表达的相关性及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本60例,对照上皮包括正常舌组织11例、癌旁组织49例。采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2与cyclin B1... 目的研究舌鳞癌组织中p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,探讨它们阳性表达的相关性及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本60例,对照上皮包括正常舌组织11例、癌旁组织49例。采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,并结合舌鳞癌的临床病理特征进行分析。结果舌癌组织中可见p34cdc2与cyclin B1蛋白表达并显棕色/黄色,主要定位于细胞浆中。两种蛋白在癌组织中存在增多表达,与正常组织和(或)癌旁组织中的表达差异有显著性(P<0.01)。p34cdc2蛋白的表达在舌鳞癌不同临床分期、组织分级和有无淋巴结转移组间差异有显著性(P<0.05),而与年龄、性别无统计学意义;同时cyclin B1蛋白的表达也在舌鳞癌不同临床分期、组织分级中差异有显著性(P<0.05),而在不同年龄、性别及有无淋巴结转移组间差异无显著性。结论p34cdc2及cyclin B1蛋白在舌鳞癌中有表达增多现象,或许可反映舌鳞癌细胞分裂增殖能力;增多表达的p34cdc2及cyclin B1蛋白可作为评价舌鳞癌临床分期和组织分级等临床病理特征的参考指标之一。 展开更多
关键词 舌肿瘤 鳞状细胞 cdc2蛋白激酶 细胞周期蛋白B 免疫组织化学 细胞增殖
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Cdc2基因敲低逆转录病毒载体设计与构建方法 被引量:1
4
作者 程序曲 王金鹏 +3 位作者 黄强 王爱东 董军 兰青 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2005年第6期256-259,共4页
目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体。方法利用在线软件siRNASelectionProgram和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴... 目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体。方法利用在线软件siRNASelectionProgram和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞,产生逆转录病毒,并利用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入的60bp序列与原序列一致,位置正确。pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分别为4.25×105CFU/ml和6.00×105CFU/ml。结论cdc2基因表达siRNA逆转录病毒重组载体构建成功,可为研究胶质瘤分子病因学提供有用工具。 展开更多
关键词 RNA干扰 基因 cdc2蛋白激酶 逆转录病毒载体 基因沉默 神经胶质瘤
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三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G_2/M周期停滞 被引量:1
5
作者 陈智超 李秋柏 +5 位作者 吕建 邵菁 游泳 仲照东 黎纬明 邹萍 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期348-351,358,共5页
目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础... 目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2~5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。 展开更多
关键词 三氧化二砷 K562细胞 细胞周期停滞 cdc2蛋白激酶 SURVIVIN
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Effect of methanol extract of Schisandrae Fructus on high fat diet induced hyperlipidemic mice 被引量:1
6
作者 Se-Eun Lee Hyungwoo Kim +2 位作者 Chang-Hyun Kim Chiyeon Lim Suin Cho 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期818-825,共8页
OBJECTIVE:To investigate the effects and molecular targets of Schisandrae Fructus(SF)methanol extract(SFme)in mice with hyperlipidemia induced by high fat diet.METHODS:We observed changes in body weight,blood serum co... OBJECTIVE:To investigate the effects and molecular targets of Schisandrae Fructus(SF)methanol extract(SFme)in mice with hyperlipidemia induced by high fat diet.METHODS:We observed changes in body weight,blood serum content of total cholesterol,high-density lipoprotein(HDL)-cholesterol,and triglyceride.The extent of accumulation of lipid peroxide due to lipid metabolism disorder also evaluated by measuring malondialdehyde(MDA)level.In addition,after getting gene expression in hepatic tissues,target protein of SFme was identified using a protein interaction database.RESULTS:SFme significantly decreased total cholesterol and triglyceride levels without alteration of body weight in mice,and the livercontent of MDA was statistically decreased by SFme.And expression changes of cyclindependent kinase 1(Cdk1)and leucine-rich repeat kinase 2(Lrrk2)were restored by SFme.CONCLUSION:The effect of SFme on the highfat-diet induced hyperlipidemia via decreasing total cholesterol and triglyceride levels may involve the expression of Cdk1 and Lrrk2 proteins. 展开更多
关键词 SCHISANDRA HYPERLIPIDEMIAS OBESITY Cardiovascular diseases cdc2 protein kinase
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LHRH拮抗剂Cetrorelix对子宫内膜癌细胞生长周期的影响及其机理
7
作者 梁睿 汤晓晖 +1 位作者 主改霞 张建国 《现代妇产科进展》 CSCD 2003年第5期342-344,共3页
目的 :研究LHRH拮抗剂Cetrorelix对子宫内膜癌细胞生长周期及周期相关蛋白的影响 ,探讨其抑制内膜癌细胞生长的机理。方法 :用流式细胞仪细胞周期分析及Westernblotting蛋白分析法 ,研究在Cetrorelix的作用下子宫内膜癌细胞系HEC 1A细... 目的 :研究LHRH拮抗剂Cetrorelix对子宫内膜癌细胞生长周期及周期相关蛋白的影响 ,探讨其抑制内膜癌细胞生长的机理。方法 :用流式细胞仪细胞周期分析及Westernblotting蛋白分析法 ,研究在Cetrorelix的作用下子宫内膜癌细胞系HEC 1A细胞生长周期及相关周期蛋白的改变。结果 :1 0 -5mol/LCetrorelix可导致HEC 1A细胞生长停滞于G2 /M期 ,而与G2 /M期停滞相关的p5 3 ,磷酸化p5 3 (phospho p5 3 ) (丝氨酸 3 92 )及磷酸化cdc2 (phospho cdc2 ) (酪氨酸 1 5 )蛋白水平均显著增高。结论 :Cetrorelix抑制内膜癌细胞增殖作用的机理是结合细胞表面受体后引起一系列抑制性信号传递 ,导致细胞周期停滞于G2 /M期 ,主要表现为G2 期停滞。其中p5 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 促性腺素释放激素 细胞周期 蛋白质P53 cdc2蛋白激酶
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角蛋白19通过上调CDK1促进乳腺癌细胞增殖和化疗耐受 被引量:1
8
作者 钱海云 崔丰和 +2 位作者 黄江平 王向辉 马圣伟 《中国医师杂志》 CAS 2017年第2期210-213,共4页
目的探讨角蛋白19(KRT19)在乳腺癌中的作用及机制。方法用qRT—PCR方法检测35例乳腺癌组织及配对癌旁组织中KRTl9表达量,分析其表达量与乳腺癌TNM分期、分化程度及远端转移等的相关性。同时检测正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中KR... 目的探讨角蛋白19(KRT19)在乳腺癌中的作用及机制。方法用qRT—PCR方法检测35例乳腺癌组织及配对癌旁组织中KRTl9表达量,分析其表达量与乳腺癌TNM分期、分化程度及远端转移等的相关性。同时检测正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中KRT19基础水平的表达量。在乳腺癌细胞中干预KRT19的表达,检测细胞的增殖能力和克隆形成能力,四唑氮化合物(MTS)实验检测细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)的敏感性。Western blot技术检测细胞周期相关蛋白的表达。结果KRT19在乳腺癌组织中的表达量明显高于癌旁组织,且其表达量与乳腺癌TNM分期及远端转移有关,而与乳腺癌组织分化无关。同样的,KRT19在乳腺癌细胞中的表达量也明显高于正常乳腺上皮细胞。在MCF-7细胞中过表达KRT19,能够明显增加该细胞的增殖能力、克隆形成能力及其对5-Fu的化疗耐受性。而在MDA—MB-231细胞中干扰KRT19的表达,得到完全相反的结果。机制研究中发现KRT19可上调CDK1而对p27无作用。结论KRT19在乳腺癌中明显高表达,且与乳腺癌TNM分期及远端转移等临床特征呈正相关。KRT19通过上调CDK1加强乳腺癌细胞的增殖能力和克隆形成能力以及其对5-Fu的化疗耐受性。 展开更多
关键词 角蛋白19 cdc2蛋白激酶 乳腺肿瘤 细胞增殖 药物耐受性
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以CDC2激酶为靶点的反义基因治疗大鼠慢性增生性胆管炎 被引量:1
9
作者 周涌 李富宇 +3 位作者 程南生 蒋力生 李宁 李全生 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第5期398-400,共3页
目的 胆结石的术后高复发率和胆道再狭窄率均与术后遗留的慢性增生性胆管炎(proliferative cholangitis,PC)密切相关,故探讨CDC2 kinase shRNA对PC的抗增殖疗效和抑制成石潜力的可行性意义重大.方法 向大鼠PC模型的胆总管内注入0.5 ml... 目的 胆结石的术后高复发率和胆道再狭窄率均与术后遗留的慢性增生性胆管炎(proliferative cholangitis,PC)密切相关,故探讨CDC2 kinase shRNA对PC的抗增殖疗效和抑制成石潜力的可行性意义重大.方法 向大鼠PC模型的胆总管内注入0.5 ml的CDC2 kinase shRNA.数据采用方差分析、q检验.结果 CDC2 kinase shRNA可通过抑制CDC2 kinase,PCNA和Procollagen Ⅰ的表达,有效遏制胆道黏膜上皮、黏膜下腺体和胆管壁胶原纤维的过度增殖,并使内源性β-葡萄糖醛酸酶的分泌减少50%,从而降低PC的成石潜力.结论 CDC2 kinase shRNA对PC的抗增殖疗效可能有助于预防肝内胆管结石的术后复发和胆道再狭窄. 展开更多
关键词 胆结石 胆管炎 cdc2蛋白激酶
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肝再生增强因子对细胞周期素依赖性激酶1基因表达的影响 被引量:1
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作者 邵凤娟 成军 +3 位作者 马英骥 刘蔚 纪冬 王志凌 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2013年第2期10-13,共4页
目的研究人肝再生增强因子(ALR)对细胞周期素依赖性激酶1启动子(CDK1p)转录调节的作用,探讨ALR的生物学作用机制。方法根据GenBank中CDK1p序列的分析设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增人CDK1基因启动子基因序列,并克隆至真核报告载体p... 目的研究人肝再生增强因子(ALR)对细胞周期素依赖性激酶1启动子(CDK1p)转录调节的作用,探讨ALR的生物学作用机制。方法根据GenBank中CDK1p序列的分析设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增人CDK1基因启动子基因序列,并克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建CDK1启动子报告基因表达载体pCAT3-CDK1p,以该质粒转染HepG2细胞系,并同时与pcDNA3.1(-)-ALR共转染HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果 pCAT3-CDK1p组CAT表达活性明显高于pCAT3-basic组,差异有统计学意义,pCAT3-CDK1p与pcDNA3.1(-)-ALR共转染组的CAT表达活性明显低于pCAT3-CDK1p组,差异有统计学意义。结论 CDK1启动子有顺式激活下游基因的活性,ALR对CDK1基因有下调作用。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 cdc2蛋白激酶 下调作用
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垂体瘤转化基因、P27及周期素依赖性激酶4在胶质瘤中表达及其相关性研究
11
作者 苑玉环 戴如飞 +2 位作者 蔡军 李晓明 阎超 《中国基层医药》 CAS 2007年第11期1811-1813,i0002,共4页
目的探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)、周期素依赖性激酶抑制因子P27在胶质瘤中的作用以及它们与胶质瘤细胞周期的关系。方法40例胶质瘤标本分为Ⅰ级8例、Ⅱ10例、Ⅲ级13例、Ⅳ级9例,RT-PCR检测PTTG及P27mRNA的表达,免疫组织化学检测P... 目的探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)、周期素依赖性激酶抑制因子P27在胶质瘤中的作用以及它们与胶质瘤细胞周期的关系。方法40例胶质瘤标本分为Ⅰ级8例、Ⅱ10例、Ⅲ级13例、Ⅳ级9例,RT-PCR检测PTTG及P27mRNA的表达,免疫组织化学检测PTTG、P27及周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达。结果PTTGmRNA在Ⅰ~Ⅳ级的表达分别为(0.907±0.065)、(1.109±0.083)、(1.312±0.089)、(1.499±0.215),组间比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);P27mRNA在Ⅰ~Ⅳ级的表达分别为(1.308±0.117)、(1.105±0.200)、(0.826±0.163)、(0.610±0.063),组间比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);PTTG蛋白及CDK4蛋白表达均随肿瘤病理级别的增高而增加,两者在各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05).P27蛋白表达随肿瘤病理级别的增高而降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);PTTG与CDK4蛋白表达之间呈正相关(P<0.01),与P27蛋白表达之间呈负相关(P<0.01),P27蛋白与CDK4蛋白表达之间呈负相关(P<0.01)。结论PTTG、P27在胶质瘤的发生、发展中起重要的作用,两者的异常表达有细胞周期调控有关。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 癌基因 cdc2蛋白激酶
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C型Niemann-Pick病神经原纤维缠结的形成与特征
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作者 张旻 降风 +4 位作者 魏佳军 王雪贞 王伟 Inez Vincent 卜碧涛 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期541-544,共4页
目的探讨C型尼曼-皮克病(NPC)脑部神经原纤维缠结(NFT)形成的时相特征。方法以17例年龄7个月至55岁的NPC患者为研究对象,采用tau蛋白和有丝分裂期相关抗体进行免疫组织化学染色和银染,分析患者脑内NFT形成的特点。结果最早可在4... 目的探讨C型尼曼-皮克病(NPC)脑部神经原纤维缠结(NFT)形成的时相特征。方法以17例年龄7个月至55岁的NPC患者为研究对象,采用tau蛋白和有丝分裂期相关抗体进行免疫组织化学染色和银染,分析患者脑内NFT形成的特点。结果最早可在4岁的患者海马旁回发现典型的NFT形成,随年龄增长数量逐渐增多。在形态上与阿尔茨海默病(AD)所见高度相似,但未发现老年斑。在NPC中,有丝分裂期磷酸化表位早于tau蛋白过度磷酸化及NFT形成。结论NFT形成并非老龄化过程的结果,且与老年斑的存在与否并无关联。cdc2/cyclinB1可能是NFT形成的关键性早期事件,针对其活性的抑制剂对于早期干预NPC NFT的形成有重要意义。 展开更多
关键词 尼曼-皮克病 神经原纤维缠结 cdc2蛋白激酶 细胞周期蛋白B TAU蛋白质类 磷酸化
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曲匹地尔对培养大鼠血管平滑肌细胞的有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)和P34^(cdc2)激酶的影响 被引量:1
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作者 程焰 刘萍 +2 位作者 安国顺 曾繁典 唐朝枢 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期246-250,共5页
目的:研究曲匹地尔(Tra)对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的细胞增殖周期及对有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)和P34cdc2激酶的表达及活性的影响。方法:以流式细胞术测定细胞周期,免疫印迹法测定MAPK和P34cd... 目的:研究曲匹地尔(Tra)对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的细胞增殖周期及对有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)和P34cdc2激酶的表达及活性的影响。方法:以流式细胞术测定细胞周期,免疫印迹法测定MAPK和P34cdc2的表达,免疫沉淀后测定MAPK和P34cdc2对其特异性底物髓脂质碱性蛋白(MBP)和HistoneH1的磷酸化活性。结果:Tra降低细胞周期中S期比例和细胞分裂增殖指数,能明显抑制给血清刺激后MAPK的表达和活性,明显抑制P34cdc2激酶活性而对其表达无明显影响。结论:Tra对细胞周期的影响与其抑制MAPK和P34cdc2激酶活性和MAPK的蛋白表达有关。 展开更多
关键词 曲匹地尔 血管平滑肌细胞 蛋白激酶 P34^cdc2
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Cdc2相关蛋白激酶PFTK1单克隆抗体的制备
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作者 曹雪 张顺亮 +3 位作者 姜鹭 葛克山 丛艳君 任发政 《中国奶牛》 2010年第2期9-11,共3页
本试验以Cdc2相关蛋白激酶PFTK1的120~141位多肽段与载体蛋白KLH偶联制备人工抗原,免疫Balb/c小鼠,取高免疫效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合,通过有限稀释法最终得到了2株分泌抗PFTK1抗体的杂交瘤细胞,分别... 本试验以Cdc2相关蛋白激酶PFTK1的120~141位多肽段与载体蛋白KLH偶联制备人工抗原,免疫Balb/c小鼠,取高免疫效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合,通过有限稀释法最终得到了2株分泌抗PFTK1抗体的杂交瘤细胞,分别命名为4E7和2E3,经鉴定2株抗体均为IgM亚型,轻链均为κ型。经过Western blotting鉴定该抗体能够与PFTK1(1~139肽段)特异性结合。此抗体经过优球蛋白沉淀法纯化后,其纯度达到86.8%。该抗体的制备为研究蛋白激酶PFTK1功能奠定了基础。 展开更多
关键词 cdc2相关蛋白激酶 单克隆抗体 制备
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