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CD34^+造血干细胞移植在大鼠缺氧缺血性脑病中的神经保护机制 被引量:2
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作者 周露丹 范海玲 +1 位作者 王丽珍 梁国安 《中国现代医生》 2018年第11期30-33,共4页
目的探讨CD34^+造血干细胞移植在大鼠缺氧缺血性脑病中的神经保护作用和机制。方法建立体外人造血干细胞(CD34^+)增殖模型并进行体外扩增,分析其生物学活性。选取90只SD大鼠构建大鼠缺氧缺血动物模型并随机分为三组(每组30只):对照组、... 目的探讨CD34^+造血干细胞移植在大鼠缺氧缺血性脑病中的神经保护作用和机制。方法建立体外人造血干细胞(CD34^+)增殖模型并进行体外扩增,分析其生物学活性。选取90只SD大鼠构建大鼠缺氧缺血动物模型并随机分为三组(每组30只):对照组、模型组和治疗组;给予治疗组大鼠造血干细胞(CD34^+)移植3 d后,处死大鼠并观察脑组织病理改变;采用TUNEL法检测神经细胞凋亡的发生;采用免疫组织化学法检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和血清神经生长因子(nerve growth factor,NGF)蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组和治疗组动物行为学异常明显加重,凋亡细胞数明显增多,细胞内BDNF和NGF含量显著下降(P<0.05);与模型组相比,治疗组动物行为学异常明显减轻,凋亡细胞数明显减少,细胞内BDNF和NGF含量显著上升(P<0.05)。结论 CD34^+造血干细胞移植对大鼠缺氧缺血性脑病中具有显著的神经保护作用,可以有效促进脑内神经营养相关因子的表达。 展开更多
关键词 缺氧缺血性脑病 cd34+造血干细胞 神经保护 干细胞移植
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CD34^+脐血造血干细胞的体外培养及其生物学特性研究
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作者 胡卫华 王净 +4 位作者 何向锋 褚莉莉 赵枫姝 蒋翠莲 李晓丽 《皖南医学院学报》 CAS 2010年第3期161-165,共5页
目的:建立稳定的CD34+脐血造血干细胞(CD34+UHSC)的体外分离、培养扩增体系,并研究其生物学特性。方法:密度梯度离心及免疫磁珠法从脐血中分离CD34+UH-SC,加入细胞因子SCF、IL-3和IL-6进行体外培养扩增,观察细胞形态及其生长特性。应用... 目的:建立稳定的CD34+脐血造血干细胞(CD34+UHSC)的体外分离、培养扩增体系,并研究其生物学特性。方法:密度梯度离心及免疫磁珠法从脐血中分离CD34+UH-SC,加入细胞因子SCF、IL-3和IL-6进行体外培养扩增,观察细胞形态及其生长特性。应用流式细胞仪测定细胞周期及其CD34分子的表达,研究其增殖、生长和分化特性。以RT-PCR法检测干细胞高表达基因ABCG2的转录表达。结果:在体外培养条件下,CD34+UHSC悬浮生长,约1周后易形成克隆球,增殖旺盛,呈现指数生长期;细胞增殖周期随体外培养时间延长而逐渐趋缓;CD34+UHSC表面标志亦随体外培养时间延长而表达下降,同时ABCG2基因的表达亦逐步下调。结论:体外获得纯化的CD34+UHSC,生长稳定、增殖能力强,但随体外培养时间的延长,CD34+分子标志逐步丢失,提示在增殖旺盛的指数生长期7~21d内最适用于各项相关实验研究。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+造血干细胞 体外培养 流式细胞术
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慢病毒转染脐血CD34^+造血干细胞方法的优化 被引量:2
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作者 周睿卿 龚玉萍 +2 位作者 林娟 何茜 万永凤 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期130-134,共5页
目的探讨慢病毒载体系统转染人脐血CD34+造血干细胞优化的转染方法。方法采用第二代、第三代慢病毒载体系统,通过改变病毒浓度、感染体积、感染复数(MOI)值、感染方式、感染时间和感染后培养基等各方面条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)基... 目的探讨慢病毒载体系统转染人脐血CD34+造血干细胞优化的转染方法。方法采用第二代、第三代慢病毒载体系统,通过改变病毒浓度、感染体积、感染复数(MOI)值、感染方式、感染时间和感染后培养基等各方面条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pTRIPdU3-RNAiTALh-EF1a-GFP转染CD34+干细胞,于37℃、5%CO2的孵箱中培养14d后,在光学显微镜下进行集落计数和分类,并与未转染的CD34+干细胞进行比较,从而筛选出优化的转染方法。结果三质粒系统的第二代慢病毒载体转染率高于四质粒系统的第三代慢病毒载体。优化的转染条件为:新鲜分选的CD34+细胞于当日(0d),在含病毒滴度107 TU、Polybrene 2μg/mL的opti-MEM培养液中,细胞和病毒混合液于平底12孔板孔中,200×g离心1h,离心后继续共培养8h,再换新的病毒液200×g离心1h,共培养8h。按照含细胞因子的液体培养基∶半固体培养基=1∶1的比例配置转染后培养基,继续培养,可以获得较高感染率。感染病毒后的CD34+干细胞培养14d后,与未感染的CD34+细胞相似,可以形成各类血细胞集落。结论优化的慢病毒转染方法可以有效感染CD34+造血干细胞,而不影响干细胞的分化功能。 展开更多
关键词 慢病毒载体 cd34+造血干细胞 基因转染
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诱导体外扩增的小鼠骨髓CD34^+造血细胞分化为树突状细胞 被引量:11
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作者 董强刚 叶闻斐 +2 位作者 王亦宾 江晓丰 冯久贤 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期132-136,共5页
诱导体外培养扩增后的小鼠骨髓CD34+造血细胞分化为树突状细胞(DC)。方法C57BL/6j小鼠骨髓CD34+细胞采用血管内皮细胞共培养方法进行体外扩增,扩增后的CD34+细胞经磁性细胞分选技术纯化,并用GM┐CSF... 诱导体外培养扩增后的小鼠骨髓CD34+造血细胞分化为树突状细胞(DC)。方法C57BL/6j小鼠骨髓CD34+细胞采用血管内皮细胞共培养方法进行体外扩增,扩增后的CD34+细胞经磁性细胞分选技术纯化,并用GM┐CSF等细胞因子诱导其向DC分化。结果小鼠骨髓CD34+造血细胞不论是否经过体外培养均可被诱导分化为DC,后者具有典型的树突状形态特征,表达高水平的MHCⅠ、Ⅱ类抗原和CD86共刺激分子,在混合白细胞反应(MLR)中能有效地刺激静息期T淋巴细胞增殖。结论小鼠骨髓CD34+细胞经体外培养扩增后仍然具有向DC分化的能力,通过骨髓细胞体外培养扩增可以显著提高DC产量。 展开更多
关键词 树突细胞 cd34 造血干细胞 体外扩增 生物治疗
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人参皂甙对人骨髓造血干细胞的增殖作用 被引量:8
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作者 方桂伦 金锦梅 高瑞兰 《浙江临床医学》 2000年第2期75-77,共3页
探讨人参皂甙(GS)对人骨髓CD34+造血干细胞的增殖作用。方法:采给Dynal M450 CD34+免疫磁珠分离法阳性选择获取高纯度的人骨髓CS34+造血干细胞,应用多向祖细胞(CFU-Mix)体外培养技术,观察CD... 探讨人参皂甙(GS)对人骨髓CD34+造血干细胞的增殖作用。方法:采给Dynal M450 CD34+免疫磁珠分离法阳性选择获取高纯度的人骨髓CS34+造血干细胞,应用多向祖细胞(CFU-Mix)体外培养技术,观察CD34+造血干细胞对GS的敏感性。结果:1.经Dynal M-450 CD34+免疫磁珠分离获得骨3髓 CD34+细胞占骨髓单个核细胞( MNC)的 0. 52~1.30%;CD34+细胞的存活率达94.0~98.2%。 2最佳浓度的GS使CD34+细胞的CFU-Mix集落形成率提高54.4%(P<0.01),而高浓度时表现为抑制。结论:GS不但作用于人骨髓造血祖细胞,而已对CD34+造血干细胞也具有明显的刺激增殖作用。 展开更多
关键词 人参总皂甙 造血祖细胞 造血细胞 免疫磁珠
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脐血CD34^+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究 被引量:3
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作者 李群良 蔡海波 +1 位作者 刘启威 谭文松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-62,共4页
目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测C... 目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测CD34+造血干/祖细胞表达的基因。结果在所检测的588个基因中,发现63个基因具有显著的表达水平,其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+造血干/祖细胞 SMART—PCR 高密度点阵膜
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差异显示法分析不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的研究 被引量:1
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作者 李群良 刘启威 +1 位作者 蔡海波 谭文松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页
目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果... 目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所使用的差异显示条件下,得到30个差异表达基因片段,其中一个差异表达片段为RAN基因,该基因属于RAS癌基因家族,可能与造血细胞增殖有关。结论不同生长环境影响CD34+造血干/祖细胞的基因表达,这些差异表达的基因可为优化体外培养环境,扩增造血细胞提供分子基础。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+造血干/祖细胞 培养环境 差异显示
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体外扩增脐血CD_(34)^+细胞 被引量:2
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作者 刘颉 李桂霞 +1 位作者 丘峰云 阮文宾 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第7期401-403,共3页
目的探讨某些造血细胞因子对脐血造血干细胞的扩增效应。方法脐血CD+34细胞经免疫磁珠法分选后,在含有重组人Flt3配基(rhFlt3L)、干细胞因子(rhSCF)、白细胞介素1β(rhIL1β)、rhIL3和r... 目的探讨某些造血细胞因子对脐血造血干细胞的扩增效应。方法脐血CD+34细胞经免疫磁珠法分选后,在含有重组人Flt3配基(rhFlt3L)、干细胞因子(rhSCF)、白细胞介素1β(rhIL1β)、rhIL3和rhIL6的液体培养体系中培养7至14天。采用流式细胞仪、造血细胞集落和长期培养起始细胞(LTCIC)方法检测扩增后的细胞。结果在上述细胞因子作用下,脐血CD+34细胞明显扩增。细胞总数、CD+34细胞和造血细胞集落总数在第7天分别扩增31±19、4±5、10±67倍、第9天分别扩增236±106、20±20、57±62,第14天分别扩增770±505、30±30、189±133。扩增的细胞以髓系祖细胞为主,极少红系祖细胞,无淋巴系细胞,并含有LTCIC。结论理想的造血细胞因子的组合可以加速体外扩增脐血CD+34细胞。 展开更多
关键词 cd34 胎盘 造血干细胞移植 体外扩增
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使用抗氧化剂调控胞内的ROS对脐血CD34^+细胞体外扩增特性的影响
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作者 范锦立 蔡海波 谭文松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期767-770,共4页
目的:使用抗氧化剂调控胞内活性氧物质(ROS)水平,考察其对脐血CD34+细胞体外扩增特性的影响。方法:在体外培养过程中,分别采用超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)或N-乙酰半胱氨酸(NAC)3种抗氧化剂降低脐血CD34+细胞内的ROS水平,研究... 目的:使用抗氧化剂调控胞内活性氧物质(ROS)水平,考察其对脐血CD34+细胞体外扩增特性的影响。方法:在体外培养过程中,分别采用超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)或N-乙酰半胱氨酸(NAC)3种抗氧化剂降低脐血CD34+细胞内的ROS水平,研究了CD34+细胞在抗氧化剂清除ROS后的体外扩增特性。结果:体外培养时细胞因子的应用会使细胞内的ROS水平显著上升。3种抗氧化剂均能有效地清除细胞内ROS,且清除程度随使用剂量的改变而变化。在培养体系中添加2000U/mL SOD、200U/mL CAT或2mmol/L NAC,扩增后培养物中CD34+细胞及CD34+CD38-细胞的比例、集落生成细胞的密度均有明显提高,但对CD34+细胞扩增倍数影响不大;而加入8000U/mL SOD、1000U/mL CAT或5mmol/L NAC,抑制CD34+细胞的扩增能力。结论:采用细胞因子体外扩增脐血CD34+细胞时,使用低剂量的抗氧化剂适度清除细胞内的ROS,明显提高培养物中造血干/祖细胞的含量,同时并不影响扩增后CD34+细胞的再扩增能力。 展开更多
关键词 活性氧(ROS) cd34^+造血干/祖细胞 体外扩增 抗氧化剂
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人造血干/祖细胞多态性的研究:Ⅲ.骨髓CD34^+造血干/祖细胞功能亚群的分析
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作者 奚永志 张双喜 +2 位作者 唐佩弦 魏文 孔繁华 《实验生物学报》 CSCD 1996年第1期49-57,共9页
CD 34^+造血干/祖细胞(HSC/HPC)是十分异质性的,由多个不同功能亚群所构成,在分化方向与重建造血等方面差异显著。本文对正常人骨髓CD 34^+ HSC/HPC各亚群进行了较全面的分析。首先以阳性选择策略,采用Isolex^(TM) 50免疫磁球分选术富... CD 34^+造血干/祖细胞(HSC/HPC)是十分异质性的,由多个不同功能亚群所构成,在分化方向与重建造血等方面差异显著。本文对正常人骨髓CD 34^+ HSC/HPC各亚群进行了较全面的分析。首先以阳性选择策略,采用Isolex^(TM) 50免疫磁球分选术富集骨髓CD 34^+HSC/HPC,其纯度>90%,随之采用免疫荧光抗体双标记二维流式细胞仪对其测定,发现高纯度的CD 34^+HSC/HPC可分为八个不同亚群:1.CD 34^+/CD 71^-(23.4%—56.6%)与CD 34^+/CD 71^+(33.4%—66.6%);2.CD34^+/CD 45^-(80.8%—82.5%)与CD34^+/CD 45^+(8.1%—11.2%);3.CD 34^+/CD 33^-(20.4%—80.6%)与CD 34^+/CD 33^+(14.6%—64.8%);4.CD 34^+/DR^-(6.3%—11.0%)与CD 34^+/DR^+(82.8%—85.5%)。用免疫胶体金——免疫桥酶联组化双染色对上述亚群进一步分析的结果与流式细胞仪的高度一致。 展开更多
关键词 cd34^+ 造血干 祖细胞 功能亚群 骨髓
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