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蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用
被引量：
4
1
作者
牛晓璐
许万福
+4 位作者
李松玉
柯志勇
曾方银
罗深秋
邓凡
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期351-355,共5页
目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分...
目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性。结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。
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关键词
蛋白激酶D1
烟曲霉分生孢子
NF-ΚB
转录激活
磷酸化
下载PDF
职称材料
TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用
被引量：
3
2
作者
饶振华
谢卫华
+3 位作者
苏明声
龙凯
罗闳丹
谢小梅
《中国科学：生命科学》
CSCD
北大核心
2012年第6期503-512,共10页
为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲...
为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
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关键词
NOD1
TLR4
TLR4-siRNA
烟曲霉孢子
调控关系
原文传递
题名
蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用
被引量：
4
1
作者
牛晓璐
许万福
李松玉
柯志勇
曾方银
罗深秋
邓凡
机构
南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室
南方医科大学骨科研究所
南方医科大学南方医院检验科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期351-355,共5页
基金
国家自然科学基金(30973014
81272852)
+1 种基金
广东省自然科学基金(10151051501000040)
广东省自然科学基金博士启动基金(9451051501003704)~~
文摘
目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性。结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。
关键词
蛋白激酶D1
烟曲霉分生孢子
NF-ΚB
转录激活
磷酸化
Keywords
protein
kinase
D1
aspergillusfumigatus
conidia
nuclear
factor-κB
transcriptional
activity
phosphorylation
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用
被引量：
3
2
作者
饶振华
谢卫华
苏明声
龙凯
罗闳丹
谢小梅
机构
江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室
江西中医学院药学院
出处
《中国科学：生命科学》
CSCD
北大核心
2012年第6期503-512,共10页
基金
国家自然科学基金(批准号:30560147和30760236)资助项目
文摘
为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
关键词
NOD1
TLR4
TLR4-siRNA
烟曲霉孢子
调控关系
Keywords
NOD1,
TLR4,
TLR4-siRNA,
aspergillusfumigatus
conidia
,
regulation
relationship.
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用
牛晓璐
许万福
李松玉
柯志勇
曾方银
罗深秋
邓凡
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
下载PDF
职称材料
2
TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用
饶振华
谢卫华
苏明声
龙凯
罗闳丹
谢小梅
《中国科学：生命科学》
CSCD
北大核心
2012
3
原文传递
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