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H9N2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡的组织病理学研究 被引量:8
1
作者 罗玲 胡薛英 +5 位作者 程国富谷长勤 周全 李自力 赵雅心 周诗其 毕丁仁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期259-261,265,共4页
本研究用H9N2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡 ,对感染蛋鸡的组织病理学进行了观察 ,结果发现接毒后第 3d ,主要病理变化为全身各组织的广泛性充血、出血以及肝脏、肾脏的变性、坏死 ;肝、肾组织的Mann亚甲蓝伊红染色发现肝细胞、肾小管上... 本研究用H9N2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡 ,对感染蛋鸡的组织病理学进行了观察 ,结果发现接毒后第 3d ,主要病理变化为全身各组织的广泛性充血、出血以及肝脏、肾脏的变性、坏死 ;肝、肾组织的Mann亚甲蓝伊红染色发现肝细胞、肾小管上皮细胞胞浆内有嗜酸性包涵体 ;红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )检查结果表明鸡接毒 3d后 ,HI抗体开始呈上升趋势。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 组织病理学 包涵体 蛋鸡
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抗体选择压作用下H9N2亚型禽流感病毒NA基因的变异 被引量:5
2
作者 杜燕 娄本红 +2 位作者 武专昌 赵鹏 崔治中 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-6,共6页
将LG1株H9N2亚型禽流感病毒在带有抗LG1株母源抗体的鸡胚中分4个独立系列连续传40代后,有3个系列从10~20代起在NA基因的#99位发生了可稳定遗传的碱基"G"到"A"的突变,并使氨基酸由蛋氨酸变为异亮氨酸;有2个系列从20... 将LG1株H9N2亚型禽流感病毒在带有抗LG1株母源抗体的鸡胚中分4个独立系列连续传40代后,有3个系列从10~20代起在NA基因的#99位发生了可稳定遗传的碱基"G"到"A"的突变,并使氨基酸由蛋氨酸变为异亮氨酸;有2个系列从20~30代起在#473位发生了可稳定遗传的由"A"到"G"的碱基突变,导致相应的氨基酸由天冬酰胺变为丝氨酸,另一个传代系列在50代时也发生了同样的突变。在无抗体的鸡胚上的2个独立对照系列同样传了80代,在这2个位点没有发生突变,表明这2个突变与抗体的选择压相关。在抗LG1母源抗体阳性鸡胚的连续40代传代过程中,NA基因在有抗体组的四个传代系列碱基的非同义突变(NS)与同义突变(S)比为4.6(32/7),而在无抗体组NS/S比为2.0(16/8)。有抗体组NS/S值显著高于无抗体组,也显示出抗体的选择压作用。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 nA基因 抗体选择压 基因变异
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深圳市不同人群和鸡群感染禽流感病毒H9N2亚型状况研究 被引量:3
3
作者 何建凡 程小雯 +2 位作者 吕星 吴春利 逯建华 《中国热带医学》 CAS 2005年第6期1171-1172,1194,共3页
目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒;采用红细胞凝集抑制试验(HI)和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病... 目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒;采用红细胞凝集抑制试验(HI)和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病毒,其抗体阳性率为7%,但未能从人群中分离到H9N2亚型流感病毒。人群血清中其抗体阳性率与职业高度相关,与鸡只密切接触的人群明显高于非密切接触的人群。结论禽流感病毒H9N2亚型对人群和鸡群均易感,可通过近距离的密切接触传播;推测人所感染的H9N2可能主要来源于鸡只等家禽。 展开更多
关键词 人群 鸡只 禽流感病毒h9n2亚型 抗体
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金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2作用研究 被引量:2
4
作者 张美义 何家靖 +7 位作者 杨子峰 杨兆丽 杨家庆 詹利之 曾庆慕 冯丽玲 李国桥 朱宇同 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第7期1064-1068,共5页
【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,... 【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,并观察金翘片的解热、镇痛、抗炎作用。【结果】金翘片具有明显的抑制甲型H3N2流感病毒致肺病变作用(P <0.05或P <0.01),抑制率随剂量增大而增大,呈量效关系;同时也对禽流感病毒H9N2感染鼠肺病变表现出明显的抑制作用(P<0.01)。并具有显著的解热、镇痛、抗炎作用。【结论】金翘片在体内具有显著的抗甲型H3N2流感病毒、抗禽流感病毒H9N2及解热、镇痛、抗炎作用。 展开更多
关键词 金翘片 甲型h3n2流感病毒 禽流感病毒h9n2 疾病模型 动物 小鼠 大鼠
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禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达
5
作者 张烨 于在江 +5 位作者 辛丽 陈永坤 唐启慧 陈禹保 陈清轩 舒跃龙 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期881-887,共7页
克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列。为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒h9n2 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达
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不同职业暴露人群感染H5N1禽流感病毒风险性分析 被引量:11
6
作者 袁洁 贺锋 +1 位作者 苏良 叶文 《中国热带医学》 CAS 2011年第5期573-574,共2页
目的了解长沙地区不同类型禽类职业暴露人群高致病性禽流感H5N1亚型病毒的抗体分布状况,分析不同职业暴露人群H5N1感染的风险性。方法采集菜市场家禽屠宰零售人员、大型家禽饲养企业工人和农村个体家禽散养人员的血清标本,用单放射免疫... 目的了解长沙地区不同类型禽类职业暴露人群高致病性禽流感H5N1亚型病毒的抗体分布状况,分析不同职业暴露人群H5N1感染的风险性。方法采集菜市场家禽屠宰零售人员、大型家禽饲养企业工人和农村个体家禽散养人员的血清标本,用单放射免疫扩散溶血技术(SRH)检测H5N1抗体。结果市场零售人员、农村个体家禽散养人员、企业饲养人员H5N1感染率分别为25%、1%和1.92%,男性从业人员H5N1抗体阳性率为10%,女性为23.88%。结论市场零售人员感染H5N1风险性远高于农村散养人员和企业饲养人员,不同职业人员中女性H5N1抗体阳性率高于男性从业人员。 展开更多
关键词 禽流感 职业暴露人群 h5n1抗体
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减毒沙门菌运送的H9N2亚型禽流感病毒DNA疫苗的研制及其免疫试验 被引量:5
7
作者 刘丽平 焦新安 +1 位作者 张小荣 潘志明 《动物医学进展》 CSCD 2007年第9期1-6,共6页
根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。... 根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207和X4550,得到两种运送DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)。以5×109cfu/只的剂量两次口服接种1日龄的商品代伊莎褐蛋鸡,免疫鸡既能检测到HA特异性的血清抗体应答,又能检测到黏膜免疫应答,采用A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株经滴鼻和口服同时攻毒免疫鸡后,这两种疫苗抑制免疫鸡排毒的效果与灭活疫苗有显著差异。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 DnA疫苗 h9n2亚型禽流感病毒 免疫效力
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高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白NP真核表达载体的构建、表达与鉴定 被引量:5
8
作者 彭海燕 迟莹 +1 位作者 李燕 卞倩 《江苏预防医学》 CAS 2014年第5期6-9,共4页
目的构建高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白(NP)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达、鉴定其编码重组蛋白NP。方法采用RT-PCR法扩增NP基因,T-A克隆到pMD18-T载体中构建pMD18-T-NP质粒。经PCR、双酶切鉴定后,双酶切阳性质粒与pXJ40-H... 目的构建高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白(NP)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达、鉴定其编码重组蛋白NP。方法采用RT-PCR法扩增NP基因,T-A克隆到pMD18-T载体中构建pMD18-T-NP质粒。经PCR、双酶切鉴定后,双酶切阳性质粒与pXJ40-HA载体,电泳后胶回收,连接目的片段,构建pXJ40-HA-NP质粒,经PCR、双酶切、测序分析鉴定为阳性的质粒即为NP蛋白的真核表达载体。转染293T细胞后,采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组NP蛋白的表达。结果成功构建了高致病性禽流感病毒H5N1亚型NP基因的真核表达载体,并在293T细胞中成功表达出分子量为56kD的重组蛋白。结论成功构建的NP蛋白真核表达载体为进一步研究其功能,研发高致病性禽流感病毒H5N1亚型的诊断、治疗方法和疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 高致病性禽流感h5n1亚型 核蛋白 克隆 真核表达
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2011年-2014年我国部分省区H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列分析 被引量:5
9
作者 陈顺艳 廖昌韬 +5 位作者 曾凡桂 严专强 苏晓娜 廖秋生 覃健萍 陈峰 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期32-37,共6页
本研究于2011年-2014年在我国部分省区鸡群中鉴定出49株H9N2亚型禽流感病毒,并对所有毒株的HA基因进行克隆、测序及序列分析。结果表明,49个毒株的HA基因开放阅读框全长均为1 683bp,编码560个氨基酸。所有分离株均属于以HK/Y280/97株为... 本研究于2011年-2014年在我国部分省区鸡群中鉴定出49株H9N2亚型禽流感病毒,并对所有毒株的HA基因进行克隆、测序及序列分析。结果表明,49个毒株的HA基因开放阅读框全长均为1 683bp,编码560个氨基酸。所有分离株均属于以HK/Y280/97株为代表的H9.4.2谱系,并明显分成2个亚分支(H9.4.2.5和H9.4.2.6)。分离株HA基因核苷酸同源性在87.1%~100%之间,与疫苗株SH/F/98株、GD/SS/94株和SD/6/96株核苷酸同源性在89.4%~92.5%之间。对HA基因的推导氨基酸序列分析表明,所有分离株裂解位点附近没有连续的碱性氨基酸插入,符合低致病力毒株特征,受体结合位点为PWTN*LY形式,受体结合位点左沿为NGLM/QGL形式,右沿均为GTSKA形式。在49个分离株中共发现10个潜在糖基化位点,但只有6个糖基化位点保守。研究表明,近年来H9N2亚型禽流感在我国多个地区流行,2013年以后流行毒株趋势以H9.4.2.5为主,但病毒基因仍在不断发生变异,因此需要继续加强对H9N2亚型禽流感分子流行病学的监控。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 序列分析
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草鸡源H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定 被引量:3
10
作者 张发明 郑杰 +7 位作者 王文泉 陈玲 邢雪莲 张红 李静 贾秀珍 车竞 张洪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期175-178,共4页
2010年4月,安徽省某草鸡养殖场发生一起以严重呼吸困难、急性死亡为特征的病例。取发病典型的鸡内脏,按常规方法处理后,接种10日龄SPF鸡胚,经有限稀释法纯化,获得一株病毒,通过HA、HI、分子生物学以及动物回归等试验,最终确诊该病为H9... 2010年4月,安徽省某草鸡养殖场发生一起以严重呼吸困难、急性死亡为特征的病例。取发病典型的鸡内脏,按常规方法处理后,接种10日龄SPF鸡胚,经有限稀释法纯化,获得一株病毒,通过HA、HI、分子生物学以及动物回归等试验,最终确诊该病为H9亚型禽流感。 展开更多
关键词 草鸡 h9亚型禽流感病毒 分离 鉴定
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不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究 被引量:2
11
作者 张建伟 史爱华 +4 位作者 沈佳 景小冬 章振华 李林 姜北宇 《安徽农业科学》 CAS 2012年第8期4609-4611,共3页
[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg... [目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72~96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。 展开更多
关键词 培养基 h9亚型流感病毒 MDCK细胞 增殖效果
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禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达 被引量:2
12
作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期33-38,共6页
目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表... 目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52~1545bp),pMETA/NA(121~1254bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果:重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2HA、NA基因序列,为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒h9n2 血凝素 神经氨酸酶 真核酵母表达
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H9 N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达 被引量:1
13
作者 王金萍 宋建领 +1 位作者 张富强 胡媛媛 《动物医学进展》 CSCD 2006年第8期56-60,共5页
根据已知H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计、合成PCR引物。自H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶扩增血凝素基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨... 根据已知H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计、合成PCR引物。自H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶扩增血凝素基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组血凝素,分子质量约75 ku。采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组血凝素的免疫反应性,结果表明,重组血凝素能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 血凝素 表达
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抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 被引量:1
14
作者 李存 张宝中 +10 位作者 安小平 米志强 刘大斌 姜焕焕 潘博 王盛 陈斌 黄芬 王娟 王晓娜 童贻刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期219-225,共7页
分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转... 分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转染分泌片和J链表达质粒,然后用抗生素Zeocin选择阳性克隆细胞,利用倍比稀释的方法筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过Western blotting分析培养上清中SIgA的表达情况。结果表明,在CHO细胞中成功表达了SIgA抗体,上述研究为研制分泌型IgA抗体制剂奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒h5n1 WESTERn BLOTTInG SIgA抗体
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H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶 被引量:1
15
作者 范克伟 庞海 +2 位作者 陈吉龙 黄志勇 吴德峰 《家畜生态学报》 北大核心 2012年第2期31-36,共6页
根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P... 根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mol/L IPTG,在37℃诱导表达4h,经SDS-PAGE和Western-blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达。并经Ni-NTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶。结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1_P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型H5N1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 流感病毒h5n1 PB1_P 克隆 表达纯化 蛋白结晶
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中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因特性 被引量:1
16
作者 房师松 何建凡 +3 位作者 程小雯 吕星 逯建华 张顺祥 《中国热带医学》 CAS 2007年第10期1747-1748,1752,共3页
目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列,利用生物信息学软件DNASTAR 5.0进行核酸... 目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列,利用生物信息学软件DNASTAR 5.0进行核酸同源性分析,用MEGA 3.1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR-KR,与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比,减少1个碱性氨基酸;共有8个潜在的糖基化位点,抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇,与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致,有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。 展开更多
关键词 人禽流感病毒h5n1 基因序列 中国南方
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禽流感病毒A/Chicken/Jiangsu/JS-1/2002(H9N2)分子鉴定与起源分析 被引量:1
17
作者 刘华雷 何海蓉 +2 位作者 周斌 魏建超 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B04期273-277,共5页
运用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Chicken/Jiangsu/JS-1/2002(H9N2)完整的血凝素 (HA)基因,并克隆到pGEM-T载体中,进一步进行了序列测定。序列测定结果已经登陆 GenBank,登陆号为AY364228。所扩增的HA基因长度为1683核苷酸,共编码56... 运用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Chicken/Jiangsu/JS-1/2002(H9N2)完整的血凝素 (HA)基因,并克隆到pGEM-T载体中,进一步进行了序列测定。序列测定结果已经登陆 GenBank,登陆号为AY364228。所扩增的HA基因长度为1683核苷酸,共编码560个氨基酸,其中 信号肽长度为18aa,HA1为319aa,HA2为223aa。HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RSSR↓GLF, 不舍连续的碱性氨基酸,具有低致病性AⅣ HA基因裂解位点的序列特征。通过构建一个包含 18株H9N2亚型AIV的HA基因遗传进化树,发现所有的18个毒株共可分为欧亚谱系和北美谱 系两个谱系,而本分离株在分类地位上国内另外的三个分离株同属于欧亚谱系,在遗传进化上非 常接近,表明它们可能具有共同的起源。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 血凝素基因(hA)
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Effect of Different Culture Media on the Proliferation of Avian Influenza Virus H9 Subtypes in MDCK Cells
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作者 ZHANG Jian-wei SHI Ai-hua +4 位作者 SHEN Jia JING Xiao-dong ZHANG Zhen-hua LI Lin JIANG Bei-yu 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第1期28-30,33,共4页
[Objective] To screen the best culture media for the proliferation of avian influenza virus (AIV) H9 subtypes in MDCK cells. [Method] The DMEM containing 10% (V/V) newborn calf serum, low-serum containing medium ... [Objective] To screen the best culture media for the proliferation of avian influenza virus (AIV) H9 subtypes in MDCK cells. [Method] The DMEM containing 10% (V/V) newborn calf serum, low-serum containing medium ( MEM-MD-611 ) and serum-free medium (SFE4Mega) were used to culture the MDCK monolayer ceils, which were then inoculated with different dilutions of AIV H9 subtypes, and the 3 kinds of media were al- so used as the maintenance solution to culture the virus. The cytopathic changes were observed at every 24 h, and the HA titers of the culture su- pernatants were also determined. [ Result] After culturing for 72 -96 h, the HA titers of the serum-free media were higher than that of low-serum culture media, while the HA titers were higher in the low-serum media than in the serum containing media. [ Conclusion] The 3 kinds of media can all used for the proliferation of AIV_ but the low-serum culture medium (MEM-MD-611 ) and serum-free medium (SFE4Meaa3 are preferred. 展开更多
关键词 Culture medium avian influenza virus h9 subtype MDCK cell PROLIFERATIOn
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禽流感病毒H5N1血凝素基因适应性进化过程中的关键位点突变规律研究
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作者 彭小川 靳远 +5 位作者 胡明达 周江林 周静 岳俊杰 任洪广 梁龙 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期1-9,共9页
目的:寻找导致禽流感病毒H5N1血凝素(HA)适应性进化的关键突变,建立氨基酸突变评价体系,对突变作用进行评估,印证它们与病毒适应性进化的关联性。方法:计算株频率和枝频率,寻找标记分枝,向根结点回溯寻找HA进化路径上的氨基酸突变。计... 目的:寻找导致禽流感病毒H5N1血凝素(HA)适应性进化的关键突变,建立氨基酸突变评价体系,对突变作用进行评估,印证它们与病毒适应性进化的关联性。方法:计算株频率和枝频率,寻找标记分枝,向根结点回溯寻找HA进化路径上的氨基酸突变。计算各突变位点氨基酸的频率变化、有效变换及高频次突变,基于以上几个因素建立突变评价体系。结果:建立了大规模自动化寻找突变的方法,计算得到HA进化过程中的氨基酸突变435个,通过氨基酸频率图表分析这些突变可以很好地反映病毒适应性进化过程,其中79个突变是有效变换,发生的位点为正选择位点,且多数位点落在HA抗原表位上;29个突变是高频次突变,其中多数也为有效变换,因而与病毒适应性进化密切相关。结论:大规模自动化寻找突变的方法可靠,建立的突变评价体系准确性高,找到的关键突变及位点对实验有很好的指导意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒h5n1 血凝素 适应性进化 关键突变 氨基酸频率 有效变换 高频次突变
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H5N1禽流感病毒NA基因重组腺病毒表达载体的构建
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作者 王青 胡建和 +3 位作者 徐彦召 朱国坡 宋涛 李任峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第6期15-19,共5页
构建携带有H5N1亚型AIV NA基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究AIV中NA基因在病毒致病过程中的作用及相关诊断试剂的开发提供依据。采用PCR的方法从构建好的包含有H5N1AIV NA基因的pMD-19T-N1质粒中扩增出NA基因,定向插入pAdtrack-CM... 构建携带有H5N1亚型AIV NA基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究AIV中NA基因在病毒致病过程中的作用及相关诊断试剂的开发提供依据。采用PCR的方法从构建好的包含有H5N1AIV NA基因的pMD-19T-N1质粒中扩增出NA基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-N1,将pAdeasyd-N1经pacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有NA基因的腺病毒pAd-N1。结果表明,构建含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-N1经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误。线性化后的pAdeasy-N1转染HEK293细胞,成功获得腺病毒pAd-N1载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。 展开更多
关键词 腺病毒载体 AIV h5n1亚型 nA基因 载体构建
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