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分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用
被引量：
2
1
作者
范小勇
马辉
+3 位作者
郭建
朱召芹
郭盛淇
赵国屏
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1104-1109,共6页
目的构建分枝杆菌可控表达载体，利用其过表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的免疫保护性抗原，亲和层析纯化后分析免疫原性。方法应用PCR扩增耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，Ms）乙酰胺酶编码基因启动子（...
目的构建分枝杆菌可控表达载体，利用其过表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的免疫保护性抗原，亲和层析纯化后分析免疫原性。方法应用PCR扩增耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，Ms）乙酰胺酶编码基因启动子（pACE），构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列；克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达，以Ni^2＋亲和层析纯化重组蛋白；并用该重组嵌合抗原Ag856 A2对卡介苗（BCG）免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激，以IFN-γ酶联免疫斑点技术（ELISPOT）分析其免疫原性。结果成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列，利用0．02％乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达；同时利用引入的6×Ilis标签可方便实现重组抗原的一步纯化，且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌。结论以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化，与大肠杆菌异源表达相比，该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性。
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关键词
分枝杆菌
乙酰胺酶
启动子
同源表达
可诱导表达
原文传递
以amdS为筛选标记的黑曲霉遗传转化体系的建立
被引量：
1
2
作者
孙菁
任文琪
+2 位作者
许勤虎
曹威
刘浩
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第9期179-187,共9页
黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物,也是用于研究丝状真菌生长、发育、代谢、基因功能等的模式微生物。将构巢曲霉来源的乙酰胺酶编码基因amdS在黑曲霉中异源表达,成功得到黑曲霉amdS转化子。经表型分析,amdS赋予了黑曲霉在乙酰胺为唯...
黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物,也是用于研究丝状真菌生长、发育、代谢、基因功能等的模式微生物。将构巢曲霉来源的乙酰胺酶编码基因amdS在黑曲霉中异源表达,成功得到黑曲霉amdS转化子。经表型分析,amdS赋予了黑曲霉在乙酰胺为唯一氮源的培养基上生长的能力,而野生型菌株则生长微弱。构建了以amdS为筛选标记的基因敲除载体,以草酰乙酸水解酶基因oahA上下游同源序列构建oahA敲除质粒,转化黑曲霉后成功筛选到oahA敲除菌株,草酸合成水平明显降低。结果表明,利用amdS作为营养筛选标记能够很好地应用于黑曲霉遗传转化操作中。
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关键词
黑曲霉
筛选标记
amdS基因
乙酰胺酶
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职称材料
题名
分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用
被引量：
2
1
作者
范小勇
马辉
郭建
朱召芹
郭盛淇
赵国屏
机构
复旦大学附属上海市公共卫生临床中心
上海生物制品研究所
复旦大学生命科学学院微生物系
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1104-1109,共6页
基金
国家“十一五”重大传染病专项（2008ZX10003011）
上海市青年科技启明星计划（09QA1405200）
国家自然科学基金资助项目（30901276）
文摘
目的构建分枝杆菌可控表达载体，利用其过表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的免疫保护性抗原，亲和层析纯化后分析免疫原性。方法应用PCR扩增耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，Ms）乙酰胺酶编码基因启动子（pACE），构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列；克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达，以Ni^2＋亲和层析纯化重组蛋白；并用该重组嵌合抗原Ag856 A2对卡介苗（BCG）免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激，以IFN-γ酶联免疫斑点技术（ELISPOT）分析其免疫原性。结果成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列，利用0．02％乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达；同时利用引入的6×Ilis标签可方便实现重组抗原的一步纯化，且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌。结论以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化，与大肠杆菌异源表达相比，该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性。
关键词
分枝杆菌
乙酰胺酶
启动子
同源表达
可诱导表达
Keywords
Mycobacteria
acetamidase
Promoter
Homologous expression
Inducible expression
分类号
R686 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
以amdS为筛选标记的黑曲霉遗传转化体系的建立
被引量：
1
2
作者
孙菁
任文琪
许勤虎
曹威
刘浩
机构
天津科技大学生物工程学院
天津实发中科百奥工业生物技术有限公司
出处
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第9期179-187,共9页
基金
天津科技大学青年教师创新基金项目(2016LG12)
国家自然科学基金项目(21706192)
+1 种基金
天津市特聘教授2015计划项目
工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目(17PTGCCX00190)。
文摘
黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物,也是用于研究丝状真菌生长、发育、代谢、基因功能等的模式微生物。将构巢曲霉来源的乙酰胺酶编码基因amdS在黑曲霉中异源表达,成功得到黑曲霉amdS转化子。经表型分析,amdS赋予了黑曲霉在乙酰胺为唯一氮源的培养基上生长的能力,而野生型菌株则生长微弱。构建了以amdS为筛选标记的基因敲除载体,以草酰乙酸水解酶基因oahA上下游同源序列构建oahA敲除质粒,转化黑曲霉后成功筛选到oahA敲除菌株,草酸合成水平明显降低。结果表明,利用amdS作为营养筛选标记能够很好地应用于黑曲霉遗传转化操作中。
关键词
黑曲霉
筛选标记
amdS基因
乙酰胺酶
Keywords
Aspergillus niger
selective marker
amdS gene
acetamidase
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用
范小勇
马辉
郭建
朱召芹
郭盛淇
赵国屏
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
原文传递
2
以amdS为筛选标记的黑曲霉遗传转化体系的建立
孙菁
任文琪
许勤虎
曹威
刘浩
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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