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植物硒代谢积累及相关酶的研究进展 被引量:25
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作者 杜玉潇 李亚男 陈大清 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期269-276,共8页
阐述了植物硒代谢的基本途径及其积累的分子机制,详细介绍了几种参与硒代谢的关键性酶的分子生物学特性。并展望了有关植物硒代谢的发展趋势。
关键词 植物 代谢 atp硫酸化酶 谷光甘肽过氧化物酶 硒代半胱氨酸甲基转移酶 综述
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生物素化ATP硫酸化酶的表达、固定化与应用 被引量:8
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作者 邹秉杰 罗娟 +1 位作者 武海萍 周国华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期923-928,共6页
现代大规模焦测序技术的产生是DNA测序技术的一次革命,其关键技术之一是得到高活性的、固定于磁性微球表面的ATP硫酸化酶.生物素化的ATP硫酸化酶可以通过生物素与亲和素之间的特异结合特性固定在包被亲和素的磁性微球表面,但是利用化学... 现代大规模焦测序技术的产生是DNA测序技术的一次革命,其关键技术之一是得到高活性的、固定于磁性微球表面的ATP硫酸化酶.生物素化的ATP硫酸化酶可以通过生物素与亲和素之间的特异结合特性固定在包被亲和素的磁性微球表面,但是利用化学修饰法将ATP硫酸化酶进行生物素化修饰很可能会影响酶的活性.利用融合表达策略,将大肠杆菌生物素酰基载体蛋白C端87个氨基酸肽段(BCCP87)与ATP硫酸化酶在大肠杆菌内融合表达,经SDS-PAGE和Westernblot分析,表达的融合蛋白分子质量约为64ku,并且能够在大肠杆菌内被生物素化.生物素化的ATP硫酸化酶能够与亲和素包被的磁珠结合,固定后的ATP硫酸化酶具有活性,并且能够用于定量检测焦磷酸盐(PPi)和焦测序,为今后建立高通量大规模焦测序系统提供了一个有效的工具酶. 展开更多
关键词 atp硫酸化酶 生物素化 固定化 焦测序
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酿酒酵母ATP-硫酸化酶在大肠杆菌中的表达纯化及其在焦测序中的应用 被引量:9
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作者 罗娟 吴文娟 +1 位作者 邹秉杰 周国华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期623-627,共5页
ATP-硫酸化酶(ATPS,EC2.7.7.4)是一种可逆催化ATP和SO42-反应生成腺嘌呤-5′-磷酸硫酸(APS)和焦磷酸盐(PPi)的酶,已经用于焦测序反应。以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisias,CICC1202)基因组DNA为模板,用PCR扩增得到ATPS基因,并克隆到... ATP-硫酸化酶(ATPS,EC2.7.7.4)是一种可逆催化ATP和SO42-反应生成腺嘌呤-5′-磷酸硫酸(APS)和焦磷酸盐(PPi)的酶,已经用于焦测序反应。以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisias,CICC1202)基因组DNA为模板,用PCR扩增得到ATPS基因,并克隆到原核表达质粒pET28a(+),得到重组表达质粒pET28a(+)-ATPS,在IPTG诱导下,携带pET28a(+)-ATPS的大肠杆菌BL21(DE3)表达分子量约为60kD的带有His标签的ATPS酶,经镍亲和层析和超滤两步纯化后,可得到电泳纯级ATPS,比活达5.1×104u/mg,并成功应用于焦测序反应中。 展开更多
关键词 atp-硫酸化酶 酿酒酵母 表达 纯化 焦测序
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Quantitative Analysis of ATP Sulfurylase and Selenocysteine Methyltransferase Gene Expression in Different Organs of Tea Plant (<i>Camellia sinensis</i>) 被引量:3
4
作者 Shaoqiang Tao Juan Li +4 位作者 Xungang Gu Yanan Wang Qiang Xia Bing Qin Lin Zhu 《American Journal of Plant Sciences》 2012年第1期51-59,共9页
Tea plant (Camellia sinensis) has unique biological features for the study of cellular and molecular mechanisms, an evergreen broad-leaved woody plant which can accumulate selenium in soil abundant of Selenium. Expres... Tea plant (Camellia sinensis) has unique biological features for the study of cellular and molecular mechanisms, an evergreen broad-leaved woody plant which can accumulate selenium in soil abundant of Selenium. Expression of the genes related to Selenium (Se) metabolism is an adaptation to the soil environment for a long period. The purpose of the present study was to explore if there exist differences of expression about these genes in tea plant between growing in Selenium-abundant and normal soil. A quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (Q-RT-PCR) assay was done for quantification of ATP sulfurylase (APS) and selenocysteine methyltransferase (SMT) mRNA normalized to Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene in tea plant. Young leaves, mature leaves and tender roots from tea plants growing in soil abundant of Selenium were respectively obtained from Shitai County, Anhui Province, and also the relevant materials of the selenium un-enriched tea plant planted at agricultural garden of Ahui Agriculture University were taken as control for real-time PCR analysis. The results showed that APS1, APS2 and SMT expression levels for either young or mature leaves in selenium-enriched tea plant were lower than that in ordinary (selenium un-enriched) tea plant. In contrast, the APS1, APS2 and SMT expression level of roots in selenium-enriched tea plant were all higher than that in ordinary tea plant. APS1 gene expression level of roots in selenium-enriched tea plant was about 1.6 times higher than that in the ordinary tea plant, APS2 gene expression level was about 4.8-fold higher than that in the ordinary tea plant, SMT gene expression level was about 3.3 times higher than that in the ordinary tea plant. Among various tissues of selenium-enriched tea plant, APS1 gene relative expression level of young leaves was similar to or slightly higher than mature leaves, and the one of roots was the lowest among them;APS2 gene relative expression level of young leaves was similar to or slig 展开更多
关键词 Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction atp sulfurylase SELENOCYSTEINE METHYLTRANSFERASE Tea Plant (Camellia sinensis)
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多酶一锅法合成硫酸基供体3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸(PAPS)
5
作者 岳继恒 储梦萍 +1 位作者 储建林 何冰芳 《生物加工过程》 CAS 2023年第6期632-641,共10页
以腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)等为原料,来源于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的ATP硫酸化酶(ATPS)和来源于产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)的APS激酶(APSK)构建的多酶催化体系可合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸(PAPS)。同时,在... 以腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)等为原料,来源于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的ATP硫酸化酶(ATPS)和来源于产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)的APS激酶(APSK)构建的多酶催化体系可合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸(PAPS)。同时,在酶法合成PAPS的反应体系中引入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)来源的无机焦磷酸水解酶(PPase),消耗反应过程中的副产物PPi,使得反应向生成PAPS的方向进行,大幅提高多酶法合成PAPS的产率。本研究构建了重组质粒pET-28a-sumo-ATPS、pET-28a-APSK和pET-28a-PPase,并在大肠杆菌中表达了重组酶,研究酶学性质和优化多酶催化反应合成PAPS的反应条件,以提高PAPS的产量水平,最终PAPS的累积量为14.47 g/L。该工艺可大幅降低PAPS的制备成本。 展开更多
关键词 3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸 atp硫酸化酶 APS激酶 无机焦磷酸水解酶
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硫酸盐活化复合体的分类及其功能 被引量:4
6
作者 王艳兴 杨玲 孙梅好 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期252-257,共6页
硫酸盐进入细胞内活化的第一步是ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine 5’-phosphosulfate,APS)和焦磷酸,此反应非常不易进行。研究发现某些ATPS可与硫酸盐同化代谢相关酶组成硫酸盐... 硫酸盐进入细胞内活化的第一步是ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine 5’-phosphosulfate,APS)和焦磷酸,此反应非常不易进行。研究发现某些ATPS可与硫酸盐同化代谢相关酶组成硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)而促进硫的同化。本文介绍了目前已发现的三类SAC:GTPase型SAC(GTPase type SAC)、APSK型SAC(APSK type SAC)和APSR型SAC(APSR type SAC),并对其促进APS合成的方式及目前的研究热点进行了讨论。 展开更多
关键词 硫酸盐 atp硫酸化酶 硫酸盐活化复合体
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玉米ST和ATPS部分cDNA序列克隆及分析 被引量:3
7
作者 朱超 王保莉 曲东 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1742-1746,共5页
硫酸盐转运蛋白(ST)和ATP硫酸化酶(ATPS)是根系吸收硫酸盐和植物体内硫酸盐同化过程的关键蛋白和酶,在硫酸盐的生物转运过程中具有重要作用.以水培玉米农大108根系为材料,并根据已报道的玉米的硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶基因保守序列... 硫酸盐转运蛋白(ST)和ATP硫酸化酶(ATPS)是根系吸收硫酸盐和植物体内硫酸盐同化过程的关键蛋白和酶,在硫酸盐的生物转运过程中具有重要作用.以水培玉米农大108根系为材料,并根据已报道的玉米的硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶基因保守序列分别设计PCR引物对,采用RT-PCR方法克隆到783 bp和820 bp的部分硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶cDNA片段,分别命名为ST_ND108和ATPS_ND108.序列分析和比对结果显示,ST_ND108与已报道的玉米和水稻的高亲和型硫酸盐转运蛋白基因同源性分别为99%和85%;而ATPS_ND108与已报道的玉米ATP硫酸化酶基因同源性达到97%,进化树聚类分析和预测氨基酸的BLAST结果证实ST_ND108为高亲和性硫酸盐转运蛋白基因片段,ATPS_ND108为质体ATP硫酸化酶基因片段. 展开更多
关键词 玉米根系 硫酸盐转运蛋白 atp硫酸化酶 cDNA基因克隆 序列分析
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茶树硒营养代谢关键酶ATP硫化酶基因克隆及启动子结构分析 被引量:2
8
作者 王雅楠 朱林 +2 位作者 叶爱华 陶少强 秦冰 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期654-661,共8页
为探明茶树硒营养代谢关键酶基因ATP硫化酶的表达调控规律,通过PCR获得APS的DNA全长序列,应用genome walking克隆了APS基因的5′侧翼序列,采用PLACE、PlantCARE在线启动子预测工具分析表明:该序列含有启动子的特定结构,如TATA-box,CAAT-... 为探明茶树硒营养代谢关键酶基因ATP硫化酶的表达调控规律,通过PCR获得APS的DNA全长序列,应用genome walking克隆了APS基因的5′侧翼序列,采用PLACE、PlantCARE在线启动子预测工具分析表明:该序列含有启动子的特定结构,如TATA-box,CAAT-box等,为深入研究茶树硒营养代谢关键酶的表达调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 茶树 基因克隆 atp硫化酶 启动子 基因组步移
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茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建 被引量:1
9
作者 朱林 江昌俊 +4 位作者 叶爱华 李叶云 余梅 邓威威 房婉萍 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期121-125,共5页
采用能有效转化双子叶植物的表达载体pBI121构建植物硒营养代谢关键酶基因的表达载体,将原载体中GUS基因用茶树ATP硫化酶基因(APS1和APS2)替换,将硒半胱氨酸甲基转移酶基因(CsSMT)连接到pBI121载体上直接与GUS基因相连,分别构建了目的... 采用能有效转化双子叶植物的表达载体pBI121构建植物硒营养代谢关键酶基因的表达载体,将原载体中GUS基因用茶树ATP硫化酶基因(APS1和APS2)替换,将硒半胱氨酸甲基转移酶基因(CsSMT)连接到pBI121载体上直接与GUS基因相连,分别构建了目的基因植物表达载体pBI-APS1、pBI-APS2和pBI-CsSMT。通过三亲杂交法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,获得转化工程菌,为通过植物基因工程获得富硒农产品打下基础。 展开更多
关键词 茶树 atp硫化酶 硒半胱氨酸甲基转移酶 基因 植物表达载体
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多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化 被引量:1
10
作者 李晓燕 蔡谨 +2 位作者 杭宝建 黄磊 徐志南 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期119-125,共7页
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成... 3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成PAPS的两个酶:三磷酸腺苷(ATP)硫化酶和5’-腺苷磷酰硫酸(APS)激酶。构建了一条体外合成PAPS的途径。首先利用ATP硫化酶将ATP转化生成APS,同时产生副产物无机焦磷酸(PPi),APS再在APS激酶作用下转化生成PAPS。研究了Mg2+浓度、缓冲体系和p H、温度以及无机焦磷酸水解酶(PPase)的添加对该酶反应的影响。通过添加无机焦磷酸水解酶(PPase),极大提高了PAPS的转化率。在最优条件下考察不同ATP浓度下PAPS随时间的积累量变化,发现反应过程中存在底物抑制作用;ATP浓度为50 mmol?L?1时,反应25 h,PAPS的积累量为18.87 mmol?L?1。反应过程中分批补料ATP,能极大提高催化效率。反应11.5 h,PAPS积累量可达20.36 mmol?L?1(10.32 g·L?1),转化率为81.4%。 展开更多
关键词 3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸 atp硫化酶 APS激酶 分批补料
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油菜ATP硫酸化酶部分cDNA克隆及序列分析
11
作者 王帮庆 邱睿 王保莉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-130,共5页
ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS,EC 2.7.7.4)广泛存在于动物、植物、微生物中,可催化ATP和SO42-生成APS和PPi,也可以催化此过程的逆反应。用Genbank公布的的油菜ATPS全长序列与甘蓝、拟南芥以及洋葱的序列进行比对,得到一段保守性比... ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS,EC 2.7.7.4)广泛存在于动物、植物、微生物中,可催化ATP和SO42-生成APS和PPi,也可以催化此过程的逆反应。用Genbank公布的的油菜ATPS全长序列与甘蓝、拟南芥以及洋葱的序列进行比对,得到一段保守性比较强的序列。采用RT-PCR方法从油菜‘秦优8号’的叶片获得880 bp长的cDNA片段,命名为RATPS_8。序列分析和比对结果表明:RATPS_8与已报道的甘蓝、芥菜和油菜的基因同源性分别为95%、92%和91%,进化树聚类分析和预测氨基酸的BLAST结果证实,RATPS_8为油菜‘秦优8号’ATP硫酸化酶的部分基因片段。 展开更多
关键词 油菜 atp硫酸化酶 CDNA 基因克隆 序列分析
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ATP硫酸化酶基因MoMET3在稻瘟病菌生长发育和致病过程中的功能分析
12
作者 冯向阳 张震 +5 位作者 柴荣耀 邱海萍 王教瑜 毛雪琴 王艳丽 孙国昌 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期542-550,共9页
【目的】真菌对硫元素的利用始于ATP硫酸化酶对硫酸根离子的活化。对稻瘟病菌ATP硫酸化酶在病菌生长发育和致病过程中的功能进行分析,可为稻瘟病的防治提供药物靶标。【方法】采用同源重组方法构建基因敲除载体,并对突变体的表型进行分... 【目的】真菌对硫元素的利用始于ATP硫酸化酶对硫酸根离子的活化。对稻瘟病菌ATP硫酸化酶在病菌生长发育和致病过程中的功能进行分析,可为稻瘟病的防治提供药物靶标。【方法】采用同源重组方法构建基因敲除载体,并对突变体的表型进行分析。【结果】Mo MET3基因是病菌营养生长和分生孢子形成所必需的,但不是毒力因子。稻瘟病菌ATP硫酸化酶编码基因Mo MET3缺失后,突变体营养生长速率减慢,产孢量降低,但是突变体对寄主的毒力不受影响;虽然基因缺失不影响突变体分生孢子萌发和附着胞成熟,但突变体在硫营养限制时孢子萌发后次生菌丝的生长明显受抑。Mo MET3基因互补后,突变体恢复正常生长,能利用硫酸盐。【结论】无机硫的还原对分生孢子的萌发和附着胞的成熟并不是必需的,分生孢子内储存的还原态硫化合物可以满足这一过程中硫营养的需求,但病菌侵入寄主组织后需要吸收利用寄主源还原态硫以利于侵染菌丝的扩展。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 atp硫酸化酶 MoMET3 功能分析
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Control of sulfate concentration by miR395-targeted APS genes in Arabidopsis thaliana 被引量:9
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作者 Qin Ai Gang Liang +1 位作者 Huimin Zhang Diqiu Yu 《植物分类与资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期114-123,共10页
Sulfur nutrition is crucial for plant growth and development,as well as crop yield and quality.Inorganic sulfate in the soil is the major sulfur source for plants.After uptake,sulfate is activated by ATP sulfurylase,a... Sulfur nutrition is crucial for plant growth and development,as well as crop yield and quality.Inorganic sulfate in the soil is the major sulfur source for plants.After uptake,sulfate is activated by ATP sulfurylase,and then gets assimilated into sulfur-containing metabolites.However,the mechanism of regulation of sulfate levels by ATP sulfurylase is unclear.Here,we investigated the control of sulfate levels by miR395-mediated regulation of APS1/3/4.Sulfate was over-accumulated in the shoots of miR395 over-expression plants in which the expression of the APS1,APS3,and APS4 genes was suppressed.Accordingly,reduced expression of miR395 caused a decline of sulfate concentration.In agreement with these results,over-expression of the APS1,APS3,and APS4 genes led to the reduction of sulfate levels.Differential expression of these three APS genes in response to sulfate starvation implied that they have different functions.Further investigation revealed that the regulation of sulfate levels mediated by miR395 depends on the repression of its APS targets.Unlike the APS1,APS3,and APS4 genes,which encode plastid-localized ATP sulfurylases,the APS2 gene encodes a cytosolic version of ATP sulfurylase.Genetic analysis indicated that APS2 has no significant effect on sulfate levels.Our data suggest that miR395-targeted APS genes are key regulators of sulfate concentration in leaves. 展开更多
关键词 SULFUR miR395 APS1 APS2 APS3 APS4 atp sulfurylase
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嗜酸氧化亚铁硫杆菌ATP硫酸化酶的表达、纯化及性质鉴定 被引量:3
14
作者 钱林 郑春丽 柳建设 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期136-140,共5页
ATP硫酸化酶是一种催化ATP和SO42-反应生成腺嘌呤-5'-磷酸硫酸(APS)和焦磷酸盐(PPi)的酶,它是硫酸根同化反应第一步的关键酶。以嗜酸氧化亚铁硫杆菌(A.ferrooxidansATCC 23270)基因组为模板,用PCR扩增得到ATPS基因,并克隆到表达载体... ATP硫酸化酶是一种催化ATP和SO42-反应生成腺嘌呤-5'-磷酸硫酸(APS)和焦磷酸盐(PPi)的酶,它是硫酸根同化反应第一步的关键酶。以嗜酸氧化亚铁硫杆菌(A.ferrooxidansATCC 23270)基因组为模板,用PCR扩增得到ATPS基因,并克隆到表达载体pLM1上。加入IPTG的诱导表达,用AKTA蛋白纯化仪的镍柱亲和层析纯化得到浓度和纯度都较高的ATPS蛋白。SDS-PAGE分析,证实其分子量大小为33 kD,并成功的测出了其活性,比活达3.0×103U/mg。 展开更多
关键词 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 atp硫酸化酶 表达 纯化
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辣椒ATP硫酸化酶基因(CaATPS1)的克隆与逆境表达
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作者 朱磊 杨路明 +1 位作者 孙守如 李严曼 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1040-1047,共8页
采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因... 采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因与Gen Bank中登录的茄科植物烟草、马铃薯及其它物种中的ATPS1氨基酸序列具有较高的同源性;进化树分析表明,辣椒Ca ATPS1与同为茄科属的烟草、马铃薯和胡麻属的芝麻处于同一进化分枝上,而与十字花科植物进化关系较远;荧光定量PCR分析显示,Ca ATPS1能被低温、干旱、高盐、机械损伤、过氧化氢、水杨酸、乙烯利以及DC3000侵染等各种胁迫和信号分子诱导。 展开更多
关键词 atp硫酸化酶 辣椒 基因克隆与表达特性 胁迫应答
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