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荷叶碱对小鼠肝AML-12细胞内脂质代谢的影响 被引量:3
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作者 徐豪 王雪竹 +5 位作者 俞卓利 高靖汝 郭瑞 李娇妹 李松涛 韩强 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第11期18-24,共7页
该研究通过高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定荷叶中荷叶碱含量,对比分析25种荷叶中荷叶碱含量差异,并利用油酸诱导建立AML-12细胞脂质蓄积模型,研究荷叶碱对脂质代谢的影响。通过测定甘油三酯(Triglyce... 该研究通过高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定荷叶中荷叶碱含量,对比分析25种荷叶中荷叶碱含量差异,并利用油酸诱导建立AML-12细胞脂质蓄积模型,研究荷叶碱对脂质代谢的影响。通过测定甘油三酯(Triglyceride,TG)含量和油红O染色情况,评估细胞脂滴蓄积情况;检测细胞内AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5‘-Monophosphate-Activated Protein Kinase,AMPK)通路相关蛋白表达水平,探究荷叶碱影响脂质代谢的作用机制。经HPLC检测,发现荷叶品种间荷叶碱含量差异显著,其中佛座莲的荷叶碱质量分数最高,达0.68 mg/g,而金凤的荷叶碱质量分数最低,仅为0.22 mg/g。在脂质代谢研究中,与对照组相比,模型组在建模后脂滴数量显著增加,TG含量提升(P<0.01),P-AMPK和脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose Triglyceride Lipase,ATGL)在蛋白水平上表达显著降低(P<0.05);在荷叶碱的干预下,AML-12细胞的脂滴蓄积程度明显降低,TG含量显著减少(P<0.05),P-AMPK和ATGL的蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。由此表明:不同荷叶品种间荷叶碱含量存在明显差异,荷叶碱可能是通过调控AMPK/ATGL途径调节AML-12细胞内脂质代谢。该结果可为荷叶的开发利用提供理论支持。 展开更多
关键词 荷叶碱 aml-12细胞 脂代谢 高脂血症
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苦丁冬青苷D抑制肝细胞脂质沉积作用及机制
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作者 薛彩彩 厉彦翔 +2 位作者 乔秀梅 彭金咏 王金红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1688-1694,共7页
目的探讨苦丁冬青苷D(kudinoside D,KD-D)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导肝细胞脂质沉积的影响。方法体外培养AML-12细胞,随机分为Control组、PA组、PA+KD-D 20μmol·L^(-1)组、PA+KD-D 40μmol·L^(-1)组和PA+KD-D 80μmol&#... 目的探讨苦丁冬青苷D(kudinoside D,KD-D)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导肝细胞脂质沉积的影响。方法体外培养AML-12细胞,随机分为Control组、PA组、PA+KD-D 20μmol·L^(-1)组、PA+KD-D 40μmol·L^(-1)组和PA+KD-D 80μmol·L^(-1)组。除Control组外,其他各组细胞加入PA(0.4 mmol·L^(-1))孵育24 h,KD-D在PA加入前1 h给予。MTT法检测细胞存活率;油红O染色和透射电子显微镜检测肝细胞脂质沉积;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧族;MitoSOX线粒体超氧化物红色荧光探针检测细胞线粒体超氧化物。结果不同浓度KD-D明显改善PA诱导的肝细胞形态学改变。与Control组比较,PA组细胞内红色脂滴明显增加;与PA组比较,KD-D不同浓度干预的细胞内红色脂滴减少。透射电子显微镜结果提示,KD-D减少PA诱导的肝细胞脂肪变性并改善超微结构。此外,KD-D明显降低PA诱导的细胞活性氧水平(P<0.01),降低细胞线粒体超氧化物含量(P<0.01)。结论KD-D可抑制PA诱导的肝细胞脂质沉积,其机制可能与调控氧化应激反应有关。 展开更多
关键词 苦丁冬青苷D aml-12细胞 棕榈酸 脂质沉积 氧化应激 非酒精性脂肪性肝病
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胚胎干细胞分泌因子增强AML-12细胞抗凋亡能力 被引量:1
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作者 林武 黄昭帅 +1 位作者 鲍苗 陈肖鸣 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第6期408-412,共5页
目的:研究胚胎干细胞分泌因子是否能增强AML-12细胞在恶劣条件培养下的抗凋亡能力。方法:分别用胚胎干细胞完全培养基(CON-M)和胚胎干细胞上清液(ESC-M)培养AML-12细胞,并置于恶劣细胞培养环境中培养,MTT法比较各组AML-12细胞活力;Seaho... 目的:研究胚胎干细胞分泌因子是否能增强AML-12细胞在恶劣条件培养下的抗凋亡能力。方法:分别用胚胎干细胞完全培养基(CON-M)和胚胎干细胞上清液(ESC-M)培养AML-12细胞,并置于恶劣细胞培养环境中培养,MTT法比较各组AML-12细胞活力;Seahorse细胞代谢分析仪比较各组AML-12细胞氧消耗率以及细胞外酸化率等呼吸功能代谢情况。结果:MTT结果显示在恶劣细胞培养环境中,于ESC-M中培养的AML-12细胞拥有更强的抗凋亡能力。Seahorse细胞代谢分析显示ESC-M培养能加强AML-12细胞糖酵解潜力、最大氧化呼吸能力以及氧化呼吸潜力。结论:胚胎干细胞分泌因子能够增强AML-12细胞在恶劣培养条件下的抗凋亡能力。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 细胞生存 肝细胞 代谢 aml-12细胞
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橄榄苦苷通过抑制PPARγ稳定糖脂代谢调控NAFLD的作用机制
4
作者 罗明珠 王怡婷 +4 位作者 楚薇 马琰岩 王靖怡 李晶哲 刘长振 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期5462-5467,共6页
目的:基于PPARγ信号通路探索橄榄苦苷对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)细胞模型以及糖脂代谢的作用及可能机制。方法:采用油酸诱导AML12小鼠肝细胞构建NAFLD细胞模型。分成对照组、NAFLD组、GW9662组和橄榄苦苷组。用油红染色以及油红定量检... 目的:基于PPARγ信号通路探索橄榄苦苷对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)细胞模型以及糖脂代谢的作用及可能机制。方法:采用油酸诱导AML12小鼠肝细胞构建NAFLD细胞模型。分成对照组、NAFLD组、GW9662组和橄榄苦苷组。用油红染色以及油红定量检测药物对NAFLD细胞模型脂质沉积的影响。基于表面等离子共振技术配体结合检测法和Luciferase体外转录激活实验,检测橄榄苦苷能否与PPARγ直接结合以及对其作用特性。采用qPCR法检测橄榄苦苷对PPARγ下游脂代谢相关靶基因的影响。采用流式细胞分析和生化分析检测橄榄苦苷对糖摄取的作用。采用3T3-L1前脂肪细胞研究橄榄苦苷对脂肪生成的影响。结果:与对照组比较,NAFLD组经油酸诱导后产生大量脂质沉积(P<0.01),PPARγ及下游靶基因mRNA表达增加,如脂肪酸摄取和脂肪从头合成基因。与NAFLD组比较,GW9662组和橄榄苦苷组显著改善油酸诱导的脂肪堆积(P<0.05)。橄榄苦苷可以直接结合PPARγ并抑制其转录活性。橄榄苦苷降低PPARγ/α及其下游脂代谢相关靶基因mRNA表达水平(P<0.05),如CD36、Fatp1、Fabp3、SCD1、Acc1和Fasn等。橄榄苦苷还可以在一定程度上促进AML12的糖摄取能力(P<0.05),抑制3T3-L1细胞成脂分化(P<0.05)。结论:橄榄苦苷可以直接靶向PPARγ并抑制其转录活性,稳定糖脂代谢改善NAFLD。 展开更多
关键词 橄榄苦苷 非酒精性脂肪肝病 PPARΓ aml12小鼠肝细胞 3T3-L1前脂肪细胞
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金雀花碱在山豆根肝毒性中的作用 被引量:4
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作者 樊海艇 谷颖敏 +5 位作者 孙伟 耿悦 王莉萍 金若敏 张泽安 田雪松 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期176-181,共6页
目的:通过金雀花碱(CYT)体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法:小鼠肝AML12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L(-1)的C... 目的:通过金雀花碱(CYT)体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法:小鼠肝AML12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L(-1)的CYT,于加药后3,6,12,24 h,取细胞上清液,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL)及乳酸脱氢酶(LDH)水平。急性毒性实验,小鼠分别单次口服灌胃24.8,33.1,44.2,58.9,78.5 mg·kg(-1)CYT,设空白组。亚慢性毒性实验,小鼠随机分为3组,分别口服灌胃超纯水,11.2,14.0 mg·kg(-1)CYT,连续90 d。第91天小鼠麻醉后取血清检测ALT,AST,TBIL,LDH等生化指标,并做肝脏病理切片。结果:CYT的半抑制浓度(IC50)为15.17 mmol·L(-1)。14 mmol·L(-1)CYT自6 h起,ALT,AST释放逐渐增加,于12 h达到峰值(P〈0.05,P〈0.01),之后有下降趋势(P〈0.01);14 mmol·L(-1)CYT早在给药6 h,LDH释放就已经显著升高(P〈0.01),在12 h达到顶峰(P〈0.01),在24 h有下降趋势(P〈0.01);各浓度CYT在3,6,12,24 h时,较相应时间点空白组而言,TBIL释放均无显著性差异。在急性毒性实验,CYT的半数致死量(LD50)为48.16 mg·kg(-1),属于全球化学品统一分类和标签制度(GSH)第2级。在亚慢性毒性实验,与空白组相比,CYT组小鼠血清ALT及LDH水平无明显差异;虽然CYT 14.0 mg·kg(-1)组小鼠血清TBIL含量升高(P〈0.05),AST含量下降(P〈0.05),但是均在本实验室背景数据范围内,与空白组相比,肝组织病理学切片亦无明显差异,这一结果可能与CYT14.0 mg·kg(-1)组小鼠一半死亡,导致血液生化及肝脏病理标本量减少相关。结论:CYT属于GSH分类的经口急性毒性2级毒性物质,其在体外培养条件下具有肝细胞毒性,但是其在体内的肝毒性以及是否为山豆根肝毒性的毒性成分需要进一步研究。 展开更多
关键词 金雀花碱 肝毒性 小鼠 aml12肝细胞
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基于RNA-seq转录组学分析一贯煎对酒精性脂肪性肝病小鼠TGFBR2受体表达的影响 被引量:3
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作者 邱丰俊 李杜 +4 位作者 朱一唯 闫晓风 叶䁎杰 王晓玲 胡旭东 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2021年第5期42-49,共8页
目的通过RNA-seq转录组学测序探讨一贯煎防治小鼠酒精性脂肪性肝病(AFLD)的潜在信号通路。方法制备小鼠AFLD模型,同时予一贯煎药液灌胃。HE染色观察小鼠肝脏损伤情况,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三... 目的通过RNA-seq转录组学测序探讨一贯煎防治小鼠酒精性脂肪性肝病(AFLD)的潜在信号通路。方法制备小鼠AFLD模型,同时予一贯煎药液灌胃。HE染色观察小鼠肝脏损伤情况,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)含量,油红O染色观察肝脏脂肪生成情况,RNA-seq转录组测序技术检测小鼠肝脏差异表达基因,并进行KEGG通路富集分析,同时以RT-qPCR进行验证。体外实验以酒精刺激AML12细胞诱导AFLD细胞模型,通过TGFBR2和SLC2A4抗体拮抗相应的肝细胞膜受体,同时给予一贯煎溶液干预,Nile Red荧光染色观察细胞内脂质合成变化。结果HE染色显示,一贯煎可减轻AFLD小鼠肝损伤;油红O染色显示,一贯煎可降低肝组织内脂质沉积;与对照组比较,模型组小鼠血清ALT、TG含量明显增加(P<0.0001),与模型组比较,一贯煎组小鼠血清ALT、TG含量减少(P<0.0001),模型组、一贯煎组较对照组血清AST含量增加,差异无统计学意义(P>0.05);KEGG通路富集结果表明,FOXO信号通路中细胞膜受体蛋白TGFBR2、SLC2A4可能是一贯煎防治小鼠AFLD的关键信号通路蛋白。体外细胞实验表明,一贯煎和TGFBR2抗体单用或联用均能显著降低酒精诱导的AML12细胞脂肪变性,SLC2A4抗体对酒精诱导AML12细胞脂肪变性无明显影响。结论一贯煎可能通过影响肝细胞膜受体蛋白TGFBR2的表达而起到防治AFLD的药理效应。 展开更多
关键词 一贯煎 酒精性脂肪性肝病 RNA-SEQ TGFBR2 脂肪变性 小鼠 aml12细胞
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肝癌细胞外泌体鉴定及其对肝细胞的影响
7
作者 车小红 张咏梅 《生物医学工程与临床》 CAS 2023年第4期420-425,共6页
目的鉴定小鼠肝癌细胞Hepa1-6来源的外泌体(Hepa1-6 Exos),探讨Hepa1-6 Exos与小鼠正常肝细胞AML12共孵育时细胞摄取外泌体效率及对细胞增殖、凋亡和细胞功能的影响。方法提取Hepa1-6 Exos;透射电子显微镜和纳米颗粒分析仪鉴定外泌体形... 目的鉴定小鼠肝癌细胞Hepa1-6来源的外泌体(Hepa1-6 Exos),探讨Hepa1-6 Exos与小鼠正常肝细胞AML12共孵育时细胞摄取外泌体效率及对细胞增殖、凋亡和细胞功能的影响。方法提取Hepa1-6 Exos;透射电子显微镜和纳米颗粒分析仪鉴定外泌体形态和粒径分布;Western blot实验检测外泌体特异性蛋白;免疫荧光技术分析AML12细胞摄取外泌体效率;CCK-8和transwell侵袭实验检测外泌体对AML12细胞增殖和凋亡能力的影响;定量聚合酶链式反应(qPCR)和Western blot实验分析外泌体对AML12细胞功能的影响。结果Hepa1-6 Exos呈茶托样形态,粒径为50~200 nm,表达特异性蛋白CD9、CD63和TSG101。AML12细胞可高效摄取Hepa1-6 Exos。与正常AML12细胞对照组相比,Hepa1-6 Exos可促进AML12细胞增殖,24 h、48 h、72 h细胞增殖率分别为(10.15±0.91)%、(16.61±1.56)%、(28.57±1.53)%(均P<0.05);与正常AML12细胞对照组相比,Hepa1-6 Exos可抑制AML12细胞凋亡,24 h、48 h、72 h细胞凋亡率分别为(2.81±0.17)%、(2.10±0.57)%、(1.96±0.85)%(均P<0.05)。Hepa1-6 Exos能增强AML12细胞白蛋白(ALB)和α1-抗胰蛋白酶(A1AT)的表达。结论Hepa1-6 Exos可促进AML12细胞的增殖,抑制其凋亡,并增强AML12细胞ALB和A1AT的表达。 展开更多
关键词 Hepa1-6细胞 外泌体 aml12细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞功能
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CRISPR/Cas9联合Cre-Loxp系统建立VASN条件敲除的小鼠肝细胞系
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作者 甘暨 杨丽超 +3 位作者 张起 孙俊铭 张俊 何敏 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第2期173-181,共9页
目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同... 目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠肝细胞AML12中,分离单克隆,提取基因组DNA,经PCR及测序鉴定获得稳定敲入Loxp序列的单克隆细胞株AML12-Loxp;将pALB-Cre质粒转染至AML12-Loxp,筛选建立敲除VASN基因的细胞系。结果:成功构建2个靶向敲除VASN基因的pX459-gRNA-VASN-1和pX459-gRNAVASN-2重组载体及一个供体载体;转染药筛后获得12个单细胞克隆,经测序,5个单克隆细胞实现VASN基因上下游精确敲入Loxp序列;同源重组敲入效率为41.6%;pALB-Cre质粒转染后获得20个单细胞克隆,经PCR和测序获得12个VASN基因敲除的单克隆细胞,敲除效率为60%。结论:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统成功构建了VASN基因敲除的AML12细胞,为后续体外研究VASN在肝细胞中的功能及在动物体内实现VASN的条件性敲除奠定了分子基础。 展开更多
关键词 VASN CRISPR/Cas9 Cre-Loxp系统 条件性敲除 aml12细胞
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突变型β-连环蛋白基因对肝细胞增殖的影响 被引量:1
9
作者 尚现章 闵军 +1 位作者 褚忠华 陈积圣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1601-1605,I001,共6页
目的 :探讨突变型 β -连环蛋白基因对肝细胞增殖的影响。 方法 :用阳离子脂质体lipofectamine将突变型 β -连环蛋白基因导入小鼠肝细胞系AML12 ,建立AML12S33Y细胞系。用流式细胞仪和细胞计数比较这两种细胞的生长情况 ;比较这两种细... 目的 :探讨突变型 β -连环蛋白基因对肝细胞增殖的影响。 方法 :用阳离子脂质体lipofectamine将突变型 β -连环蛋白基因导入小鼠肝细胞系AML12 ,建立AML12S33Y细胞系。用流式细胞仪和细胞计数比较这两种细胞的生长情况 ;比较这两种细胞在软琼脂中形成的克隆以及在免疫缺陷小鼠体内的成瘤情况。结果 :AML12细胞增殖明显快于AML12S33Y细胞 (P <0 0 1) ,提示突变型 β -连环蛋白能促进肝细胞的增殖。 4周后AML12S33Y细胞在软琼脂中可形成小克隆 ,但不能在免疫缺陷小鼠皮下形成肿瘤。结论 :突变型β -连环蛋白可以促进肝细胞增殖 ,但无致瘤性。 展开更多
关键词 突变型β-连环蛋白 肝细胞 增殖 ANL12细胞
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Rab32对小鼠肝细胞系AML12细胞内脂质代谢的影响
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作者 周围 马莉 +1 位作者 万瑛 李福祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期954-958,共5页
目的探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响。方法常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组),利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组),正常细胞设为... 目的探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响。方法常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组),利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组),正常细胞设为对照组。Western blot检测各组细胞中Rab32蛋白表达水平;尼罗红染色后,激光共聚焦显微镜观测各组细胞内的脂滴数量和面积;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及总胆固醇水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与对照组比较,过表达组AML12细胞中Rab32蛋白表达水平显著上调,而Rab32敲除组细胞中Rab32蛋白表达水平显著下调(P<0.01);过表达组AML12细胞内脂滴数量[过表达组vs对照组:(21.91±14.32)vs(33.89±17.31),P<0.01]及面积[过表达组vs对照组:(16.82±14.37)μm^2vs(22.27±14.10)μm^2,P<0.01]显著减少,每毫克蛋白甘油三酯[过表达组vs对照组:(104.03±12.28)nmol vs(130.94±4.21)nmol,P<0.01]及胆固醇水平[过表达组vs对照组:(46.92±1.26)μg vs(81.11±0.65)μg,P<0.01]显著降低;而Rab32敲除组细胞内脂滴数量[(58.23±42.28)]及面积[(53.31±36.33)μm^2]较对照组显著增加(P<0.01),其每毫克蛋白甘油三酯[(159.03±8.85)nmol]及胆固醇水平[(93.38±3.33)μg]显著增高(P<0.01)。3组细胞凋亡水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Rab32促进小鼠肝细胞AML12胞内脂质代谢。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 aml12细胞 Rab32 脂代谢
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