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甜菜坏死黄脉病毒RNA4 cDNA克隆、序列分析及其编码蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：5
1
作者 于嘉林 韩成贵 +2 位作者 杨莉莉 李大伟 刘仪 《微生物学报》 CSCD 北大核心 1997年第1期7-14,共8页
以甜菜坏死黄脉病毒(Beet Necrotic Yellow Vein Virus,简称BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一... 以甜菜坏死黄脉病毒(Beet Necrotic Yellow Vein Virus,简称BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别为97.1％和96.4％,并在5'端非编码区比F2分离物缺失了3个核苷酸。将RNA4编码区cDNA克隆到原核表达载体pFLAG·MAC上,获得融合蛋白表达质粒pFMBF87。所构建的融合蛋白由载体序列编码的14个氨基酸和31kDa蛋白C端的233个氨基酸组成。经IPTG诱导,Westem blotting分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达。本文还对内蒙分离物的株系划分进行了讨论。 展开更多
关键词 甜菜 坏死黄脉病毒 RNA4 CDNA 克隆 序列分析
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甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达
2
作者 姚华建 于嘉林 刘仪 《中国病毒学》 CSCD 1993年第4期384-389,共6页
将甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙古分离物的外壳蛋白基因亚克隆到pJW2上构建成在大肠杆菌中表达的载体。SDS-PAGE及Westexn blotting检测的结果表明,该表达载体在大肠杆菌DH5 α中经温度诱导后特异地表达21kD的甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白... 将甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙古分离物的外壳蛋白基因亚克隆到pJW2上构建成在大肠杆菌中表达的载体。SDS-PAGE及Westexn blotting检测的结果表明,该表达载体在大肠杆菌DH5 α中经温度诱导后特异地表达21kD的甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白。经光密度扫描估测,其表达量占大肠杆菌总蛋白的19.5％ 展开更多
关键词 甜菜坏死黄脉病毒 外壳蛋白基因 表达
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新疆甜菜坏死黄脉病毒RNA5的检测及核苷酸序列分析
3
作者 向本春 刘升学 +2 位作者 黄家风 席德慧 吴彩兰 《西北农业学报》 CAS CSCD 2003年第3期76-80,共5页
利用RT-PCR方法,对12个新疆不同地区的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)分离物和美国的BN-TX及黑龙江的He分离物进行检测,结果表明,只有库尔勒地区的所有分离物和来自黑龙江的He分离物含有RNA5,其他地区的分离物未检测到RNA5。选K2和He分离物进... 利用RT-PCR方法,对12个新疆不同地区的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)分离物和美国的BN-TX及黑龙江的He分离物进行检测,结果表明,只有库尔勒地区的所有分离物和来自黑龙江的He分离物含有RNA5,其他地区的分离物未检测到RNA5。选K2和He分离物进行序列分析,测得K2分离物长为1323 nt,He分离物长为1300 nt;与国内外报道的中国包头B分离物、呼和浩特H、日本的D5分离物和法国的F72分离物的RNA5序列相比,序列同源性K2为95.0％～96.8％,He为96.0％～99.3％,均含有一个开放阅读框(ORF),由此推导出的各分离物的氨基酸同源性,K2为93.0％～96.5％,He为96.5％～99.6％。其变异主要集中在富含A的区域。 展开更多
关键词 新疆 甜菜坏死黄脉病毒 RNA5 检测 核苷酸 序列分析
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