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Get effective polyclonal antisera in one month 被引量:45
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作者 YUAN XIN HU, Ju YUAN QUO, Lu SHEN, YAN CHEN, Zu CHUAN ZHANG, YONG LIAN ZHANGState Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 320 Yue Yang Road, 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期157-160,共4页
According to the traditional immunization procedure, after the first injection of the sample A (emulsion of aimed antigen and Freund's complete adjuvant) to immunize rabbit, successive injections of the sample B (... According to the traditional immunization procedure, after the first injection of the sample A (emulsion of aimed antigen and Freund's complete adjuvant) to immunize rabbit, successive injections of the sample B (emulsion of aimed antigen and Freund's incomplete adjuvant) were followed every 2-4 weeks. In general,high titer of the corresponding polyclonal antisera will be observed after 4-5 injections of sample B in 3-4months. This report presents a simply modified procedure that was able to stimulate the antisera formation in one month and achieve enough avidity to satisfy either Western blot or immunohistochemistry analysis.It just applied an additional injection of the sample A to the rabbit at the 3rd day after the primary immunization injection. You could gain the high titer of the antisera right after the first sample B injection in one month. This method has produced the desired results in three different recombinant antigens with different molecular weight (5.9 KD-55 KD) expressed from prokaryotic or eukaryotic cells. 展开更多
关键词 Antibody Formation Immunologic Techniques Animals Blotting Western Emulsions Freund's Adjuvant Immune Sera Immunohistochemistry MICE Mice Inbred BALB C Rabbits Rats Research Support Non-U.S. Gov't Serum Albumin Bovine Specific Pathogen-Free Organisms Time Factors
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六种不同蛋白质载体制备克伦特罗抗血清的比较 被引量:13
2
作者 陈继明 陆承平 +1 位作者 龚晓明 韩正康 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期83-86,共4页
以偶氮法将β激动剂克伦特罗(CL)连接小鼠血清白蛋白(MSA)、小鼠IgM(MIM)、小鼠全血清(MWS)、牛血清白蛋白(BSA)、嗜水气单胞菌(AHJ)、虾全血清(SWS)。各连接物分别免疫6组小鼠。免疫4次后用间... 以偶氮法将β激动剂克伦特罗(CL)连接小鼠血清白蛋白(MSA)、小鼠IgM(MIM)、小鼠全血清(MWS)、牛血清白蛋白(BSA)、嗜水气单胞菌(AHJ)、虾全血清(SWS)。各连接物分别免疫6组小鼠。免疫4次后用间接抑制ELISA、间接ELISA检测各组血清特异性和抗CL的效价。结果表明,各组鼠血清均含有抗CL的特异性的抗体;AHJ、SWS、MWS、MSA组血清效价显著高于MIM、BSA组。提示组分复杂的蛋白质载体具有一定的优越性。 展开更多
关键词 载体 克伦特罗 抗血清
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对硫磷人工抗原合成及其鉴定 被引量:6
3
作者 郭剑平 刘云霞 +3 位作者 高增林 张伟 吴启庆 郭月凤 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1069-1071,共3页
目的 制备对硫磷人工抗原和抗血清 ,为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法 还原对硫磷硝基成为氨基 ,合成半抗原氨基对硫磷 ;重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原 ;免疫新西兰白兔 ,进行多抗制备。结果 合成的半抗原核... 目的 制备对硫磷人工抗原和抗血清 ,为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法 还原对硫磷硝基成为氨基 ,合成半抗原氨基对硫磷 ;重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原 ;免疫新西兰白兔 ,进行多抗制备。结果 合成的半抗原核磁共振图谱鉴定结果为δ :6 9~ 7(m ,2H ,CH2 ) 6 4~ 6 5 (m ,2H ,CH2 ) 4 1~ 4 2 (q ,4H ,-CH2 ) 3 4 (s ,2H ,NH2 ) 1 3~ 1 4 (t,6H ,CH3 ) ;氨基对硫磷与牛血清白蛋白的结合比为 35~ 36∶1;抗血清经间接酶联免疫吸附法检测 ,效价达 1∶12 80 0 0 ,双向免疫扩散实验测得抗血清与人工抗原形成沉淀 ;间接竞争酶联免疫吸附法测得抗血清对对硫磷最低抑制浓度为 0 16ng/mL ;经间接酶联免疫吸附法检测人工抗原与羊抗人血清、兔抗人血清、正常兔血清无交叉反应。结论 合成对硫磷半抗原及人工抗原纯度高、结合比高 ,具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 对硫磷 抗原 抗体 免疫检测
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Association of ABO blood group and Plasmodium falciparum malaria in Dore Bafeno Area,Southern Ethiopia 被引量:10
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作者 Tewodros Zerihun Abraham Degarege Berhanu Erko 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2011年第4期289-294,共6页
Objective:To assess the distribution of ABO blood group and their relationship with Plasmodium falciparum(P.falciparum) malaria among febrile outpatients who sought medical attention at Dore Bafeno Health Center,South... Objective:To assess the distribution of ABO blood group and their relationship with Plasmodium falciparum(P.falciparum) malaria among febrile outpatients who sought medical attention at Dore Bafeno Health Center,Southern Ethiopia.Methods:A total of 269 febrile outpatients who visited Dore Bafeno Health Center,Southern Ethiopia,were examined for malaria and also tested for ABO blood groups in January 2010.The blood specimens were collected by finger pricking,stained with Geimsa,and examined microscopically.Positive cases of the parasitemia were counted.CareStart^(TM) Malaria PflPv Combo was also used to test the blood specimens for malaria.ABO blood groups were determined by agglutination test using ERYCLONE antisera.Data on socio-demographic characteristics and treatment status of the participants were also collected.Chi-square and ANOVA tests were used to assess the difference between frequencies and means,respectively.Results:Out of a total of 269 participants,178(66.2%) febrile patients were found to be infected with Plasmodium parasites,among which 146(54.3%),28(10.4%),and 4(1.5%) belonged to P.falciparum,P.vivax,and mixed infections,respectively.All febrile patients were also tested for ABO blood groups and 51.3%,23.5%,21.9%and 3.3%were found to be blood types of 0,A,B and AB,respectively.Both total malaria infection and P.falciparum infection showed significant association with blood types(P<0.05).The proportion of A or B but not 0 phenotypes was higher(P<0.05) in individuals with P.falciparum as compared with non-infected individuals.The chance of having P.falciparum infection in patients with blood groups A,B and AB was 2.5,2.5 and 3.3times more than individuals showing blood 0 phenotypes,respectively.The mean P.falciparum malaria parasitemia for blood groups A,B,AB,and 0 were 3 744/μ L,1 805/ μ L,5 331/μ L,and1 515/μ L,respectively(P<0.01).Conclusions:The present findings indicate that individuals of blood groups A,B and AB are more susceptible to P.falciparum infection as compared with individuals o 展开更多
关键词 Plasmodium falciparum malaria ABO blood groups Ethiopia Febrile outpatient PARASITEMIA ASSOCIATION Blood specimen Geimsa CareStart^(TM) Malaria Pf/Pv Combo ERYCLONE antisera Plasmodium parasite Malaria infection Distribution Agglutination test Plasmodium vivax
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猪γ干扰素的体外表达及其多克隆抗血清的制备 被引量:7
5
作者 闫丽萍 周艳君 +2 位作者 仇华吉 魏萍 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期252-255,共4页
从健康仔猪前腔静脉无菌采血 ,分离外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,用猪γ干扰素 (IFN_γ)基因特异性引物通过RT_PCR扩增猪IFN_γ的全长cDNA序列 ,将其克隆到pMD18_T载体中 ,再亚克隆到pUC18和表达载体pET_30a中 ,经测序发现其序列与... 从健康仔猪前腔静脉无菌采血 ,分离外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,用猪γ干扰素 (IFN_γ)基因特异性引物通过RT_PCR扩增猪IFN_γ的全长cDNA序列 ,将其克隆到pMD18_T载体中 ,再亚克隆到pUC18和表达载体pET_30a中 ,经测序发现其序列与GenBank报道的IFN_γ基因序列基本一致。将重组质粒pET_30a_IFN_γ转化大肠杆菌BL2 1,于 37℃经IPTG诱导表达 ,IFN_γ基因获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 39%。经SDS_PAGE及Westernblot分析表明 ,表达的融合蛋白分子量约为 2 5ku。将包涵体用 8mol/L脲变性 ,用ProBondTMPurificationSysterm纯化 ,经透析复性 ,得到纯化的目的蛋白 ,含量可达 0 3mg/mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔三次 ,制备了高滴度的猪IFN_γ抗血清。本实验表达和纯化了猪IFN_γ ,并制备兔抗猪IFN_γ的抗血清 ,为下一阶段关于猪γ干扰素重组蛋白其应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪Γ干扰素 重组细胞因子 抗血清
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相思子毒素-a的纯化及鉴定 被引量:9
6
作者 李小兵 谢光洪 +7 位作者 周昌芳 张志刚 宋文学 周晓翠 张乃生 王兴龙 高宏伟 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期310-313,318,共5页
采用硫酸铵分级分离法和凝胶层析法,从相思子种仁中分离纯化出一种毒蛋白P1′。凝胶薄层扫描测得纯度≥97%;SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量为64300;经β-巯基乙醇处理,P1′分离为A、B 2条链,相对分子质量分别为29100和35400;经腹腔注射... 采用硫酸铵分级分离法和凝胶层析法,从相思子种仁中分离纯化出一种毒蛋白P1′。凝胶薄层扫描测得纯度≥97%;SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量为64300;经β-巯基乙醇处理,P1′分离为A、B 2条链,相对分子质量分别为29100和35400;经腹腔注射,小鼠LD50为2.11μg/kg;P1′质量浓度≥3.91 mg/L时,可凝集兔红细胞;P1′的B链N末端8个氨基酸序列为:I-V-E-K-S-I/L-I-N,与相思子毒素-a(abrin-a)和相思子毒素-b(abrin-b)同源性较高,为75%;肽质量指纹谱(PMF)分析表明,P1′与abrin-a匹配强度最高,为86%,与abrin-b、相思子毒素-c(abrin-c)和相思子毒素-d(abrin-d)匹配强度均为10%,表明毒蛋白P1′为abrin-a。abrin-a经1%甲醛减毒处理制备类毒素,家兔5次免疫后获得了效价高、特异性较强的抗血清。 展开更多
关键词 相思子毒素-a 纯化 鉴定 抗血清
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鱼呼肠孤病毒(FRV)抗血清的制备及其应用 被引量:7
7
作者 闵淑琴 洪世雯 蔡宜叔 《水产学报》 CAS 1986年第4期383-387,共5页
在FRV的分离和纯化基础上,本文介绍了制备FRV抗血清的几种方法。并采用不连续对流免疫电泳法(DCIE)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FRV诊断学研究结果,同时对这两种方法检测FRV的灵敏度作了比较。
关键词 鱼呼肠孤病毒 抗血清 制备 不连续对流免疫电泳 酶联免疫吸附试验 诊断 草鱼 出血病
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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量:7
8
作者 赵丽丽 刘敏 +5 位作者 哈卓 刘巍巍 赵永欣 葛俊伟 乔薪瑗 李一经 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期604-610,共7页
应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的... 应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的VP3蛋白,并制备抗血清。Western-blotting结果显示,VP3蛋白可被兔抗IPNV阳性血清识别;间接ELISA结果显示,IPNV细胞培养物作为抗原,兔抗VP3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时,P/N>2,抗血清可与IPNV全病毒发生反应,以上两项结果说明,表达的VP3蛋白与天然的IPNVVP3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了IPNVVP3蛋白,融合蛋白以可溶性形式存在,并制备了高效价的抗血清。 展开更多
关键词 传染性胰腺坏死病毒 VP3基因 原核表达 抗血清
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鸡抗REV血清的制备与检定 被引量:7
9
作者 李俊平 杨承槐 +3 位作者 李启红 夏业才 黄建华 陈永忠 《中国兽药杂志》 2011年第9期15-18,共4页
用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫... 用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验(IFA)的效价为1∶2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗(11B18和11B54的混合物)相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 抗血清 间接免疫荧光试验
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副猪嗜血杆菌分型血清的制备及其在流行病学研究上的应用 被引量:7
10
作者 储岳峰 高鹏程 +4 位作者 赵萍 贺英 樊祜卿 逯忠新 赵海燕 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期999-1002,共4页
用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法(基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法),并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型... 用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法(基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法),并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型鉴定。结果顺利制备出了副猪嗜血杆菌15个血清型菌株的分型血清,建立了副猪嗜血杆菌KRG分型方法,62株副猪嗜血杆菌分离株中血清5型占22.5%、4型占16.1%、12型占14.5%、不能分型的菌株占16.2%。试验建立的副猪嗜血杆菌KRG分型方法,可为中国副猪嗜血杆菌血清学分型提供技术支持;血清型5、4、12为中国部分地区近2年最流行的血清型,为副猪嗜血杆菌病的防制提供了有效的参考依据。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分型血清 血清型鉴定 流行病学
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鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备 被引量:4
11
作者 张富春 钱东 +3 位作者 林仁勇 马纪 马正海 钟哲 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期11-13,共3页
鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接... 鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接到测序载体pUCm -T质粒上 ,通过序列测定和分析得到正确的mZP3cDNA。经内切酶EcoRI和XhoI处理 ,将mZP3cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1中 ,在T4DNA连接酶的作用下构建出融合表达载体pGEX -mZP3,转化大肠杆菌BL - 2 1菌株 ,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物 ,经过SDS -PAGE鉴定 ,表达的融合蛋白GST -mZP3分子质量约为 72kD左右 ,纯化的融合蛋白免疫兔子 ,获得效价为1∶1 0 0 0的抗血清 ,Westernblot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性 。 展开更多
关键词 mZP3 CDNA 质粒GST-mZP3 原核表达 融合蛋白 抗血清
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产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备 被引量:5
12
作者 田冬青 彭小兵 +4 位作者 蒋玉文 杨京岚 陈小云 丁家波 屠伟英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期365-369,共5页
PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)... PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)中,在37℃1mmol/LIPTG诱导下该基因获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为36600,与预期值一致。Western-blotting试验显示,该重组蛋白可被D型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备天然毒素相似的反应原性。重组ε毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达,且以周质方式为主。重组蛋白在胰酶活化前后均可致死小鼠,活化后毒力可为原来的150倍。以重组ε毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明,重组ε毒素蛋白抗血清每毫升可中和30000个小鼠MLD。毒素-抗毒素中和试验和琼脂扩散试验均表明,该抗血清具有ε毒素特异性。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 ε毒素 克隆表达 抗血清
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多抗间接ELISA方法的建立及其在海洋细菌快速检测中的应用 被引量:5
13
作者 职通瑞 宋晓玲 +2 位作者 张晓静 张盛静 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2015年第2期71-76,共6页
为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1:2000。将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶... 为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1:2000。将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌快速检测的间接ELISA方法。此方法中,兔抗血清最佳稀释度为1:10000,菌液最佳包被浓度为106 CFU/ml;HRP-羊抗兔血清最佳稀释浓度为1:1000,可检测细菌最低浓度为104 CFU/ml。抗蜡样芽孢杆菌血清与苏云金芽孢杆菌有交叉反应,抗溶藻胶弧菌血清与其亲缘相近菌株无交叉反应,具有较强的特异性。2012年和2013年,分别从斑节对虾、中国对虾、凡纳滨对虾等9批样本中分离纯化到109株海洋细菌,利用建立的多抗间接ELISA方法对其中部分菌株进行快速检测,共检测出6株溶藻胶弧菌,未检测出蜡样芽孢杆菌。 展开更多
关键词 间接ELISA 蜡样芽孢杆菌 溶藻胶弧菌 兔抗血清 对虾
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胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型标准抗血清的制备及初步临床应用 被引量:5
14
作者 陈凡 何启盖 +5 位作者 陈焕春 刘正飞 张震亚 张迎 Ross Bowle Pat Blackall 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期458-461,共4页
用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、... 用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、-80℃下保存一年无明显变化。用抗血清对从湖南,安徽,河南等地分离的胸膜肺炎菌株进行分型鉴定,分别为血清2,3,8型;而PCR检测均为阳性,说明抗血清可用于野生株的鉴定和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 抗血清 血清分型
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传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析 被引量:5
15
作者 王健楠 赵丽丽 +4 位作者 刘立月 连科迅 李一经 葛俊伟 刘敏 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1770-1775,共6页
利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,... 利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表明,表达IPNV VP2 COE蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为IPNV检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。 展开更多
关键词 IPNV-ZYX分离株 VP2 COE蛋白 原核表达 免疫特性
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传染性造血组织坏死病毒核衣壳蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量:5
16
作者 赵永欣 赵丽丽 +5 位作者 刘巍巍 王建楠 李一经 乔薪瑗 葛俊伟 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2011年第5期40-44,共5页
应用RT-PCR方法扩增了长度为1176 bp的IHNV-ZYX株编码核衣壳(N)蛋白基因,将N基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约48 KD的N蛋白,与理论值相符;提取... 应用RT-PCR方法扩增了长度为1176 bp的IHNV-ZYX株编码核衣壳(N)蛋白基因,将N基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约48 KD的N蛋白,与理论值相符;提取N蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blot-ting实验结果说明,表达的N蛋白与天然的IHNV N蛋白一样具有相同的抗原性。本试验结果为进一步研究分离株IHNV-ZYX N基因的免疫功能,建立灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法和研制基因工程疫苗奠定了重要的物质基础。 展开更多
关键词 传染性造血组织坏死病毒 N基因 原核表达 抗血清
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牛冠状病毒S蛋白抗原表位基因的串联表达及抗血清制备 被引量:4
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作者 程凯慧 沈付娆 +6 位作者 邹积振 朱彤 苗自利 张亮 解晓莉 杨宏军 何洪彬 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期59-61,66,共4页
为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa~403 aa、771 aa~784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,... 为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa~403 aa、771 aa~784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达抗原表位融合蛋白,用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了BCoV抗原表位基因重组表达质粒,获得了融合蛋白的抗血清,Western-Blot检测显示,该抗血清可与BCoV的融合蛋白特异性结合。表明成功构建了BCoV抗原表位基因原核表达载体并获得了BCo V抗血清,本研究为BCoV诊断试剂盒的开发和BCoV多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 抗原表位 串联表达 抗血清
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重组刚地弓形虫Peroxiredoxin蛋白的纯化及抗血清制备 被引量:4
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作者 刘转转 王海龙 +4 位作者 孟晓丽 刘红丽 申金雁 殷国荣 原飞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第3期201-203,共3页
目的对原核系统表达的重组刚地弓形虫Peroxiredoxin(rTgPrx)蛋白进行镍亲和层析纯化,免疫大鼠,制备抗血清。方法优化rTgPrx表达条件,获得大量的可溶性蛋白,经镍亲和层析法纯化后皮下注射免疫Wistar大鼠,间接ELISA法测定血清抗体效价。... 目的对原核系统表达的重组刚地弓形虫Peroxiredoxin(rTgPrx)蛋白进行镍亲和层析纯化,免疫大鼠,制备抗血清。方法优化rTgPrx表达条件,获得大量的可溶性蛋白,经镍亲和层析法纯化后皮下注射免疫Wistar大鼠,间接ELISA法测定血清抗体效价。结果在表达菌液A600为0.5,IPTG浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导10 h时,可溶性rTgPrx表达量较高;用镍亲和层析纯化获得纯的目的蛋白,免疫大鼠后诱导产生高滴度抗体血清,效价达1∶12 800以上。结论镍亲和层析法纯化的rTgPrx具有免疫原性,用该蛋白免疫大鼠可获得高效价的抗rTgPrx血清。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 PEROXIREDOXIN 蛋白纯化 抗血清
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层粘连蛋白、纤粘连蛋白及Ⅳ型胶原抗血清对小鼠胚泡着床的影响 被引量:2
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作者 段恩奎 蒋广泰 曾国庆 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 2000年第2期190-194,共5页
文中报道了子宫角单次注射层粘连蛋白 (LN)抗血清、纤粘连蛋白 (FN)抗血清以及Ⅳ型胶原 (ColⅣ )抗血清对小鼠胚胎植入的作用。选用 6 0只 30 g左右的昆明品系雌性成年小鼠 ,与有生殖能力的雄性小鼠按 1∶1合笼 ,翌晨检查外阴 ,以出现... 文中报道了子宫角单次注射层粘连蛋白 (LN)抗血清、纤粘连蛋白 (FN)抗血清以及Ⅳ型胶原 (ColⅣ )抗血清对小鼠胚胎植入的作用。选用 6 0只 30 g左右的昆明品系雌性成年小鼠 ,与有生殖能力的雄性小鼠按 1∶1合笼 ,翌晨检查外阴 ,以出现阴栓为妊娠第 1天。于妊娠第 3天下午 ,给每个雌性小鼠左侧子宫角单次注射 5 μlLN抗血清、FN抗血清或ColⅣ抗血清作为实验组 ;给同一小鼠右侧子宫角注射 5 μl正常兔血清 (Normalrabbitserum ,NRS)作为对照组。于妊娠第 8天剖检受试雌鼠 ,观察并统计每侧子宫角着床的胚胎数 ,并以t检验。实验发现 :LN抗血清和正常兔血清处理的子宫角 (n =19)着床胚胎数 (平均值±标准差 )分别为 2 0 7± 1 0 6和 5 15± 1 14;FN抗血清和正常兔血清处理的子宫角 (n =2 4)着床胚胎数分别为 1 83± 1 46和 5 6 6± 2 0 2 ;ColⅣ抗血清和正常兔血清处理的子宫角 (n =17)着床胚胎数分别为 2 0 7± 1 0 3和 5 71± 2 0 2。三组实验侧着床胚胎数均极显著低于对照侧的着床数 (P <0 0 1)。结果表明 ,子宫角单次注射 5 μlLN抗血清。 展开更多
关键词 胚泡着床 LN FN ColⅣ 子宫解注射 避孕方法
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羊、鸡抗鼠脂肪细胞膜抗血清对大鼠体脂与生长性能的影响 被引量:4
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作者 张建峰 王俊东 +1 位作者 李俊平 郝俊虎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期407-410,共4页
应用提取的鼠脂肪细胞膜分别免疫羊和鸡 ,所产生的抗血清用于 Wistar大鼠被动免疫。实验 1: 组腹腔注射羊正常血清 , 组腹腔注射羊抗鼠脂肪细胞膜抗血清 ,剂量均为 1m L /只 ,连续注射 4 d。结果表明 ,羊抗鼠脂肪细胞膜抗血清免疫促进... 应用提取的鼠脂肪细胞膜分别免疫羊和鸡 ,所产生的抗血清用于 Wistar大鼠被动免疫。实验 1: 组腹腔注射羊正常血清 , 组腹腔注射羊抗鼠脂肪细胞膜抗血清 ,剂量均为 1m L /只 ,连续注射 4 d。结果表明 ,羊抗鼠脂肪细胞膜抗血清免疫促进了大鼠体增重 ,降低了体脂沉积 ,与对照组相比 ,7周末体重增加 6 .35 % (P<0 .0 5 ) ,饲料摄入增加6 .85 % (P<0 .0 1) ,料重比 (F/G)提高 4 5 .0 0 % (P<0 .0 5 ) ;肾周、附睾、网膜脂肪垫重量分别降低 2 3.92 % (P<0 .0 5 )、34.4 5 % (P<0 .0 5 )、0 .98% ,脂肪总量降低 2 0 .92 %。实验 2 :1组腹腔注射鸡正常血清 ,2组腹腔注射鸡抗鼠脂肪细胞膜抗血清 ,剂量均为 1m L/只 ,连续注射 4 d。结果表明 ,鸡抗鼠脂肪细胞膜抗血清免疫对大鼠的生长发育产生了不利影响 ,7周末 ,免疫大鼠平均体重较对照组减少 4 0 g(P<0 .0 5 ) ,饲料摄入显著降低 (P<0 .0 1) ;对体脂的沉积和血液中 TG和 FFA的影响没有规律 。 展开更多
关键词 脂肪细胞膜 被动免疫 抗血清 大鼠 生长性能
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