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氧化石墨烯-DNA纳米探针用于三磷酸腺苷的检测与药物递送
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作者 张越 梁蕊 +1 位作者 赵灿男 李春梅 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期118-127,共10页
癌细胞内三磷酸腺苷(ATP)浓度异常与肿瘤发生发展过程密切相关,因此,快速、准确地检测细胞内外ATP水平具有重要意义。盐酸阿霉素(DOX)是一种广泛使用的抗癌药物,能嵌入DNA碱基对,并通过抑制DNA复制和转录诱导细胞凋亡。氧化石墨烯(Graph... 癌细胞内三磷酸腺苷(ATP)浓度异常与肿瘤发生发展过程密切相关,因此,快速、准确地检测细胞内外ATP水平具有重要意义。盐酸阿霉素(DOX)是一种广泛使用的抗癌药物,能嵌入DNA碱基对,并通过抑制DNA复制和转录诱导细胞凋亡。氧化石墨烯(Graphene oxide, GO)由于具有毒性低、比表面积大和易功能化,可以有效、稳定地负载DNA纳米探针进入细胞等优点而被广泛应用。然而,复杂环境中的生物分子容易通过物理吸附竞争性结合到GO表面,导致假阳性信号。基于此,提出了一种新型的GO-DNA纳米探针,并将其应用于ATP的检测与抗癌药物DOX靶向递送。以ATP的核酸适配体与其互补链杂交形成双链DNA(dsDNA),并通过G-C碱基对负载DOX,利用互补链延伸的poly A序列吸附到GO表面构建了GO-dsDNA-DOX纳米探针,能极大程度地降低复杂环境中物理吸附引起的干扰,减少假阳性信号产生。ATP与适配体特异性结合会导致DOX释放,根据其荧光“off-on”实现ATP的定量分析,DOX荧光强度与ATP含量在0.08~8.0 mmol/L范围内呈现良好的线性关系,线性方程为IF=3.0897c+129.08,检测限(3σ/k)为0.059 mmol/L,且方法具有良好的选择性和抗干扰能力。细胞毒性及荧光成像结果表明,负载DOX的纳米探针在人乳腺癌细胞(MCF-7)内有明显的药物释放,显著诱导细胞凋亡。该研究建立了一种免修饰、简单和快速的ATP含量检测分析方法,并利用癌细胞内高浓度ATP实现靶向药物递送,降低了对正常细胞的毒副作用,为癌症的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 DNA纳米探针 氧化石墨烯 荧光检测 盐酸阿霉素 药物递送
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AC3缺失对小鼠MOE组织内相关因子及信号通路的影响
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作者 蔡苗 麦明晓 方小丽 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期3931-3936,共6页
腺苷酸环化酶3(Adenylate cyclase 3,AC3)是膜整合蛋白,可将ATP变成cAMP,使cAMP信号通路受损,进而导致嗅觉丧失。主要嗅觉表皮(main olfactory epithelium,MOE)组织是感知和传导嗅觉信号的重要器官,主要通过环磷酸腺苷cAMP、肌醇1,4... 腺苷酸环化酶3(Adenylate cyclase 3,AC3)是膜整合蛋白,可将ATP变成cAMP,使cAMP信号通路受损,进而导致嗅觉丧失。主要嗅觉表皮(main olfactory epithelium,MOE)组织是感知和传导嗅觉信号的重要器官,主要通过环磷酸腺苷cAMP、肌醇1,4,5-三磷酸(Inositol 1,4,5-trisphosphate,IP3)、刺猬(Hedgehog,Hh)等3个信号通路进行嗅觉信号转导。MOE组织中有AC2、AC3、AC4等表达,为探讨当AC3缺失时,AC2和AC4是否可以发挥AC3作用介导嗅觉信号转导;AC3缺失是否通过引起IP3和Hh信号通路的改变而介导cAMP信号通路,本研究拟选取AC3缺失的小鼠和野生型小鼠各4只,以小鼠的MOE组织为实验材料,利用实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测小鼠MOE组织内的AC2、AC4;检测IP3信号通路中的ip3r1、calm1、calm2;检测Hh信号通路中的patched、smoothened、gli1和gli2等基因的表达情况。结果显示,AC3缺失的小鼠中AC3几乎无表达;和野生型小鼠相比,AC3缺失的小鼠MOE组织中AC2、AC4表达量均显著下降(p〈0.05),分别下调1倍和4倍;AC3缺失的小鼠IP3信号通路中的三磷酸肌醇Ⅰ型受体(type 1 inositol1,4,5-trisphosphate receptor,ip3r1)、calm1、calm2表达量均显著下降(p〈0.05),分别下调0.3倍、10倍及4倍;AC3缺失的小鼠Hh信号通路中patched、smoothened、gli1和gli2的表达量均显著下降(p〈0.05),分别下调0.4倍、10倍、10倍、4倍。因此,AC3缺失会导致cAMP信号通路的调节受损,进而影响AC3相关因子AC2和AC4的表达,同时抑制IP3和Hh信号通路的传导,在探究AC3基因敲出小鼠嗅觉丧失方面具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 腺苷酸环化酶3 主要嗅觉表皮组织 肌醇1 4 5-三磷酸 HH 信号通路
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三磷酸腺苷对蟾蜍交感神经节细胞的作用及机制分析
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作者 陈章强 刘汉清 胡申江 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第2期91-95,共5页
目的 观察ATP所引起的蟾蜍椎旁交感神经节细胞电位变化和有关因素的影响 ,以探讨ATP在神经节内的作用及其机制。方法 采用细胞外微电极技术记录离体灌流神经节电位。结果 外源性ATP(2 0 0 μmol L)可引起去极化 (n =1 1 0 ) ,超极化 ... 目的 观察ATP所引起的蟾蜍椎旁交感神经节细胞电位变化和有关因素的影响 ,以探讨ATP在神经节内的作用及其机制。方法 采用细胞外微电极技术记录离体灌流神经节电位。结果 外源性ATP(2 0 0 μmol L)可引起去极化 (n =1 1 0 ) ,超极化 (n =33) ,以及去极后伴随一超极过程的双相反应 (n =1 2 )。P2 嘌呤受体拮抗剂ci bacronblue 3GA(30 0 μmol/L)和奎尼丁 (30 0 μmol/L) ,均可抑制ATP所致去极反应 ,其幅值分别减小 (2 4 .2± 1 7.5 ) %(n =1 8,P <0 .0 1 )和 (32 .5± 1 1 .5 ) % (n =2 1 ,P <0 .0 1 )。P1 嘌呤受体拮抗剂氨茶碱 (2 0 0 μmol L) ,可抑制ATP所致超极反应 ,幅值减小 (6 5 .0± 2 2 .9) % (n =9,P <0 .0 1 )。在无钠溶液中 ,ATP的去极幅值变化为 (1 3.6± 1 7.5 ) % (n =1 0 ,P >0 .0 5 ) ,无统计学意义。在无钙溶液中或同时加用EDTA(1mol L)以去除溶液的Ca2 + ,可使ATP所致去极幅值减小 (2 3.6± 1 8.3) % (n =1 5 ,P <0 .0 1 )。电压依赖性钾通道阻断剂 4—氨基吡啶 (3mmol L)和ATP敏感性钾通道阻断剂格列苯脲 (1 0 0mol L) ,均可可抑制ATP所致超极反应 ,其幅值分别减小 (6 4 .5± 2 1 .9) % (n =1 1 ,P <0 .0 1 )和(6 6 .4± 2 2 .4 ) % (n =6 ,P <0 .0 1 )。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 蟾蜍 交感神经节 细胞 机制 嘌呤受体
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PI3K-Akt-eNOS信号通路在三磷酸腺苷后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用 被引量:21
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作者 高妮妮 王芳 廉哲勋 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期59-63,共5页
目的:探讨磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号通路在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:建立兔心肌缺血再灌注模型,随机将动物分为4组:即缺血再灌注组(对照组)、ATP后处理... 目的:探讨磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号通路在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:建立兔心肌缺血再灌注模型,随机将动物分为4组:即缺血再灌注组(对照组)、ATP后处理组、磷酯酰肌醇-3激酶抑制剂(Wortmannin)+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、线粒体ATP依赖性钾通道抑制剂5-羟葵酸(5-HD)+ATP后处理组(5-HD+ATP组)。再灌注结束后,苏木素伊红染色法观察心肌病理组织变化、TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化方法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达、Bcl-2/Bax比值及磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果 :ATP后处理组心肌细胞核变小及细胞间质水肿程度较对照组明显减轻,Wortmannin+ATP组和5-HD+ATP组心肌细胞核大小及细胞间质水肿程度与对照组相似;ATP后处理组与对照组比较,心肌细胞凋亡指数明显减低,抗凋亡因子Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<0.01);Wortmannin+ATP组和5-HD+ATP组心肌细胞凋亡指数、Bcl-2/Bax比值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);p-eNOS蛋白阳性表达ATP后处理组较对照组和Wortmannin+ATP组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),与5-HD+ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 :ATP后处理可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路最终作用于线粒体ATP依赖性钾通道,减少细胞凋亡,减轻兔缺血再灌注损伤。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 心肌缺血再灌注损伤 磷酯酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 内皮型一氧化氮合酶
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阿司匹林抗脑缺血/再灌注损伤的作用及机制 被引量:19
5
作者 邱丽颖 余涓 陈崇宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期972-976,共5页
目的观察阿司匹林对大鼠脑缺血/再灌损伤72h的保护作用及机制。方法线栓法制作局部大脑缺血2h、再灌72h模型,观察60mg·kg-1阿司匹林对脑损伤面积、水肿程度及死亡率的影响;并从抗凋亡、能量代谢及钙调神经磷酸酶活性变化探讨其机... 目的观察阿司匹林对大鼠脑缺血/再灌损伤72h的保护作用及机制。方法线栓法制作局部大脑缺血2h、再灌72h模型,观察60mg·kg-1阿司匹林对脑损伤面积、水肿程度及死亡率的影响;并从抗凋亡、能量代谢及钙调神经磷酸酶活性变化探讨其机制。结果阿司匹林明显缩小再灌注72h引起的脑损伤范围,减轻水肿,降低死亡率,明显降低脑细胞凋亡数目,提高Bcl2/Bax,改善能量代谢,抑制钙调神经磷酸酶的异常升高。结论阿司匹林对脑缺血/再灌损伤72h有明显保护作用,其机制可能与抗凋亡、提高Bcl2/Bax、改善能量代谢及对钙调神经磷酸酶的影响有关。 展开更多
关键词 阿司匹林 脑缺血/再灌注损伤 凋亡 BCL-2/BAX 能量代谢 钙调神经磷酸酶
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Changes in the Contents of ATP and Its Related Breakdown Compounds in Various Tissues of Oyster During Frozen Storage 被引量:13
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作者 WANG Qi XUE Changhu LI Zhaojie FU Xueyan XU Jie XUE Yong 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2007年第4期407-412,共6页
The changes in the contents of adenosine 5’-triphosphate (ATP) and its related breakdown compounds were investigated in the adductor muscle, mantle, gill and body trunk of oyster (Crassostrea gigas) during frozen sto... The changes in the contents of adenosine 5’-triphosphate (ATP) and its related breakdown compounds were investigated in the adductor muscle, mantle, gill and body trunk of oyster (Crassostrea gigas) during frozen storage at -20℃ and -30℃ and compared with that of the fresh oyster. The investigation was performed using an HPLC system. Different extents of ATP decomposi- tion were found in various tissues frozen at the two temperatures. The K, K’ and A.E.C values were calculated as the chemical fresh- ness indices. Considering the results of sensory evaluation, the A.E.C. value in body trunk at -20℃ and -30℃ could be used as the best freshness index for frozen oyster. 展开更多
关键词 OYSTER FROZEN adenosine 5'-triphosphate (ATP) HPLC freshness index
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三磷酸腺苷的电喷雾质谱裂解规律研究 被引量:8
7
作者 刘继红 曹书霞 +2 位作者 卢建莎 廖新成 赵玉芬 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期283-287,共5页
采用电喷雾离子阱质谱仪对正负离子模式下5′-三磷酸腺苷(adenosine 5′-triphosphate,ATP)的各种离子[ATP+H]+、[ATP-nH+(n+1)Na]+(n=0~4)、[ATP-H]-的裂解规律进行了系统研究,并提出可能的裂解过程。实验发现在裂解过程中,ATP脱去γ... 采用电喷雾离子阱质谱仪对正负离子模式下5′-三磷酸腺苷(adenosine 5′-triphosphate,ATP)的各种离子[ATP+H]+、[ATP-nH+(n+1)Na]+(n=0~4)、[ATP-H]-的裂解规律进行了系统研究,并提出可能的裂解过程。实验发现在裂解过程中,ATP脱去γ-磷酸时,不仅是P—O键断裂,还存在三磷酸链上β-P‖O中O先夺去碱基上的氨基或核糖环上的羟基中H、N或O再亲核进攻磷引发结构重排,脱去γ-磷酸得到一系列碎片离子。利用理论计算解释了2种重排途径的可能性与碎片离子的丰度差异。 展开更多
关键词 5'-三磷酸腺苷(ATP) 电喷雾多级质谱 裂解规律 理论计算
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三磷酸腺苷生物发光法快速测定食品中细菌的含量 被引量:7
8
作者 林玲 陈惠 郭广生 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期26-30,共5页
建立了测定食品中细菌三磷酸腺苷(—帅)的生物发光分析方法。生物发光原理基于萤光素酶、虫萤光素、氧气、ATP和Mg^2+的催化氧化反应。产生的光信号强度与ATP含量成一定关系。考察了各种物理化学参数对反应的影响。反应体系最优化条... 建立了测定食品中细菌三磷酸腺苷(—帅)的生物发光分析方法。生物发光原理基于萤光素酶、虫萤光素、氧气、ATP和Mg^2+的催化氧化反应。产生的光信号强度与ATP含量成一定关系。考察了各种物理化学参数对反应的影响。反应体系最优化条件:pH7.4、牛血清白蛋白(BSA)浓度为1.0g/L和室温反应。方法检出限为1.0×10^12mol/L。线性范围1.0×10^-7-1.0×10^-11mol/L,分析时间30min,批内变异和批间变异分别小于4%和5%。研究了部分食品中细菌检测的样品前处理方法,应用于糕点和饮料样品中细菌的测定,加标回收率范围为82.1%~115%。检测结果与传统培养方法检测结果相关性良好。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 生物发光 细菌 萤光素酶
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嘌呤能受体在肿瘤中的研究进展
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作者 杨雪 邓丽聪 万山 《肿瘤代谢与营养电子杂志》 2024年第4期576-584,共9页
嘌呤能信号转导与许多生物过程有关,三磷酸腺苷和其他细胞外核苷酸作为内源性配体激活嘌呤能受体进行信号转导,提示其在肿瘤治疗中的潜力。在人类肿瘤组织和肿瘤细胞系中已发现多种广泛表达的嘌呤能受体,在炎症和缺氧肿瘤环境中被细胞... 嘌呤能信号转导与许多生物过程有关,三磷酸腺苷和其他细胞外核苷酸作为内源性配体激活嘌呤能受体进行信号转导,提示其在肿瘤治疗中的潜力。在人类肿瘤组织和肿瘤细胞系中已发现多种广泛表达的嘌呤能受体,在炎症和缺氧肿瘤环境中被细胞外三磷酸腺苷激活发挥关键作用,影响肿瘤细胞的代谢、增殖和转移。具体来看,P2X受体属于配体门控离子通道类型,而P2Y受体则属于G蛋白偶联受体,这些受体的激活会影响细胞内钙离子浓度、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移等关键生物学过程。在不同类型的肿瘤中,不同的嘌呤能受体亚型展现出差异的表达和作用,如P2X7在神经母细胞瘤中促进肿瘤细胞增殖,而P2Y12在胶质母细胞瘤中降低肿瘤细胞的克隆形成能力和迁移能力。此外,嘌呤能受体的激活也影响了肿瘤微环境中的免疫反应和治疗效果,针对不同嘌呤能受体亚型的药物可以影响肿瘤细胞的生长和转移,甚至增强免疫治疗的效果。本文综述多种嘌呤能受体的研究进展,详细讨论它们在不同肿瘤中的作用,深入理解其作为抗肿瘤药物靶点的潜能。 展开更多
关键词 嘌呤能受体 P2X亚型 P2Y亚型 肿瘤 三磷酸腺苷 白血病 肿瘤进展 肿瘤治疗
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金属有机框架Cu@Sc-MOF纳米酶对5'-三磷酸腺苷的比色/荧光检测
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作者 柴小静 赵瑞瑞 +2 位作者 张羱 董川 双少敏 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期728-738,共11页
通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪... 通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪(DAP),并在570 nm产生特征荧光发射峰(激发波长为390 nm)。由于5’-三磷酸腺苷(ATP)与Cu2+络合,抑制了Cu@Sc-MOF的催化活性,使得652 nm处的吸光度和570 nm处的荧光强度减弱,基于Cu@Sc-MOF的类过氧化物酶活性,构建了一种用于检测ATP的比色/荧光双模式光谱法。比色和荧光分析法的线性范围分别为2.50~40.00μmol/L和1.00~22.50μmol/L,检出限(LOD)分别为0.60和0.27μmol/L。将上述比色/荧光双模式分析法用于肝癌细胞HepG2细胞裂解液中ATP的检测,加标回收率分别为92.0%~101%和93.2%~97.9%,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 Cu@Sc-MOF 纳米酶 类过氧化物酶活性 比色/荧光 5’-三磷酸腺苷
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Electroacupuncture improves neuropathic pain Adenosine, adenosine 5'-triphosphate disodium and their receptors perhaps change simultaneously 被引量:3
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作者 Wen Ren Wenzhan Tu +2 位作者 Songhe Jiang Ruidong Cheng Yaping Du 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第33期2618-2623,共6页
Applying a stimulating current to acupoints through acupuncture needles–known as electroacupuncture–has the potential to produce analgesic effects in human subjects and experimental animals. When acupuncture was app... Applying a stimulating current to acupoints through acupuncture needles–known as electroacupuncture–has the potential to produce analgesic effects in human subjects and experimental animals. When acupuncture was applied in a rat model, adenosine 5-triphosphate disodium in the extracellular space was broken down into adenosine, which in turn inhibited pain transmission by means of an adenosine A1 receptor-dependent process. Direct injection of an adenosine A1 receptor agonist enhanced the analgesic effect of acupuncture. The analgesic effect of acupuncture appears to be mediated by activation of A1 receptors located on ascending nerves. In neuropathic pain, there is upregulation of P2X purinoceptor 3 (P2X3) receptor expression in dorsal root ganglion neurons. Conversely, the onset of mechanical hyperalgesia was diminished and established hyperalgesia was significantly reversed when P2X3 receptor expression was downregulated. The pathways upon which electroacupuncture appear to act are interwoven with pain pathways, and electroacupuncture stimuli converge with impulses originating from painful areas. Electroacupuncture may act via purinergic A1 and P2X3 receptors simultaneously to induce an analgesic effect on neuropathic pain. 展开更多
关键词 ELECTROACUPUNCTURE ANALGESIA adenosine adenosine 5'-triphosphate disodium A1 receptors P2Xpudnoceptor 3 receptors neuropathic pain peripheral nervous system central nervous system regeneration neural regeneration.
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颈上交感神经节细胞P2X_3受体介导心肌痛伤害性信息作用的电生理研究 被引量:4
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作者 李桂林 梁尚栋 +3 位作者 徐昌水 高云 许宝华 张春平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期193-198,共6页
目的观察心肌缺血致心肌痛伤害性剌激后颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)细胞P2X3受体在心肌痛伤害性信息传递中的作用。方法用全细胞膜片钳技术记录心肌缺血组和对照组大鼠新鲜分离的SCG神经元P2X受体激动剂激活电流及P2X3... 目的观察心肌缺血致心肌痛伤害性剌激后颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)细胞P2X3受体在心肌痛伤害性信息传递中的作用。方法用全细胞膜片钳技术记录心肌缺血组和对照组大鼠新鲜分离的SCG神经元P2X受体激动剂激活电流及P2X3受体特异性拮抗剂A-317491对P2X受体激动剂激活电流的作用。结果①大部分受检细胞对ATP(1~1000μmol.L-1)敏感,ATP-激活电流(IATP)显示快失敏和慢失敏两种形式的内向电流,心肌缺血组IATP明显高于同一浓度时对照组的IATP。②在心肌缺血组SCG细胞,P2X3受体选择性激动剂α、β亚甲三磷酸腺苷(α,β-meATP)产生激活电流,而在对照组SCG细胞只有极少数细胞有此反应,且电流幅度小。③P2X3受体特异性拮抗剂A-317491(100nmol.L-1)对心肌缺血组和对照组ATP(100μmol.L-1)-激活电流均出现抑制作用,且同一浓度的A-317491对心肌缺血组IATP的抑制作用较对照组IATP的作用更为明显。A-317491(100nmol.L-1)使心肌缺血组和对照组SCG细胞α,β-meATP(10μmol.L-1)-激活电流减小,对心肌缺血组的抑制作用更明显。④心肌缺血组和对照组SCG细胞ATP(100μmol.L-1)-激活电流的I-U曲线反转电位不变,均接近0mV。结论心肌缺血后P2X受体激动剂在SCG神经元激活电流增大,P2X3受体特异性拮抗剂A-317491可抑制P2X受体激动剂激活的电流。因此,颈上交感神经节细胞的P2X3受体可能参与心肌痛伤害性感受信息的传递。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 P2X3 受体 心肌痛 颈上神经节 A-317491 全细胞膜片钳技术
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固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷 被引量:1
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作者 邱蔚然 李玉豆 +1 位作者 蒋晓明 徐茜 《华东化工学院学报》 CSCD 1989年第4期451-455,共5页
用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连... 用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷 合成 啤酒酵母细胞
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Spectrofluorimetric Study on the Weak Interaction between ATP and Na-4-Tosyl-L-arginine Methyl Ester Hydrochloride 被引量:3
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作者 马彦青 吕功煊 +2 位作者 李颖 刘书花 鲜亮 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2007年第9期1253-1258,共6页
In this paper, some new results on the selective weak interaction between Na-4-tosyl-L-arginine methyl ester hydrochloride (TAME) and adenosine-5'-triphosphate (ATP) have been reported. Fluorescence spectrophotom... In this paper, some new results on the selective weak interaction between Na-4-tosyl-L-arginine methyl ester hydrochloride (TAME) and adenosine-5'-triphosphate (ATP) have been reported. Fluorescence spectrophotometry and Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy were used to investigate this kind of weak interaction. In fluorescence experiments, obvious fluorescence quenching phenomena were observed when TAME was added, which indicated the weak interactions between TAME and ATP. It has been identified by fluorescence titration experiments that TAME exhibited high selectivity to ATP over ADP and AMP. FT-IR spectral results showed that an ATP-TAME adduct was formed. The experimental results indicated that the interaction sites were the guanidinium group of TAME main-chain and the γ-phosphate group of ATP, and the interaction took place through hydrogen bonding and electrostatic force. In addition, the effects of metal ions on the weak interaction between ATP and TAME, or between ATP and analogues of L-arginine were studied. 展开更多
关键词 Na-4-tosyl-L-arginine methyl ester hydrochloride adenosine-5'-triphosphate (ATP) binding site fluorescence quenching Fourier transform infrared (FT-IR) spectra
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Sperm glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene expression in asthenozoospermic spermatozoa 被引量:2
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作者 Donatella Paoli Marianna Pelloni +4 位作者 Mariagrazia Gallo Giulia Coltrinari Francesco Lombardo Andrea Lenzi Loredana Gandini 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2017年第4期409-413,共5页
It has been suggested that the energy required for sperm motility is produced by oxidative phosphorylation while glycolysis seems to be an important source for ATP transmission along the flagellum. Some studies have i... It has been suggested that the energy required for sperm motility is produced by oxidative phosphorylation while glycolysis seems to be an important source for ATP transmission along the flagellum. Some studies have investigated the chemical and kinetic properties of the enzyme glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase to identify any changes in the regulation of glycolysis and sperm motility. In contrast, there are few studies analyzing the genetic basis of hypokinesis. For this reason, we investigated the glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene in human sperm to evaluate whether asthenozoospermia was correlated with any changes in its expression. Semen examination and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene expression studies were carried out on 116 semen samples divided into two groups - Group A consisted of 58 normokinetic samples and Group B of 58 hypokinetic samples. Total RNA was extracted from spermatozoa, and real-time PCR quantification of mRNA was carried out using specific primers and probes. The expression profiles for the Groups A and B were very similar. The mean delta Ct was as follows - Group A, 5.79 + 1.04; Group B, 5.47 + 1.27. Our study shows that in human sperm, there is no difference in glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene expression between samples with impaired motility and samples with normal kinetics. We believe that this study could help in the understanding of the molecular mechanisms of sperm kinetics, suggesting that hypomotility may be due to a possible posttranscriptional impairment of the control mechanism, such as mRNA splicing, or to posttranslational changes. 展开更多
关键词 adenosine-5'-triphosphate gene expression sperm glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase sperm motility
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化学位移估算研究ATP构象随溶液pH值的变化 被引量:3
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作者 姜凌 毛希安 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期796-801,共6页
利用Johnson和Bovey的理论和方法计算了不同扭曲角χ(O4'-C1'-N9-C4)的ATP(5'-三磷酸腺苷)分子中糖环质子H1'和H2'由于环流效应引起的化学位移.H1'的化学位移与扭曲角χ有较强的依赖关系,反映了ATP在溶液中细... 利用Johnson和Bovey的理论和方法计算了不同扭曲角χ(O4'-C1'-N9-C4)的ATP(5'-三磷酸腺苷)分子中糖环质子H1'和H2'由于环流效应引起的化学位移.H1'的化学位移与扭曲角χ有较强的依赖关系,反映了ATP在溶液中细微的构象变化.将计算结果与实验结果比较,证明在本文讨论的pH值范围(1~10)内,Mg2+加入后,ATP的扭曲角χ在230°~360°范围内变化.随溶液的pH值减小,ATP分子的构象由trans构象通过-gauche构象转变为cis构象.从而证明在酸性条件下,ATP倾向于以cis构象存在,而在碱性条件下trans构象更为稳定,从另一方面支持了在酸性条件下N1参与配位而在碱性条件下N7参与配位的结论.在讨论中也考虑了由pH变化所引起的环流强度的变化. 展开更多
关键词 构象 PH值 化学位移 ATP 5'-三磷酸腺苷 金属离子 配位
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Changes in P2Y purinoreceptor-mediated intracellular calcium signal pathways results in inositol-1, 4, 5-triphosphate-sensitive calcium stores in rat small trigeminal ganglion neurons 被引量:1
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作者 Yuanyin Wang Andong Liu +3 位作者 Jie Lei Min Xie Zhongwen Li Liecheng Wang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第12期906-910,共5页
BACKGROUND: Most of the currently available information on purinergic receptors (P2Rs) involved in pain transmission is based on results obtained in dorsal root ganglion or the spinal cord. However, the mechanism o... BACKGROUND: Most of the currently available information on purinergic receptors (P2Rs) involved in pain transmission is based on results obtained in dorsal root ganglion or the spinal cord. However, the mechanism of P2Rs in trigeminal neuralgia remains unclear. OBJECTIVE: To investigate changes in the P2R-mediated calcium signaling pathway in nociceptive trigemJnal ganglion neurons. DESIGN, TIME AND SETTING: In vitro experiments were conducted at the Patch-Clamp Laboratory of Comprehensive Experiment Center of Anhui Medical University, China from September 2008 to June 2009. MATERIALS: Thapsigargin, caffeine, suramin, and adenosine 5'-triphosphate were purchased from Sigma, USA. METHODS: Using Fura-2-based microfluorimetry, intracellular calcium concentration ([Ca^2+]i) was measured in freshly isolated adult rat small trigeminal ganglion neurons before and after drug application. MAIN OUTCOME MEASURES: Fluorescent intensities were expressed as the ratio F340/F380 to observe [Ca^2+]i changes. RESULTS: In normal extracellular solution and Ca^2+-free solution, application of thapsigargin (1 μmol/L), a sarcoplasmic reticulum Ca^2+ pump adenosine 5'-triphosphate inhibitor, as well as caffeine (20 mmol/L), a ryanodine receptor agonist, triggered [Ca^2+]i increase in small trigeminal ganglion neurons. A similar response was induced by application of adenosine 5'-triphosphate (100 μmol/L). In Ca^2+-free conditions, adenosine 5'-triphosphate-induced [Ca^2+]i transients in small trigeminal ganglion neurons were inhibited in cells pre-treated with thapsigargin (P 〈 0.01), but not by caffeine (P 〉 0.05). In normal, extracellular solution, adenosine 5'-triphosphate-induced [Ca^2+]i transients in small trigeminal ganglion neurons were partly inhibited in cells pre-treated with thapsigargin (P 〈 0.05). CONCLUSION: Inositol-1,4, 5-triphosphate (IP3)- and ryanodine-sensitive Ca^2+ stores exist in rat nociceptive trigeminal ganglion neurons. Tw 展开更多
关键词 calcium stores cytoplasmic calcium trigeminal ganglion adenosine 5'-triphosphate purinergic receptors neurotrophic factor trigeminal neuralgia neural regeneration
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Pannexin1,2在小鼠睾丸癌I-10细胞和睾丸间质细胞TM3中的表达及通道功能调控 被引量:2
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作者 刘号峰 董淑英 +4 位作者 苑敏 王雪如 武丹丹 范威振 童旭辉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期776-781,共6页
目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控。方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100μmol/L的甘珀酸(CBX)、200μmol/L的丙磺... 目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控。方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100μmol/L的甘珀酸(CBX)、200μmol/L的丙磺舒(PBN)作用于I-10细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力;化学发光法检测细胞外ATP浓度;分别干扰(shRNA)和过表达(m Panx-1) Panx-1基因,调控Panx-1蛋白的表达及功能。结果:Western印迹结果显示,与TM3细胞相比,I-10细胞中Panx-1和Panx-2的表达量分别增加(289. 5±55. 8)%(P <0. 05)和(264. 5±24. 6)%(P <0. 05);采用CBX和PBN处理后,实时荧光实验和化学发光法结果显示,与对照组相比,CBX组和PBN组平均荧光物质转运量下降(87. 5±17. 7)%和(89. 3±14. 3)%(P<0. 01),细胞外ATP水平在8、16、24 h时分别下降(57. 3±7. 2)%、(56. 4±9. 6)%,(63. 4±6. 4)%、(61. 7±2. 5)%,(35. 8±1. 6)%、(13. 5±8. 3)%(P <0. 01); shRNA和m Panx-1处理后,Western印迹结果显示,与阴性对照组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-1的表达量下降(38. 3±5. 2)%和(31. 8±5. 1)%(P <0. 01),m Panx-1组Panx-1的表达量增加(128. 4±7. 5)%(P <0. 01),且实时荧光实验和化学发光法结果显示,shRNA组荧光物质转运量下降(72. 4±39. 4)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别下降(14. 7±0. 1)%、(13. 7±0. 3)%、(13. 1±0. 3)%(P <0. 01); m Panx-1组荧光物质转运量增加(122. 5±. 17. 1)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别增加(886. 1±82. 1)%、(885. 8±83. 3)%、(841. 5±21. 8)%(P <0. 01)。结论:Panx-1和Panx-2在小鼠睾丸癌I-10细胞中表达增多,CBX和PBN及shRNA抑制Panx通道后,睾丸癌I-10细胞荧光传递能力减弱和细胞外ATP水平下降。 展开更多
关键词 泛连接蛋白通道 ATP 甘珀酸 丙磺舒 小鼠
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ATP在海马CA1区长时程增强中的作用及机制 被引量:2
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作者 宫庆娟 黄乔东 +1 位作者 陈金生 卢振和 《现代医院》 2011年第8期8-11,共4页
目的探讨三磷酸腺苷(adenosine5'-triphosphate,ATP)在海马CA1区长时程增强(LTP)中的作用及机制。方法本研究采用海马在体电生理记录和免疫组织化学方法。在体电生理记录海马CA1区兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic p... 目的探讨三磷酸腺苷(adenosine5'-triphosphate,ATP)在海马CA1区长时程增强(LTP)中的作用及机制。方法本研究采用海马在体电生理记录和免疫组织化学方法。在体电生理记录海马CA1区兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potentials,fEPSPs)以及高频刺激诱导的LTP,免疫组织化学观察海马CA1区小胶质细胞的激活情况。结果①侧脑室内给予ATP不影响基础性fEPSPs,但能显著抑制高频刺激诱导的LTP,高频刺激后fEPSPs平均幅度较生理盐水对照组明显降低。②侧脑室内给予P2X7受体拮抗剂oxidized ATP,可阻止ATP对海马CA1区LTP的抑制。③给予ATP后30 min,海马CA1区的小胶质细胞明显被激活;侧脑室内给予小胶质细胞抑制剂美满霉素或TNF-α中和抗体,均可阻止ATP对海马CA1区LTP的抑制。结论 ATP可能与P2X7受体结合,激活小胶质细胞抑制海马CA1区LTP,TNF-α参与此作用。 展开更多
关键词 长时程增强 三磷酸腺苷 海马 小胶质细胞
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Fluorescent probes for recognition of ATP
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作者 Ying Wu Jia Wen +2 位作者 Hongjuan Li Shiguo Sun Yongqian Xu 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2017年第10期1916-1924,共9页
Adenosine 5'-triphosphate(ATP) not only participates in various physiological activities as the universal energy currency but also implicates in various pathological processes in living cells. Consequently,sensitiv... Adenosine 5'-triphosphate(ATP) not only participates in various physiological activities as the universal energy currency but also implicates in various pathological processes in living cells. Consequently,sensitive and selective detection ATP in live cells, tissues, as well as environmental samples, are urgently demanded. Due to the simple and convenient operation, economy cost, high selectivity for analyte, well biocompatibility and low cytotoxicity, fluorescent sensors for monitoring ATP have aroused great attention of researchers. In recent years, a large number of fluorescent sensors for detecting ATP have developed. This manuscript summarized most of these sensors and the interaction-mechanism between ATP and sensors, mainly including electrostatic interaction, p-p interaction, covalent bonding or hydrogen bond, or combinations of them, and the advantages of each strategy were also generalized.Here, a viewpoint of classification was shown where the sensors were divided into five typed ones according to the structure of probes used. 展开更多
关键词 Fluorescent probes adenosine 5'-triphosphate(ATP) Cell imaging Sensitive detection Multi-interactions Recognition mechanism
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