6省13个产地颠茄草中2种成分测定及相关性分析 被引量：13

1

作者 吴玉婷 吕伟旗 汤晟凌 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1618-1623,共6页

目的测定6省13个产地颠茄草Atropa belladonna L.中莨菪碱、总生物碱,并分析其相关性。方法紫外可见分光光度法法测定全草总生物碱含有量,反相高效液相色谱法测定莨菪碱含有量,考察其与产地经纬度、海拔的相关性,SPSS17.0软件进行方差... 目的测定6省13个产地颠茄草Atropa belladonna L.中莨菪碱、总生物碱,并分析其相关性。方法紫外可见分光光度法法测定全草总生物碱含有量,反相高效液相色谱法测定莨菪碱含有量,考察其与产地经纬度、海拔的相关性,SPSS17.0软件进行方差分析与聚类分析。结果总生物碱在0.02~0.20 mg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率101.85%,RSD 1.09%;莨菪碱在50~500μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率99.98%,RSD 1.64%,与株高、主茎粗、分蘖数、叶长、叶宽、叶柄长、鲜重呈正相关关系,与叶长宽比、纬度、海拔呈负相关关系;13批样品分为4个类群。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于颠茄草的质量控制。 展开更多

关键词 颠茄草 总生物碱 莨菪碱 相关性 聚类分析

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UV-B胁迫下Ca^(2+)对颠茄生理特性与次生代谢产物的调控研究 被引量：10

2

作者 卢克欢 刘兴 +2 位作者 杨怡 廖志华 吴能表 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1527-1538,共12页

有害中波紫外线(Ultraviolet B, UV-B; 280~320 nm)辐射影响植物的生长和发育, Ca^(2+)是植物生长发育所必须的大量元素之一,外源Ca^(2+)不但可以提高植物抗胁迫能力,还对次生代谢具有调控作用。以颠茄(AtropabelladonnaL.)实生苗为材料... 有害中波紫外线(Ultraviolet B, UV-B; 280~320 nm)辐射影响植物的生长和发育, Ca^(2+)是植物生长发育所必须的大量元素之一,外源Ca^(2+)不但可以提高植物抗胁迫能力,还对次生代谢具有调控作用。以颠茄(AtropabelladonnaL.)实生苗为材料,在UV-B辐射(10μW cm^(–2))背景下,研究不同浓度外源Ca^(2+)、不同处理时间对颠茄生理特性、氮代谢、次生代谢产物含量以及托品烷类生物碱代谢途径中3个关键酶基因表达量的影响。结果表明,随着UV-B辐射时间的延长(4~12 d),对颠茄的光合作用、氮代谢以及生物碱的积累产生抑制作用,加剧了膜脂氧化程度;经外源Ca^(2+)处理,叶片初始荧光(Fo)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量呈下降趋势,叶片最大光化学效率(F_v/F_m)、光合色素(总叶绿素、类胡萝卜素)含量、抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性均呈上升趋势,说明Ca^(2+)有利于缓解UV-B辐射的抑制,加强对UV-B胁迫的抗性;在Ca^(2+)处理下,叶片中硝态氮含量显著降低,游离氨基酸、可溶性蛋白含量和氮代谢关键酶(NR、GS、GDH)的活性显著提高,叶片中莨菪碱含量和东莨菪碱含量显著提高;qRT-PCR分析显示,在外源Ca^(2+)的诱导下,托品烷类生物碱合成途径中3个关键酶基因(PMT、TR I、H6H)表达量均有不同程度上调趋势。本研究结果可为田间种植提供理论参考。 展开更多

关键词 UV-B胁迫 颠茄 生理特性 氮代谢 托品烷类生物碱

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颠茄PMT·TR-I和H6H基因植物高效表达载体的构建 被引量：9

3

作者 成瑜 杨春贤 +5 位作者 王贵君 李郑娜 杨颖舫 冯国庆 陈敏 廖志华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第14期7211-7213,共3页

[目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)基因、托品酮还原酶-I(Tropinone reductase-I,TR-I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H)基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方... [目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)基因、托品酮还原酶-I(Tropinone reductase-I,TR-I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H)基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆到PMT、TR-I和H6H基因编码区序列,并连接到植物表达载体pCAMBIA1304+(p1304+)中。[结果]成功构建了植物高效表达载体p1304+-PMT、p1304+-TR-I、p1304+-H6H、p1304+-PMT-H6H、p1304+-TR-I-PMT和p1304+-TR-I-H6H,并转化农杆菌,获得可直接用于遗传改良颠茄的工程菌。[结论]该研究为利用植物基因工程技术提高东莨菪碱的产量奠定了基础。 展开更多

关键词 东莨菪碱 颠茄 1 4-丁二胺-氮-甲基转移酶 托品酮还原酶-I 莨菪碱6-β-羟化酶 载体构建

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外源性5-氨基乙酰丙酸对盐胁迫下颠茄生理特性及次生代谢产物含量的影响 被引量：9

4

作者 卢克欢 郭双 +2 位作者 韦悦 张翠平 吴能表 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期13-20,共8页

通过对颠茄幼苗生理特性及生物碱含量的研究,寻找提高颠茄在盐胁迫条件下的抗性能力以及提高生物碱含量的途径.采用100 mmol/L NaCl溶液和不同质量浓度5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)溶液处理颠茄幼苗,对颠茄叶片的叶绿素含量、叶绿素荧光参数... 通过对颠茄幼苗生理特性及生物碱含量的研究,寻找提高颠茄在盐胁迫条件下的抗性能力以及提高生物碱含量的途径.采用100 mmol/L NaCl溶液和不同质量浓度5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)溶液处理颠茄幼苗,对颠茄叶片的叶绿素含量、叶绿素荧光参数、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、游离脯氨酸含量、丙二醛(MDA)含量、抗氧化酶(SOD,POD)活性及莨菪碱、东莨菪碱含量进行测定.结果表明:叶面喷施5-ALA可显著(p>0.05)提高抗氧化酶活性及叶绿素含量、渗透调剂物质含量,降低盐胁迫对细胞质膜过氧化程度和PSⅡ的损伤程度,同时可提高盐胁迫下颠茄中东莨菪碱的产量,但是对莨菪碱产量的作用不明显.外源5-ALA可有效缓解盐胁迫对颠茄生长的抑制,提高其抗盐能力. 展开更多

关键词 颠茄 盐胁迫 生理特性 次生代谢

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诱导子对颠茄毛状根有效成分及代谢关键酶基因表达的影响 被引量：9

5

作者 郭双 刘佳 +3 位作者 卢克欢 张翠平 韦悦 吴能表 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期897-902,共6页

目的提高药用植物颠茄Atropa belladonna有效成分的产量,为颠茄在实际生产中提供经济高效的处理方法,为相关药用植物次生代谢的机制研究提供基础性参考。方法通过向培养基中添加4种不同诱导子,包括茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨... 目的提高药用植物颠茄Atropa belladonna有效成分的产量,为颠茄在实际生产中提供经济高效的处理方法,为相关药用植物次生代谢的机制研究提供基础性参考。方法通过向培养基中添加4种不同诱导子,包括茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨酸(SA)、酵母提取物(YE),研究诱导子对颠茄毛状根有效成分的积累及代谢途径中的关键酶基因1,4-丁二氨-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyl transferase,pmt)基因、托品酮还原酶-I(tropinone reductase-I,tr I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(hyoscyamine-6-β-hydroxylase,h6h)基因表达的影响。实验将0.5 g新鲜颠茄毛状根接种于盛有B5液体培养基的三角瓶中,暗培养12 d后,将培养基更换为含有诱导子的4种新培养基,相同条件下再培养2 d后采集毛状根样品,测定每瓶毛状根的鲜质量、干质量、部分生理指标、托品烷类生物碱的量及3种关键酶基因的表达量。结果 MJ抑制了颠茄毛状根的生长及托品烷类生物碱的产生,pmt、trI基因的表达量与对照组相比也有所下降;AgNO_3虽然抑制了毛状根的生长,但却显著提高了托品烷类生物碱的含量,同时pmt、trI、h6h基因的表达量均升高;SA对颠茄毛状根的生长影响不显著,但使东莨菪碱的含量提高;YE对颠茄毛状根的生长及托品烷类生物碱的含量均有促进作用,pmt、trI、h6h基因的表达量也相应升高。结论 AgNO_3是提高颠茄毛状根中托品烷类生物碱含量的最佳诱导子,YE在促进颠茄毛状根生长的同时也可促进其次生代谢。推断诱导子通过调控某种或某几种关键酶基因的表达来影响生物碱的代谢合成,为生产中提高颠茄毛状根药用成分含量提供了可参考的方法。 展开更多

关键词 颠茄 诱导子 托品烷类生物碱 毛状根 茉莉酸甲酯 硝酸银 水杨酸 酵母提取物

原文传递

UV-B辐射对颠茄氮代谢及次生代谢产物含量的影响 被引量：9

6

作者 卢克欢 苏贝贝 +3 位作者 郭双 张翠平 韦悦 吴能表 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1062-1069,共8页

有害的中波紫外线(ultraviolet B,UV-B;280~320 nm)辐射影响植物的生长与发育。但也有研究证明,UV-B辐射可诱导生物碱合成。然而,UV-B辐射能否提高颠茄(Atropa belladonna L.)中托品烷类生物碱(tropane alkaloids,TAs)的含量尚未见报道... 有害的中波紫外线(ultraviolet B,UV-B;280~320 nm)辐射影响植物的生长与发育。但也有研究证明,UV-B辐射可诱导生物碱合成。然而,UV-B辐射能否提高颠茄(Atropa belladonna L.)中托品烷类生物碱(tropane alkaloids,TAs)的含量尚未见报道。本研究以颠茄实生苗为材料,研究UV-B不同照射度强、时间(d数)对颠茄的氮代谢、生物碱含量及TAs代谢途径中的几个关键酶基因表达量的影响。结果表明,随着辐射天数的增加(5~30 d),低强度(LU,5μW/cm^2)UV-B处理与对照(无辐射)比较,硝态氮、莨菪碱、东莨菪碱含量无显著差异。然而,中等强度(MU,10μW/cm^2)和高强度(HU,15μW/cm^2)UV-B辐射,明显增加硝态氮含量,谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、谷氨酸脱氢酶(glutamine dehydrogenase,GDH)活性明显高于对照。重要的是,中、高强度UV-B辐射显著降低了颠茄的叶片与茎中莨菪碱和东莨菪碱含量。荧光定量PCR揭示,莨菪碱合成的关键酶腐胺N-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)编码基因、莨菪碱-6-β-羟化酶(hyoscyamine-6-β-hydroxylase,H6H)基因表达呈高度组织特异性,主要是在根部表达。与对照比较,低强度照射25 d引起pmt在根部的表达量显著上调,而中、高强度照射导致其下调;h6h在根部的相对表达量随着处理强度的增加逐渐降低;托品酮还原酶Ⅰ(tropinone reductaseⅠ,TRⅠ)编码基因在叶片中的表达量较高,随照射强度的增加而升高。上述结果表明,低强度UV-B辐射促进氮代谢,有利于莨菪碱合成;而长期中、高强度UV-B辐射,尽管促进了谷氨酸代谢,但却使pmt和h6h表达降低,不利于莨菪碱和东莨菪碱的积累。总之,本研究结果显示,不同UV-B辐射强度和时间,对颠茄合成TAs的影响不同,可为大田试验生产莨菪碱提供有益的参考。 展开更多

关键词 颠茄 中波紫外线(ultraviolet B UV-B)辐射 氮代谢 托品烷类生物碱

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盐胁迫下外源2,4-表油菜素内酯对颠茄氮代谢及TAs代谢的影响 被引量：8

7

作者 辛正琦 代欢欢 +3 位作者 辛余凤 何潇 谢海艳 吴能表 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2001-2011,共11页

以颠茄(Atropa belladonna L.)幼苗为材料,采用盆栽试验,使用外源2,4-表油菜素内酯(2,4-Epibrassinolide, EBR)处理幼苗,研究在100 mmol L^(-1)NaCl胁迫下不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4mgL^(-1))外源EBR在不同处理时间(5、10、15、20d)... 以颠茄(Atropa belladonna L.)幼苗为材料,采用盆栽试验,使用外源2,4-表油菜素内酯(2,4-Epibrassinolide, EBR)处理幼苗,研究在100 mmol L^(-1)NaCl胁迫下不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4mgL^(-1))外源EBR在不同处理时间(5、10、15、20d)内对颠茄氮代谢、次生代谢产物含量以及托品烷类生物碱(tropane alkaloids, TAs)合成途径中前体物质含量、关键酶基因表达量的影响,旨在明确外源EBR调控颠茄耐盐性的生理机制。盐胁迫下颠茄氮代谢受到抑制,而施加外源EBR能够有效增强颠茄的氮代谢能力,硝态氮含量显著升高,铵态氮含量降低,游离氨基酸、可溶性蛋白含量以及氮代谢关键酶活性均有不同程度的上升。盐胁迫不利于生物碱的合成和积累,显著降低了TAs途径中前体物质的合成和关键酶基因的表达。外施0.1 mg L^(-1) EBR能够有效提高鸟氨酸、精氨酸、多胺含量以及腐胺合成关键酶活性,并通过上调TAs途径中关键酶基因TR I、H6H的表达量来提高莨菪碱和东莨菪碱的含量。表明适宜浓度的外源EBR能够有效缓解盐胁迫对颠茄生理代谢的破坏,通过提高氮代谢能力、促进TAs的产生和积累,提高颠茄幼苗的耐盐性。 展开更多

关键词 颠茄 盐胁迫 氮代谢 次生代谢

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诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱质量分数的影响 被引量：6

8

作者 刘佳 卢克欢 +3 位作者 郭双 张翠平 韦悦 吴能表 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期75-80,共6页

目的:研究不同浓度茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨酸(SA)、酵母提取物(YE)4种诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱合成的影响.方法:将0.5g新鲜颠茄毛状根接种于B5液体培养基中,黑暗培养12d后,将原有培养基换成加有不同浓度... 目的:研究不同浓度茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨酸(SA)、酵母提取物(YE)4种诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱合成的影响.方法:将0.5g新鲜颠茄毛状根接种于B5液体培养基中,黑暗培养12d后,将原有培养基换成加有不同浓度诱导子的4种新培养基,同样条件下再培养2d,收集颠茄毛状根材料,测定其鲜质量与干质量及托品烷类生物碱的含量.结果:MJ抑制了毛状根生长与托品烷类生物碱的积累,而AgNO_3虽然抑制了颠茄毛状根的生长,但却显著提高了托品烷类生物碱的积累,托品烷类生物碱的产量在100μmol/L AgNO_3处理下达到26.191mg,是对照的219.9%.在SA处理下,较小程度地抑制了毛状根的生长,对东莨菪碱的积累有促进作用.在YE处理下,随试验浓度升高,对毛状根生长及托品烷类生物碱的积累的促进作用也逐渐增强.结论:AgNO_3是提高毛状根中托品烷类生物碱的最佳诱导子,而YE是对颠茄毛状根生长的最佳诱导子. 展开更多

关键词 颠茄 诱导子 托品烷类生物碱 毛状根

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超表达HnCYP82M3和DsTRI基因对颠茄托品烷生物碱合成的影响

9

作者 穆德会 刘艳红 +5 位作者 陈漂漂 谭艾娟 马炳南 潘航 张明生 强玮 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期775-783,共9页

托品烷生物碱(TAs)是一类临床上广泛应用的抗胆碱药物,颠茄是提取TAs的主要药源植物,利用代谢工程技术大量获取TAs具有重要的产业价值。本研究基于开源引流代谢工程策略,在颠茄发根中超表达TAs合成途径分支处的细胞色素氧化酶(cytochrom... 托品烷生物碱(TAs)是一类临床上广泛应用的抗胆碱药物,颠茄是提取TAs的主要药源植物,利用代谢工程技术大量获取TAs具有重要的产业价值。本研究基于开源引流代谢工程策略,在颠茄发根中超表达TAs合成途径分支处的细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,CYP82M3)HnCYP82M3(来源于天仙子)和托品酮还原酶I(tropinone reductase I,TRI)DsTRI(来源于曼陀罗)两个酶基因,以期通过CYP82M3催化合成托品酮(开源),TRI进而将托品酮引入TAs合成的代谢方向(引流),大量促进3种TAs的积累。从天仙子根中克隆了HnCYP82M3基因,其编码氨基酸与颠茄AbCYP82M3序列一致性高达91.7%。单独超表达HnCYP82M3不影响颠茄发根TAs的含量,说明CYP82M3不是TAs合成的关键酶。同时超表达HnCYP82M3和DsTRI极大促进了3种TAs的积累,莨菪碱、山莨菪和东莨菪碱含量分别是对照的4.97倍、2.83倍和2.19倍,并且提高幅度大于DsTRI单表达。本研究证明分支点处酶基因共表达的开源引流策略是有效提高颠茄TAs合成的代谢工程新方法,为工业化大量获取TAs奠定了理论和技术基础。 展开更多

关键词 CYP82M3 TRI 托品烷生物碱 颠茄 代谢工程

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rolB基因对颠茄表型发育和托品烷生物碱合成的影响 被引量：1

10

作者 敖雯雯 谭艾娟 +5 位作者 马炳南 穆德会 路星星 潘航 张明生 强玮 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1705-1712,共8页

发根农杆菌pRiA4质粒上的rol基因是促进次生代谢的强效基因,可利用rol基因对颠茄进行分子育种以提升颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)含量。本研究将rolB基因在颠茄植株中进行超表达,为了研究rolB基因对颠茄TAs生物合成的影... 发根农杆菌pRiA4质粒上的rol基因是促进次生代谢的强效基因,可利用rol基因对颠茄进行分子育种以提升颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)含量。本研究将rolB基因在颠茄植株中进行超表达,为了研究rolB基因对颠茄TAs生物合成的影响,分析了转基因颠茄的表型、TAs含量及TAs合成途径中关键酶基因的表达水平。结果表明,转基因颠茄根系发达,叶片增大、叶片鲜重增加、叶片颜色加深,花朵增大、花形改变,雌蕊高度降低,花粉活力下降。转基因颠茄茎中TAs的含量显著高于对照,东莨菪碱、山莨菪碱、莨菪碱的含量分别为对照的2.11~2.91、1.23~2.37、4.88~5.20倍。与对照组相比, TAs合成途径中的关键酶基因N-甲基腐胺转移酶(PMT)、吡咯烷聚酮合酶(PYKS)、托品酮还原酶I (TRI)、芳香族氨基酸氨基转移酶4 (ArAT4)、UDP-糖基转移酶1 (UGT1)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达上调,且托品酮还原酶II (TRII)作为代谢分流基因表达下调。研究表明rolB基因通过增强TAs合成途径代谢流和减弱竞争支路代谢分流,增强了颠茄根中TAs的合成能力和茎中的积累。本研究为利用rolB基因进行高产TAs颠茄的分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 ROlB基因 颠茄 东莨菪碱 山莨菪碱 莨菪碱

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颠茄精氨酸脱羧酶基因的克隆与表达分析 被引量：5

11

作者 王中平 秦白富 +5 位作者 强玮 邱飞 侯艳玲 陈敏 兰小中 廖志华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期2734-2740,共7页

目的克隆颠茄Atropa belladonna精氨酸脱羧酶(arginine decarboxylase,ADC)基因并进行生物信息学、组织表达谱和诱导谱分析。方法以颠茄总RNA反转录的cDNA为模板,采用RACE技术克隆颠茄ADC基因的全长cDNA序列,利用BLAST和PBIL等在线工具... 目的克隆颠茄Atropa belladonna精氨酸脱羧酶(arginine decarboxylase,ADC)基因并进行生物信息学、组织表达谱和诱导谱分析。方法以颠茄总RNA反转录的cDNA为模板,采用RACE技术克隆颠茄ADC基因的全长cDNA序列,利用BLAST和PBIL等在线工具进行生物信息学分析,采用实时定量PCR(q RT-PCR)技术对ADC基因进行组织表达谱和诱导谱分析。结果克隆到2个ADC基因,分别命名为AbADC1(登录号KT802752)和AbADC2(登录号KT802751)。AbADC1基因cDNA全长为2 817 bp,编码712个氨基酸残基;AbADC2基因cDNA全长为2 992 bp,编码715个氨基酸残基。蛋白质序列比对表明,AbADC1与马铃薯Solanum tuberosum ADC的相似性较高,为89%;AbADC2与曼陀罗Datura stramonium ADC的相似性较高,为90%。q RT-PCR检测结果表明,AbADC1在须根中的表达量最高,而AbADC2在主根中的表达量最高;AbADC1和AbADC2均不受盐胁迫响应,AbADC2受低温胁迫响应。结论首次克隆并获得了2条颠茄ADC基因全长序列,为进一步研究颠茄托品烷类生物碱的代谢合成奠定了基础。 展开更多

关键词 颠茄 精氨酸脱羧酶 基因表达 托品烷类生物碱 总RNA CDNA

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颠茄最佳采收期的研究 被引量：4

12

作者 王峰伟 马延康 +2 位作者 雷卫宾 上官建国 潘晓 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第15期61-63,共3页

通过研究颠茄干物质、生物碱含量积累动态来确定最佳采收期,为颠茄规范化种植提供理论依据。结果表明:在整个生育期内,颠茄的干重呈不断增加的趋势,于9月下旬达到最大值,单株干重可达152.48g;生物碱的含量花果期积累最快,9月中旬达到最... 通过研究颠茄干物质、生物碱含量积累动态来确定最佳采收期,为颠茄规范化种植提供理论依据。结果表明:在整个生育期内,颠茄的干重呈不断增加的趋势,于9月下旬达到最大值,单株干重可达152.48g;生物碱的含量花果期积累最快,9月中旬达到最大值,可达4.86%,而后则出现下降的趋势。综合分析产量与质量因素,9月中旬颠茄经济产量最高,为最佳采收时间。 展开更多

关键词 颠茄 干重 生物碱

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rolC基因对颠茄托品烷生物碱合成的影响 被引量：3

13

作者 路星星 谭艾娟 +5 位作者 周浩 敖雯雯 吕世明 满建民 张明生 强玮 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期533-540,共8页

发根农杆菌浸染植物后产生的发根可合成高水平次生代谢产物,这种代谢增强作用是由rol基因诱导激发的,因此可利用rol基因提高颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)的合成能力。本研究以颠茄为实验材料,将发根农杆菌pRiA4质粒上的r... 发根农杆菌浸染植物后产生的发根可合成高水平次生代谢产物,这种代谢增强作用是由rol基因诱导激发的,因此可利用rol基因提高颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)的合成能力。本研究以颠茄为实验材料,将发根农杆菌pRiA4质粒上的rolC基因通过CaMV35S启动子驱动,导入颠茄中超表达。分析转基因颠茄的表型、TAs含量以及TAs合成途径关键酶基因转录表达水平表化。结果表明,转基因颠茄表现出根系发达、雄性不育、雄蕊柱长高于雌蕊、提前开花、节间缩短、花小且多、腋芽和侧芽增多、顶端优势下降和叶片狭长等表型;转基因颠茄的TAs含量均显著高于对照,莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量最高可达对照的2.58、3.59和15.77倍;TAs合成途径中的3个关键酶基因腐胺N-甲基转移酶(PMT)、托品酮还原酶I(TRⅠ)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达量与对照相比表达上调。以上研究表明rolC基因通过上调颠茄TAs合成关键酶基因的表达提高了颠茄中TAs的合成能力,为利用rolC基因进行高TAs含量的颠茄分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 颠茄 ROlC基因 莨菪碱 东莨菪碱 山莨菪碱

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3种常用培养基对颠茄毛状根生长与次生代谢产物积累的影响 被引量：4

14

作者 张翠平 李琳琳 +3 位作者 韦悦 卢克欢 郭双 吴能表 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期36-41,共6页

研究了B5,MS,N6 3种培养基对颠茄毛状根的生长及托品烷类生物碱质量分数和产量的影响.结果表明:B5,MS培养基中颠茄毛状根的生物量明显高于N6培养基,两者之间差异无统计学意义,但B5培养基中东莨菪碱和莨菪碱质量分数与产量均显著高于MS... 研究了B5,MS,N6 3种培养基对颠茄毛状根的生长及托品烷类生物碱质量分数和产量的影响.结果表明:B5,MS培养基中颠茄毛状根的生物量明显高于N6培养基,两者之间差异无统计学意义,但B5培养基中东莨菪碱和莨菪碱质量分数与产量均显著高于MS培养基.因此,比较3种培养基,B5培养基作为基本培养基不仅有利于颠茄毛状根的生长,也对托品烷类生物碱的合成有促进作用,为建立适合其生长和次生代谢产物产生的离体培养体系提供了理论依据. 展开更多

关键词 颠茄 毛状根 培养基 托品烷类生物碱

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多阶段采样分析颠茄草特征成分变化规律及最佳采收期 被引量：2

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作者 冯言颜 熊维政 +2 位作者 李磊 郭立 郭军霞 《医药导报》 CAS 北大核心 2022年第9期1354-1359,共6页

目的考察河南秋种颠茄草不同采收时间及不同部位对药材质量的影响,并将不同产地颠茄草中硫酸天仙子胺和东莨菪内酯2种特征成分含量进行对比分析。方法采用高效液相色谱法测定不同采收时间、不同部位及不同产地颠茄草中硫酸天仙子胺和东... 目的考察河南秋种颠茄草不同采收时间及不同部位对药材质量的影响,并将不同产地颠茄草中硫酸天仙子胺和东莨菪内酯2种特征成分含量进行对比分析。方法采用高效液相色谱法测定不同采收时间、不同部位及不同产地颠茄草中硫酸天仙子胺和东莨菪内酯的含量。比较河南秋种颠茄草各部位对全草2种特征成分的贡献值,预测河南秋种颠茄草最佳采收时间,并对不同产地颠茄药材进行聚类分析。结果硫酸天仙子胺、东莨菪内酯分别在0.25~8.00 mg·mL^(-1),18.764~600.44μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.07%,94.76%,RSD分别为1.30%,1.04%;2种成分含量在6月中旬最高;河南秋种颠茄草不同部位对全草两种成分贡献值的大小为:叶>茎>果>根;20个产地样品可聚为4类,其中河南秋种颠茄草质量较好。结论河南秋种颠茄草质量较好,6月中旬采收较适宜。 展开更多

关键词 颠茄草 特征成分 采收期

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颠茄高频再生体系的建立及卡那霉素抗性筛选 被引量：2

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作者 王细荣 强玮 +3 位作者 卢衍 李金弟 陈敏 廖志华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10197-10198,10373,共3页

[目的]建立颠茄高频再生体系及筛选卡那霉素(Kan)抗性。[方法]以颠茄叶片及腋芽为外植体,研究了培养基中6-BA和NAA不同配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽对Kan的敏感性。[结果]MS+4.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA为叶片不定芽分化的最佳... [目的]建立颠茄高频再生体系及筛选卡那霉素(Kan)抗性。[方法]以颠茄叶片及腋芽为外植体,研究了培养基中6-BA和NAA不同配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽对Kan的敏感性。[结果]MS+4.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA为叶片不定芽分化的最佳培养基,不定芽分化率达100%,在1cm×1cm叶块上的不定芽分化数平均达5.85;MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA为腋芽不定芽分化的最适培养基,不定芽分化率达100%,每个腋芽不定芽分化平均数为4～8个;400.0mg/LKan为颠茄叶片遗传转化的最佳筛选浓度。[结论]为颠茄无菌苗的快速繁殖以及基于叶盘法的遗传转化奠定了基础。 展开更多

关键词 颠茄 再生体系 Kan 敏感性

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PMT和H6H双基因共转化颠茄发根的植株再生 被引量：2

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作者 杨春贤 周启贵 +4 位作者 陈敏 彭梅芳 张婷婷 张磊 廖志华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1548-1551,共4页

目的获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株。方法选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1... 目的获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株。方法选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基培养1、5、10d后,转入1/2MS固体培养基中诱导不定芽和不定根,培养条件均为(25±1)℃,55μmol/(m2.s),12h/d。采用PCR扩增检测再生植株的PMT、H6H和NPT-。结果发根在1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基上培养5d后,转入1/2MS固体培养基上培养,60%的外植体能自发长出不定芽,1/2MS+0.1mg/LIBA固体培养基中诱导生根较1/2MS固体培养基强,15d产生的条数平均为9条,形成了完整的再生植株。PCR检测表明所有再生植株均为颠茄的转基因再生植株。结论建立了颠茄转化发根再生体系,为实现颠茄托品烷类生物碱的代谢工程及开展分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 颠茄 1 4-丁二胺-氮甲基转移酶 莨菪碱-6β-羟化酶 发根 再生

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颠茄AbCYP80F1基因的克隆与功能分析 被引量：1

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作者 付维 郑涛 +4 位作者 姜育松 康健 张明生 苟光前 强玮 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第16期4291-4299,共9页

目的克隆颠茄Ab CYP80F1基因和启动子序列,分析启动子上与调控信号和转录因子相关的调控元件,研究Ab CYP80F1基因超表达对颠茄发根中东莨菪碱积累的影响。方法以莨菪CYP80F1为探针,在颠茄转录组中进行Blastn检索获得同源的unigene。采用... 目的克隆颠茄Ab CYP80F1基因和启动子序列,分析启动子上与调控信号和转录因子相关的调控元件,研究Ab CYP80F1基因超表达对颠茄发根中东莨菪碱积累的影响。方法以莨菪CYP80F1为探针,在颠茄转录组中进行Blastn检索获得同源的unigene。采用RACE技术克隆Ab CYP80F1全长,热不对称PCR技术克隆启动子序列,发根农杆菌浸染法获得超表达AbCYP80F1基因的颠茄发根,对培养的发根中东莨菪碱含量进行HPLC分析。结果克隆得到1 675 bp的全长Ab CYP80F1基因,其编码蛋白与铃铛子的CYP80F1亲缘关系最近。基因上游2 000 bp启动子上包含的顺式作用元件涉及光、无氧、生长素、茉莉酸、赤霉素和低温信号响应,同时包含有MYB、AP2/ERF、WRKY和bHLH转录因子的识别位点。超表达Ab CYP80F1基因使颠茄发根中东莨菪碱含量平均提高了1.8倍。结论 AbCYP80F1是颠茄须根特异性表达的合成途径基因,超表达能提高终产物东莨菪碱含量,Ab CYP80F1可能受到WRKY和bHLH转录因子的调控。 展开更多

关键词 颠茄 AbCYP80F1 东莨菪碱 启动子分析 RACE技术

原文传递

外源茉莉酸甲酯对UV-B胁迫下颠茄生物碱积累及TAs代谢途径调控的机制探究 被引量：1

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作者 山雨思 辛正琦 +2 位作者 何潇 代欢欢 吴能表 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1894-1904,共11页

以颠茄(Atropa belladonna L.)为材料,采用外源茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理颠茄幼苗,研究UV-B胁迫下不同浓度外源MeJA在不同处理时间对颠茄托品烷类生物碱(tropane alkaloids,TAs)含量、TAs合成途径上游产物、信号分子以及... 以颠茄(Atropa belladonna L.)为材料,采用外源茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理颠茄幼苗,研究UV-B胁迫下不同浓度外源MeJA在不同处理时间对颠茄托品烷类生物碱(tropane alkaloids,TAs)含量、TAs合成途径上游产物、信号分子以及关键酶基因表达量的影响,初步探究UV-B胁迫下外源MeJA调控颠茄TAs代谢途径的机制。UV-B胁迫显著降低了颠茄莨菪碱和东莨菪碱的含量,对TAs合成途径前体物质的积累产生抑制作用,不利于TAs合成代谢。经适宜浓度的MeJA处理后,颠茄TAs含量有一定程度的提高,次生代谢途径中前体氨基酸(鸟氨酸和精氨酸)、多胺含量以及腐胺合成关键酶活性也均有不同程度的上升;信号分子NO的浓度随MeJA浓度的升高呈先升后降的趋势,在MeJA浓度为250μmol L^(-1)时达到最高。对TAs合成途径关键酶基因表达量的检测发现,在外源MeJA的诱导下,颠茄叶片和根部TRI、PPAR、H6H表达量均有不同程度的上调。表明外源MeJA通过诱导颠茄TAs合成上游产物含量的升高,刺激NO的迸发,为TAs合成途径提供更多的前体物质,同时通过调控TAs代谢途径中关键酶基因TRI、PPAR与H6H的高效表达,有效缓解UV-B胁迫对颠茄TAs的抑制作用,提高颠茄莨菪碱和东莨菪碱的含量。以上研究结果可为今后进一步研究逆境胁迫下外源诱导子调控颠茄TAs次生代谢途径机制提供依据,以期在实际生产中有效提高颠茄的抗逆性和其药用成分的积累。 展开更多

关键词 茉莉酸甲酯 UV-B胁迫 颠茄 托品烷类生物碱 次生代谢

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外施MeJA调控UV-B辐射下颠茄生理特性及氮代谢的影响

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作者 何会流 山雨思 谢玉华 《内江师范学院学报》 CAS 2021年第8期58-62,共5页

以颠茄幼苗为试材,UV-B(10μW·cm-2)辐射下,研究外施不同浓度MeJA对颠茄幼苗逆境生理及氮代谢的影响(处理时长12 d).结果表明:外施MeJA可显著提高UV-B辐射下颠茄叶片光合色素和脯氨酸含量,其中250μmol·L-1 MeJA更能促进二者... 以颠茄幼苗为试材,UV-B(10μW·cm-2)辐射下,研究外施不同浓度MeJA对颠茄幼苗逆境生理及氮代谢的影响(处理时长12 d).结果表明:外施MeJA可显著提高UV-B辐射下颠茄叶片光合色素和脯氨酸含量,其中250μmol·L-1 MeJA更能促进二者含量的积累;抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性在外施不同浓度MeJA处理后也有一定程度的提升,而MDA含量则显著降低.对氮代谢的研究发现,可溶性蛋白、硝态氮、游离氨基酸含量以及氮代谢关键酶(NR、GS、GDH)活性,在UV-B辐射下外施MeJA处理后,均有显著提高,而铵态氮含量显著降低.因此,本试验结果显示,在UV-B辐射下,外施适宜浓度的MeJA有利于颠茄幼苗的生长和氮素代谢,可有效缓解UV-B辐射对颠茄幼苗的伤害. 展开更多

关键词 颠茄 UV-B 外源MeJA 逆境生理 氮代谢

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