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EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定
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作者 涂向东 吴玉水 +4 位作者 邱龙翔 连云宗 程烽 兰风华 朱忠勇 《福州总医院学报》 2008年第1期22-24,共3页
目的:构建EB病毒的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达;分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法:采用基因工程技术,以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和Xho... 目的:构建EB病毒的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达;分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法:采用基因工程技术,以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定,并免疫BALB/C小鼠。结果:序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠,经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体,且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论:表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。 展开更多
关键词 Epstein—Barr病毒 gp85 表达 免疫原性
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