苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的鉴定提纯和酶联法检测 被引量：29

1

作者 王小凤 李秋波 +3 位作者 王荣 洪霓 王国平 刘福昌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期137-144,共8页

苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观... 苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观察,W-55和W-29病毒颗粒长度分别为800 nm 和650nm。用 CLSV W-55分离物制备的兔抗血清效价为1/3200,用 SGV PV-71(ATCC)分离物制备小鼠腹水抗体效价为1/800,均用间接 ELISA 法测定。对感染 CLSV 和 SGV 的昆诺藜、苹果叶和花瓣检测结果表明,P/N 值具有显著性。本工作为苹果无毒苗木的生产提供了快速、灵敏的病毒检测手段。 展开更多

关键词 茎沟病毒 苹果 褪绿叶斑病毒

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苹果褪绿叶斑病毒生物学及生化特性研究 被引量：18

2

作者 洪霓 王国平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期77-81,共5页

对从苹果和扁桃上获得２个苹果褪绿叶斑病毒的分离物ＡＣＬＳＶ－Ｃ和ＡＣＬＳＶ－Ｂ的主要生物学和生化特性进行了比较。人工接种５科１９种草本植物，发现两者均能侵染苋色藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｍａｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ）、... 对从苹果和扁桃上获得２个苹果褪绿叶斑病毒的分离物ＡＣＬＳＶ－Ｃ和ＡＣＬＳＶ－Ｂ的主要生物学和生化特性进行了比较。人工接种５科１９种草本植物，发现两者均能侵染苋色藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｍａｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ）、昆诺藜（Ｃｈ．ｑｕｉｎｏａ）和西方烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｏｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ），产生局部侵染斑和系统褪绿斑。但症状反应存在差异，后者在这３种植物上引起叶片反卷等较强症状反应，还可潜伏侵染笋瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍａｘｉｍａｃｖ．ＢｕｔｅｒｃｕｐＢｕｒｇｅｓｓ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，ＡＣＬＳＶ－Ｂ衣壳蛋白的迁移率较ＡＣＬＳＶ－Ｃ快。两者的ＲＮＡ分子量及双链ＲＮＡ数量无明显差异。根据已报道的核苷酸系列设计合成引物，采用ＰＣＲ法检测ＡＣＬＳＶ分离物，均获得特异性扩增产物。 展开更多

关键词 苹果 褪绿叶斑病毒 生物学 生化特性

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3种苹果潜隐病毒多重RT-PCR检测体系的建立 被引量：12

3

作者 范旭东 董雅凤 +2 位作者 张尊平 李丽丽 裴光前 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1821-1826,共6页

研究建立了能同时检测苹果茎沟病毒(Applestem grooving virus,ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的多重RT-PCR方法。以复合感染3种病毒的苹果‘望山红’... 研究建立了能同时检测苹果茎沟病毒(Applestem grooving virus,ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的多重RT-PCR方法。以复合感染3种病毒的苹果‘望山红’组培苗为试材,对影响多重PCR的反应条件进行了一系列的调整和优化。多重RT-PCR体系灵敏性测验显示,最低能从RNA总量187.5ng的样品中检测3种病毒的存在。多重RT-PCR产物的序列与报道的病毒序列有较高的同源性,12个田间苹果样品的多重RT-PCR检测结果与单一PCR的结果一致,初步证明了多重RT-PCR检测的准确性。 展开更多

关键词 苹果 多重RT-PCR 检测 苹果茎沟病毒 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒

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梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测 被引量：10

4

作者 牛建新 周民生 +2 位作者 马兵钢 赵英 刘宏 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期53-58,共6页

为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度... 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响，退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明：RNasin的用量大于0．2U·μL^-1时，信号强度随着RNasin量的加大而增强；只有当dNTPs浓度达1．0mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA；AMV浓度在0．3-0．5U·μL^-1均可进行正常的逆转录，而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多；引物浓度达到0．9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录，并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20-30次可出现较强的蓝色信号，引物浓度在0．8-1．2μmol·L^-1时显色较好；Taq酶浓度为20U·μL^-1以上，均显示较深的蓝色；Mg^2＋浓度为1．5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系，利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证，取得了很好效果。 展开更多

关键词 梨 库尔勒香梨 苹果褪绿叶斑病毒 原位PCR

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5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立

5

作者 胡国君 范旭东 +4 位作者 李军 任芳 孙喜陈 张尊平 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第10期79-83,88,共6页

苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNM... 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。 展开更多

关键词 苹果 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 苹果锈果类病毒 多重PCR

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ACLSV外壳蛋白与梨两种E3泛素连接酶互作及亚细胞定位

6

作者 邱辉 朱德娟 +4 位作者 张永乐 高玉洁 李柳 王国平 洪霓 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1715-1727,共13页

为深入了解苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)与寄主植物的互作特性,构建了表达该病毒外壳蛋白(coat protein,CP)的诱饵载体pGBKT7-CP,采用酵母双杂交技术,从‘红香酥’梨cDNA文库中筛选出与ACLSV CP潜在互作的3... 为深入了解苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)与寄主植物的互作特性,构建了表达该病毒外壳蛋白(coat protein,CP)的诱饵载体pGBKT7-CP,采用酵母双杂交技术,从‘红香酥’梨cDNA文库中筛选出与ACLSV CP潜在互作的33种寄主因子。酵母双杂交和双分子荧光互补试验验证了CP与来自梨的两种RING型E3泛素连接酶(命名为MIEL和BOI)互作。亚细胞定位分析表明,CP与BOI具有相似的胞间连丝和细胞核分布特点,MIEL主要分布在内质网和细胞核。双分子荧光互补试验结果显示,CP与BOI互作不改变二者的亚细胞分布,而CP与MIEL互作信号分布与MIEL亚细胞定位相似。构建了这3种蛋白的截短突变体,发现含zf-CHY结构域(1~99aa)的MIEL截短突变体可以与CP互作,而仅全长BOI可以与CP互作,CP截短突变体不能与这两种寄主蛋白互作。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 外壳蛋白 酵母双杂交 E3泛素连接酶 蛋白互作 亚细胞定位

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通辽市塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒的检测及变异分析

7

作者 张悦东 孙平平 +4 位作者 李小燕 杨荣 王宝侠 张磊 李正男 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期978-987,共10页

【目的】明确通辽地区塞外红苹果(Maluspumila‘Saiwaihong’)中苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和苹果茎沟病毒(ASGV)3种苹果潜隐病毒的普遍率和遗传多样性。【方法】从通辽市开鲁县8个乡镇随机采集了96份塞外红苹果枝条... 【目的】明确通辽地区塞外红苹果(Maluspumila‘Saiwaihong’)中苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和苹果茎沟病毒(ASGV)3种苹果潜隐病毒的普遍率和遗传多样性。【方法】从通辽市开鲁县8个乡镇随机采集了96份塞外红苹果枝条,采用RT-PCR法对样品进行3种苹果潜隐病毒检测。对检测为阳性的样品进行病毒基因克隆、测序,并进行序列一致性分析和系统发育分析。【结果】检测结果表明,被检测的塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒均有不同程度的发生,并且存在2种或3种病毒的复合侵染。基于CP基因对病毒一致性和变异情况进行分析,结果表明,来源于塞外红苹果的29个ACLSV分离物的核苷酸序列一致性为78.1%~99.9%,与其他15个已知的ACLSV分离物的一致性为69.1%~93.6%;来源于塞外红苹果的12个ASPV分离物的核苷酸序列一致性为83.6%~99.7%,与其他15个已知的ASPV分离物的一致性为75.4%~91.5%;来源于塞外红苹果的21个ASGV分离物的核苷酸序列一致性为96.4%~100.0%,与其他已知的40个ASGV分离物的一致性为89.9%~98.9%。系统发育分析结果表明,44个ACLSV分离物聚集在7个主支,其中29个塞外红苹果的ACLSV分离物分别位于JB组、Balatonl组、B6组和一个独立分支;27个ASPV分离物聚集为6支,其中12个塞外红苹果的ASPV分离物分别位于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ组;61个ASGV分离物聚集为8个支,其中塞外红苹果的21个ASGV分离物聚集在一起,形成独立分支。【结论】ACLSV、ASGV、ASPV均能侵染塞外红苹果,并且发生率较高。与其他来源的病毒相比,塞外红苹果的3种病毒分离物,各种内各分离物彼此之间的序列一致性较好并且进化关系较近。研究结果为塞外红苹果产业绿色、健康、持续发展提供基本理论依据。 展开更多

关键词 塞外红苹果 RT-PCR 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 苹果茎沟病毒

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苹果属植物对苹果褪绿叶斑病毒病的抗性 被引量：3

8

作者 曾明 《果树科学》 CSCD 北大核心 1994年第1期5-9,共5页

毒原P204双芽嫁接接种苹果褪绿叶斑病毒(Apple Chlortic Leaf Spot Virus),对所用试材都能进行有效浸染.试验表明,苹果属植物受CLSV浸染后,过氧化物酶活性及同工酶都产生显著变化,并且相对酶活性的大小及同工酶的变化与植株对CLSV抗性... 毒原P204双芽嫁接接种苹果褪绿叶斑病毒(Apple Chlortic Leaf Spot Virus),对所用试材都能进行有效浸染.试验表明,苹果属植物受CLSV浸染后,过氧化物酶活性及同工酶都产生显著变化,并且相对酶活性的大小及同工酶的变化与植株对CLSV抗性的强弱显著相关;受侵染后新酶带的出现不是新酶成分的产生,只是由于病毒的侵染诱发酶蛋白的提前合成.试验初步发现所用试材中河南海棠、丽江山定子、小金海棠抗性相对较强;垂丝海棠、锡金海棠抗性较弱;扁果海棠、森林苹果R12740—7A、湖北海棠、三叶海棠则甚敏感. 展开更多

关键词 褪绿叶斑病毒 过氧化物酶 苹果树

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苹果褪绿叶斑病毒一步法RT-PCR检测 被引量：5

9

作者 张强 牛建新 李西萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期67-69,共3页

RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉... RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉污染。笔者建立的一步法RT-PCR是在逆转录酶(M-MLV)和Taq DNA聚合酶共同作用下,只需在一个反应管中就可以完成反转录和cDNA扩增的全过程,两个步骤一步完成,以达到对苹果褪绿叶斑病毒快速、简便、敏感的检测。 展开更多

关键词 一步法RT-PCR 检测 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)

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3种苹果潜隐性病毒一步多重RT-PCR检测体系的优化 被引量：2

10

作者 陈红霞 邵建柱 +2 位作者 孙建设 乔雪华 曹晓凤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期51-57,共7页

为建立更为快速准确的苹果潜隐性病毒检测方法,以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的田间苹果成龄树为试材,设计合成了扩增目的片段为273bp(ASGV)、358bp(ACLSV)和432bp(ASPV)的3对特异性引物,并... 为建立更为快速准确的苹果潜隐性病毒检测方法,以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的田间苹果成龄树为试材,设计合成了扩增目的片段为273bp(ASGV)、358bp(ACLSV)和432bp(ASPV)的3对特异性引物,并对影响RT-PCR体系的主要参数进行试验优化。结果表明:建立的一步多重RT-PCR体系可以实现对3种主要潜隐性病毒的特异性检测;通过对田间多个样品的检测验证,表明该方法的准确性和灵敏度都很高,并缩短了单个样品的检测时间,极大地提高了工作效率。 展开更多

关键词 苹果茎沟病毒 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 一步多重RT—PCR

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梨叶片中苹果褪绿叶斑病毒的引物原位标记检测 被引量：3

11

作者 赵英 牛建新 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期15-20,共6页

选用带苹果褪绿叶斑病毒的香梨叶片,制备成适合进行原位RT-PCR的石蜡切片。设计特异引物,利用引物原位标记(Primedin situlabeling,PRINS)技术对切片组织中的病毒进行了检测研究,结果表明,PRINS-FITC染色法和PRINS-Rhodamine染色法均能... 选用带苹果褪绿叶斑病毒的香梨叶片,制备成适合进行原位RT-PCR的石蜡切片。设计特异引物,利用引物原位标记(Primedin situlabeling,PRINS)技术对切片组织中的病毒进行了检测研究,结果表明,PRINS-FITC染色法和PRINS-Rhodamine染色法均能获得良好的检测效果,有病毒部位分别显示绿色荧光和红色荧光,而且荧光出现的位置与原位RT-PCR检测的结果一致。由此证明引物原位标记技术可用于果树病毒的原位检测。 展开更多

关键词 梨 引物原位标记 苹果褪绿叶斑病毒 病毒检测方法 染色

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苹果褪绿叶斑病毒在苹果植株体内的分布 被引量：3

12

作者 李楠 王亚迪 +3 位作者 杨军玉 丁丽 王亚南 曹克强 《北方园艺》 CAS 北大核心 2018年第13期47-52,共6页

以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒... 以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒在苹果植株中的时空分布规律提供参考依据。结果表明:从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,ACLSV在花中的相对含量最高,芽中最低,ACLSV相对含量由高到低依次为:花、二年生枝皮组织、叶、一年生枝皮组织和芽。从树体方位角度分析,在苹果一年生枝皮组织中,ACLSV在4个方位上的病毒相对含量差异显著,位于南向的病毒相对含量最高,西向最低。从生长发育时期角度进行分析,2015年9月至2016年4月,苹果一年生枝皮组织中,病毒相对含量从9月中旬至10月中旬大幅升高,10月中旬达到这8个月中的最高峰,此后病毒相对含量开始下降,3月起呈上升趋势。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 实时荧光定量RT-PCR 分布规律

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苹果褪绿叶斑病毒辽宁分离物生物学和基因组研究 被引量：3

13

作者 张双纳 李正男 +4 位作者 张尊平 范旭东 任芳 胡国君 董雅凤 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期716-720,共5页

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，ACLSV）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以... 苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，ACLSV）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以检索到19个ACLSV分离物的基因组序列。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 基因组序列 分离物 GENBANK数据库 生物学 辽宁 开放阅读框 ACLSV

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山西苹果褪绿叶斑病毒的分布及遗传多样性分析 被引量：2

14

作者 续海红 王燕飞 +2 位作者 窦彦鑫 陈伟 杨凯 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期75-82,92,共9页

苹果褪绿叶斑病毒Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV)是侵染苹果的主要潜隐性病毒之一,在我国苹果植株上发生普遍,严重威胁我国苹果的品质与产量。本研究从山西省12个苹果主产区随机采集360份表现褪绿和斑驳等症状的苹果叶片作为... 苹果褪绿叶斑病毒Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV)是侵染苹果的主要潜隐性病毒之一,在我国苹果植株上发生普遍,严重威胁我国苹果的品质与产量。本研究从山西省12个苹果主产区随机采集360份表现褪绿和斑驳等症状的苹果叶片作为研究样本,通过RT-PCR检测,360份样本中有209份样本为ACLSV阳性,对209份阳性样本的外壳蛋白(coat protein,CP)基因进行分离、测序、克隆,得到12个新的ACLSV分离物(分别命名为Shanxi 1~Shanxi 12)。选择17个来自不同国家的分离物与12个新的ACLSV分离物在核苷酸和氨基酸层面上进行序列一致性和系统发育分析。结果显示,29个ACLSV分离物被划分为2个不同进化群体。进一步对2个不同ACLSV群体进行选择压分析和中性检验,结果表明,组Ⅰ与组Ⅱ的ACLSV群体之间存在明显的遗传差异,其中负向选择可能是ACLSV遗传变异的原因之一。本研究较全面地分析了ACLSV的发生、危害,并对山西苹果的ACLSV分离物进行了遗传结构分析,为山西苹果褪绿叶斑病毒病的防治提供了理论指导。 展开更多

关键词 山西苹果 隐性病毒 苹果褪绿叶斑病毒 外壳蛋白 遗传变异

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苹果3种潜隐病毒研究进展 被引量：1

15

作者 袁彧伟 张磊 +4 位作者 付崇毅 孙平平 武占敏 马强 李正男 《北方农业学报》 2021年第4期83-97,共15页

苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒是苹果生产中最常见的3种病毒,通常复合侵染苹果树,在世界范围内给苹果产业造成了巨大经济损失。目前,生产中主要是通过培育无病毒苗木和加强检疫防止3种病毒的大面积暴发。文章基于国内外... 苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒是苹果生产中最常见的3种病毒,通常复合侵染苹果树,在世界范围内给苹果产业造成了巨大经济损失。目前,生产中主要是通过培育无病毒苗木和加强检疫防止3种病毒的大面积暴发。文章基于国内外对3种病毒的研究进展,从生物学、分子特性、致病机制3个方面系统地综述了3种病毒的研究进展情况,并展望了上述病毒未来在基因功能、致病机制等方面的研究,以期为3种病毒的有效防控提供参考。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 苹果茎沟病毒 研究进展

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利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒MP互作的寄主因子 被引量：2

16

作者 何乙坤 钟敏 +2 位作者 张瑜 王亚南 曹克强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期124-131,共8页

为了找到与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)运动蛋白(Movement protein,MP)互作的寄主因子,首先构建了ACLSV MP酵母双杂交诱饵载体,然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R127... 为了找到与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)运动蛋白(Movement protein,MP)互作的寄主因子,首先构建了ACLSV MP酵母双杂交诱饵载体,然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)cDNA文库中筛选互作基因;在GenBank中对互作寄主基因进行BLAST分析,根据基因注释推测其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。结果表明,构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-MP无自激活性、无毒性。筛选到69个与ACLSV MP互作的苏俄苹果寄主因子,包括水解酶活性、病程相关蛋白、氧化还原酶活性、磷酸酶活性、催化活性、连接酶活性、苯丙氨酸解氨酶活性、过氧化物酶活性、DNA结合功能和未知蛋白,共10类不同功能的蛋白。通过生物信息学分析,推断蛋白磷酸酶、病程相关蛋白及3-磷酸甘油醛脱氢酶可能在互作过程中起重要作用。该研究为深入了解ACLSV致病特征及病原与寄主互作机制奠定基础。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 苏俄苹果 酵母双杂交 互作基因

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库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究 被引量：1

17

作者 牛建新 朱军 马兵钢 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期58-63,共6页

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明... 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 CDNA探针 库尔勒香梨 检测技术 RNA提取方法 PCR反应体系 Tween20 牛血清白蛋白 总RNA 杂交信号 生物素标记 库尔勒地区 比较研究 实验研究 杂交反应 高灵敏度 杂交检测 甲酰胺 皮层 叶片 浓度 幼叶 老叶

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库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒RNAi载体构建及烟草遗传转化 被引量：2

18

作者 李诗林 郑银英 +4 位作者 崔百明 都业娟 乔亚红 田桂英 向本春 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第4期422-428,共7页

为了初步研究苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)中CP、MP基因的功能及致病相关性,根据Genbank中登录的ACLSV序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增CP基因5’端序列377bp(PCR-CLA)和MP基因3’端序列354bp(PCR-CLB)作为靶标基因。以植物表达载体pBi35SG1... 为了初步研究苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)中CP、MP基因的功能及致病相关性,根据Genbank中登录的ACLSV序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增CP基因5’端序列377bp(PCR-CLA)和MP基因3’端序列354bp(PCR-CLB)作为靶标基因。以植物表达载体pBi35SG12为骨架载体,卡那霉素抗性基因为筛选基因,将靶标基因的正向序列和反向重复序列分别插入到内含子(intron)的两侧,构建RNAi载体pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,利用农杆菌介导的方法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),通过对各载体的干扰效果评价来分析各基因的主要功能。通过PCR检测pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,结果表明已分别获得27株和24株转基因植株。本研究为进一步评价各载体的干扰效果和研究ACLSV主要基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 克隆 RNAI载体 遗传转化

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利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子 被引量：2

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作者 何乙坤 钟敏 +5 位作者 胡同乐 王树桐 段豪 丁丽 王亚南 曹克强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期4821-4829,共9页

[目的]利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[方法]首先构建ACLSV CP的酵母... [目的]利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[方法]首先构建ACLSV CP的酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold中,测定转化菌在SD/-Trp、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上的生长情况,从而判断其在酵母双杂交过程中对报告基因的自激活活性。将p GBKT7-CP及p GBKT7分别转化至酵母菌株Y2H gold,培养不同时间后,用紫外分光光度计测定OD600值,分析p GBKT7-CP对酵母菌生长的影响;然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)c DNA文库中钓取与ACLSV CP互作的因子,最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选生长良好的蓝色阳性菌落,测定序列,并在Gen Bank中对其进行BLAST分析,根据基因注释推断其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[结果]成功构建了酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold后,转化菌只能在SD/-Trp平板上正常生长,不能在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上生长,表明重组质粒自身不能激活报告基因His及Ade的表达,没有自激活活性。酵母双杂诱饵载体p GBKT7-CP与对照空质粒转化菌生长情况相似,证明诱饵载体对酵母菌没有毒性;筛选到了69个互作寄主基因,包括转录因子活性、碳固定活性、细胞内铁离子平衡、防御反应、水解酶活性、氧化酶活性、氧化还原酶活性、光系统II组件、绑定蛋白等10类蛋白,经生物信息学分析,其中8个寄主基因(Malus3-1、Malus4-2、Malus4q1、Malus31-3、Malus49q2、Malus15-1、Malus6-2、Malus91-4)可能在病毒与寄主互作过程中起重要作用。[结论]分析筛选到的重要寄主蛋白功能,推测ACLSV CP与BZIP类、MYB类转录因子、病程相关蛋白(PR-5、PR-8、PR-10)互作,可� 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 苏俄苹果 酵母双杂交 互作基因

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来源于新疆的3个苹果褪绿叶斑病毒分离物的分子变异研究 被引量：1

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作者 黄妍妍 王利平 +2 位作者 洪霓 韦向东 王国平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期551-555,共5页

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus,ACLSV）可侵染多种仁果类和核果类果树,广泛分布于世界各个果产区。该病毒侵染苹果树一般不产生明显症状,

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 分子变异 分离物 核果类果树 新疆 病毒侵染 leaf 苹果树

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