血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用 被引量：4

1

作者 周志军 林连珍 +3 位作者 彭焱 李陶敬 李策生 胡勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第10期1080-1085,共6页

目的建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方... 目的建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方法;用VWF国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无FⅧ的VWF),确定VWF∶Ag的国际单位(Ag/ml)与质量单位(μg/ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析。结果捕获抗体和检测抗体稀释度均为1∶200;VWF∶Ag的1 Ag/ml对应16μg/ml;标准曲线的线性范围为160~10 ng/ml,各浓度回收率在95.8%~103.2%之间,变异系数(CV)<5%,R2≥0.99;不同浓度样品检测结果的批内回收率在93.0%~113.9%之间,批间回收率在95.1%~105.5%之间;批内CV在0.7%~8.2%之间,批间CV在3.8%~9.6%之间;样品添加试验的回收率在96.9%~114.7%之间。具有生物学活性的样品应-80℃冻存,复融1次后立即检测;国药集团武汉血液制品有限公司FⅧ纯化工艺中PEG沉淀和离子交换层析去除了95%以上的VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的FⅧ∶Ag/VWF∶Ag比值。结论建立的人VWF抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行VWF的抗原含量检测可作为FⅧ纯化工艺内部质量控制的一个指标。 展开更多

关键词 血管性血友病因子 抗原含量 酶联免疫吸附测定

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柯萨奇病毒A组6型抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

2

作者 鲁卫卫 刘善茹 +5 位作者 郭会杰 郝春生 王潇潇 吴蕴怡 张中洋 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第11期1341-1348,共8页

目的建立柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A,CV-A)6型抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用,以用于CV-A6生产过程和四价手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)疫苗的质量控制。方法分别以纯化的CV-A6羊多抗作为包被抗... 目的建立柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A,CV-A)6型抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用,以用于CV-A6生产过程和四价手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)疫苗的质量控制。方法分别以纯化的CV-A6羊多抗作为包被抗体、小鼠抗CV-A6单抗作为检测抗体,进行配对筛选研究,建立CV-A6抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,并对试验条件进行优化。对方法的线性、范围、专属性、准确性、精密性、耐用性进行验证。采用建立的方法检测CV-A6抗原生产过程样品和成品抗原含量。结果羊多抗和单抗16D1-1E5具有中和抗体活性,其他3株单抗均无中和抗体活性;所有抗体的ELISA效价均不低于1.00×10^(5);除单抗2B6-4F9为IgG3亚型外,其他3株单抗均为IgG2a亚型。以羊多抗作为包被抗体、单抗16D1-1E5作为检测抗体进行配对,可用于方法的建立。确定包被抗体的稀释比例为1∶2000~1∶6000,检测抗体的稀释比例为1∶4000~1∶6000。建立的CV-A6抗原定量检测方法线性范围为0.664~21.263 U/mL,线性R2≥0.99;该方法仅能特异性检测CV-A6抗原,与CVA10、CV-A16和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV-71)抗原无交叉反应,生产过程中可能存在的M199、DMEM、Vero细胞蛋白、牛血清蛋白对方法测定无干扰;该方法测定高(21.00 U/mL)、中(10.50 U/mL)、低(1.70 U/mL)浓度样品的测定值/理论值在95%~105%之间,相对标准偏差在15%以内;在0.664~21.263 U/mL范围内,线性R2≥0.99,测定值/理论值在95%~105%之间,精密性验证相对标准偏差在15%以内;该方法在不同孵育温度(35、37、39℃)下测定样品的准确性和精密性无差别。采用建立的方法检测CV-A6抗原生产过程样品及成品抗原含量,可有效反映工艺过程样品及成品抗原浓度变化趋势。结论建立了CV-A6抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,该方法线性、范围、专属性、准确性、精密性、耐用性均较好,可用于CV-A6抗原� 展开更多

关键词 柯萨奇病毒A组6型 抗原含量 酶联免疫吸附测定 四价手足口病疫苗

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重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法的建立 被引量：4

3

作者 张改梅 陈磊 +6 位作者 高帆 姚昕 李国顺 顾美荣 毛群颖 刘建凯 郑海发 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第6期476-480,共5页

目的建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体... 目的建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),确定定量限度及最佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行方法学验证.结果线性范围为5~80U/ml,线性和平行性良好.定量下限为5U/ml,检测不同浓度的EV-A71国家抗原标准品,回收率在88%~115%,准确度良好;重复性和中间精密度测定,其变异系数均小于15%;与重组柯萨奇病毒A16、甲型肝炎灭活疫苗(HAV)、冻干水痘减毒活疫苗(VZV)、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、五价口服轮状病毒减毒活疫苗(RV)等疫苗、Tris缓冲液、PBS缓冲液、破碎液、汉逊酵母宿主蛋白(HCP)均无交叉反应,其专属性良好.结论建立了重组EV-A71疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法并进行了初步验证,为疫苗研制中抗原含量的质控提供了可靠的检测手段. 展开更多

关键词 肠道病毒71型(EV-A71) 疫苗 汉逊酵母 抗原含量 方法建立

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检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用 被引量：4

4

作者 周志军 孙文 +3 位作者 施金荣 朱华松 陈雪婷 王平 《微生物学免疫学进展》 2007年第4期28-31,共4页

为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助... 为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段。 展开更多

关键词 竞争ELISA 狂犬病毒 抗原含量

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不同感染方式对狂犬病病毒在人二倍体细胞中增殖的影响

5

作者 甄祖刚 周荔葆 +2 位作者 王野 刘春雨 张怡轩 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第2期177-181,共5页

目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国... 目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国药典》(2020版)检测方法检测收获液病毒滴度及原液抗原含量。结果带毒传代组的收获液病毒滴度为(6.40±0.33)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.8±1.5)IU·mL^(-1);混种传代感染组的收获液病毒滴度为(6.35±0.18)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.3±2.1)IU·mL^(-1);直接吸附感染组收获液病毒滴度为(4.71±0.39)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(12.6±2.0)IU·mL^(-1)。结论试验证明狂犬病病毒PV株采用混种传代感染的方式感染人二倍体细胞MRC-5细胞,病毒增殖效果良好,毒种代次明确,工艺操作简单,更适合于狂犬疫苗的生产。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 人二倍体细胞 感染方式 抗原含量

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新型冠状病毒S蛋白抗体的制备及初步应用 被引量：4

6

作者 徐康维 何蕊 +4 位作者 权娅茹 苏喆 王剑锋 赵慧 李长贵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期857-861,共5页

目的制备新型冠状病毒S蛋白抗体,初步建立检测新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量的方法。方法使用新型冠状病毒重组S蛋白分别免疫羊和兔,获得抗血清。采用间接ELISA法和微量中和试验检测抗血清效价,免疫印迹试验检测抗体特异性。采用蛋白G... 目的制备新型冠状病毒S蛋白抗体,初步建立检测新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量的方法。方法使用新型冠状病毒重组S蛋白分别免疫羊和兔,获得抗血清。采用间接ELISA法和微量中和试验检测抗血清效价,免疫印迹试验检测抗体特异性。采用蛋白G纯化树脂分别对羊和兔抗血清进行亲和层析纯化,获得抗体。以纯化后的羊抗体作为包被抗体,兔抗体作为显示抗体,建立新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测方法。结果对羊进行4次免疫后,抗血清ELISA效价达220000,中和抗体效价达1536。对兔进行3次免疫后,抗血清ELISA效价达220000,中和抗体效价达4096。羊和兔抗体均可与新型冠状病毒S蛋白特异性结合。应用纯化后的抗体,成功建立了检测抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法线性良好,R^(2)>0.99,可用于新型冠状病毒灭活疫苗原液抗原含量的检测。结论成功制备了羊和兔抗新型冠状病毒S蛋白高效价抗体,并初步建立了新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 抗血清效价 酶联免疫吸附试验 抗原含量

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森林脑炎灭活疫苗抗原参考品的建立

7

作者 梁佳琪 邢坤鹏 +5 位作者 陈娜娜 王颖 刘晨阳 李帅 常军亮 李景良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第11期1281-1285,1293,共6页

目的建立森林脑炎灭活疫苗抗原参考品,以期准确定量检测疫苗的抗原含量。方法将森林脑炎灭活疫苗原液与冻干保护剂按1∶1的体积分数混合,经冻干,制备为候选参考品,并检测其装量均匀性及抗原均匀性。经3个实验室协作标定,对抗原定量检测... 目的建立森林脑炎灭活疫苗抗原参考品,以期准确定量检测疫苗的抗原含量。方法将森林脑炎灭活疫苗原液与冻干保护剂按1∶1的体积分数混合,经冻干,制备为候选参考品,并检测其装量均匀性及抗原均匀性。经3个实验室协作标定,对抗原定量检测结果进行统计并赋值,验证参考品的稳定性及适用性。结果24瓶候选参考品装量均值为0.497 g/瓶,分装精度为0.48%;7瓶候选参考品抗原含量均值为50.990 EU/支,CV为7.3%。3个实验室协作标定候选参考品抗原含量均值为52.464 EU/支[95%CI:(52.464±3.807)EU/支],同一实验室CV为7.3%~13.3%,不同实验室之间CV为14.1%。候选参考品赋值为50 EU/支。参考品具有良好的加速稳定性、复溶稳定性及冻融稳定性。以该参考品为标准品,检测森林脑炎灭活疫苗病毒收获液、原液、解析附后疫苗均显示较好的平行性和线性关系(R^(2)均>0.99)。结论建立的森林脑炎灭活疫苗抗原参考品具有良好的稳定性,可用于森林脑炎灭活疫苗的质量控制。 展开更多

关键词 森林脑炎灭活疫苗 抗原含量 参考品 质量控制

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戊型肝炎疫苗抗原国家标准品的建立 被引量：3

8

作者 高帆 卞莲莲 +3 位作者 么山山 毛群颖 梁争论 吴星 《中国病毒病杂志》 CAS 2022年第6期433-436,共4页

目的建立戊型肝炎疫苗抗原国家标准品,用于我国戊型肝炎疫苗质量控制。方法选取一批戊型肝炎疫苗原液为标准品原料制备候选标准品(编号CS),进行均匀性和稳定性检测,并分发给3个实验室进行协作标定和适用性研究。结果CS均匀性结果显示分... 目的建立戊型肝炎疫苗抗原国家标准品,用于我国戊型肝炎疫苗质量控制。方法选取一批戊型肝炎疫苗原液为标准品原料制备候选标准品(编号CS),进行均匀性和稳定性检测,并分发给3个实验室进行协作标定和适用性研究。结果CS均匀性结果显示分装精度为0.7%;抗原含量均匀性CV值为6.8%;水分含量为0.4%。稳定性结果显示CS具有较好的加速稳定性和复溶稳定性。协作标定共获得16个有效数据,结果显示CS平均值为259271 YU/支[95%CI:(259271±5768)YU/支],实验室内CV值为2.8%~6.9%,实验室间CV值为4.5%。依据3个实验室完成的协作标定结果,将CS赋值260000 U/支。以CS为标准检测企业自制样品均显示较好的平行性和线性。结论本研究建立了首个戊型肝炎疫苗抗原国家标准品(300051-202101),可用于我国戊型肝炎疫苗质量控制。 展开更多

关键词 戊型肝炎 疫苗 抗原含量 国家标准品

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我国柯萨奇病毒A组16型抗原标准品的协作标定和适用性研究 被引量：3

9

作者 毛群颖 高帆 +9 位作者 王泽鋆 李秀玲 高强 安文琪 杨二霞 卞莲莲 杜瑞晓 崔博沛 徐苗 梁争论 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第6期481-486,共6页

目的建立第一代国家柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)抗原标准品,用于CV-A16疫苗的抗原含量检测.方法由中国食品药品检定研究院(中检院)牵头,联合我国主要的CV-A16灭活疫苗研发单位,共计6个实验室,采用协标试剂盒,分别对两个相同、编盲设置的... 目的建立第一代国家柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)抗原标准品,用于CV-A16疫苗的抗原含量检测.方法由中国食品药品检定研究院(中检院)牵头,联合我国主要的CV-A16灭活疫苗研发单位,共计6个实验室,采用协标试剂盒,分别对两个相同、编盲设置的候选CV-A16抗原标准品(A、B)进行CV-A16抗原含量协作标定.并且分别采用各实验室建立的CV-A16抗原检测试剂盒和各自工艺制备的CV-A16疫苗原液,以候选标准品为标准进行适用性研究.结果各实验室A/B相对抗原含量比为0.978~1.082(CV:6.2%~12.4%),表明各实验室检测结果准确、可靠.故将A、B结果合并分析.候选标准品(A、B)的几何均值为2194.5kU/ml,几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为11.0%,且协标结果呈正态分布,符合标准品研制要求.将候选标准品的抗原含量暂定为2000U/ml进行适用性研究,共3家实验室完成该研究,结果显示3个采用各自工艺制备的CV-A16原液,在各自建立的CV-A16检测试剂盒上均与候选标准品具有良好的线性和平行性,适用性良好.结论建立的候选标准品可作为CV-A16抗原标准品,赋值为2000U/ml,用于CV-A16疫苗的抗原含量检测. 展开更多

关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组16型 抗原含量 标准品

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第二代肠道病毒71型(EV71)抗原国家标准品的建立 被引量：3

10

作者 高帆 卞莲莲 +4 位作者 吴星 么山山 王一平 毛群颖 梁争论 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1069-1075,共7页

目的建立第二代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原国家标准品,用于体外效力(EV71抗原含量)质量控制。方法选取与第一代EV71抗原国家标准品相同来源的原料和冻干方法制备候选标准品(CS),经均匀性和稳定性考核合格后,分发给4个实验室... 目的建立第二代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原国家标准品,用于体外效力(EV71抗原含量)质量控制。方法选取与第一代EV71抗原国家标准品相同来源的原料和冻干方法制备候选标准品(CS),经均匀性和稳定性考核合格后,分发给4个实验室,以EV71抗原国际标准品(WHO IS)和第一代EV71抗原国家标准品(NS)为标准进行协作标定及适用性研究。结果 CS与WHO IS及CS与NS均具有良好的平行性和线性。以WHO IS为标准时,CS检测的平均值为2 316 IU/mL,实验室内CV为4.3%~9.3%,实验室间CV为7.1%,95%置信区间为2 229~2 403 IU/mL;以NS为标准时,CS检测平均值为2 437 U/mL,实验室内CV为3.9%~10.7%,实验室间CV为5.3%,95%置信区间为2 355~2 519 U/mL。以CS为标准检测各企业生产的EV71收获液、原液和疫苗均具有较好的平行性和线性,且准确率均位于90%~110%之间。在2~8和37℃放置56 d,CS抗原含量稳定;CS复溶后置2~8℃保存7 d或-20℃反复冻融5次,抗原含量残留率均未超过90%~110%。结论建立了第二代EV71抗原国家标准品,赋值2 320 IU/mL(相当于2 440 U/mL)。 展开更多

关键词 手足口病 肠道病毒71型 抗原含量 国家标准品

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重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒的研制 被引量：2

11

作者 安超强 刘东 +10 位作者 卞莲莲 刘明琛 么山山 徐康维 李长贵 吴星 毛群颖 高帆 徐苗 姜崴 梁争论 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期411-418,共8页

目的制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒,并进行验证。方法选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包... 目的制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒,并进行验证。方法选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包被抗体,从4株单克隆抗体(14C8、15F9、17A7和20D8)中筛选出1株具有受体结合域(receptor-binding domain,RBD)结合活性高,且广谱抗主要突变株的单克隆抗体作为酶标抗体(用HRP标记),制备重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的双抗体夹心ELISA法通用检测试剂盒,并采用棋盘滴定法对包被抗体稀释度(1∶125~1∶4000)和酶标抗体稀释度(1∶250~1∶32000)进行优化。验证试剂盒的专属性、线性范围、准确性、精密性及耐用性。将制备的通用检测试剂盒分发给12个实验室,检测各实验室自制的不同表达系统(CHO细胞、毕赤酵母、Sf9细胞或大肠埃希菌)和目的蛋白(RBD或S蛋白)的15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液(包括11批以WT株为参考序列设计的原液及4批以Beta、Gamma和Delta变异株设计的原液)。结果确定包被抗体最佳稀释度为1∶500,单克隆抗体20D8作为酶标抗体,最佳稀释度为1∶4000。通用检测试剂盒与严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)病毒的重组S蛋白无交叉反应;第1代重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原国家标准品(简称国家标准品)浓度在0.16~2.50 U/mL范围内,与A450/630呈良好的线性关系,线性方程为:y=0.791 x-0.1004,R2=0.9937;0.16~2.50 U/mL国家标准品重复6次检测结果回收率均在95%~104%之间,变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;2名实验员在不同时间重复3次检测结果的CV为4.4%~6.6%;在不同温度及时间条件下检测结果回收率均在80%~120%范围内。15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液抗原含量的检测结果与国家标准品均具有良好的平行性。结论本研究建立的抗原含量通用检测� 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 重组蛋白疫苗 抗原含量 通用试剂盒

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蛋白质免疫印迹快速测定猪肺炎支原体抗原含量 被引量：2

12

作者 车巧林 胡芳 +2 位作者 沈晓红 董彦鹏 靳蒙蒙 《现代畜牧兽医》 2021年第1期14-18,共5页

为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法,试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱,测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量,并与Western blot(WB)测定的CCU进行比较。结果显示:曝光5 s,107 CCU/mL含量以... 为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法,试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱,测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量,并与Western blot(WB)测定的CCU进行比较。结果显示:曝光5 s,107 CCU/mL含量以上的猪肺炎支原体抗原在46 kDa处有条带,且条带粗细、明暗程度随着CCU含量的增高而增强;中试生产的7批抗原中,有3批抗原CCU和WB 2种方法测定的含量相同,两批抗原测定的含量基本相同;两批抗原测定的含量有差异,但差值在1.5~5.0倍之间。结果表明,WB可用于猪肺炎支原体抗原含量的快速测定。 展开更多

关键词 蛋白质免疫印迹 快速测定 猪肺炎支原体 抗原含量

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口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系 被引量：1

13

作者 李乐 苗海生 +4 位作者 廖德芳 胡骑 信爱国 朱明旺 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第1期88-90,共3页

为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免... 为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5μg时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。 展开更多

关键词 口蹄疫 免疫原含量 抗体滴度 完全病毒颗粒

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仔猪大肠杆菌·C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺 被引量：2

14

作者 刘泽文 袁芳艳 +5 位作者 周丹娜 梁望旺 段正赢 杨克礼 徐涤平 田永祥 《安徽农业科学》 CAS 2012年第17期9276-9277,9279,共3页

[目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可... [目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可产生较高含量的纤毛抗原;当接种剂量为1%～2%,C型产气荚膜梭菌C59-2菌株在35℃条件下培养16～20 h,可产生大量致死性毒素。[结论]该研究为研制具有较好效果的仔猪红痢、黄痢预防疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 大肠杆菌 C型产气荚膜梭菌 培养工艺 抗原含量 仔猪红痢 仔猪黄痢

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免疫佐剂对禽流感疫苗抗体的影响评价 被引量：1

15

作者 陈生雷 王一平 +3 位作者 谷崇高 陈欣婷 李凤艳 舒秀伟 《现代畜牧兽医》 2021年第12期63-65,共3页

为研究免疫佐剂对禽流感抗体产生的影响。不同抗原含量配比制备的禽流感疫苗中添加免疫佐剂,通过效力检验检验免疫佐剂对禽流感H5亚型和H7亚型免疫抗体的影响。结果表明,相同抗原含量添加免疫佐剂,同比不添加免疫佐剂组HI抗体效价上升0.... 为研究免疫佐剂对禽流感抗体产生的影响。不同抗原含量配比制备的禽流感疫苗中添加免疫佐剂,通过效力检验检验免疫佐剂对禽流感H5亚型和H7亚型免疫抗体的影响。结果表明,相同抗原含量添加免疫佐剂,同比不添加免疫佐剂组HI抗体效价上升0.9~1.9个滴度;不同抗原含量添加免疫佐剂,抗原含量为15%的HI抗体效价不低于30%、25%和20%抗原含量组。研究表明,添加免疫佐剂对产生禽流感HI抗体具有一定的提升作用。 展开更多

关键词 免疫佐剂 禽流感疫苗 抗原含量 疫苗效价

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新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测方法的建立 被引量：1

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作者 徐康维 王聪聪 +5 位作者 何蕊 杨惠洁 王开芹 乔志中 权娅茹 李长贵 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第4期10-14,共5页

目的建立新型冠状病毒(新冠病毒)灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,并对该方法检测2家企业疫苗的适用性进行验证。方法使用羊抗S蛋白抗体作为包被抗体,兔抗S蛋白抗体作为显示抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法,并对方法的准确... 目的建立新型冠状病毒(新冠病毒)灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,并对该方法检测2家企业疫苗的适用性进行验证。方法使用羊抗S蛋白抗体作为包被抗体,兔抗S蛋白抗体作为显示抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法,并对方法的准确度、精密度进行验证;分别使用该方法及企业自建方法对2家企业生产的各20批次疫苗产品进行检测,评价方法的一致性。结果成功建立了新冠病毒灭活疫苗抗原含量检测方法,该方法线性良好,R^(2)>0.99。方法验证结果显示,对于2家企业疫苗回收率均在80%~120%范围内,试验内与试验间CV均<10%。方法比对结果显示,该方法与企业方法检测结果比值对于A企业比值在0.83~1.22之间,平均为1.02;与B企业比值在0.91~1.07之间,平均为0.99;不同方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立了新冠病毒灭活疫苗抗原含量检测方法,该方法的准确性与精密度良好,并且对国内2家企业生产的疫苗具有较好的适用性。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒灭活疫苗 抗原含量 酶联免疫吸附试验

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肠道病毒71型灭活疫苗体外和体内相对效力试验的相关性 被引量：1

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作者 周振歆 易力 +6 位作者 张晗 赵勇 杨骄雪 王丹丹 苗睿 张玉平 董少忠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1028-1032,共5页

目的评价肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗体外和体内相对效力试验检测结果的相关性。方法以EV71灭活疫苗上市以后1个自然年内生产的62批EV71灭活疫苗为研究对象,进行体外(抗原含量测定)和体内相对效力试验(ED50效力试... 目的评价肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗体外和体内相对效力试验检测结果的相关性。方法以EV71灭活疫苗上市以后1个自然年内生产的62批EV71灭活疫苗为研究对象,进行体外(抗原含量测定)和体内相对效力试验(ED50效力试验和中和抗体效价检测),并分析62批EV71灭活疫苗的抗原含量与半效稀释倍数、ED50效力、中和抗体效价的相关性及ED50效力与中和抗体效价的相关性。结果抗原含量与半效稀释倍数及中和抗体效价呈良好正相关(P<0.01),ED50效力与中和抗体效价呈显著负相关(P<0.01),抗原含量与ED50效力无相关性(P>0.05)。结论体外相对效力试验替代体内相对效力试验用于EV71灭活疫苗效力检测具有可行性。 展开更多

关键词 肠道病毒71型灭活疫苗 抗原含量 半效稀释倍数 ED50效力 中和抗体效价 相关性

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肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗抗原检测方法的建立及验证 被引量：1

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作者 施歌 石亮 +6 位作者 王翠艳 白鹭 褚彦飞 史赫 谷铁军 刘大维 包小华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期853-857,共5页

目的建立定量检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗抗原含量的检测方法,并进行验证。方法用EV71 VLP抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行Protein A亲和层析纯化。以纯化的抗EV71 VLP... 目的建立定量检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗抗原含量的检测方法,并进行验证。方法用EV71 VLP抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行Protein A亲和层析纯化。以纯化的抗EV71 VLP多克隆抗体为包被抗体,筛选最佳包被浓度及酶标抗体稀释倍数,建立定量检测EV71 VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并对该方法进行准确度、精密度验证,确定方法的线性范围和定量限。结果抗EV71多克隆抗体包被浓度5μg/mL,酶标抗体稀释度1∶10000条件下,建立了检测EV71 VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法。抗原标准品浓度在0.5~8 U/mL范围内,其对数值与对应的A450值对数值呈良好的线性关系,R^(2)=0.9927,定量限为2 ng/mL;准确度验证回收率为81%~106%;精密度验证相对标准偏差(RSD)为4.96%~12.04%。结论建立了用于EV71 VLP抗原定量检测的双抗体夹心ELISA法,有望用于EV71 VLP疫苗抗原含量的初步检测。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 病毒样颗粒 疫苗 抗原含量 酶联免疫吸附试验

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一次性生物工艺袋储存Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的稳定性研究

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作者 王虓宇 朱云 +7 位作者 沈武玲 张名 蔡玮 赵云蓉 刘畅 卢振攀 张明珠 平玲 《中国医药生物技术》 2022年第2期125-131,共7页

目的探讨一次性生物工艺袋存储Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)单价原液和三价半成品在不同环境下的稳定性。方法对储存在三个品牌的生物工艺袋中的s IPV原液及三价半成品在不同保存条件下不同时间点取样,观察样品外观并进行pH检测、... 目的探讨一次性生物工艺袋存储Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)单价原液和三价半成品在不同环境下的稳定性。方法对储存在三个品牌的生物工艺袋中的s IPV原液及三价半成品在不同保存条件下不同时间点取样,观察样品外观并进行pH检测、无菌实验、细菌内毒素、D抗原含量、2-苯氧乙醇、游离甲醛、蛋白含量、DNA残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量、异常毒性和大鼠效力实验。结果三个品牌的生物工艺袋中单价原液在2~8℃下保存15个月内,D抗原回收率与当前储存条件相比无统计学差异;三价半成品在(37±2)℃、相对湿度(75±5)%加速至14天,(25±2)℃、相对湿度(60±5)%保存至6个月和2~8℃保存至24个月各项检测结果都在质量标准范围内,不同品牌间比较无统计学差异,并且各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求。结论sIPV单价原液和半成品阶段使用一次性生物工艺袋,制品的稳定性与使用传统的玻璃或不锈钢容器比较无显著性差异,检测结果均符合企业标准,在生产中可以考虑使用。 展开更多

关键词 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 D抗原含量 一次性生物工艺袋 稳定性实验

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速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量 被引量：5

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作者 陈琼 李茂光 +4 位作者 李红 王春娥 石继春 陈翠萍 叶强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第7期718-722,共5页

目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证。方法采用免疫化学系统（IMMAGE 800）,选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品... 目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证。方法采用免疫化学系统（IMMAGE 800）,选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品离心沉淀后用缓冲溶液复溶,经Na OH解吸附法处理样品和标准品。对方法进行线性、重复性、准确性、专属性、适用性验证,并采用建立的方法检测3批13价肺炎球菌结合疫苗样品中的各型多糖抗原含量。结果在设定的条件下,各型多糖抗原浓度在1-6μg/ml范围内,线性良好（相关系数〉0.99）;各型多糖抗原含量重复检测的相对标准偏差（RSD）均低于8%;13型多糖结合抗原含量的回收率在70%-130%之间;6A与19A型特异性血清与其他12型多糖抗原有交叉反应,但与阳性对照的比值均较低（〈5%）,其他12种特异性血清特异性良好,无交叉反应;除1、3型抗原外,其余型别的游离多糖抗原基本不干扰结合抗原的检测结果。结论建立的速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量重复性、准确性良好,1、3型结合抗原不适用于直接离心沉淀获得。 展开更多

关键词 速率比浊法 13价肺炎球菌结合疫苗 结合多糖抗原含量

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