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丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制 被引量:20
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作者 周鹏 何昱 +5 位作者 杨洁红 张宇燕 周惠芬 赵涛 付巍 万海同 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期4844-4848,共5页
为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物... 为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR法检测细胞MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA表达水平,透射电镜观察细胞超显微结构变化。结果表明缺氧使原代培养的r BMECs受到明显损伤,与模型组比较,丹红注射液(50,100 m L·L-1)可显著对抗缺氧造成的损伤,增强SOD活性,降低MDA水平,明显下调MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA的表达,丹红注射液100 m L·L-1能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接,抑制缺氧诱导的细胞凋亡。从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤r BMECs具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应及细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 丹红注射液 乳鼠脑微血管内皮细胞(r bmecs) 缺氧 抗氧化 炎症 细胞凋亡
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辣木叶多糖对过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 被引量:12
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作者 马广明 刘骥 +1 位作者 姜鑫 张永根 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期350-358,共9页
奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)在奶牛泌乳期代谢旺盛,导致活性氧(ROS)大量产生,从而诱发氧化应激。辣木叶多糖(MLP)能有效清除ROS和自由基,但其是否具有缓解BMECs氧化损伤的潜力尚不清楚。因此,本文以MLP为添加剂,探究其对过氧化氢(H2O2)诱导... 奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)在奶牛泌乳期代谢旺盛,导致活性氧(ROS)大量产生,从而诱发氧化应激。辣木叶多糖(MLP)能有效清除ROS和自由基,但其是否具有缓解BMECs氧化损伤的潜力尚不清楚。因此,本文以MLP为添加剂,探究其对过氧化氢(H2O2)诱导BMECs氧化损伤的保护作用。本试验首先将分离的BMECs置于含有不同浓度H2O2的培养基中培养2 h建立氧化损伤模型,以确定H2O2的适宜浓度;随后在培养基中加入不同浓度MLP溶液培养BMECs 2 h,以确定MLP适宜浓度;最终选用浓度为500μmol/L的H2O2和4 mg/mL的MLP用于本试验。试验设置4个组,分别为对照组1(BMECs)、对照组2(BMECs+MLP)、损伤组(BMECs+H2O2)、保护组(BMECs+MLP+H2O2),每组3个重复。试验对BMECs中ROS数量、BMECs凋亡以及BMECs中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量进行检测。结果表明:1)ROS检测结果显示,MLP抑制了细胞内ROS的生成。2)Hochest33258染色结果与透射电镜观察结果显示,MLP降低了BMECs的凋亡率,同时保持了细胞膜和细胞结构完整性。3)试剂盒检测结果显示,MLP提高了BMECs中CAT、GSH-Px和SOD活性,同时降低了MDA含量。综上所述,MLP可有效减缓BMECs凋亡,提高其抗氧化能力。 展开更多
关键词 bmecs 氧化应激 辣木叶多糖 活性氧
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灯盏花素对大鼠脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制研究 被引量:13
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作者 李钊飞 曹小雨 +2 位作者 陈琼芳 王钢 杨秀芬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期295-296,共2页
灯盏花素(breviscapine,Bre)是从短亭飞蓬中提取的黄酮类化合物,具有保护缺血性脑血管疾病、调节血管内皮功能、减轻炎性反应等作用本实验通过分离培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs),建立氧糖剥夺(OGD)BMECs模型,研究Bre对BMECs损... 灯盏花素(breviscapine,Bre)是从短亭飞蓬中提取的黄酮类化合物,具有保护缺血性脑血管疾病、调节血管内皮功能、减轻炎性反应等作用本实验通过分离培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs),建立氧糖剥夺(OGD)BMECs模型,研究Bre对BMECs损伤是否具有保护作用,并探讨其可能的机制。相关研究尚未见报道。 展开更多
关键词 灯盏花素 大鼠 脑微血管内皮细胞 OGD 保护作用 机制
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乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯含量及瘦素和过氧化物酶增殖物激活受体γ基因表达量的影响 被引量:11
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作者 齐利枝 生冉 +1 位作者 闫素梅 赵艳丽 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1519-1525,共7页
本试验旨在研究乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯(TAG)含量及瘦素(leptin)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达量的影响。将传至第3代的奶牛乳腺上皮细胞以适宜的密度培养48 h后,随机分为6个处理,各处理分别采用乙酸浓度... 本试验旨在研究乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯(TAG)含量及瘦素(leptin)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达量的影响。将传至第3代的奶牛乳腺上皮细胞以适宜的密度培养48 h后,随机分为6个处理,各处理分别采用乙酸浓度为0(对照组)、4、6、8、10和12 mmol/L的培养液。置于37℃5%CO2培养箱继续培养48 h。收集细胞,观测脂滴形成状况,测定TAG含量及leptin和PPARγ基因表达量。结果表明:随乙酸浓度的增加,培养的奶牛脂肪前体细胞脂滴形成增多;随乙酸浓度的增加,TAG含量和PPARγ基因表达量均呈显著的线性或二次曲线增加(P<0.05),且以乙酸浓度为10和12 mmol/L时效果较好;一定浓度的乙酸可上调leptin基因表达量,尤以浓度为8、10 mmol/L时上调作用较好。结果提示,乙酸对奶牛乳腺上皮细胞内脂滴的形成、TAG的积累、leptin和PPARγ基因的表达有显著的促进作用。本试验条件下,乙酸浓度为10~12 mmol/L时能较好地促进PPARγ基因的表达,浓度为8~10 mmol/L时能较好地促进leptin基因的表达。 展开更多
关键词 乙酸 奶牛乳腺上皮细胞 瘦素 过氧化物酶增殖物激活受体-γ
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梓醇对高糖致大鼠脑微血管内皮细胞间紧密连接破坏的保护作用研究 被引量:6
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作者 邹利 刘珂 +1 位作者 祝慧凤 俸珊 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期4118-4124,共7页
梓醇为地黄的主要有效成分,具有缓解脑微血管内皮细胞水肿,促进内皮细胞存活与增殖作用。而其是否对高血糖引发的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)间紧密连接损伤具保护作用还未知。该文评价了梓醇对高... 梓醇为地黄的主要有效成分,具有缓解脑微血管内皮细胞水肿,促进内皮细胞存活与增殖作用。而其是否对高血糖引发的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)间紧密连接损伤具保护作用还未知。该文评价了梓醇对高糖致大鼠BMECs紧密连接破坏的保护作用,并对其机制进行了初步研究。原代分离715 d SD大鼠BMECs,经30 mmol·L-1高糖损伤后,观察梓醇对其存活率、内皮素-1分泌、跨膜电阻、紧密连接超微结构、骨架蛋白F-actin重构、紧密连接蛋白和黏附连接蛋白表达的影响。结果表明梓醇(0. 3,3. 0,30. 0μmol·L-1)呈剂量依赖性提高BMECs存活率、降低内皮素-1的分泌、提高BMECs间跨膜电阻;透射电镜结果显示其还能增强BMECs间紧密连接;免疫荧光染色证实梓醇上调紧密连接蛋白claudin-5,ZO-1的表达,逆转高糖所致F-actin细胞骨架重排;q-PCR结果也进一步证实梓醇呈剂量依赖性上调紧密连接蛋白claudin-5,occludin,ZO-1,ZO-2,ZO-3和黏附连接蛋白α-actintin,vinculin,cateinins的mRNA表达(P <0. 05)。该研究表明梓醇对高糖致BMECs的损伤具有保护作用,其机制可能与上调细胞间紧密连接与黏附连接表达,逆转细胞骨架蛋白F-actin重构有关。 展开更多
关键词 梓醇 高糖 bmecs 紧密连接 黏附连接 细胞骨架蛋白
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冰片通过下调TLR4-NF-κB通路缓解LPS诱导的BMECs损伤 被引量:4
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作者 喻斌 梁涛 +3 位作者 卢金福 吕高虹 卞勇 阮鸣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-6,共6页
目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8... 目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的生成,DCFH-DA探针检测ROS含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、p-p65、p65、p-IκBα和IκBα的表达。结果冰片剂量优化结果表明其在10 mg·L^(-1)和20 mg·L^(-1)具有良好的剂量-效应依赖性。以它们为低、高剂量,发现冰片可显著减少TNF-α、IL-6和IL-8的分泌和ROS的生成,降低凋亡细胞百分率,减少TLR4、p-p65和IκBα的表达,并增加p65和p-IκBα的表达。结论冰片可通过下调TLR4-NF-κB通路缓解BMECs的炎症反应,进而减少大脑损伤。 展开更多
关键词 冰片 脂多糖 bmecs TLR4-NF-κB通路
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几种药物对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分泌炎性因子的影响 被引量:5
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作者 冯峰 马维武 +1 位作者 管翠萍 周学章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2387-2391,共5页
通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最... 通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最佳致炎剂量,确定细胞炎症模型;将氟尼辛葡甲胺、亚硫酸氢钠穿心莲内酯、苦木、莲胆作用于炎症模型细胞,以地塞米松作为阳性对照,ELISA法检测各组细胞培养液上清中炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达变化情况。研究发现,经LPS(10mg/L)刺激BMECs 24h,炎症模型组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的含量显著高于空白对照组(P<0.05),IL-6的含量极显著高于空白对照组(P<0.01);氟尼辛葡甲胺(10mg/L)、亚硫酸氢钠穿心莲内酯(5mg/L)、苦木(5mg/L)、莲胆(5mg/L)在使用质量浓度下均能不同程度地抑制炎症模型组BMECs分泌TNF-α、IL-6和IL-1β,其中亚硫酸氢钠穿心莲内酯对炎症细胞具有很好的抗炎作用,为以后体内的抗炎作用研究奠定基础。 展开更多
关键词 亚硫酸氢钠穿心莲内酯 脂多糖 bmecs 炎性因子
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mtr-miR156a在奶牛乳腺上皮细胞的靶基因筛选鉴定及其调控奶牛乳蛋白生物合成的研究
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作者 刘宝宝 贾晶莹 +3 位作者 孟桂智 刘祖江 马云 蔡小艳 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期7355-7367,共13页
本试验旨在探究苜蓿miR156a(mtr-miR156a)在奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)的靶基因及其对乳蛋白合成的调控作用,为进一步研究外源性植物微小RNA(miRNA)调控奶牛乳蛋白合成提供研究基础。首先通过联川生物云平台、TargetScan和RNAhybrid在线... 本试验旨在探究苜蓿miR156a(mtr-miR156a)在奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)的靶基因及其对乳蛋白合成的调控作用,为进一步研究外源性植物微小RNA(miRNA)调控奶牛乳蛋白合成提供研究基础。首先通过联川生物云平台、TargetScan和RNAhybrid在线网站预测和筛选出mtr-miR156a调控蛋白合成的候选靶基因,然后构建候选靶基因丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A 56 kDa调节亚基delta亚型(PPP2R5D)和磷酸肌醇3激酶调控亚单位2(PIK3R2)的重组质粒,并通过双荧光素酶验证鉴定出靶向基因,最后运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达mtr-miR156a对BMECs乳蛋白合成相关基因表达以及酪蛋白编码基因mRNA和蛋白表达的影响。结果表明:1)双荧光素酶报告基因和qRT-PCR鉴定了mtr-miR156a可以靶向结合PPP2R5D和PIK3R2并极显著降低其表达水平(P<0.01)。2)与mimic NC相比,过表达mtr-miR156a极显著降低丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、核糖体蛋白S6激酶beta-1(S6K1)、真核翻译起始因子4B(eIF4B)、核糖体蛋白S6(RPS6)、结节性硬化症复合物亚基2(TSC2)、脑富集Ras同源物(RHEB)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)相对表达量(P<0.01),极显著提高蛋白激酶B1(Akt1)和真核翻译起始因子4E结合蛋白1(EIF4EBP1)相对表达量(P<0.01)。3)与mimic NC处理相比,过表达mtr-miR156a极显著提高酪蛋白alpha S1(CSN1S1)、酪蛋白alpha S2(CSN1S2)、酪蛋白beta(CSN2)和酪蛋白kappa(CSN3)相对表达量(P<0.01)。4)ELISA结果表明,与mimic NC处理相比,过表达mtr-miR156a显著提高BMECs培养液上清液中α酪蛋白和β酪蛋白含量(P<0.05),极显著提高上清液中κ酪蛋白含量(P<0.01)。综上所述,mtr-miR156a通过靶向结合位于磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/mTOR信号通路的PPP2R5D和PIK3R2,调控PI3K/Akt/mTOR信号通路PDK1、S6K1、eIF4B、RPS6、Akt1、TSC2、RHEB、mTOR、eIF4E和EIF4EBP1等基因表达,� 展开更多
关键词 mtr-miR156a bmecs PPP2R5D PIK3R2 跨界调控 酪蛋白
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脑微血管内皮细胞与脑卒中关系的研究进展 被引量:6
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作者 余奇劲 陶红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第19期3259-3261,共3页
血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面,其结构主要有3层:脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialceils,BMECs)、基膜和胶质细胞足突,其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步... 血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面,其结构主要有3层:脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialceils,BMECs)、基膜和胶质细胞足突,其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步认识到BMECs不仅是生物学上的结构与功能屏障,还能合成多种物质,调节血管舒缩和营养神经,当其功能发生障碍时,一系列脑血管疾病随之发生。 展开更多
关键词 脑微血管内皮细胞 脑卒中 bmecs 血脑屏障 脑血管疾病 神经组织 毛细血管 胶质细胞
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激素及细胞因子调控奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳的研究进展 被引量:3
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作者 母晓佳 李大彪 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第5期1061-1067,共7页
奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)具有分泌乳汁的特殊功能,BMECs的增殖和泌乳主要受激素和细胞因子等多种因素控制。该文总结了近年泌乳相关激素和细胞因子调控BMECs增殖及泌乳的研究进展和有待进一步解决的问... 奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)具有分泌乳汁的特殊功能,BMECs的增殖和泌乳主要受激素和细胞因子等多种因素控制。该文总结了近年泌乳相关激素和细胞因子调控BMECs增殖及泌乳的研究进展和有待进一步解决的问题,为今后系统研究BMECs增殖和泌乳调控信号通路开拓思路,提供参考。 展开更多
关键词 激素 细胞因子 bmecs 泌乳
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脑通汤对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤内皮屏障抗原及紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的影响 被引量:5
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作者 何筑 况时祥 +1 位作者 张树森 邹家莉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第21期3483-3486,共4页
目的:探讨脑通汤对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用及血脑屏障通透性的影响。方法:体外培养大鼠原代BMECs,缺氧/复氧法模拟脑缺血再灌注损伤。免疫组化检测内皮屏障抗原(EBA)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测紧密连接蛋... 目的:探讨脑通汤对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用及血脑屏障通透性的影响。方法:体外培养大鼠原代BMECs,缺氧/复氧法模拟脑缺血再灌注损伤。免疫组化检测内皮屏障抗原(EBA)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)m RNA、紧密连接蛋白(ZO-1)m RNA的表达。结果:免疫组化示,与正常细胞组比较,模型组EBA蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤大、中剂量含药血清组EBA蛋白表达显著升高(P<0.05);但正常血清组与模型组比较差异无显著性(P>0.05)。实时荧光定量PCR法示,与正常细胞组比较,模型组Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤不同剂量含药血清组干预后,Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达量明显上调,其中脑通汤大剂量含药血清组显著上调(P<0.05)。结论:脑通汤可以保护脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤,其保护机制可能与其上调EBA蛋白及Claudin-5、ZO-1基因的表达密切相关。 展开更多
关键词 脑通汤 缺氧/复氧 脑微血管内皮细胞 EBA CLAUDIN-5 ZO-1
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究 被引量:2
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作者 沈俊逸 赵智明 +3 位作者 刘春丽 壮雨雯 徐文俊 蔡辉 《天津中医药》 CAS 2019年第1期58-62,共5页
[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。... [目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子受体-1(IGF-1R)基因表达水平,通过甲臜化合物(MTS)检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高(P<0.01),同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。 展开更多
关键词 复元醒脑汤 糖尿病 脑梗死 bmecs miRNA-320 IGF-1
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HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制探讨 被引量:2
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作者 黄丹 丛喆 +3 位作者 徐珮 金光 高锡强 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期81-85,共5页
HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内... HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内皮细胞或破坏内皮细胞间的紧密连接穿透血脑屏障进入CNS,但其机制尚不明确。目前有几种比较公认的假说,包括病毒直接入侵假说、单核/巨噬细胞入侵假说、T细胞诱导假说和液相入胞假说。本文将就HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制作一综述。 展开更多
关键词 bmecs 血脑屏障 趋化因子受体
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黄花蒿醇提物对奶牛乳腺细胞中共轭亚油酸合成相关酶基因表达的作用 被引量:4
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作者 王丽芳 张兴夫 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期3271-3278,共8页
【目的】通过奶牛乳腺上皮细胞体外培养试验,研究黄花蒿乙醇提取物对乳腺上皮细胞中与共轭亚油酸(CLA)合成相关酶的基因SCD表达的影响,探讨其对乳脂肪合成相关酶ACACA和FASN基因以及与脂肪转运相关酶LPL基因表达的影响,旨在从乳腺层次... 【目的】通过奶牛乳腺上皮细胞体外培养试验,研究黄花蒿乙醇提取物对乳腺上皮细胞中与共轭亚油酸(CLA)合成相关酶的基因SCD表达的影响,探讨其对乳脂肪合成相关酶ACACA和FASN基因以及与脂肪转运相关酶LPL基因表达的影响,旨在从乳腺层次探明黄花蒿乙醇提取物对乳中CLA合成的部分作用机制。【方法】将采自于健康泌乳中期荷斯坦奶牛的乳腺组织用保温盒带回实验室,在无菌条件选取腺泡较多的深层组织,采用胶原酶消化法获得乳腺上皮细胞,放于37℃,CO2浓度为5%的培养箱中进行原代培养。试验所用的细胞是经过复苏的第二代细胞,待细胞复苏后,以3×10^4个/mL的密度接种细胞到24孔板中,分别置于37℃的5%CO2培养箱中培养,采用台盼蓝计数法每天进行一次计数,设3个重复,连续7 d,未计数组每2天换液一次,绘制细胞生长曲线。另外,待细胞生长至对数增殖期,更换新鲜培养液,随机分为4组,即培养液中黄花蒿提取物的浓度为0、3.0、6.0、12.0 mg·L^-1,提取物作用时间均为48 h,检测不同浓度黄花蒿提取物对与脂肪酸合成相关酶SCD、ACC、FAS、LPL基因表达量的影响。每个处理3个重复。【结果】使用倒置显微镜观察,乳腺上皮细胞形态呈铺路石样;在3×10^4个/mL的接种密度下,细胞生长曲线呈S型,在1—2d乳腺上皮细胞为潜伏期,3—6d为指数增长期,之后进入平台期,符合一般细胞生长曲线规律,说明培养的乳腺上皮细胞具有正常的增殖能力,可以用于后续的研究;与对照组相比,添加黄花蒿乙醇提取物有增加SCD酶基因表达量的趋势,其中3mg·L^-1组显著增加了SCD酶的基因表达量(P<0.05),而6 mg·L^-1组和12mg·L^-1组虽然增加了SCD酶的基因表达量,但与对照组相比差异不显著(P>0.05);添加黄花蒿乙醇提取物有增加乳腺上皮细胞中ACACA基因表达量的趋势,但与对照组相比差异不显著(P>0.05),且随着添加� 展开更多
关键词 黄花蒿乙醇提取物 奶牛乳腺上皮细胞 SCD ACACA FASN LPL
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从PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路探讨复方当归注射液对拟缺血神经元的作用 被引量:4
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作者 李韵歆 汤轶波 +7 位作者 郑燕飞 李月 于雪 张巧慧 陈亚飞 白雪 马茹 刘振权 《天津中医药》 CAS 2020年第4期442-449,共8页
[目的]探讨复方当归注射液(CAI)干预拟缺血损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)后的条件培养液对拟缺血损伤神经元的影响及作用机制。[方法]原代培养SD大鼠BMECs及皮层神经元,免疫荧光鉴定两种细胞,收集正常BMECs条件培养液(N-CM)、拟缺血损伤B... [目的]探讨复方当归注射液(CAI)干预拟缺血损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)后的条件培养液对拟缺血损伤神经元的影响及作用机制。[方法]原代培养SD大鼠BMECs及皮层神经元,免疫荧光鉴定两种细胞,收集正常BMECs条件培养液(N-CM)、拟缺血损伤BMECs条件培养液(I-CM)及CAI低、中、高剂量干预后的拟缺血损伤BMECs条件培养液(IC-CM,1.25、2.5、5μL/mL),分别作用于正常神经元和拟缺血损伤神经元,用CCK8法检测各组神经元活性、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)信号通路Akt的磷酸化水平[磷酸化Akt(p-Akt)/Akt]、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(Erk)信号通路Erk的磷酸化水平[磷酸化Erk(p-Erk)/Erk]。[结果]与N-CM处理组相比,I-CM处理组神经元活性显著降低(P<0.01)、Akt磷酸化水平下降(P<0.05)、Erk磷酸化水平显著上升(P<0.01);CAI干预后IC-CM低剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平高于I-CM处理组(P<0.05),IC-CM中、高剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平显著高于I-CM处理组(P<0.01),各IC-CM处理组较I-CM处理组的Erk磷酸化水平变化不明显(P>0.05)。[结论]CAI可通过干预拟缺血损伤内皮细胞进而对拟缺血损伤神经元达到保护作用,该保护作用可能与活化PI3K/Akt信号通路存在相关性,与MAPK/Erk信号通路关联不大。 展开更多
关键词 拟缺血损伤 神经元 复方当归注射液 PI3K/AKT MAPK/ERK 脑微血管内皮细胞 缺血性中风
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亚油酸对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪和乳蛋白合成相关基因表达的影响 被引量:4
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作者 李大彪 李红磊 +4 位作者 邢媛媛 于永强 王卫云 陈玲 李平 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第3期257-264,共8页
该文主要研究了添加不同浓度的亚油酸(顺-9,顺-12-十八碳二烯酸)(0、20、40、80、120μmol/L)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。通过MTT法检测细胞活力,利用甘油... 该文主要研究了添加不同浓度的亚油酸(顺-9,顺-12-十八碳二烯酸)(0、20、40、80、120μmol/L)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。通过MTT法检测细胞活力,利用甘油三酯试剂盒检测BMECs内甘油三酯(triglyceride,TAG)的合成量,实时荧光定量PCR检测乳脂和乳蛋白合成相关基因的表达。结果表明:(1)添加20μmol/L的亚油酸能促进BMECs的增殖,120μmol/L的亚油酸组BMECs的相对增殖率显著低于对照组(P〈0.05);(2)40μmol/L和80μmol/L亚油酸添加组BMECs中TAG的合成量显著高于对照组(P〈0.05);(3)添加20μmol/L亚油酸显著上调αs1-酪蛋白(casein alpha s1 identifiers symbols,CSN1S1)和κ-酪蛋白(κ-casein,CSN3)基因的表达,而80μmol/L和120μmol/L亚油酸显著下调CSN1S1和CSN3基因的表达(P〈0.05);(4)120μmol/L亚油酸上调了真核启始4E结合蛋白-1(eukaryotic initiation factor 4E-binding-protein-1,4EBP1)基因的表达,下调了核糖体蛋白S6激酶-1(ribosomal protein S6 kinase-1,RPS6K1)基因的表达(P〈0.05);(5)添加20~120μmol/L亚油酸显著下调脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-Co A desaturase,SCD)、脂肪酸结合蛋白-3(fatty acid-binding protein-3,FABP3)的基因表达(P〈0.05);(6)20μmol/L亚油酸添加组过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARG)基因表达量显著高于对照组,而120μmol/L亚油酸组PPARG、固醇调节元件结合因子-1(sterol regulatory element binding factor-1,SREBF1)的表达量显著低于对照组(P〈0.05)。综上所述,20~40μmol/L的亚油酸对BMECs乳脂肪和乳蛋白合成有较好的促进效果。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 细胞活力 αs1-酪蛋白 κ-酪蛋白 甘油三酯 乳脂合成相关基因
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牛乳腺上皮细胞体外分离培养模式、方法及其应用进展 被引量:1
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作者 母童 虎红红 +1 位作者 顾亚玲 张娟 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期56-67,共12页
乳腺由具有泌乳功能的腺泡组成,乳腺上皮细胞(MEC)以单层方式排列在腺泡外围,是乳腺对外界病原进行免疫保护的重要组分,负责将血液中的营养物质通过一系列复杂生化过程转化为乳汁。牛乳腺上皮细胞(BMECs)的体外分离培养在很大程度上解... 乳腺由具有泌乳功能的腺泡组成,乳腺上皮细胞(MEC)以单层方式排列在腺泡外围,是乳腺对外界病原进行免疫保护的重要组分,负责将血液中的营养物质通过一系列复杂生化过程转化为乳汁。牛乳腺上皮细胞(BMECs)的体外分离培养在很大程度上解决了活体试验条件不可控、操作困难、成本高及个体差异大等诸多问题,还可以为体外研究乳腺组织生长发育规律、泌乳机制、乳房疾病等提供良好的细胞模型。本文总结了BMECs的分类和作用、培养方法、模式及其在基因表达机理研究和组学中的应用进展,以期为BMECs体外培养及相关研究提供有价值的参考和新思路。 展开更多
关键词 bmecs 体外培养 模式 应用
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梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用 被引量:1
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作者 尚远宏 田金凤 +2 位作者 王敏 李松青 徐晓玉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期358-360,373,共4页
探讨梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用。取新生10 d的SD大鼠乳鼠,分离、培养脑皮层微血管原代内皮细胞,并利用DMEM无糖培养基、三气培养箱缺氧容器(缺糖缺氧2 h)及5%CO2培养箱复氧培养24 h复制缺氧/复氧模... 探讨梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用。取新生10 d的SD大鼠乳鼠,分离、培养脑皮层微血管原代内皮细胞,并利用DMEM无糖培养基、三气培养箱缺氧容器(缺糖缺氧2 h)及5%CO2培养箱复氧培养24 h复制缺氧/复氧模型,MTT法BMECs细胞活力,Western blot法检测MMP-9的蛋白表达。结果显示,与模型组相比,梓葛冻干粉针(49.00、98.00μg·m L^(-1))能促进缺氧/复氧模型中BMECs增殖;梓葛冻干粉针(24.50、49.00、98.00μg·m L^(-1))能显著抑制BMECs细胞中MMP-9蛋白表达升高(p<0.05);提示梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用可能与降低MMP-9蛋白表达有关。 展开更多
关键词 梓葛冻干粉针 bmecs MMP-9 缺氧/复氧损伤
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硒对金黄色葡萄球菌感染的奶牛乳腺上皮细胞Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键因子mRNA转录水平的影响 被引量:3
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作者 关立增 王亨 +3 位作者 刘俊俊 王娟 韩照清 毕崇亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期879-884,934,共7页
为探究硒(Se)对金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs) Nod2/MAPK/mTORs信号通路的调控机制,本研究首先用不同浓度硒(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)对bMECs进行预孵育,12 h后再经S.aureus感染处理。分别于感染后6 h、... 为探究硒(Se)对金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs) Nod2/MAPK/mTORs信号通路的调控机制,本研究首先用不同浓度硒(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)对bMECs进行预孵育,12 h后再经S.aureus感染处理。分别于感染后6 h、8 h和10 h收集bMECs提取其RNA,应用q PCR方法检测bMECs中Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR、IL-8和IL-10 mRNA的转录水平。结果显示,S.aureus能显著提高bMECs中Nod2、RIP2、JNK、AKT和mTOR mRNA的转录水平(p<0.01),而硒能不同程度的抑制这些因子mRNA的转录水平(p<0.05或p<0.01)。此外,S.aureus能显著或极显著提高bMECs中IL-8和IL-10 mRNA的转录水平(p<0.05或p<0.01),而硒对S.aureus感染的bMECs中IL-8和IL-10 mRNA的转录水平有明显抑制作用(p<0.05或p<0.01)。上述结果表明,硒可通过抑制Nod2/MAPK/mTORs信号通路的转导而减轻S.aureus诱导的bMECs的炎症反应。本研究为阐明硒能减轻S.aureus诱导的bMECs炎症反应的机制提供试验依据。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 Nod2/MAPK/mTORs 奶牛乳腺上皮细胞 MRNA
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硒对S.aureus诱导的奶牛乳腺上皮细胞Nod2/MAPK/mTORs信号通路关键蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 毕崇亮 刘俊俊 +3 位作者 王亨 王娟 韩照清 关立增 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期2891-2898,共8页
【目的】硒(Se)能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌(S. aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表... 【目的】硒(Se)能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌(S. aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表达的影响,从而为阐明硒的免疫调控机制提供理论依据。【方法】首先将bMECs以10^6细胞/孔接种于6孔板中,当细胞超过80%的汇合度时,用含2、4和8μmol·L^-1浓度硒的培养基替换原来的培养基,继续孵育12 h,然后用PBS洗涤每孔3次,将S. aureus按MOI=1:1的比例加入6孔板中,继续培养0.5 h,然后收集bMECs细胞进行相关蛋白的检测。本试验共分3大组,即对照(Con)组(bMECs)、模型(Mod)组(bMECs+S. aureus)和试验组。其中试验组又分3个亚剂量组,即Low组(bMECs+2μmol·L^-1 Se+S. aureus)、Mid组(bMECs+4μmol·L^-1 Se+S. aureus)和Hig组(bMECs+8μmol·L^-1 Se+S. aureus),每组设3个重复。利用BCA蛋白测定试剂盒对收集的bMECs细胞进行总蛋白提取。应用Western blotting技术检测bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。将蛋白样品加到10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,上样量为20μg/孔,之后将蛋白转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。将PVDF膜用5 mL 5%脱脂乳阻断2 h,脱脂乳脱脂后用TBST清洗后,分别用5 mL的Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR和β-actin的一抗孵育过夜,回收一抗。之后在PVDF膜中分别加入5 mL上述蛋白的二抗,室温孵育2 h,回收二抗。PVDF用TBST洗涤5次,最后在暗室条件下进行化学显影。【结果】S. aureus能显著提高bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平(P<0.01)。S. aureus感染0.5 h后,Nod2蛋白水平显著升高(P<0.01)。在培养基里添加2μmol·L^-1的硒可极显著抑制Nod2蛋白的表达(P<0.01),在培养基里添加8μmol·L^-1的硒可显著抑制Nod2的表达(P<0.05);S. aureus感染0.5 h后,RIP2蛋白水平显著升高(P<0.05),而� 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 Nod2/MAPK/mTORs 奶牛乳腺上皮细胞
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