大蒜E病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备 被引量：19

1

作者 林林 郑红英 +1 位作者 陈炯 陈剑平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期533-535,共3页

设计特异性引物PCR扩增了余杭大蒜病样中的大蒜E病毒 (GarV E)的全长CP基因 ,构建原核表达载体并在大肠杆菌中过量表达 ,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。Westernblot检测结果表明 ,抗血清与GarV E的CP起强的特异性反应。 7个大蒜样... 设计特异性引物PCR扩增了余杭大蒜病样中的大蒜E病毒 (GarV E)的全长CP基因 ,构建原核表达载体并在大肠杆菌中过量表达 ,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。Westernblot检测结果表明 ,抗血清与GarV E的CP起强的特异性反应。 7个大蒜样品中 ,内蒙古赤峰市、宁夏银川和甘肃天水等 4个样品受到GarV E的侵染。试验也证明了田间GarV E编码的CP分子量为 35kD ,不同于已报道的其他葱X病毒属成员的 2 展开更多

关键词 大蒜E病毒 外壳蛋白 基因 原核表达 抗血清 纯化

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芋花叶病毒检测试剂盒的研制 被引量：9

2

作者 韦传宝 贾玉成 杜宇 《安徽大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期85-89,94,共6页

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）CP基因的菌株，通过12％SDS．PAGE和5％-20％梯度SDS—PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔，获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清．硫酸铵沉淀初步提取IgG，然后用P... 用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）CP基因的菌株，通过12％SDS．PAGE和5％-20％梯度SDS—PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔，获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清．硫酸铵沉淀初步提取IgG，然后用Protein A—Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG，IgG与甘油1：1混合获得效价1：3100的一抗，将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成DMV检测试剂盒．用研制的检测试剂盒对芋、魔芋和马蹄莲叶片样品的间接ELISA检测表明，DMV在田间普遍发生，并确定研制的试剂盒完全可用于DMV检测． 展开更多

关键词 芋花叶病毒 抗血清制备 试剂盒研制

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马铃薯Y病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量：7

3

作者 王玉 黄显德 +4 位作者 魏代福 温亮 杨举田 陈秀斋 田延平 《山东农业科学》 2018年第1期111-114,共4页

采用RT-PCR方法扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,将其连接到原核表达载体pEHISTEV上,获得重组质粒pEHISTEV-PVY-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达出分子量为35 k D的融合蛋白。切胶回... 采用RT-PCR方法扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,将其连接到原核表达载体pEHISTEV上,获得重组质粒pEHISTEV-PVY-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达出分子量为35 k D的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,免疫新西兰大耳兔制备PVY CP抗血清。间接ELISA结果表明,该抗血清的效价为1∶16384,Western blot分析表明该抗血清只与感染PVY的普通烟植株有特异性反应,而与健康普通烟和感染PVX的普通烟植株无反应。本研究为PVY的血清学检测以及早期预警奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 衣壳蛋白 原核表达 抗血清制备

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玫瑰叶畸形病毒外壳蛋白基因原核表达与抗血清制备

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作者 张秀琪 聂张尧 +5 位作者 李梦林 苏江月 丁泽慧 张宗英 韩成贵 王颖 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期230-234,241,共6页

玫瑰叶畸形病毒(rosa rugosa leaf distortion virus,RrLDV)属于番茄丛矮病毒科Tombusviridae天竺葵环斑病毒属Pelarspovirus,能够引起月季叶片畸形、黄化以及提前衰老等症状,是危害月季的病毒之一。为建立玫瑰叶畸形病毒的快速检测方法... 玫瑰叶畸形病毒(rosa rugosa leaf distortion virus,RrLDV)属于番茄丛矮病毒科Tombusviridae天竺葵环斑病毒属Pelarspovirus,能够引起月季叶片畸形、黄化以及提前衰老等症状,是危害月季的病毒之一。为建立玫瑰叶畸形病毒的快速检测方法,采用热硼酸盐法提取发病月季叶片总RNA,通过RT-PCR扩增该病毒外壳蛋白基因,连接至原核表达载体pDB-His-MBP上,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21以IPTG,诱导蛋白表达,获得浓度为8 mg/mL的重组蛋白,制备了兔多抗血清。Western blot检测血清效价为1∶2048000,当效价为1∶1000时,灵敏度为1∶1024。血清学检测结果与RT-PCR检测结果一致,表明该抗血清可用于RrLDV的检测,有利于检测该病毒的发生和分布。 展开更多

关键词 玫瑰叶畸形病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清制备

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洋葱黄矮病毒和韭葱黄条病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备 被引量：4

5

作者 鲁宇文 沈嘉乐 +3 位作者 韦传宝 郑红英 陈炯 陈剑平 《科技通报》 2006年第5期638-641,共4页

根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)和韭葱黄条病毒(LYSV)序列设计特异引物,分别扩增OYDV和LYSV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳... 根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)和韭葱黄条病毒(LYSV)序列设计特异引物,分别扩增OYDV和LYSV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化诱导产物,免疫小鼠,获得高纯度的抗CP血清。Westernblot分析表明,OYDV与LYSV血清学远缘相关。对大蒜田间样品的间接ELISA检测表明,OYDV和LYSV在田间普遍发生,且通常为复合侵染。两者间微弱的血清学交叉反应对ELISA检测结果影响极小,可用于样品检测。 展开更多

关键词 洋葱黄矮病毒 韭葱黄条病毒 原核表达 抗血清制备 间接ELISA

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筇竹CBF1基因的原核表达和多克隆抗体的制备 被引量：6

6

作者 肖艳 林华 +3 位作者 杨丽娟 陈世界 熊泽平 陈其兵 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期375-381,共7页

以筇竹(Qiongzhuea tumidinoda Hsueh et Yi)叶片为试材,采用RT-PCR方法克隆其CBF1基因,并将CBF1连接到原核表达载体pET32a(+)上,经克隆测序确定所构建的重组载体pET32-QZ开放阅读框正确。将重组载体pET32-QZ转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)... 以筇竹(Qiongzhuea tumidinoda Hsueh et Yi)叶片为试材,采用RT-PCR方法克隆其CBF1基因,并将CBF1连接到原核表达载体pET32a(+)上,经克隆测序确定所构建的重组载体pET32-QZ开放阅读框正确。将重组载体pET32-QZ转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明CBF1蛋白得到了高效表达,所表达蛋白是大小约为45 kD的融合蛋白。经镍柱纯化后作为抗原免疫家兔,制备CBF1蛋白特异性抗血清。所制备的多克隆抗体能够与融合蛋白和经冷诱导的筇竹叶片总蛋白在25 kD处出现杂交条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。 展开更多

关键词 筇竹 CBF1 原核表达 抗血清制备

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百合斑驳病毒外壳蛋白基因原核表达、抗血清制备及其应用 被引量：5

7

作者 徐品三 宋炯 张郑瑶 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期630-635,共6页

为了建立百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的快速检测方法,采用RT-PCR方法从感染LMoV的百合叶片中克隆该病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,然后连接到原核表达载体pET28a(+)上,导入大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)并诱导表... 为了建立百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的快速检测方法,采用RT-PCR方法从感染LMoV的百合叶片中克隆该病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,然后连接到原核表达载体pET28a(+)上,导入大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)并诱导表达,以表达的重组蛋白为抗原制备该病毒的抗血清。结果显示:LMoVCP全长为822 bp,编码274个氨基酸;SDS-PAGE及Western blot检测结果表明,经IPTG诱导得到了分子量约为34 kD带有HIS标签的目的蛋白;用该蛋白制备的抗血清经间接ELISA和Western blot检测结果显示,其效价为1∶51 200,具有较高的特异性,可用于感染LMoV百合的检测,其检测结果与RT-PCR检测结果一致。 展开更多

关键词 百合斑驳病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清制备

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猪链球菌35个血清型标准抗血清的制备及应用 被引量：4

8

作者 姜艳华 孙乾 +4 位作者 王楷宬 黄保续 辛长卫 姜平 范伟兴 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第9期19-21,24,共4页

用猪链球菌35个血清型的标准菌株免疫新西兰白兔制备标准抗血清,经试管凝集测定抗血清的效价均在1:32以上,吸附处理后抗血清具有良好的特异性和敏感性。对12株猪链球菌的试验结果表明:抗血清只与相同血清型的菌株出现凝集,可以区分出PC... 用猪链球菌35个血清型的标准菌株免疫新西兰白兔制备标准抗血清,经试管凝集测定抗血清的效价均在1:32以上,吸附处理后抗血清具有良好的特异性和敏感性。对12株猪链球菌的试验结果表明:抗血清只与相同血清型的菌株出现凝集,可以区分出PCR方法无法区分的1型和14型以及2型和1/2型,并在国内首次鉴定出猪链球菌13型。 展开更多

关键词 猪链球菌 抗血清 制备 应用

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小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白抗体制备 被引量：3

9

作者 祁伟 韦传宝 杜宇 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期35-38,共4页

根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)序列设计特异引物,扩增ZYMV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plys S中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化诱导产物,免疫小鼠,获... 根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)序列设计特异引物,扩增ZYMV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plys S中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化诱导产物,免疫小鼠,获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清。硫酸铵沉淀法与Protein A-Red Sepharose亲和层析相结合提取IgG,获得效价达1∶4800的一抗,对西瓜和甜瓜田间样品的间接ELISA检测表明,ZYMV在田间普遍发生,研究制备的IgG可用于ZYMV检测。 展开更多

关键词 小西葫芦黄花叶病毒 原核表达 抗血清制备 IgG提取 间接ELISA

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侵染浙贝母的百合斑驳病毒CP基因的原核表达及抗血清制备 被引量：4

10

作者 韦传宝 姚厚军 +1 位作者 杨宇 刘春云 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1182-1186,共5页

目的:制备抗百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)CP血清,为研究侵染不同植物LMoV之间的血清学关系以及大田检测LMoV奠定基础。方法:根据Genbank报道的百合斑驳病毒CP基因序列设计引物,扩增其外壳蛋白基因并分析序列。将LMoV CP基因插... 目的:制备抗百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)CP血清,为研究侵染不同植物LMoV之间的血清学关系以及大田检测LMoV奠定基础。方法:根据Genbank报道的百合斑驳病毒CP基因序列设计引物,扩增其外壳蛋白基因并分析序列。将LMoV CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株,通过IPTG诱导表达。经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP,免疫小鼠获得抗CP血清,采用Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然LMoV病毒结合。结果:LMoV的CP与目前已报道的LMoV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为95%～99%,氨基酸序列同源性为98%～100%。制备的抗体对CP具有高度特异性,且能够与天然LMoV病毒离子结合。结论:本研究制备的抗血清可以作为百合斑驳病毒的检测。 展开更多

关键词 浙贝母 百合斑驳病毒 CP基因 原核表达 抗血清制备

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玉米黄花叶病毒运动蛋白的原核表达纯化与抗血清制备

11

作者 马秋萌 刘玉姿 +3 位作者 吴迪 李洪蕊 王颖 韩成贵 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期343-349,共7页

为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia c... 为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达融合蛋白,将纯化后的融合蛋白对新西兰大白兔Oryctolagus cuniculus进行免疫并制备MaYMV MP多克隆抗血清,并采用Western blot对抗血清的效价、灵敏度和特异性进行检测。结果显示,利用成功构建的原核表达载体经诱导表达获得分子量大小约为62 kD的融合蛋白,纯化后对新西兰大白兔进行免疫获得MaYMV MP抗血清,该抗血清的效价为1∶128000,灵敏度为1∶32,且该抗血清能够特异性地检测到本氏烟Nicotiana benthamiana中瞬时表达的MaYMV MP,而不与马铃薯卷叶病毒属Polerovirus及黄症病毒属Luteovirus的其他病毒发生血清学交叉反应,证明该抗血清具有良好的特异性。表明本研究制备的MaYMV MP抗血清能特异性地检测到MaYMV MP,可用于对田间样品的MaYMV血清学检测。 展开更多

关键词 玉米黄花叶病毒 血清制备 原核表达 瞬时表达 运动蛋白

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黄瓜绿斑驳花叶病毒基因组全序列分析及病害的田间调查 被引量：4

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作者 肖彩利 郑红英 +3 位作者 吴晓花 李国景 燕飞 陈剑平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期529-536,共8页

为明确近年来在浙江省葫芦科作物上发生的黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）基因组特征及其发生分布情况,从浙江省及上海地区的甜瓜、西瓜和瓠瓜上采集疑似样品进行RT-PCR鉴定,通过分段扩增测序的方法拼... 为明确近年来在浙江省葫芦科作物上发生的黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）基因组特征及其发生分布情况,从浙江省及上海地区的甜瓜、西瓜和瓠瓜上采集疑似样品进行RT-PCR鉴定,通过分段扩增测序的方法拼接获得基因组全序列并进行系统进化分析,利用特异性引物扩增获得CGMMV外壳蛋白（coat protein,CP）基因序列,制备CGMMV CP抗血清进行Western-blot和Dot-ELISA检测。结果显示,来自甜瓜、西瓜和瓠瓜的3个CGMMV分离物基因组全序列均具有烟草花叶病毒属典型基因组结构特征,全部由6 423 nt构成;3个全序列间的核苷酸同源性高达99.11%~99.67%,编码的CP氨基酸同源性为100%。系统进化分析发现,CGMMV不同分离物形成2个进化相关群体,3个浙江的CGMMV分离物均位于第I组内,与已报道的中国CGMMV分离物和韩国CGMMV分离物亲缘性较高。Western-blot检测表明CGMMV CP抗血清可以与感病植株中的病毒发生特异性反应,可用于CGMMV鉴定;Dot-ELISA检测发现CGMMV在浙江省和上海市的葫芦科作物上普遍存在。 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 全序列 系统进化分析 原核表达 抗血清制备

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聚乙二醇沉淀法部分提纯香石竹斑驳病毒 被引量：4

13

作者 张爱平 《上海农业学报》 CSCD 1992年第2期88-90,共3页

接种香石竹斑驳病毒四周后的高雪轮病叶用2倍体积磷酸缓冲液匀浆。滤液用氯仿和正丁醇澄清,二轮聚乙二醇(PEG)沉淀,得到具有侵染活性的部分提纯的香石竹斑驳病毒。提纯制剂的A260/280值为1.612,病毒含量5.9mg/ml。与等量福氏不完全佐剂... 接种香石竹斑驳病毒四周后的高雪轮病叶用2倍体积磷酸缓冲液匀浆。滤液用氯仿和正丁醇澄清,二轮聚乙二醇(PEG)沉淀,得到具有侵染活性的部分提纯的香石竹斑驳病毒。提纯制剂的A260/280值为1.612,病毒含量5.9mg/ml。与等量福氏不完全佐剂乳化后,4次肌肉注射家兔,得到双扩散效价为1:2048的专化抗血清。结果表明,PEG沉淀结合高速离心,是部分提纯香石竹斑驳病毒的可行方法。 展开更多

关键词 香石竹 斑驳病毒 PEG沉淀

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香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备 被引量：4

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作者 余乃通 冯团成 +1 位作者 王建华 刘志昕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期375-378,共4页

本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1mmol/L IPTG条件下诱导4h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20kD的融合蛋白。实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6mol/L尿素... 本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1mmol/L IPTG条件下诱导4h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20kD的融合蛋白。实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6mol/L尿素的Binding Buffer中,再经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,可获得高纯度的融合蛋白。将纯化融合蛋白经12%SDS-PAGE电泳,切胶回收目的带,液氮研磨并按1:1(W/V)混合佐剂,4次免疫家兔,获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清。以融合蛋白作抗原,间接ELISA法测定其抗血清效价为1:5000。田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1:500。Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础。 展开更多

关键词 香蕉束顶病毒 核穿梭蛋白 纯化 抗血清制备

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人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备 被引量：3

15

作者 颜新敏 孙怀昌 +1 位作者 于可响 于峰 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2004年第2期52-54,共3页

根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物,上游引物5＇端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGF cDNA;测序表明,克隆的hEGF cDNA与已发表的序列完全相同;经Signalp V1.1软件分析,山羊β-乳球... 根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物,上游引物5＇端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGF cDNA;测序表明,克隆的hEGF cDNA与已发表的序列完全相同;经Signalp V1.1软件分析,山羊β-乳球蛋白信号肽序列与hEGF cDNA能在预计位点切割。将此cDNA克隆到pGEX-6P-1中,经IPTG诱导,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达约32 ku的GST-hEGF融合蛋白。将此cDAN插到pcDNA-3中,用此重组质粒免疫青紫蓝兔,经6次免疫后获得抗hEGF的多克隆抗体,该抗体能识别GST-hEGF融合蛋白。 展开更多

关键词 人表皮生长因子 CDNA 原核表达 抗体制备

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水稻瘤矮病毒S9基因的生物信息学分析及原核表达蛋白的抗血清制备 被引量：3

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作者 赵芹 邓永枢 +1 位作者 阮小蕾 李华平 《热带作物学报》 CSCD 2010年第12期2153-2158,共6页

以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的第9组分全长核苷酸序列。生物信息学分析表明,其基因结构特征与已报道的其他分离物基本一致。Pns9蛋白为细胞膜外蛋白,在植物呼... 以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的第9组分全长核苷酸序列。生物信息学分析表明,其基因结构特征与已报道的其他分离物基本一致。Pns9蛋白为细胞膜外蛋白,在植物呼肠孤病毒属内没有发现同源蛋白,与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的入口蛋白(portal protein)及姜氏军团菌(Legionella drancourtii LLAP12)的假设蛋白(hypothetical protein LDG_3259)分别有33%和24%的氨基酸序列相似性,功能尚待确定。将S9基因克隆至原核表达载体pET-28b(+)得到高效表达,融合蛋白经亲和层析纯化后,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot和ELISA分析表明制备的兔抗为特异抗血清,效价为1∶13 1072。 展开更多

关键词 水稻瘤矮病毒 S9 原核表达 抗血清制备

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葡萄A病毒外壳蛋白原核表达及抗血清制备 被引量：3

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作者 任芳 董雅凤 +3 位作者 张尊平 范旭东 胡国君 朱红娟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期327-331,共5页

葡萄A病毒（Grapevine virus A，GVA）为线性病毒科（Flexiviridae）葡萄病毒属（Vitivirus）的代表种，是葡萄皱木复合病（rugose wood complex disease）的重要病原之一，可引起葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退... 葡萄A病毒（Grapevine virus A，GVA）为线性病毒科（Flexiviridae）葡萄病毒属（Vitivirus）的代表种，是葡萄皱木复合病（rugose wood complex disease）的重要病原之一，可引起葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退死亡等危害。GVA为线状单链RNA病毒，基因组共编码5个开放阅读框（ORF1-5），其中ORF4 编码外壳蛋白（coat protein， CP），是病毒粒子包裹和系统移动所必需的功能蛋白。GVA自然寄主为葡萄，机械摩擦可侵染本氏烟等草本寄主，由于嫁接和无性繁殖材料调运等因素造成该病毒远距离传播，目前在世界多个国家和地区均有发生。 展开更多

关键词 病毒外壳蛋白 抗血清制备 葡萄 原核表达 complex 嫁接成活率 VIRUS RNA病毒

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侵染浙贝母的浙贝母病毒Y(FVY)CP基因的原核表达及抗血清制备(英文) 被引量：3

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作者 韦传宝 隗洋洋 +3 位作者 杨宇 刘士亮 胡皓雨 何月 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1498-1502,共5页

目的:制备抗侵染浙贝母的浙贝母病毒Y(Fritillary virus Y,FVY)CP血清,为大田检测FVY和研究FVY与其他病毒之间的血清学关系奠定基础。方法:根据Genbank报道的FVY CP基因序列设计引物,扩增其CP基因。Blast分析FVY CP基因核苷酸序列与其... 目的:制备抗侵染浙贝母的浙贝母病毒Y(Fritillary virus Y,FVY)CP血清,为大田检测FVY和研究FVY与其他病毒之间的血清学关系奠定基础。方法:根据Genbank报道的FVY CP基因序列设计引物,扩增其CP基因。Blast分析FVY CP基因核苷酸序列与其他马铃薯Y病毒属成员CP基因的同源性。将CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株,通过IPTG诱导表达。经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP,免疫小鼠获得抗CP血清,采用Western blot分析抗体的特异性。用原核表达的17种马铃薯Y病毒属病毒CP蛋白作为抗原,检测抗FVY CP血清是否能与其进行交叉反应。采用ELISA分析抗体能否与天然FVY病毒离子结合。结果:FVY CP基因与油点草病毒Y(TrVY)CP基因、大豆花叶病毒半夏分离物CP基因和小西葫芦黄花叶病毒六安分离物CP基因分别有81.2%、68.1%和67.2%的同源性。制备的抗体对FVY CP具有高度特异性,同时能与大豆花叶病毒半夏分离物(SMV-P)CP蛋白有中等强度的结合,与小西葫芦黄花叶病毒CP蛋白有弱的结合。结论:抗体能够与天然FVY病毒离子结合,因此可以作为该病毒的大田检测。 展开更多

关键词 浙贝母 浙贝母病毒Y CP基因 原核表达 抗血清制备

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昆明地区香石竹斑驳病毒的鉴定、提纯及抗血清制备 被引量：3

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作者 卜云萍 丁骅孙 王启芳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期5-7,共3页

在昆明地区栽培的香石竹上发现了香石竹斑驳病毒，人工接种可局部侵染苋色藜、墙生藜、千日红及番杏，可系统侵染昆诺阿藜和美国石竹，分别造成褪绿斑、斑驳或坏死斑。经二轮ＰＥＧ（分子量６０００）沉淀，病毒提纯量约２２０ｍｇ／ｋ... 在昆明地区栽培的香石竹上发现了香石竹斑驳病毒，人工接种可局部侵染苋色藜、墙生藜、千日红及番杏，可系统侵染昆诺阿藜和美国石竹，分别造成褪绿斑、斑驳或坏死斑。经二轮ＰＥＧ（分子量６０００）沉淀，病毒提纯量约２２０ｍｇ／ｋｇ鲜组织。电镜观察病毒颗粒直径为２８ｎｍ，等轴对称。提纯物紫外扫描呈典型病毒核蛋白吸收峰，Ａ２６０／Ａ２８０值为１．５６。提纯病毒经４次免疫家兔，所得抗血清经试管沉淀测定效价为１∶４０９６，琼脂糖双扩散效价为１∶１０２４。 展开更多

关键词 香石竹 斑驳病毒 鉴定 提纯 抗血清

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中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建 被引量：3

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作者 孔凡惠 脱建波 +5 位作者 魏娇 唐伟 李向东 迟胜起 田延平 于金凤 《山东农业科学》 2015年第8期6-10,共5页

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原... 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。 展开更多

关键词 中国小麦花叶病毒 衣壳蛋白(CP) 富含半胱氨酸蛋白(CRP) 抗血清制备 侵染性克隆

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