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人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达 被引量：3
1
作者 许晓东 张德意 +1 位作者 朱冠保 张丽芳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期923-925,共3页
目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基... 目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBac^(TM)1,构建重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE- A3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定。结果成功构建了重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白。结论通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原 表位 疫苗
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