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博尔纳病病毒自然感染状况及其核苷酸序列 被引量：8
1
作者 马培林 张凤民 +4 位作者 李桂梅 杨爱英 李懿宏 谷鸿喜 生田和良 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期408-410,共3页
目的　探讨中国黑龙江地区正常人和马博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus ,BDV)自然感染状况 ,进而比较分析中国自然感染的BDV与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株及标准株He/80在种系发生中的关系。方法　用巢式RT -PCR方法检测中... 目的　探讨中国黑龙江地区正常人和马博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus ,BDV)自然感染状况 ,进而比较分析中国自然感染的BDV与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株及标准株He/80在种系发生中的关系。方法　用巢式RT -PCR方法检测中国黑龙江地区正常人和马匹单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBM Cs)中BDV - p2 4基因片段 ,分别随机选取每种样本部分阳性扩增产物进行克隆测序 ,测序结果与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株以及标准株He/80进行序列比较。结果　 76例正常人、34匹马的标本中BDV - p2 4基因的阳性检出率分别为 9 2 % (7/76 )和 2 3 5 % (8/34)。序列分析结果表明 ,中国黑龙江地区正常人和马感染的BDV的核苷酸序列除与一个新亚型株No/98差别较大 (大于 15 % )外 ,与其他国外精神分裂症患者和马源BDV分离株同源性均大于 94 % ,与标准株He/80同源性达到 98%以上。结论　证实黑龙江地区正常人和马中存在BDV的自然感染。该地区感染的BDV与标准株He/80存在高度的同源性。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 巢式RT-PCR 人 马 精神分裂症
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博尔纳病病毒磷蛋白在PC-12细胞内的稳定表达及对其增殖的影响 被引量：3
2
作者 余建萍 徐鸣明 +3 位作者 彭丹 曾志磊 张英英 谢鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期123-127,共5页
【目的】建立博尔纳病病毒磷蛋白在神经源性PC-12细胞内的稳定表达体系,初步探讨博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长是否有影响。【方法】培养PC-12细胞,用阳离子脂质体的方法将带有博尔纳病病毒磷蛋白基因的表达质粒转染到细胞内进... 【目的】建立博尔纳病病毒磷蛋白在神经源性PC-12细胞内的稳定表达体系,初步探讨博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长是否有影响。【方法】培养PC-12细胞,用阳离子脂质体的方法将带有博尔纳病病毒磷蛋白基因的表达质粒转染到细胞内进行稳定表达,用荧光显微镜和RT-PCR的方法检测细胞内磷蛋白的表达,用MTT方法检测磷蛋白对细胞生长的影响。【结果】转染细胞经培养10代后仍然表达目的蛋白,成功建立稳定表达体系。MTT检测显示博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,其生长明显滞后,但粘附能力增加。【结论】通过本文建立的体系能在PC-12细胞内稳定表达博尔纳病病毒磷蛋白,该体系可用于进一步深入研究博尔纳病病毒磷蛋白的作用机制,进而为研究博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的机制提供基础。此外本文通过检测细胞的增殖活性发现博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,可能是博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的重要机制之一。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 磷蛋白 PC-12细胞 增殖
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抗博尔纳病病毒磷蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2
3
作者 马丽华 黄荣忠 +6 位作者 张亮 徐晓艳 曾粒 刘钊 邓婧 李文娟 谢鹏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期244-247,共4页
目的制备抗博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)重组磷蛋白(p24)多克隆抗体,并对其进行鉴定,为BDV血清免疫学检测方法的建立奠定基础。方法用本课题组前期制备的重组BDVp24蛋白经背腿部多点皮下注射免疫新西兰大白兔,共免疫4次,末次... 目的制备抗博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)重组磷蛋白(p24)多克隆抗体,并对其进行鉴定,为BDV血清免疫学检测方法的建立奠定基础。方法用本课题组前期制备的重组BDVp24蛋白经背腿部多点皮下注射免疫新西兰大白兔,共免疫4次,末次免疫后第7天采血,分离血清,采用抗原亲和纯化法纯化抗血清,ELISA法测定抗血清效价;Western blot和免疫荧光鉴定其特异性。结果制备的抗BDV p24多克隆抗体的纯度为98%,ELISA效价达1∶128 000,该抗体与重组p24蛋白和BDV感染OL细胞表达的p24蛋白均能发生特异性反应。结论成功制备了灵敏性和特异性良好的抗BDV p24多克隆抗体,为研发相关的诊断试剂和研究该病毒的感染发病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 磷蛋白类 多克隆抗体
原文传递
抗博尔纳病病毒磷蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1
4
作者 马丽华 邓榕 +2 位作者 徐晓艳 杨宏静 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期779-783,共5页
目的以重组的博尔纳病病毒(BDV)磷蛋白(p24)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。方法以纯化后的重组BDVp24免疫小鼠,将骨髓瘤细胞与其脾细胞进行融合,经ELISA法筛选出分泌抗p24单抗的细胞株,并对其进行克隆与亚克隆培养,将最终获... 目的以重组的博尔纳病病毒(BDV)磷蛋白(p24)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。方法以纯化后的重组BDVp24免疫小鼠,将骨髓瘤细胞与其脾细胞进行融合,经ELISA法筛选出分泌抗p24单抗的细胞株,并对其进行克隆与亚克隆培养,将最终获得的其中2株细胞株分别注入小鼠腹腔制备单抗,经亲和纯化法纯化后,采用ELISA法测定效价,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光鉴定其特异性。结果建立了2株稳定分泌抗p24单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚类均为IgG1型。纯化后的腹水抗p24单抗纯度为98%和93%,ELISA效价在1∶81 000以上,该抗体均能识别重组p24蛋白和BDV感染人类少突胶质细胞(Oligodendroglia cell,OL细胞)所表达的p24蛋白。结论成功制备了灵敏性高、特异性好的抗BDVp24单抗,为博尔纳病病毒诊断方法的研制及感染机理的研讨提供依据。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 磷蛋白类 单克隆抗体
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Borna病病毒与淋巴瘤关系的初步研究
5
作者 杨泽松 陈建斌 +4 位作者 牟君 谢鹏 赵立波 张小东 李勇 《中国肿瘤》 CAS 2007年第10期839-841,共3页
[目的]探讨Borna病病毒(BDV)感染与人类淋巴瘤的关系。[方法]采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链式反应(FQ-nRT-PCR),检测了经病理学诊断的非霍奇金淋巴瘤(NHL)14例、霍奇金淋巴瘤(HD)6例及健康人20例的外周血单个核细胞(PBMC)中BDV p24... [目的]探讨Borna病病毒(BDV)感染与人类淋巴瘤的关系。[方法]采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链式反应(FQ-nRT-PCR),检测了经病理学诊断的非霍奇金淋巴瘤(NHL)14例、霍奇金淋巴瘤(HD)6例及健康人20例的外周血单个核细胞(PBMC)中BDV p24基因片段。[结果]20例淋巴瘤患者与20例健康对照者的BDV p24基因片段检测均为阴性。[结论]淋巴瘤与BDV感染无明显相关性。 展开更多
关键词 淋巴瘤 borna病病毒 聚合酶链反应
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博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组质粒的构建及鉴定
6
作者 翟爱霞 答嵘 +3 位作者 宋武琦 李小光 李玉军 张凤民 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期4-6,共3页
构建博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒。通过PCR方法扩增获得博尔纳病痛毒p24基因的完整序列,将此片段定向克隆到pEGFP-N1载体多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。... 构建博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒。通过PCR方法扩增获得博尔纳病痛毒p24基因的完整序列,将此片段定向克隆到pEGFP-N1载体多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。PCR及核酸序列测定证明博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒构建成功。构建的重组质粒将为研究博尔纳病病毒p24基因在真核细胞中的功能和作用提供实验依据。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 基因重组 PCR 序列分析
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博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化
7
作者 金戈 张亮 +6 位作者 徐晓艳 黄荣忠 马丽华 邓婧 李文娟 房亮 谢鹏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第10期1148-1151,共4页
目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化... 目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 磷蛋白类 原核细胞 基因表达 纯化
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BDV核蛋白在少突胶质细胞内表达定位的基础研究
8
作者 王振海 刘建 谢鹏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期816-820,共5页
目的 研究博尔纳病病毒核蛋白在转染的少突胶质细胞（oligodendroglial cell,OL）内的表达定位及其对细胞活性的影响.方法 应用RT-PCR检测转染细胞内BDVp40的基因片段,应用激光共聚焦显微镜和Western blot的方法观察核蛋白在细胞内的表... 目的 研究博尔纳病病毒核蛋白在转染的少突胶质细胞（oligodendroglial cell,OL）内的表达定位及其对细胞活性的影响.方法 应用RT-PCR检测转染细胞内BDVp40的基因片段,应用激光共聚焦显微镜和Western blot的方法观察核蛋白在细胞内的表达定位.应用MTT方法观察核蛋白对OL活性的影响.结果 在转染BDVp40基因片段的荧光表达质粒的OL内检测到BDVp40的基因片段;激光共聚焦显微镜提示核蛋白存在于细胞质和细胞膜中;Western blot的结果显示在细胞膜蛋白中存在核蛋白,而在细胞质中未检测到该蛋白;MTT法检测BDV核蛋白对OL活性具有明显的抑制作用.结论 通过研究转染的OL内稳定表达了BDV核蛋白,并将其定位在细胞的结构蛋白中,尤其在细胞膜中含量更为丰富,说明其可能在细胞的信号转导或介导病毒感染人胞过程中发挥关键作用.BDV核蛋白对OL的活性有抑制作用,这可能是BDV导致中枢神经系统损伤的机制之一. 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 核蛋白 少突胶质细胞
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博尔纳病病毒感染与神经胶质瘤相关性研究
9
作者 李均辉 《中国校医》 2013年第4期303-304,共2页
目的探讨博尔纳病病毒(BDV)感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用Western-blot方法,对23例神经胶质瘤患者和23例脑外伤患者血清中BDV-p24/p40特异性抗体进行检测。结果 23例神经胶质瘤患者血清中BDV-p24/p40抗体阳性4例,阳性率为17... 目的探讨博尔纳病病毒(BDV)感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用Western-blot方法,对23例神经胶质瘤患者和23例脑外伤患者血清中BDV-p24/p40特异性抗体进行检测。结果 23例神经胶质瘤患者血清中BDV-p24/p40抗体阳性4例,阳性率为17.4%;脑外伤患者血清标本中无BDV-p40抗体检出,阳性率为0%。结论神经胶质瘤患者血清中存在博尔纳病病毒的感染。 展开更多
关键词 神经胶质瘤/病因学 borna病病毒/免疫 抗体 病毒/血液 印迹法 Far-Western
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