目的建立高灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人脂肪细胞瘦素的分泌。方法制备兔抗人瘦素多克隆抗体和鼠抗人瘦素单克隆抗体，建立生物素-亲和素放大酶联免疫分析方法（BA-ELISA），观测原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中瘦素的分泌...目的建立高灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人脂肪细胞瘦素的分泌。方法制备兔抗人瘦素多克隆抗体和鼠抗人瘦素单克隆抗体，建立生物素-亲和素放大酶联免疫分析方法（BA-ELISA），观测原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中瘦素的分泌及曲格列酮对其影响。结果BA-ELISA方法灵敏度可达0．03ng／ml，曲线工作范围0．05—5ng／ml，批内批间变异系数分别小于7．4％和9．3％，平均回收率97．8％。测定经柱层析分离的混合人血清或脂肪细胞培养上清，仅显示单峰游离瘦素。观测到人网膜前脂肪细胞随诱导分化成熟而瘦素分泌量递增；10μmol／L曲格列酮可使瘦素的分泌峰值增加1倍。健康成人空腹血清瘦素水平女性显著高于男性（均值：7．6ng／ml vs 3．2ng／ml，P〈0．001），与体重指数均有较强的相关性（r=0．61、0．67；P〈0．001）。结论建立了高灵敏的BA-ELISA测定游离瘦素水平，尤其适于瘦素浓度低的临床血样本测定及基础研究之用。展开更多
文摘目的建立高灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人脂肪细胞瘦素的分泌。方法制备兔抗人瘦素多克隆抗体和鼠抗人瘦素单克隆抗体，建立生物素-亲和素放大酶联免疫分析方法（BA-ELISA），观测原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中瘦素的分泌及曲格列酮对其影响。结果BA-ELISA方法灵敏度可达0．03ng／ml，曲线工作范围0．05—5ng／ml，批内批间变异系数分别小于7．4％和9．3％，平均回收率97．8％。测定经柱层析分离的混合人血清或脂肪细胞培养上清，仅显示单峰游离瘦素。观测到人网膜前脂肪细胞随诱导分化成熟而瘦素分泌量递增；10μmol／L曲格列酮可使瘦素的分泌峰值增加1倍。健康成人空腹血清瘦素水平女性显著高于男性（均值：7．6ng／ml vs 3．2ng／ml，P〈0．001），与体重指数均有较强的相关性（r=0．61、0．67；P〈0．001）。结论建立了高灵敏的BA-ELISA测定游离瘦素水平，尤其适于瘦素浓度低的临床血样本测定及基础研究之用。
