基于MobileNetV2与LBP特征融合的婴幼儿表情识别算法 被引量：6

1

作者 邓源 施一萍 +2 位作者 江悦莹 朱亚梅 刘瑾 《电子科技》 2022年第8期47-52,共6页

针对婴幼儿表情识别率低、特征复杂提取不充分等问题,文中提出一种基于MobileNetV2与LBP双通道特征融合的婴幼儿表情识别算法。第1条通道使用改进后的MobileNetV2网络,可快速、准确地提取出人脸表情全局特征。第2条通道对原始输入图进... 针对婴幼儿表情识别率低、特征复杂提取不充分等问题,文中提出一种基于MobileNetV2与LBP双通道特征融合的婴幼儿表情识别算法。第1条通道使用改进后的MobileNetV2网络,可快速、准确地提取出人脸表情全局特征。第2条通道对原始输入图进行分块,利用图像信息熵构造出权值,提取出分块加权LBP直方图特征,突出了表情信息丰富的区域。通过融合双通道模型的输出向量来提升特征表达能力,并采用支持向量机替代Softmax层进行表情分类。实验表明,使用融合特征比单一特征具有更好的分类效果,并且在自建的婴幼儿表情数据集中的表情识别准确率可达到85.71%。 展开更多

关键词 卷积神经网络 局部二值模式 特征融合 双通道模型 表情识别 图像信息熵 婴幼儿 支持向量机

下载PDF 职称材料

FMDV结构基因P1的克隆与植物双元表达载体的构建 被引量：3

2

作者 王宝琴 张永光 +3 位作者 王小龙 潘丽 王文秀 王永录 《畜牧与兽医》 北大核心 2005年第9期3-5,共3页

通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构基因P1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将P1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pB in438,构建重组中间表达载体pB inP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pB inFMDV... 通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构基因P1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将P1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pB in438,构建重组中间表达载体pB inP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pB inFMDV-P1。结果表明:P1基因为2 208 bp。重组中间表达载体pB inP1经BamHⅠ/SalⅠ双酶切、PCR扩增和序列测定,表明P1基因、Kozak序列等已插入pB inP1。在含50mg/L卡那霉素、25 mg/L链霉素和50 mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行P1基因的PCR检测,证明植物双元表达载体pB inFMDV-P1构建正确。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 P1基因 克隆 三亲融合 双元表达载体 根癌农杆菌

下载PDF 职称材料

豌豆早期结瘤素基因ENOD12A的克隆及与PsLectin基因双元表达载体的构建 被引量：4

3

作者 王洪伟 张兴国 +3 位作者 黎林 孙士群 秦淑丽 苏承刚 《西南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期202-205,共4页

采用PrimStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsENOD12A.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的序列仅相差1个碱基,但推导的氨基酸序列没有改变.将PsENOD12A基因和豌豆凝集素基因psl重组进了双元表... 采用PrimStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsENOD12A.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的序列仅相差1个碱基,但推导的氨基酸序列没有改变.将PsENOD12A基因和豌豆凝集素基因psl重组进了双元表达载体. 展开更多

关键词 豌豆 早期结瘤素基因 凝集素基因 双元表达载体

下载PDF 职称材料

蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究 被引量：3

4

作者 陈永胜 王永佳 +3 位作者 王莹 黄凤兰 李国瑞 王文跃 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-42,共4页

通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡... 通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。 展开更多

关键词 蓖麻毒蛋白 RNAI RNAi表达载体 遗传转化

下载PDF 职称材料

MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖及分化的影响 被引量：3

5

作者 吴丹 胡兰 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期38-42,共5页

为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞... 为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。 展开更多

关键词 MSTN基因 双元表达载体 成肌细胞 增殖分化

下载PDF 职称材料

豌豆早期结瘤素基因PsSYM10的克隆及其表达载体的构建 被引量：3

6

作者 谢玉会 田婷婷 +2 位作者 黄国栋 苏承刚 张兴国 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期69-72,共4页

采用Pri mStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsSYM10.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的同源基因在碱基和氨基酸序列上的相似性分别为98.6%和99.7%.将PsSYM10基因与结瘤相关基因PsENOD12、凝... 采用Pri mStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsSYM10.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的同源基因在碱基和氨基酸序列上的相似性分别为98.6%和99.7%.将PsSYM10基因与结瘤相关基因PsENOD12、凝集素基因PsLectin串联组合,构建成了双元表达载体. 展开更多

关键词 豌豆 早期结瘤素基因PsSYM10 PsENOD12A 凝集素基因PsLectin双元表达栽体

下载PDF 职称材料

抗除草剂bar基因植物表达载体的构建与抗性功能的检测 被引量：2

7

作者 孟灵真 陈全家 +3 位作者 杨婷 阿依夏木.古丽 王希东 曲延英 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第4期265-268,共4页

根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的... 根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的质粒并与pBI121-bar重组,重组质粒命名为pBI121-bar/Bt。重组质粒导入农杆菌LBA4404工程菌中,转化新海24号棉花胚性愈伤组织。PPT抗性实验证明,构建的pBI121-bar/Bt载体获得抗除草剂抗性,并筛选出PPT临界筛选浓度为3.0mg/L。 展开更多

关键词 抗除草剂 抗虫 双价植物表达载体 棉花 PPT头孢霉素

下载PDF 职称材料

拟南芥 CPK10双元 TAP 载体的构建及原生质体表达 被引量：2

8

作者 梁芸 魏凤菊 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期43-46,共4页

为了研究拟南芥CPK10发挥功能的分子机理,通过PCR扩增克隆了CPK10基因,将该基因连接到带有FLAG和HA标签的双元串联亲和层析载体上,构建成p CM1307-3FLAG-3HA-CPK10植物表达载体,进而通过PEG介导转化拟南芥野生型原生质体,表达约10 h,通... 为了研究拟南芥CPK10发挥功能的分子机理,通过PCR扩增克隆了CPK10基因,将该基因连接到带有FLAG和HA标签的双元串联亲和层析载体上,构建成p CM1307-3FLAG-3HA-CPK10植物表达载体,进而通过PEG介导转化拟南芥野生型原生质体,表达约10 h,通过Western Blotting检测融合有FLAG和HA标签的CPK10蛋白的表达情况,结果显示,可以分别利用FLAG抗体和HA抗体特异检测到CPK10蛋白的条带。融合蛋白的成功表达,为进一步通过串联亲和纯化技术(TAP)筛选CPK10的互作蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 TAP 双元表达载体 CPK10 原生质体转化

下载PDF 职称材料

兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因启动子的克隆及双元载体的构建

9

作者 梅丽丽 郭鑫 +2 位作者 张尧 林晓飞 张文波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期7336-7342,共7页

为研究兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因(LgUGPase)的表达特性,利用Tail-PCR的技术克隆了1 376 bp的LgUGPase基因上游序列。利用PlantCARE对该序列进行预测与分析发现,其含有TATA-BOX、CAAT-BOX等启动子基本元件,同时包含光元素响应元件,低... 为研究兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因(LgUGPase)的表达特性,利用Tail-PCR的技术克隆了1 376 bp的LgUGPase基因上游序列。利用PlantCARE对该序列进行预测与分析发现,其含有TATA-BOX、CAAT-BOX等启动子基本元件,同时包含光元素响应元件,低温和干旱等逆境响应元件,赤霉素、茉莉酸甲酯和生长素等植物激素响应元件。由此推断LgUGPase基因的表达可能受到光、低温、赤霉素、茉莉酸甲酯等的调控。为进一步研究LgUGPase基因的表达模式和调控机理,将该启动子序列克隆到pORE-R1载体GUS基因的上游,构建了pORE-R1-pLgUGPase::GUS双元表达载体,为通过遗传转化拟南芥及GUS染色研究该启动子的功能及LgUGPase的表达特性提供理论参考。 展开更多

关键词 兴安落叶松 UDP焦磷酸化酶基因 启动子 双元表达载体

原文传递

植物双元表达载体pCRI1210的构建及其功能验证

10

作者 尹国 李世云 +9 位作者 路正营 韩永亮 王晔 张彦波 洪伟东 商海红 张朝军 张雪妍 李俊玲 李付广 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期960-967,共8页

pBI121是转基因研究中的常用载体,但是其多克隆位点相对较少,所携带的GUS基因检测较为复杂。为了增加其多克隆位点,增强其表达效率,简化其检测方法,本研究在pBI121载体的基础上,在其骨架中插入含有CaMV35S启动子、棉花β-tubulin基因内... pBI121是转基因研究中的常用载体,但是其多克隆位点相对较少,所携带的GUS基因检测较为复杂。为了增加其多克隆位点,增强其表达效率,简化其检测方法,本研究在pBI121载体的基础上,在其骨架中插入含有CaMV35S启动子、棉花β-tubulin基因内含子和CaMV 35S polyA终止子的干涉表达框,该表达框含有GFP报告基因。通过验证,所插入的干涉表达框能够正常表达插入的外源基因,且GFP基因可以正常表达。该载体被命名为pCRI1210,它是一种双元植物表达载体,既可以用来当作表达载体,又可以用作干涉载体。本研究为转基因研究提供了一种非常实用的工具。 展开更多

关键词 双元表达载体 pCRI1210 功能验证

下载PDF 职称材料

甘草水通道蛋白基因(GuPIP1)RNAi双元表达载体的构建及鉴定

11

作者 王芳 董乐 戴聪杰 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2009年第5期526-530,共5页

植物水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是细胞膜上选择性高效转运水分子的特异蛋白孔道.本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以甘草质膜水通道蛋白基因GuPIP1为靶基因,在GuPIP1-cDNA序列中选择378bp作为构建RNAi的序列,经三次亚克隆,最... 植物水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是细胞膜上选择性高效转运水分子的特异蛋白孔道.本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以甘草质膜水通道蛋白基因GuPIP1为靶基因,在GuPIP1-cDNA序列中选择378bp作为构建RNAi的序列,经三次亚克隆,最后形成含GuPIP1-hpRNAi表达盒的双元表达载体,并转入农杆菌EHA105. 展开更多

关键词 甘草 水通道蛋白 RNAI 双元表达载体

下载PDF 职称材料

口蹄疫病毒vp1基因的克隆与植物双元表达载体的构建

12

作者 王宝琴 王小龙 +2 位作者 张永光 潘丽 王文秀 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期166-169,共4页

通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构蛋白基因vp1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438,构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinF... 通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构蛋白基因vp1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438,构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinFMDV-VP1。结果表明:vp1基因为639bp。重组中间表达载体pBinVP1经BamHⅠ/SalⅠ双酶切、PCR扩增和序列测定,表明vp1基因、Kozak序列等插入pBinVP1中。在含50mg/L卡那霉素、25mg/L链霉素和50mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行vp1基因的PCR检测,证明植物双元表达载体pBinFMDV-VP1构建正确。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 克隆 三亲融合 双元表达载体 根癌农杆菌

下载PDF 职称材料

MSTN RNAi双元表达载体构建及效果试验

13

作者 胡兰 隋世慧 吴丹 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期11-13,17,共4页

为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达。试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可... 为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达。试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可成功构建pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体,将其转染成肌细胞48h后,该双元表达载体可明显抑制成肌细胞MSTN基因的表达。 展开更多

关键词 MSTN基因 RNAI 双元表达载体 成肌细胞

下载PDF 职称材料

水稻中受硝酸盐诱导的基因启动子的克隆与植物双元表达载体的构建

14

作者 吴文华 李新舟 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期294-297,共4页

为克隆水稻中受硝酸盐诱导的基因启动子,从GeneBank中找到了6组水稻中受硝酸盐诱导的特异cDNA片段,结合已发表的硝酸盐诱导的相关基因,经过序列比对确定特异片段所在的基因.电子克隆出对应基因的5′侧翼约1 500 bp的序列.以总DNA为模板... 为克隆水稻中受硝酸盐诱导的基因启动子,从GeneBank中找到了6组水稻中受硝酸盐诱导的特异cDNA片段,结合已发表的硝酸盐诱导的相关基因,经过序列比对确定特异片段所在的基因.电子克隆出对应基因的5′侧翼约1 500 bp的序列.以总DNA为模板利用PCR技术克隆出了对应的5′侧翼序列.经过测序分析,该序列具有许多启动子特征的顺式作用元件,加TA-box,CpG岛等.将这些启动子序列连接到pCAMBIA1391Z双元载体中,构建植物双元表达载体以进行启动子活性检测. 展开更多

关键词 水稻 硝酸盐 电子克隆 启动子 双元表达载体

下载PDF 职称材料

双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta的构建及转基因烟草的初步检测 被引量：16

15

作者 范媛媛 庞永珍 +3 位作者 吴为胜 姚剑虹 唐克轩 武天龙 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2004年第1期1-6,共6页

用限制性内切酶HindⅢ酶切分别含有CryIA(a)和CryIA(c)基因的pGEM-4zf质粒得到Ubiquitin(玉米泛素)基因启动子驱动的CryIA(a)和CryIA(c)基因表达盒,将它们分别插入到用HindⅢ开环的pCAMBIA3300(含编码抗除草剂草丁膦的bar基因)载体上形... 用限制性内切酶HindⅢ酶切分别含有CryIA(a)和CryIA(c)基因的pGEM-4zf质粒得到Ubiquitin(玉米泛素)基因启动子驱动的CryIA(a)和CryIA(c)基因表达盒,将它们分别插入到用HindⅢ开环的pCAMBIA3300(含编码抗除草剂草丁膦的bar基因)载体上形成中间载体p3300-bt。采用Pfu高保真DNA聚合酶用PCR的方法从质粒pBI121-pta上扩增得到含CaMV35S启动子和NOS终止子的pta基因表达盒,然后插入到用SmaⅠ切开的中间载体p3300-bt中,获得带有抗性基因的双价抗虫基因表达载体p3300-bt-pta。通过根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草品种百日红,获得一批抗除草剂的转基因烟草植株。 展开更多

关键词 转基因植株 表达载体 限制性内切酶 质粒 DNA聚合酶 PCR 双价抗虫基因 转基因技术

下载PDF 职称材料

大豆类受体蛋白激酶基因(rlpk2)RNAi双元表达载体的构建及其转基因 被引量：12

16

作者 李小平 邓楠 +4 位作者 马媛媛 李鹏丽 王勇 张韧 王宁宁 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-8,共8页

植物类受体蛋白激酶(plant receptor-like kinases RLKs)以其特有的结构在植物的生长、发育和防御等多种生理生化过程中发挥着重要的作用。利用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)来研究RLKs的功能已日趋成熟。本文根据植物中hpRNA(hai... 植物类受体蛋白激酶(plant receptor-like kinases RLKs)以其特有的结构在植物的生长、发育和防御等多种生理生化过程中发挥着重要的作用。利用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)来研究RLKs的功能已日趋成熟。本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以大豆类受体蛋白激酶基因rlpk2为靶基因,在rlpk2-cDNA序列3'端选择312bp作为构建RNAi的序列,借助中间克隆载体,经过三次亚克隆,最后形成含rlpk2-RNAi表达盒的双元表达载体pART27-R2,并转入农杆菌LBA4404。采用农杆菌介导大豆子叶节转化方法,共获得了三株转基因植株。转基因植株 RT-PCR分析表明rlpk2基因已被成功敲减(knock-down),并且发现敲减大豆叶片中的rlpk2基因表达明显改善大豆叶片的光合能力,结合前期研究结果,表明rlpk2基因可能在维持叶绿体的结构及保护叶绿体膜系统的完整性方面起负调节作用。 展开更多

关键词 大豆 类受体蛋白激酶 RNAI 双元表达载体

下载PDF 职称材料

甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究 被引量：8

17

作者 陈利平 陈平华 +6 位作者 陈忠伟 王恒波 许莉萍 刘迪 高三基 郭晋隆 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期99-106,共8页

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分... 甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 展开更多

关键词 甘蔗黄叶病毒 甘蔗花叶病毒 CP基因 双价RNAi表达载体构建 遗传转化

下载PDF 职称材料

几种基于pCAMBIA系列多用途新型植物表达载体的改建及优化 被引量：3

18

作者 李敬涛 孙新华 +4 位作者 余刚 贾承国 杜茜 李启云 潘洪玉 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期371-375,共5页

以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细... 以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细胞定位双元表达载体,并建立了对大量候选基因进行高通量筛选和功能验证的通用型表达载体系统. 展开更多

关键词 植物双元表达载体 CaMV 35S RD29A 多克隆位点 增强型绿色荧光蛋白

下载PDF 职称材料

意大利生菜转化体系建立及EV71抗原基因表达初探 被引量：3

19

作者 罗雯 张同林 +2 位作者 艾佐佐 刘艳梅 刘旺喜 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第3期208-214,共7页

以意大利生菜(Lactuca sativa L.var.ramosa Hort.)为试材,农杆菌LBA4404叶盘法转化子叶,通过植物组织培养技术,筛选获得再生体系最佳选择压为Kan 50 mg/L,最佳抑菌剂为Carb 400 mg/L,生菜子叶抗性愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂条件... 以意大利生菜(Lactuca sativa L.var.ramosa Hort.)为试材,农杆菌LBA4404叶盘法转化子叶,通过植物组织培养技术,筛选获得再生体系最佳选择压为Kan 50 mg/L,最佳抑菌剂为Carb 400 mg/L,生菜子叶抗性愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂条件为6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.15 mg/L或6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L,其中在6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基上诱生的抗性愈伤组织后续生芽效果较好。根据GenBank序列,优化设计合成适合植物表达的肠道病毒71型(Human enterovirus 71,EV71)C4亚型P1和3CD基因,运用基因重组技术,同时克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建共表达植物表达载体pCAMBIA2301-P1-3CD。以农杆菌介导的叶盘法转化意大利生菜子叶,对叶片PCR阳性的抗性株进行蛋白质表达检测,Western-blot实验表明,两株抗性株叶片中表达出具有生物学活性的EV71抗原蛋白质,证明了利用生菜表达EV71抗原的可行性,为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。 展开更多

关键词 肠道病毒71型(EV71) 植物双元表达载体 生菜 转基因植物 生物反应器

下载PDF 职称材料

马铃薯StTOM1和StTOM3双干扰植物双元表达载体的构建及转化验证 被引量：3

20

作者 宋静静 蒙姣荣 +2 位作者 卢晓静 邹承武 陈保善 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期22-28,共7页

病毒病是制约马铃薯生产的重要因素之一。在拟南芥等植物的研究中发现,抑制寄主因子可以显著降低细胞中病毒的累积量,从而缓解病害症状。本研究在获得与拟南芥寄主因子AtTOM1和AtTOM3具有同源性的马铃薯基因StTOM1和StTOM3的基础上,尝试... 病毒病是制约马铃薯生产的重要因素之一。在拟南芥等植物的研究中发现,抑制寄主因子可以显著降低细胞中病毒的累积量,从而缓解病害症状。本研究在获得与拟南芥寄主因子AtTOM1和AtTOM3具有同源性的马铃薯基因StTOM1和StTOM3的基础上,尝试用RNAi方法同时沉默StTOM1和StTOM3。以pUCCRNAi为中间载体,构建同时含StTOM1和StTOM3双基因干扰片段StT1-StT3的质粒pUCStT1-StT3-dRi(±),再将双基因干扰片段StT1-StT3切下并连接到双元载体pBI121上。用农杆菌介导方法,将StT1-StT3片段导入马铃薯中,获得转基因马铃薯小苗,阳性率达到83.6%。RT-PCR检测表明,转StT1-StT3马铃薯中StTOM1基因mRNA的表达水平下调了78%,StTOM3基因下调了81%。StTOM1和StTOM3沉默转基因马铃薯的获得,为将来验证和评价StTOM1和StTOM3是否为马铃薯病毒的寄主因子及在创建抗病毒马铃薯新种质的潜力,奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯 StTOM1 StTOM3 植物双元表达载体

原文传递