目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞...目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。展开更多
目的:研究不同强度脉冲电磁场干预对成肌细胞增殖的影响。方法:10Hz脉冲低频电磁场刺激经复苏后培养贴壁良好的C2C12成肌细胞,根据不同磁场强度和作用时间将其分为A、B、C组,无磁场干预的为对照组。采用RT-q PCR检测不同磁场强度下成肌...目的:研究不同强度脉冲电磁场干预对成肌细胞增殖的影响。方法:10Hz脉冲低频电磁场刺激经复苏后培养贴壁良好的C2C12成肌细胞,根据不同磁场强度和作用时间将其分为A、B、C组,无磁场干预的为对照组。采用RT-q PCR检测不同磁场强度下成肌细胞标记基因Myf5、Myo D及Pax7的m RNA的表达。结果:经RT-q PCR检测三种基因的表达情况,Myf5 m RNA在1.5 m T磁场强度下照射第五天表达最高;0.5 m T磁场强度下Myf5 m RNA的表达与对照组相比无统计学意义(P>0.05);1.0 m T磁场强度下Myf5 m RNA表达与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);1.5 m T磁场强度下Myf5 m RNA表达与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组Myo D m RNA的表达要比磁场作用下表达要高。三个磁场强度下Myo D m RNA表达与对照组相比均无统计学意义(P>0.05)。0.5 m T、1.0 m T磁场强度下Pax7 m RNA的表达要比对照组要高,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05);1.5 m T磁场强度下Pax7 m RNA表达与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论 :1.5 m T脉冲电磁场强度下作用5天对体外培养的成肌细胞Myf5 m RNA标记基因增殖促进作用最强。展开更多
文摘目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。
文摘目的:研究不同强度脉冲电磁场干预对成肌细胞增殖的影响。方法:10Hz脉冲低频电磁场刺激经复苏后培养贴壁良好的C2C12成肌细胞,根据不同磁场强度和作用时间将其分为A、B、C组,无磁场干预的为对照组。采用RT-q PCR检测不同磁场强度下成肌细胞标记基因Myf5、Myo D及Pax7的m RNA的表达。结果:经RT-q PCR检测三种基因的表达情况,Myf5 m RNA在1.5 m T磁场强度下照射第五天表达最高;0.5 m T磁场强度下Myf5 m RNA的表达与对照组相比无统计学意义(P>0.05);1.0 m T磁场强度下Myf5 m RNA表达与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);1.5 m T磁场强度下Myf5 m RNA表达与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组Myo D m RNA的表达要比磁场作用下表达要高。三个磁场强度下Myo D m RNA表达与对照组相比均无统计学意义(P>0.05)。0.5 m T、1.0 m T磁场强度下Pax7 m RNA的表达要比对照组要高,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05);1.5 m T磁场强度下Pax7 m RNA表达与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论 :1.5 m T脉冲电磁场强度下作用5天对体外培养的成肌细胞Myf5 m RNA标记基因增殖促进作用最强。
