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耳蜗毛细胞与血管纹的相互依存关系的研究 被引量:10
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作者 李轶 刘会占 +1 位作者 龚树生 何志洲 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期475-480,共6页
目的通过对Atoh1条件基因敲除小鼠及Mitf基因突变小鼠两个动物模型的研究,来验证毛细胞及血管纹两者的存活是否相互依赖,以及在内耳中是否存在钾离子从血管纹—毛细胞—支持细胞—血管纹循环通路。方法分别对一月龄两种模型小鼠进行ABR... 目的通过对Atoh1条件基因敲除小鼠及Mitf基因突变小鼠两个动物模型的研究,来验证毛细胞及血管纹两者的存活是否相互依赖,以及在内耳中是否存在钾离子从血管纹—毛细胞—支持细胞—血管纹循环通路。方法分别对一月龄两种模型小鼠进行ABR、CM、CAP和EP的测量。并用免疫组化和共聚焦显微镜以及耳蜗铺片、切片对两种模型小鼠的耳蜗Corti’s器和血管纹进行形态学观察。结果内淋巴的缺损可造成外毛细胞的凋亡,但内毛细胞依然能够存活。20 mV的内淋巴电位是外毛细胞存活所必须的。血管纹的生存及功能并不需要功能正常的Corti’s器的支持,同时内淋巴电位的产生及维持并不依赖毛细胞及支持细胞的钾离子循环的支持。结论成熟毛细胞的存活依赖于正常的血管纹功能和内淋巴的离子环境。然而,血管纹的存活及功能却并不依赖Corti’s器的功能。 展开更多
关键词 Corti’s器 血管纹 内淋巴电位 MITF Atoh1
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Lentivirus carrying the Atoh1 gene infects normal rat cochlea 被引量:6
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作者 Song Pan Jingzhi Wan +6 位作者 Shaosheng Liu Song Zhang Hao Xiong Jun Zhou Wu Xiong Kunfei Yu Yong Fu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第17期1551-1559,共9页
Lentivirus carrying the Atohl gene can infect Corti's organ and express a hair-like cell surface marker in the supporting cell area. However, expression of the gene carried by adenovirus is instantaneous, which undou... Lentivirus carrying the Atohl gene can infect Corti's organ and express a hair-like cell surface marker in the supporting cell area. However, expression of the gene carried by adenovirus is instantaneous, which undoubtedly limits its clinical application. Lentivirus acts as a carrier that can stably and continuously express genes. In this study, the cochlear structure and hearing level were not affected, and Atohl gene carried by lentivirus promoted the production of hair-like cells in the cochlear supporting cell area. This led to expression of the hair-like cell surface marker myosin 7a 30 days after lentivirus carrying Atohl was microinjected into the cochlear round window of rats. 展开更多
关键词 neural regeneration gene therapy atohl LENTIVIRUS hair cells myosin 7a COCHLEA auditorythreshold grants-supported paper NEUROREGENERATION
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Regeneration of hair cells in the mammalian vestibular system 被引量:2
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作者 Wenyan Li Dan You +2 位作者 Yan Chen Renjie Chai Huawei Li 《Frontiers of Medicine》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期143-151,共9页
Hair cells regenerate throughout the lifetime of non-mammalian vertebrates, allowing these animals to recover from hearing and balance deficits. Such regeneration does not occur efficiently in humans and other mammals... Hair cells regenerate throughout the lifetime of non-mammalian vertebrates, allowing these animals to recover from hearing and balance deficits. Such regeneration does not occur efficiently in humans and other mammals. Thus, balance deficits become permanent and is a common sensory disorder all over the world. Since Forge and Warchol discovered the limited spontaneous regeneration of vestibular hair cells after gentamicin- induced damage in mature mammals, significant efforts have been exerted to trace the origin of the limited vestibular regeneration in mammals after hair cell loss. Moreover, recently many strategies have been developed to promote the hair cell regeneration and subsequent functional recovery of the vestibular system, including manipulating the Wnt, Notch and Atohl. This article provides an overview of the recent advances in hair cell regeneration in mammalian vestibular epithelia. Furthermore, this review highlights the current limitations of hair cell regeneration and provides the possible solutions to regenerate functional hair cells and to partially restore vestibular function. 展开更多
关键词 UNCLE hair cell REGENERATION atohl NOTCH WNT
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Atoh1基因在耳聋康复中的研究进展 被引量:4
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作者 倪坤 黄红彦 《中国康复》 2006年第6期410-412,共3页
关键词 atohl 毛细胞再生 感音神经性耳聋 基因治疗
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髓母细胞瘤中Atoh1与Wnt/β-catenin和Shh通路的关系研究进展 被引量:1
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作者 李昱 唐俐 《中国神经肿瘤杂志》 2012年第4期267-271,共5页
髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是儿童最常见的脑肿瘤,Wnt与Shh信号通路与MB的发生密切相关。Wnt通路中的β-catenin能抑制Atoh1,而Atoh1调节Shh通路中的Gli2表达,Atoh1作为一个交汇点介导这两条通路的cross-talk。有关Wnt/β-catenin... 髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是儿童最常见的脑肿瘤,Wnt与Shh信号通路与MB的发生密切相关。Wnt通路中的β-catenin能抑制Atoh1,而Atoh1调节Shh通路中的Gli2表达,Atoh1作为一个交汇点介导这两条通路的cross-talk。有关Wnt/β-catenin与Shh通路cross-talk的作用机制研究将有助于阐明髓母细胞瘤的发病机制,有望为髓母细胞瘤的治疗提供一种新的策略。 展开更多
关键词 髓母细胞瘤 Atoh1 WNT/Β-CATENIN通路 Shh通路
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大鼠核转录因子Atoh1的克隆表达及鉴定
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作者 郑国玺 祝康 +3 位作者 侯瑾 朱珠 韦俊荣 许珉 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期438-443,共6页
目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS区序列,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从两只SD大鼠结肠黏膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并亚克隆于PMD-19T载体中。测序鉴定后将At... 目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS区序列,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从两只SD大鼠结肠黏膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并亚克隆于PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1 CDS区长1 056 bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,荧光显微镜和Western blot证实Atoh1目的蛋白能在293T细胞中稳定表达。结论基因工程方法可成功克隆出Atoh1编码序列,真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达。 展开更多
关键词 感音神经性聋 Atoh1 基因 克隆 真核表达载体
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Ad5-atoh1/EGFP在体诱导近成年豚鼠耳蜗产生毛细胞样细胞
7
作者 韩朝 丛宁 +3 位作者 杨娟梅 黄一波 靳楷 李雯 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期463-465,共3页
目的:在近成年豚鼠耳蜗内携带atoh1/EGFP基因的腺病毒是否能够将基膜上残留的支持细胞转分化为新的毛细胞。方法:选用体重在200~250g的健康花豚鼠12只,将构建同时表达atoh1和EGFP基因的E1/E3区缺失的人类免疫5型腺病毒5μl,通过耳蜗侧... 目的:在近成年豚鼠耳蜗内携带atoh1/EGFP基因的腺病毒是否能够将基膜上残留的支持细胞转分化为新的毛细胞。方法:选用体重在200~250g的健康花豚鼠12只,将构建同时表达atoh1和EGFP基因的E1/E3区缺失的人类免疫5型腺病毒5μl,通过耳蜗侧壁打孔灌注导入中阶内淋巴系统。其中6只于灌注2周后处死,6只灌注4周后处死,基膜铺片观察EGFP、毛细胞标记物myosinⅦa和Dapi核染色情况。结果:灌注2周处死的6只豚鼠中有2只在基膜外毛细胞外区域发现有散在的细胞核大、细胞体梭形的、表达EGFP的新生细胞。灌注4周的动物中有3只在基膜原外毛细胞位置和外毛细胞外区域发现有相似的同时表达EGFP和Myo-sinⅦa的新生细胞。结论:atoh1基因可以在近成年豚鼠体内将部分支持细胞转分化为毛细胞样细胞。这部分支持细胞位于外毛细胞位置和外毛细胞外区域的基膜上。 展开更多
关键词 腺病毒 atoh1 豚鼠 毛细胞 转分化
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大鼠Atoh1基因真核表达载体的构建及转染293T细胞的实验研究
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作者 郑国玺 祝康 +3 位作者 朱珠 侯瑾 韦俊荣 许珉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1131-1137,共7页
目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从SD大鼠结肠粘膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并TA克隆至PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连... 目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从SD大鼠结肠粘膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并TA克隆至PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(internal ribosome entrysite,IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜、PT-PCR和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1CDS区长1056bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,转染293T细胞48h后,荧光显微镜下观察到荧光蛋白的表达,PT-PCR和Western blot证实Atoh1的mRNA和蛋白能在293T细胞中正确表达。结论成功构建了真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP,并在293T细胞中成功表达,为进一步研究Atoh1的功能、作用机制及感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 感音神经性耳聋 Atoh1 基因克隆 真核表达载体
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SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析
9
作者 郑国玺 祝康 +3 位作者 朱珠 侯瑾 韦俊荣 许珉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期466-469,共4页
目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长... 目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致。这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达。结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 感音神经性耳聋 Atoh1 基因克隆 耳蜗毛细胞
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