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人参组培不定根蛋白对小鼠的抗疲劳作用及其机制 被引量：12
1
作者 王曼莹 付宝玉 +4 位作者 徐晓浩 李香竹 陈红 孙立伟 赵大庆 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期18-25,共8页
目的:探讨人参组培不定根蛋白(GARP)对小鼠的抗疲劳作用,阐明其作用机制,为开发利用人参组培不定根资源提供实验依据。方法:40只昆明种清洁级小鼠采用负重游泳实验建立疲劳动物模型,随机分为对照组,低、中和高剂量(0.25、0.50和1.00 g&#... 目的:探讨人参组培不定根蛋白(GARP)对小鼠的抗疲劳作用,阐明其作用机制,为开发利用人参组培不定根资源提供实验依据。方法:40只昆明种清洁级小鼠采用负重游泳实验建立疲劳动物模型,随机分为对照组,低、中和高剂量(0.25、0.50和1.00 g·kg^(-1))GARP组,每组10只。通过力竭游泳实验记录各组小鼠游泳时间,游泳实验后处死小鼠,采用分光光度法检测各组小鼠血清中血乳酸(BLA)和血尿素氮(BUN)水平,采用分光光度法检测各组小鼠肝组织中谷胱甘肽(GSH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和肝糖原水平,采用分光光度法检测各组小鼠肌肉组织中肌糖原水平。小鼠成肌细胞(C2C12细胞)分为对照组和不同剂量(5、10和20 mg·L^(-1))GARP组,采用分光光度法检测各组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平,苯酚硫酸法检测各组细胞葡萄糖摄取能力,Western blotting法检测各组细胞中腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平[磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK比值]和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,中和高剂量GARP组小鼠游泳时间明显延长(P<0.05或P<0.01),血清中BLA和BUN水平明显降低(P<0.05或P<0.01);不同剂量GARP组小鼠肝组织中GSH水平和SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),肝糖原和肌糖原水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,不同剂量GARP组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞的葡萄糖摄取能力明显增强(P<0.05或P<0.01),p-AMPK/AMPK比值和GLUT4蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:GARP具有抗疲劳作用,其机制可能是通过激活AMPK/GLUT4信号通路促进糖摄取实现的。 展开更多
关键词 人参组培不定根蛋白 抗疲劳 小鼠 c2c12细胞
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降糖消渴颗粒含药血清对C2C12细胞胰岛素抵抗的影响 被引量：10
2
作者 赵丹丹 穆倩倩 +3 位作者 方心 张东伟 莫芳芳 高思华 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1577-1579,共3页
目的:研究降糖消渴颗粒含药血清(JGDS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及葡萄糖摄取率的影响。方法:JGDS处理棕榈酸、小牛血清白蛋白(BSA)诱导而致胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞;通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗... 目的:研究降糖消渴颗粒含药血清(JGDS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及葡萄糖摄取率的影响。方法:JGDS处理棕榈酸、小牛血清白蛋白(BSA)诱导而致胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞;通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量;2-NBDG葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的摄取率。结果:0.25mmol/L棕榈酸和1%BSA培养16h,使得C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量与葡萄糖摄取率显著下降(P<0.05),造成骨骼肌细胞IR模型,JGDS干预可使IR模型骨骼肌细胞葡萄糖消耗量显著增加,与正常血清相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且该作用呈现一定的剂量依赖性;JGDS可增加IR骨骼肌细胞模型葡萄糖转运率,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:降糖消渴颗粒含药血清能显著增加IR的C2C12骨骼肌细胞的葡萄糖消耗和摄取,这可能是降糖消渴颗粒改善骨骼肌IR的机制之一。 展开更多
关键词 降糖消渴颗粒 c2c12细胞 含药血清 胰岛素抵抗 葡萄糖消耗 葡萄糖摄取率
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不同浓度红景天苷对成肌细胞体外分化的影响及机制初探 被引量：7
3
作者 罗维 张鹏 +2 位作者 艾磊 周越 陈晓萍 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2015年第9期50-57,共8页
研究目的:探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制,有望为成肌细胞增殖分化寻求更有效的外源调控物,以促进成肌细胞的移植和临床应用,同时为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础。... 研究目的:探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制,有望为成肌细胞增殖分化寻求更有效的外源调控物,以促进成肌细胞的移植和临床应用,同时为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础。研究方法:研究1:红景天苷对成肌细胞体外分化的影响:1)在C2C12中加入不同浓度红景天苷处理,在诱导成肌分化过程中,应用相差显微镜观察不同浓度红景天苷对C2C12分化过程中汇聚、融合和形成多核肌管的影响;2)应用免疫荧光组化方法,分析不同浓度红景天苷对C2C12成肌分化融合率的影响;3)应用real-time PCR和Western Blotting方法,检测红景天苷对C2C12成肌分化特异基因和蛋白表达的影响;研究2:红景天苷影响成肌细胞体外分化的机制初探:应用Western Blotting方法,检测红景天苷处理后C2C12成肌分化中TGF-β/Smad信号通路的变化。结果:50μg红景天苷处理:研究1:1)光镜观察结果从形态学上显示,红景天苷处理显著抑制C2C12细胞的融合和多核肌管的形成;2)免疫荧光检测结果表明Myosin-neonatal(E-MHC)阳性面积和myogenin阳性核均显著减少(P<0.05),显著抑制C2C12细胞分化过程中肌管形成,促进细胞增殖;3)real-time PCR和Western blotting检测结果表明,成肌分化特异因子MyoD和myogenin基因和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),显著抑制C2C12细胞分化过程中细胞的融合和肌管的形成;研究2:Western blotting检测结果表明,红景天苷显著抑制C2C12细胞分化效应,伴有Smad2/Smad3磷酸化激活增加,尤其是Smad3激活水平显著增加(P<0.01);30μg红景天苷处理作用不显著(P>0.05)。结论:1)红景天苷能显著抑制骨骼肌成肌细胞体外成肌分化,并促进骨骼肌成肌细胞激活增殖,促进卫星细胞库储备增加。2)红景天苷对骨骼肌成肌细胞体外分化增殖的影响存在剂量依赖性,以50μg红景天苷干预能达到显� 展开更多
关键词 红景天苷 c2c12细胞 成肌分化 TGF-β/Smad通路
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成肌细胞成脂过程中PPARγ、C/EBPα和Myogenin基因启动子的甲基化变化 被引量：7
4
作者 姜美华 巨婷婷 +4 位作者 刘洋 许玲 孙文娟 赵泮峰 尹靖东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期3010-3021,共12页
【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系... 【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系。【方法】分别用2%马血清和三联诱导剂诱导C2C12细胞成肌和成脂分化,在马血清促进的成肌分化第0、1、3和5天收集细胞进行姬姆萨染色观察肌管形成情况;在三联诱导的成脂分化第0、2、4、6和10天收集细胞进行油红O染色观察脂滴形成情况;提取成肌诱导第0、1、3、5天和成脂诱导第0、2、4、6天的RNA和DNA,分别采用qRT-PCR检测成肌和成脂分化相关基因的表达,采用重亚硫酸盐测序的方法检测PPARγ、C/EBPα和Myogenin启动子区甲基化的变化,并分析基因表达与甲基化状态的相关关系。【结果】①C2C12细胞经马血清诱导形成了多核肌管,表达成肌相关基因,但不表达脂肪特异性基因;三联诱导使C2C12细胞自主分化的肌管中沉积了脂滴,同时表达成脂和成肌相关基因;②重亚硫酸盐测序结果表明,在未分化的成肌细胞中,PPARγ基因启动子的甲基化水平是61%,在三联诱导第2、4和6天,其甲基化程度依次为49%、39%和42%,呈逐渐去甲基化趋势,与PPARγ基因转录负相关;在马血清诱导第3和5天,甲基化水平为56%和48%,与未分化的成肌细胞相比差异不显著,同时PPARγ基因的表达水平也没有显著变化;③Myogenin基因在马血清促进的成肌过程中甲基化水平不断降低(49%、42%、35%和34%),转录水平急剧增加;在三联诱导过程中,Myogenin启动子的甲基化水平由0天的49%下降为第1天的37%、第3天的41%和第5天的38%,但下降幅度弱于马血清诱导的成肌过程,这一结果与降低的Myogenin转录上调相吻合;④C/EBPα基因在未分化的C2C12细胞中呈低甲基化状态,甲基化程度仅为1.6%,在成肌分化和脂肪沉积过程中均未发生显著变化, 展开更多
关键词 c2c12细胞 DNA甲基化 成肌分化 脂肪沉积
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蒙药诃子水提物成分分析及改善胰岛素抵抗作用机制研究 被引量：7
5
作者 魏颖 苏秀兰 徐暾海 《生命的化学》 CAS 2021年第3期585-594,共10页
现代药理学研究表明蒙药诃子具有降低血糖的活性,但相关研究均不够深入。本研究运用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析法,对诃子水提物(water extract of Terminalia chebula,WET)的主要化学成分进行分析鉴定,得到化合物共107种,主要包含鞣质类... 现代药理学研究表明蒙药诃子具有降低血糖的活性,但相关研究均不够深入。本研究运用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析法,对诃子水提物(water extract of Terminalia chebula,WET)的主要化学成分进行分析鉴定,得到化合物共107种,主要包含鞣质类、多酚类、黄酮类、挥发油类。通过CCK-8法检测WET对C2C12细胞增殖的影响后,对细胞进行胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)造模,葡萄糖氧化酶法检测其对IR-C2C12细胞糖消耗的影响,确定其改善了IR的活性。而后进行蛋白质提取,Western blot法检测相关蛋白质的表达。结果发现:WET高浓度(500μg/mL、250μg/mL)具有促进IR-C2C12细胞葡萄糖消耗的作用,分别可使细胞葡萄糖消耗增加15.855%和7.943%。同时WET高低剂量均可升高IR-C2C12细胞的磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide dependent kinase 1,PDK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的表达量,WET高剂量对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)亦有明显升高作用。该研究结果显示:诃子水提物具有一定的改善C2C12细胞IR的作用,这可能与其激活PI3K/AKT通路有关。 展开更多
关键词 诃子水提物 c2c12细胞 胰岛素抵抗
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细胞肥大过程中hhLIM的亚细胞定位变化及其对细胞骨架的影响 被引量：3
6
作者 郑斌 温进坤 韩梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期255-261,共7页
hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1... hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1)为诱导因素 ,探讨hhLIM与肌动蛋白的相互作用及其影响细胞骨架的分子机制 .RT PCR、Western印迹和细胞免疫荧光分析结果表明 ,心肌肥大刺激因子ET 1在诱导心肌肥大标志基因BNP和肌动蛋白表达的同时 ,使hhLIM蛋白在C2C12细胞胞核与胞质之间进行重新定位 .激光共聚焦显微镜观察结果显示 ,hhLIM与肌动蛋白在胞质中共定位 .蛋白分步提取、鉴定及hhLIM与F肌动蛋白结合与沉降实验证明 ,hhLIM多存在于细胞骨架及其相关蛋白部分 ,在体外可与F肌动蛋白共结合 .这些结果表明 ,胞质中的hhLIM作为细胞骨架相关蛋白与肌动蛋白相互作用 .进一步研究hhLIM与细胞骨架的关系时发现 ,hhLIM过表达可使C2C12细胞的骨架变成致密网状纤维并使其对细胞松弛素导致的细胞骨架解聚产生一定的抵抗作用 ,抑制hhLIM表达则使细胞骨架稀疏 ,结构模糊 .提示hhLIM参与细胞骨架组织及重构的机制与其结合并稳定F肌动蛋白有关 . 展开更多
关键词 hhlim基因 c2c12细胞 肌动蛋白 细胞骨架
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人参皂苷Rb1对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用及AMPK信号通路相关基因表达的影响 被引量：6
7
作者 赵丹丹 吴瑞 +8 位作者 白颖 莫芳芳 马如风 柳辰玥 朱如愿 左加成 姜广建 张东伟 高思华 《世界中医药》 CAS 2019年第1期54-58,63,共6页
目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR... 目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR,人参皂苷Rb1组在模型组的基础上以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量,并应用CCK8试剂盒及光镜观察不同浓度人参皂苷Rb1对C2C12细胞活性及形态的影响,实时荧光定量PCR扩增分析人参皂苷Rb1对C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α基因表达的影响。并应用shRNA沉默AMPKα的表达,构建AMPKα低表达的骨骼肌细胞模型,以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,与不含人参皂苷Rb1的培养液比较,再次验证人参皂苷Rb1对C2C12细胞葡萄糖利用的影响及其与AMPK信号通路的关系。结果:1、3、10、30μmol/L人参皂苷Rb1对C2C12细胞形态及活性无显著影响,而100μmol/L人参皂苷Rb1造成C2C12细胞活性降低及部分细胞死亡。10,30μmol/L人参皂苷Rb1能够促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 05),且人参皂苷Rb1能够上调C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α的基因表达(P <0. 05)。10、30μmol/L人参皂苷Rb1亦能增加AMPKα低表达的骨骼肌细胞的葡萄糖消耗量(P <0. 05),而该作用程度低于其对棕榈酸诱导的C2C12细胞IR的影响,且RT-PCR结果显示人参皂苷Rb1能上调AMPKα低表达的C2C12细胞SIRT-1、PGC-1α的基因表达。结论:人参皂苷Rb1能够有效促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗,该作用与调节AMPK信号通路有关,但除AMPK信号通路亦有其他作用途径。 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 c2c12骨骼肌细胞 胰岛素抵抗 基因沉默 葡萄糖消耗 AMPK信号通路
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左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖引起的C2C12细胞凋亡
8
作者 张苗苗 刘雨佳 +1 位作者 张甦 焦光宇 《中国医科大学学报》 北大核心 2024年第2期121-126,共6页
目的探讨左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖(LPS)引起C2C12细胞凋亡的机制。方法CCK-8法检测不同浓度左西孟旦对C2C12细胞存活率的影响,选择有保护作用的左西孟旦浓度。将C2C12细胞随机分为4组:空白对照组(CON组)、左西孟旦预处理后... 目的探讨左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖(LPS)引起C2C12细胞凋亡的机制。方法CCK-8法检测不同浓度左西孟旦对C2C12细胞存活率的影响,选择有保护作用的左西孟旦浓度。将C2C12细胞随机分为4组:空白对照组(CON组)、左西孟旦预处理后的对照组(CON+L组)、LPS处理组(LPS组)、左西孟旦预处理后的LPS处理组(LPS+L组)。采用CCK-8法检测C2C12细胞的存活率;hoechst33342染色细胞核观察细胞的凋亡情况;采用实时PCR、Western blotting检测C2C12细胞PTEN/Akt通路凋亡指标的mRNA及蛋白表达水平。siRNA-PTEN转染C2C12细胞,敲除PTEN基因,检测其对凋亡通路蛋白表达的影响。结果左西孟旦能够提高LPS损伤后C2C12细胞的存活率,降低凋亡率。siRNA-PTEN抑制了PTEN基因的表达,PTEN/Akt信号通路相关mRNA与蛋白发生相应改变,导致C2C12细胞凋亡率下降。结论左西孟旦可以通过PTEN/Akt通路抑制LPS引起的C2C12细胞凋亡。 展开更多
关键词 左西孟旦 PTEN 脂多糖 c2c12细胞
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异丙肾上腺素在C2C12细胞分化中的作用及机制 被引量：6
9
作者 陈绍娟 向力 +5 位作者 江淼 王露 郑飞 张蕾 袁也 唐俊明 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第9期1178-1187,共10页
该研究主要探讨异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)在C2C12细胞分化与肌萎缩中的作用及可能的机制。在利用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体表达特征的基础上,以2%的马血清高糖培养基建立C2C12细胞分化的实验体系,随后分别按单次或连... 该研究主要探讨异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)在C2C12细胞分化与肌萎缩中的作用及可能的机制。在利用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体表达特征的基础上,以2%的马血清高糖培养基建立C2C12细胞分化的实验体系,随后分别按单次或连续单次给予10^(–5) mol/L ISO后观察其分化差异;接着再比较连续单次给予不同浓度的ISO(10^(–8) mol/L、10^(–7) mol/L、10^(–6) mol/L、10^(–5) mol/L)处理;利用细胞免疫荧光化学和Western blot方法检测C2C12细胞分化后肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MYH)的水平,并定量分析分化后骨骼肌细胞的肌管细胞核融合数目;同时,利用Western blot检测C2C12细胞分化调节有关的肌细胞生成蛋白(myogenin,Myo G)、p-p38MAPK(phosphorylated p38-mitogen-activated protein kinase)及p-AKT(phosphorylated/protein kinase B)的水平变化。结果显示,C2C12细胞呈现出α-肾上腺素和β-肾上腺素能受体表达的特征。分化培养诱导下,C2C12细胞随着时间的延长,分化成肌管的数量逐渐增多,在第8 d达峰值。单次一次给予10^(–5) mol/L ISO没有连续单次给予ISO抑制C2C12细胞分化成骨骼肌细胞显著,且连续单次给予ISO随着其浓度的增加,C2C12细胞分化为肌管细胞核融合数目逐渐减少并在ISO浓度为10^(–5) mol/L时最显著。与此同时,随着连续单次给予不同浓度(10^(–8) mol/L、10^(–7) mol/L、10^(–6) mol/L、10^(–5) mol/L)的ISO,MYH和Myo G的表达水平呈现随着浓度增加而逐渐降低的特征,而且p-p38MAPK及p-AKT的水平也呈连续单次给予ISO浓度增加而降低的趋势,在ISO浓度为10^(–5) mol/L时降低最显著。该研究提示,连续单次给予ISO显著抑制C2C12细胞分化为成熟骨骼肌细胞,且与p-p38MAPK、p-AKT及Myo G水平的降低密切相关,从而为交感神经长期过度兴奋所伴随的肌萎缩提供新的研究模型和治疗靶点。 展开更多
关键词 异丙肾上腺素 交感神经过度兴奋 骨骼肌萎缩 c2c12细胞 分化
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地鳖肽对C2C12细胞氧化损伤的保护作用 被引量：5
10
作者 徐小艾 陈靖阳 +2 位作者 黄山 孙英健 沈红 《北京农学院学报》 2020年第1期99-105,共7页
【目的】探讨地鳖肽对过氧化氢诱导的C2C12细胞氧化损伤的保护作用。【方法】体外培养C2C12细胞,H2O2处理细胞造成氧化损伤,叔丁基对苯二酚及地鳖肽处理细胞24h;采用MTT、分光光度计、免疫荧光、Western Blot、RT-PCR法分别检测细胞活... 【目的】探讨地鳖肽对过氧化氢诱导的C2C12细胞氧化损伤的保护作用。【方法】体外培养C2C12细胞,H2O2处理细胞造成氧化损伤,叔丁基对苯二酚及地鳖肽处理细胞24h;采用MTT、分光光度计、免疫荧光、Western Blot、RT-PCR法分别检测细胞活力、抗氧化酶活力及过氧化物、Nrf2核移位及相关因子基因表达。【结果】与对照组相比,H2O2组对C2C12细胞的损伤明显;与H2O2组相比,地鳖肽能够显著缓解C2C12细胞活力的降低,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活力及其基因表达,抑制脂质过氧化物MDA的产生,地鳖肽促进Nrf2核移位以及Nrf2和HO-1蛋白表达,地鳖肽促进抗氧化通路关键因子Nrf2及其下游抗氧化酶基因表达上调;地鳖肽作用效果与叔丁基对苯二酚一致。【结论】在细胞氧化损伤状态下,地鳖肽可能通过激活Nrf2-ARE信号通路,提高抗氧化酶活力及上调其基因表达实现其抗氧化保护作用。 展开更多
关键词 地鳖肽 c2c12细胞 氧化应激 Nrf2-ARE信号通路
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miR-376b-3p可促进Runx2诱导C2C12细胞进行成骨细胞早期分化 被引量：5
11
作者 耿倩倩 余守和 +2 位作者 张越 王红梅 孙奋勇 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5108-5112,共5页
背景:转录因子Runx2是调节成骨分化及骨发育的关键因子,过表达Runx2可诱导间质细胞C2C12分化为成骨细胞,但相关诱导分化分子机制并不清楚。目的:分析miR-376家族成员在Runx2诱导C2C12细胞进行成骨分化过程中的作用。方法:利用可诱导表达... 背景:转录因子Runx2是调节成骨分化及骨发育的关键因子,过表达Runx2可诱导间质细胞C2C12分化为成骨细胞,但相关诱导分化分子机制并不清楚。目的:分析miR-376家族成员在Runx2诱导C2C12细胞进行成骨分化过程中的作用。方法:利用可诱导表达Runx2的细胞系C2C12/Runx2Dox,在不同的时间点通过荧光定量PCR方法检测miR-376家族成员表达情况。C2C12/Runx2Dox细胞转染miR-376b-3p mimic后利用荧光定量PCR检测成骨细胞标记基因碱性磷酸酶及骨钙素表达情况,并利用碱性磷酸酶染色法分析碱性磷酸酶活性。利用在线工具miRanda,miRWalk与TargetScan共同预测miR-376b-3p潜在靶基因。利用DAVID Bioinformatics Resources数据库对得到的靶基因进行功能聚类分析。结果与结论:在Runx2诱导C2C12进行成骨分化过程中miR-376b-3p表达显著增加,其他成员表达无明显变化。转染miR-376b-3pmimic可上调碱性磷酸酶表达,但对骨钙素表达无影响;转染miR-376b-3pmimic也可增加碱性磷酸酶活性。靶基因功能聚类分析结果表明miR-376b-3p可参与机体骨骼发育过程,表明其在成骨分化过程中的作用。研究结果表明,Runx2通过上调miR-376b-3p的方式对与成骨分化相关基因的表达进行调节,以促进C2C12进行成骨细胞的早期分化。 展开更多
关键词 组织构建 骨组织构建 Runx2c2c12细胞 miR-376b-3p 成骨分化 强力霉素 国家自然科学基金
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CAV3介导骨骼肌和心肌细胞的IMGU和NIMGU
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作者 周彩霞 吕倩 +5 位作者 卜晓阳 田一夫 冼晶 黄媛恒 杨立会 黄勤 《海南医学院学报》 CAS 2023年第8期561-567,共7页
目的:胰岛素介导的葡萄糖摄取(insulin-mediated glucose uptake,IMGU)在骨骼肌和心肌细胞至关重要,但非胰岛素介导的葡萄糖摄取(non-insulin-mediated glucose uptake,NIMGU)也不容忽视。本文通过siRNA(small interference RNA, siRNA... 目的:胰岛素介导的葡萄糖摄取(insulin-mediated glucose uptake,IMGU)在骨骼肌和心肌细胞至关重要,但非胰岛素介导的葡萄糖摄取(non-insulin-mediated glucose uptake,NIMGU)也不容忽视。本文通过siRNA(small interference RNA, siRNA)下调微囊蛋白-3(caveolin-3, CAV3)蛋白表达,观察CAV3是否参与IMGU及NIMGU的生理过程。方法:分别设计合成针对骨骼肌C2C12细胞和心肌H9c2细胞的CAV3 siRNA并转染,C2C12细胞和H9c2细胞分别在有胰岛素和无胰岛素的DMEM培养基中培养,采用激光共聚焦显微镜观测细胞转染效果,Western blot检测CAV3、葡萄糖转运体4(Glucose transporter 4,GLUT4)蛋白表达,生化试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取率。结果:转染CAV3 siRNA后成功下调C2C12和H9c2细胞CAV3蛋白的表达。在无胰岛素刺激时,C2C12细胞转染48 h后,GLUT4表达降低(P<0.01),葡萄糖摄取减少(P<0.05),H9c2细胞转染48 h后,GLUT4表达降低(P<0.05),葡萄糖摄取减少(P<0.01)。有胰岛素刺激时,C2C12细胞转染48 h后,GLUT4表达降低(P<0.01),葡萄糖摄取减少(P<0.01),H9c2细胞转染48 h后,GLUT4的下调无统计学意义,葡萄糖摄取减少(P<0.01)。结论:C2C12细胞和H9c2细胞存在IMGU和NIMGU的这两种不同状态。在胰岛素刺激的以及无胰岛素刺激的安静状态下,都通过CAV3调节GLUT4变化而影响细胞摄取葡萄糖。 展开更多
关键词 caveolin-3 GLUT4 c2c12细胞 H9c2细胞 葡萄糖摄取
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辣木异硫氰酸酯改善C2C12肌管细胞胰岛素抵抗 被引量：1
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作者 毛家英 白玉英 +2 位作者 彭麟杰 解静 田洋 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第1期32-40,共9页
目的:建立C2C12肌管细胞胰岛素抵抗(C2C12-IR)模型,探讨辣木异硫氰酸酯(MIC-1)对C2C12肌管细胞胰岛素抵抗的影响。方法:利用棕榈酸(PA)诱导C2C12肌管细胞,建立稳定的C2C12-IR模型,并用不同浓度MIC-1(0,2,4,8,16μmol/L)处理细胞16 h。采... 目的:建立C2C12肌管细胞胰岛素抵抗(C2C12-IR)模型,探讨辣木异硫氰酸酯(MIC-1)对C2C12肌管细胞胰岛素抵抗的影响。方法:利用棕榈酸(PA)诱导C2C12肌管细胞,建立稳定的C2C12-IR模型,并用不同浓度MIC-1(0,2,4,8,16μmol/L)处理细胞16 h。采用MTT法检测C2C12-IR细胞存活率,并观察MIC-1对C2C12-IR细胞葡萄糖代谢的影响;检测细胞氧化损伤情况,包括一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH);采用Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中相关蛋白表达变化情况。结果:确定了C2C12-IR模型最佳建模条件,即用0.5 mmol/L PA处理C2C12肌管细胞16 h;与C2C12-IR组相比,MIC-1呈剂量依赖性方式,显著增加了C2C12-IR细胞葡萄糖消耗量和糖原含量;MIC-1显著降低了C2C12-IR细胞中MDA和NO水平,显著增加了GSH水平;此外,MIC-1显著增加了丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(PDK1)、磷酸化AKT和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平。结论:MIC-1通过抑制氧化应激改善胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 辣木异硫氰酸酯 c2c12细胞 胰岛素抵抗 氧化应激 胰岛素信号通路
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逆转录病毒载体介导的RNA干扰稳定抑制肌肉生长抑制素GDF-8的表达 被引量：4
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作者 刘超武 杨倬 +1 位作者 赵斌 刘长梅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期250-255,共6页
为将肌肉生长抑制素的干扰序列表达盒hU6-siGDF-8有效导入肌成纤维细胞C2C12中,以pAV-hU6+27载体为基础构建逆转录病毒载体pXSN-hU6-siGDF-8,并使之与pVSV-G质粒共转染GP-293细胞,用包装出的病毒粒子感染宿主细胞C2C12,G418筛选稳定整... 为将肌肉生长抑制素的干扰序列表达盒hU6-siGDF-8有效导入肌成纤维细胞C2C12中,以pAV-hU6+27载体为基础构建逆转录病毒载体pXSN-hU6-siGDF-8,并使之与pVSV-G质粒共转染GP-293细胞,用包装出的病毒粒子感染宿主细胞C2C12,G418筛选稳定整合逆转录病毒的抗性细胞库。2周后,Western Blotting和Real-Time PCR分析结果显示,细胞内源性的GDF-8基因的表达得到了有效的抑制;MTT法和细胞流式仪分析表明,G418抗性细胞得到了更有效的增殖,并且G_0/G_1期细胞数量减少了13.7%,S期细胞数量增加了14.9%。因此,逆转录病毒载体的RNA干扰系统可以稳定抑制GDF-8基因表达,它将成为治疗肌肉萎缩疾病的一个强有力的工具。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素GDF-8 c2c12细胞系 逆转录病毒 SHRNA
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Runx2通过抑制细胞巨自噬以诱导C2C12细胞向成骨细胞分化 被引量：4
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作者 余守和 洪岸 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期481-487,共7页
目的:探讨细胞巨自噬与Runx2诱导C2C12细胞成骨分化的关系。方法:在强力霉素(doxycyc-line,Dox)诱导Runx2表达的细胞系C2C12/Runx2Dox中进行研究。Dox(10 mg/L)处理0 d、1 d、3 d及6 d后,real-time qPCR检测LC3b、Beclin-1、p62和LAMP-... 目的:探讨细胞巨自噬与Runx2诱导C2C12细胞成骨分化的关系。方法:在强力霉素(doxycyc-line,Dox)诱导Runx2表达的细胞系C2C12/Runx2Dox中进行研究。Dox(10 mg/L)处理0 d、1 d、3 d及6 d后,real-time qPCR检测LC3b、Beclin-1、p62和LAMP-2表达情况,Western blotting分析LC3-I/LC3-Ⅱ比值。设置不同的3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rap)浓度,Dox处理14 d后分析碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性。用3-MA(5 mmol/L)或Rap(10μmol/L)与Dox共同处理1 d、3 d及6 d后检测ALP及骨钙素(osteocalcin,OC)表达情况。结果:(1)C2C12细胞向成骨分化时,LC3b与Beclin-1显著下调,p62与LAMP-2无明显变化;(2)LC3-I向LC3-Ⅱ转换的过程被抑制;(3)3-MA(5 mmol/L)可增强ALP活性,而Rap(10μmol/L)则抑制其活性;(4)3-MA可上调ALP及OC表达,Rap则下调二者表达。结论:Runx2通过下调LC3和Beclin-1、抑制LC3-I向LC3-Ⅱ转换的方式阻碍自噬体形成,以诱导C2C12细胞分化为成骨细胞。 展开更多
关键词 RUNX2 c2c12细胞 成骨分化 巨自噬
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基于C2C12细胞的2,7-二溴咔唑肌发育毒性效应
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作者 郝迪 谢群慧 +5 位作者 杨广磊 陈旸升 李云平 夏英杰 徐丽 赵斌 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期293-303,共11页
肌肉有执行机体运动和能量代谢的重要作用。据报道二噁英暴露可严重影响肌肉发育。但目前与多氯代二苯并呋喃(polychlorinated dibenzofurans,PCDFs)结构相似的卤代咔唑(polyhalogenated carbazoles,PHCZs)的肌肉发育毒性尚不明确。本... 肌肉有执行机体运动和能量代谢的重要作用。据报道二噁英暴露可严重影响肌肉发育。但目前与多氯代二苯并呋喃(polychlorinated dibenzofurans,PCDFs)结构相似的卤代咔唑(polyhalogenated carbazoles,PHCZs)的肌肉发育毒性尚不明确。本研究旨在探究2,7-二溴咔唑(2,7-dibromo-9H-carbazole,27-BCZ)的肌肉发育毒性效应。应用C2C12细胞成肌分化模型,在细胞水平上通过苏木素-伊红染色法检测融合指数和单条肌管内细胞核数2个指标评价细胞形态的变化,在分子水平上通过qRT-PCR来测定肌细胞分化调节分子和分化标志物的基因表达,探究27-BCZ对肌发育的影响及其分子机制。细胞水平实验结果显示,与对照组相比,27-BCZ 10^(-7) mol·L^(-1)暴露3 d后,肌管数量减少、形态变细变短,且分布杂乱;单条肌管内细胞核数减少、参与肌管融合的细胞核比例(融合指数)降低;27-BCZ 10^(-9)~10^(-7) mol·L^(-1)暴露6 d后,虽然单条肌管内细胞核数没有显著变化,但融合指数显著降低。分子水平实验结果显示,27-BCZ 10^(-7) mol·L^(-1)在分化末期对肌纤维结构蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的2个编码基因Myh3和Myh4的表达具有显著抑制作用。另外,27-BCZ还影响肌生成调节因子家族(myogenic regulatory factors,MRFs)基因的表达,包括显著抑制分化早期调节因子MyoD和末期调节因子Mrf4的mRNA表达,显著促进Myogenin mRNA表达。此外,27-BCZ暴露能显著促进芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)信号通路下游基因cyp1a1和cyp1b1的mRNA表达,提示27-BCZ在肌分化模型中具有类二噁英活性。总结上述结果,我们发现,在肌生成过程中,27-BCZ表现出与二噁英类似的AhR活性和肌发育干扰效应,为27-BCZ肌肉发育相关健康效应和AhR相关毒理机制研究提供了基础数据。 展开更多
关键词 2 7-二溴咔唑 c2c12小鼠成肌细胞 肌肉发育毒性 肌生成调节因子家族
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地鳖肽提取物对H_(2)O_(2)刺激C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响 被引量：3
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作者 陈靖阳 徐小艾 +2 位作者 王婉 黄山 沈红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期551-557,共7页
探究地鳖肽提取物(Eupofyphaga sinensis peptide extract,ESP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响。体外培养C2C12细胞其中培养基分别添加ESP和叔丁基对苯二酚(TBHQ)处理细胞诱导其分化融合9 d,除对照组... 探究地鳖肽提取物(Eupofyphaga sinensis peptide extract,ESP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响。体外培养C2C12细胞其中培养基分别添加ESP和叔丁基对苯二酚(TBHQ)处理细胞诱导其分化融合9 d,除对照组外所有组细胞在试验结束前8 h培养基添加H_(2)O_(2)处理细胞;采用RT-qPCR和免疫荧光法检测肌调节因子基因和蛋白表达,细胞染色和显微镜观察细胞形态。对照组可见诱导分化融合9 d的C2C12细胞出现成熟多核肌管,随着细胞培养时间延长肌调节因子MyoG基因表达增加;与对照组比较,H_(2)O_(2)组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)基因表达显著降低,在细胞分化不同时间C2C12细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)mRNA表达显著下调,表达MyoG细胞阳性率和肌管融合率比对照组明显降低;与H_(2)O_(2)组比较,ESP组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)和细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)基因表达水平显著增加,表达MyoG细胞阳性率明显增加,其中细胞染色与镜下观察结果趋势一致。ESP能影响氧化应激C2C12细胞肌调节因子(Pax7、Myf5、MyoD、MyoG、Myf6)的基因表达,提高细胞增殖和分化融合能力,其机制可能与PGC-1α的激活有关。 展开更多
关键词 地鳖肽提取物 c2c12细胞 增殖及分化融合 肌调节因子
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小鼠骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型的建立和验证 被引量：4
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作者 罗维 艾磊 +2 位作者 李显 王博发 周越 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1721-1728,共8页
目的:建立稳定可重复的骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型,促进胰岛素抵抗病理机制的探索及药物的研发与筛选。方法:采用小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12为研究对象,分别以正常分化液及含40和60 mmol/L葡萄糖的分化液诱导分化,每天用相差显微镜观... 目的:建立稳定可重复的骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型,促进胰岛素抵抗病理机制的探索及药物的研发与筛选。方法:采用小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12为研究对象,分别以正常分化液及含40和60 mmol/L葡萄糖的分化液诱导分化,每天用相差显微镜观察不同浓度葡萄糖处理对细胞汇聚、融合和形成多核肌管的影响;分别在分化1、3、5和7 d后应用2-NBDG法检测不同处理对细胞基础糖摄取和胰岛素刺激糖摄取的影响;在分化5 d和7 d后应用Western blot法检测不同干预对葡萄糖转运子4(glucose transporter 4,GLUT4)蛋白表达的影响;分化5 d后应用免疫荧光组化法检测不同干预对GLUT4蛋白分布的影响。结果:形态学结果显示,经60 mmol/L葡萄糖(高糖)处理3 d后明显抑制C2C12细胞的生长分化;葡萄糖摄取结果表明高糖处理5 d和7 d后均明显抑制C2C12的基础糖摄取和胰岛素刺激的糖摄取( P <0.01),且处理5 d后胰岛素刺激的糖摄取与基础糖摄取的差异无统计学显著性( P >0.05);Western blot检测结果表明高糖处理5 d和7 d后,胰岛素刺激的GLUT4表达与基础GLUT4表达的差异无统计学显著性( P >0.05),而对照组差异显著( P <0.05);免疫荧光组化检测结果表明高糖处理5 d后明显减少C2C12细胞胞膜上GLUT4蛋白分布水平( P <0.01)。40 mmol/L葡萄糖处理也在一定程度上发挥作用,但效果不如60 mmol/L葡萄糖明显和稳定。结论:通过高糖刺激可成功构建较为稳定的小鼠骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型,以60 mmol/L葡萄糖刺激5 d效果最好,通过形态学观察并检测基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取能力和GLUT4蛋白表达与分布能较好地评价骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗水平。 展开更多
关键词 c2c12细胞 胰岛素抵抗 模型建立 葡萄糖转运子4
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绞股蓝皂苷对C2C12细胞成肌分化的影响
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作者 唐子佳 东智卓玛 +7 位作者 吴建军 林适 杨彬彬 陈桐莹 黄佳纯 林燕平 黄幸儒 黄宏兴 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1405-1408,1452,共5页
目的研究发现,绞股蓝皂苷不仅具有抗炎、抗衰老等多重作用,而且还能促进成骨细胞增殖分化,保护其氧化应激损伤;本研究拟探讨绞股蓝皂苷对C2C12细胞成肌分化的影响。方法完全培养基培养C2C12细胞,细胞增殖贴壁后用含有不同浓度绞股蓝皂... 目的研究发现,绞股蓝皂苷不仅具有抗炎、抗衰老等多重作用,而且还能促进成骨细胞增殖分化,保护其氧化应激损伤;本研究拟探讨绞股蓝皂苷对C2C12细胞成肌分化的影响。方法完全培养基培养C2C12细胞,细胞增殖贴壁后用含有不同浓度绞股蓝皂苷的分化培养基诱导细胞分化,每个浓度均设置3个复孔;第5天观察细胞分化的形态、计算细胞的分化活力,Western blot检测相关成肌标志物MYF5和MyoD1的表达,免疫荧光检测MyoD1的表达,Image J软件计算肌管融合指数。结果诱导C2C12细胞分化的第5天可见细胞分化为典型的肌管形态,10 mg/L和5 mg/L的绞股蓝皂苷浓度干预下的MYF5和MyoD1的表达较为显著,且肌管融合指数更高,相较于对照组差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论绞股蓝皂苷可促进C2C12细胞的成肌分化,以10 mg/L和5 mg/L的浓度较好。 展开更多
关键词 绞股蓝皂苷 c2c12细胞 成肌分化
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肌肉增强子因子2对猪肌肉生长抑制素启动子活性的调节 被引量：3
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作者 李佳 邓捷 +2 位作者 张军林 成德 王华岩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期918-926,共9页
肌肉生长抑制素(Myostatin,Mstn)是转化生长因子-β超家族的成员,在哺乳动物的骨骼肌生长和分化过程中起负调控作用,其转录调控受到多个基因的影响,其中肌肉增强子因子2(MEF2)是重要的调控因子之一。因此,对猪Mstn启动子上MEF2位点及其... 肌肉生长抑制素(Myostatin,Mstn)是转化生长因子-β超家族的成员,在哺乳动物的骨骼肌生长和分化过程中起负调控作用,其转录调控受到多个基因的影响,其中肌肉增强子因子2(MEF2)是重要的调控因子之一。因此,对猪Mstn启动子上MEF2位点及其作用方式的探讨具有重要意义。首先,通过PCR方法扩增了猪Mstn基因上游1 969 kb的启动子序列,利用生物信息学方法分析该序列包含3个MEF2的结合位点;其次,采用逐步删除的方法获得5个长度不等的启动子,用荧光素酶报告系统评估了它们在小鼠成肌细胞C2C12中的活性。其次,转入含有MEF2结合位点的启动子片段和MEF2C表达载体,可以显著增强启动子活性2～6倍,高表达另一亚型MEF2A则启动子活性没有明显改变。最后,转入MEF2C表达载体,用实时定量PCR和Western blotting方法检测Mstn的转录和蛋白水平的变化,结果发现mRNA升高了2～4倍;在肌管细胞中,蛋白翻译水平也有显著升高。这些结果显示,MEF2C可以通过激活Mstn参与猪肌肉生长和发育阶段的调节。研究为Mstn基因的转录调控提供了有效的作用靶点和效应分子,为进一步探讨Mstn的功能调控提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 猪肌肉生长抑制素 转录调控 启动子活性 肌肉增强子因子2 c2c12细胞
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