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EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定
1
作者
涂向东
吴玉水
+4 位作者
邱龙翔
连云宗
程烽
兰风华
朱忠勇
《福州总医院学报》
2008年第1期22-24,共3页
目的:构建EB病毒的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达;分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法:采用基因工程技术,以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和Xho...
目的:构建EB病毒的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达;分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法:采用基因工程技术,以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定,并免疫BALB/C小鼠。结果:序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠,经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体,且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论:表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。
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关键词
Epstein—Barr病毒
gp85
表达
免疫原性
原文传递
题名
EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定
1
作者
涂向东
吴玉水
邱龙翔
连云宗
程烽
兰风华
朱忠勇
机构
福州总医院全军检验医学研究所
漳州第
泉州市第一医院
出处
《福州总医院学报》
2008年第1期22-24,共3页
文摘
目的:构建EB病毒的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达;分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法:采用基因工程技术,以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定,并免疫BALB/C小鼠。结果:序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠,经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体,且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论:表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。
关键词
Epstein—Barr病毒
gp85
表达
免疫原性
Keywords
Epstein-
Barr
virus
bxlf
2
gene
Expression
Immuno-genicity
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
R739.63 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定
涂向东
吴玉水
邱龙翔
连云宗
程烽
兰风华
朱忠勇
《福州总医院学报》
2008
0
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