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HIV-1型gp41抗原蛋白在大肠杆菌无细胞体系中的表达和免疫反应性检测 被引量：2
1
作者 来力 杨修亮 +3 位作者 盛嘉元 黄磊 蔡谨 徐志南 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期7-11,共5页
HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的... HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的影响,在0.2%Brij78条件下,可溶性gp41重组蛋白的表达水平达到650μg/m L。Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,纯度达到95.6%;超滤浓缩后,蛋白浓度为0.9 mg/m L,总回收率为70.8%。免疫反应性检测结果显示该gp41重组抗原制备的乳胶HIV抗体诊断试纸能与不同滴度的HIV-1型阳性标本反应,在检测线位置出现红色条带,而与HIV-1型阴性标本无反应。该研究制备了具有完整氨基酸序列的HIV-1型gp41重组抗原,为进一步提高HIV抗体诊断试剂的质量打下了基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 跨膜蛋白gp41 无细胞体系 去污剂 亲和层析 乳胶免疫层析 试纸 免疫反应性
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玉米精细胞质膜特异蛋白的纯化 被引量：1
2
作者 杨中汉 张一洪 曹宗巽 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第5期422-426,共5页
在获得6个品种的玉米(Zea mays L.)花粉精细胞后,采用N-hydroxysuccinimido-biotin(NHS-biotin)标记其外膜蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting对比了其中主要标记蛋白,发现其主要蛋白带差异并不显著,主要标记蛋白分子量均集中于91... 在获得6个品种的玉米(Zea mays L.)花粉精细胞后,采用N-hydroxysuccinimido-biotin(NHS-biotin)标记其外膜蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting对比了其中主要标记蛋白,发现其主要蛋白带差异并不显著,主要标记蛋白分子量均集中于91、60、43、30和17kD。采用免疫亲和层析技术进一步纯化已获得的混杂少量其它细胞器成分的精细胞质膜制剂,即利用制备的体细胞主要细胞器:线粒体、内质网、高尔基体及质膜的膜蛋白,分别免疫豚鼠,从其抗血清中纯化获得IgG,并进一步制成各种膜蛋白的免疫亲和吸附制剂。利用此技术进一步纯化经NHS-biotin标记的精细胞质膜蛋白,获得精细胞质膜特异的蛋白质,其中最为显著的蛋白质分子量约为65、22kD。 展开更多
关键词 玉米 细胞质膜 特异蛋白 提纯
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抑肽酶的亲和层析──Tosy1（对甲苯磺酰氯）在固定化酶上的应用 被引量：2
3
作者 冯万祥 施惠娟 诸镇祺 《药物生物技术》 CAS CSCD 1995年第4期20-23,共4页
以４％琼脂糖为载体，对甲苯磺酰氯为活化剂，对胰蛋白酶的固定化条件及固定化酶的性质进行了研究。其固定化条件为ｐＨ７．４，温度１５℃，时间８ｈｒ，酶量２０ｍｇ／ｇ（ｗｅｔ－ｇｅｌ）。同时研究了温度、ｐＨ值、时间以及载体与... 以４％琼脂糖为载体，对甲苯磺酰氯为活化剂，对胰蛋白酶的固定化条件及固定化酶的性质进行了研究。其固定化条件为ｐＨ７．４，温度１５℃，时间８ｈｒ，酶量２０ｍｇ／ｇ（ｗｅｔ－ｇｅｌ）。同时研究了温度、ｐＨ值、时间以及载体与酶的比例等因素对联蛋白酶固定化的影响。最后报道了该固定化酶的最适ｐＨ，热稳定性，ｐＨ贮存稳定性和操作稳定性。用这种固定化胰蛋白酶纯化抑肽酶，抑肽酶纯度提高５０倍，回收率在８５％～９５％。 展开更多
关键词 对甲苯磺酰氯 胰蛋白酶 4%琼脂糖 固定化酶 亲和层析 抑肽酶
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铜绿假单胞菌Psl多糖转运蛋白PslD的表达与纯化研究
4
作者 唐玮蔚 马旅雁 吴更 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期14-21,共8页
条件性致病菌铜绿假单胞菌是细菌生物被膜研究的模式菌,其分泌的胞外多糖Psl在生物被膜形成中起关键作用。PslD为Psl多糖的转运蛋白,由256个氨基酸构成,生物信息学分析揭示其有N端信号肽且为一次跨膜蛋白。分离纯化完整跨膜蛋白需要去... 条件性致病菌铜绿假单胞菌是细菌生物被膜研究的模式菌,其分泌的胞外多糖Psl在生物被膜形成中起关键作用。PslD为Psl多糖的转运蛋白,由256个氨基酸构成,生物信息学分析揭示其有N端信号肽且为一次跨膜蛋白。分离纯化完整跨膜蛋白需要去垢剂的作用,去垢剂种类繁多且性质不一,研究设计了一套筛选溶解PslD的去垢剂的方案。通过抗组氨酸标签的Westernblot分析,n-Decyl-β-D-maltopyranoside(DM),n-Decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(DDAO)及n-Dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(LDAO)被认为溶解PslD的效率较高。通过改变总蛋白与去垢剂比例,进一步优化了去垢剂的溶解条件,即8mg/mL总蛋白质量分数为1%的LDAO。在此溶解条件下,仅通过第一步Ni柱亲和纯化目的蛋白纯度可到达80%以上,这为进一步结晶尝试及其结构生物学研究奠定基础。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 胞外多糖 转运蛋白PslD 去垢剂 亲和层析
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