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淀粉-糖代谢酶活性变化对马铃薯块茎还原糖积累及加工品质的影响 被引量:21
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作者 成善汉 苏振洪 +1 位作者 谢从华 柳俊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1904-1910,共7页
以不同贮藏温度条件下的‘鄂马铃薯1号’和‘鄂马铃薯3号’品种为材料,对贮藏块茎还原糖、总糖含量及淀粉-糖代谢中酶活性变化规律进行研究,以明确马铃薯炸片色泽指数的主要影响因素。结果表明,贮藏期间低温是促进块茎还原糖累积的主要... 以不同贮藏温度条件下的‘鄂马铃薯1号’和‘鄂马铃薯3号’品种为材料,对贮藏块茎还原糖、总糖含量及淀粉-糖代谢中酶活性变化规律进行研究,以明确马铃薯炸片色泽指数的主要影响因素。结果表明,贮藏期间低温是促进块茎还原糖累积的主要影响因素,还原糖含量与炸片色泽具有极显著直线正相关。进一步分析表明,在4℃贮藏条件下,腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)和蔗糖合成酶活性(SuSy)与块茎还原糖含量呈显著负指数相关,酸性转化酶(Acid Inv)和碱性转化酶活性(Alkaline Inv)与块茎还原糖的积累呈显著直线正相关,是淀粉-糖代谢过程中影响块茎低温糖化的重要因素。 展开更多
关键词 块茎 酶活性 马铃薯 还原糖含量 薯块 糖积累 加工品质 淀粉 色泽 糖化
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马铃薯sAGP基因表达对块茎淀粉和还原糖含量的影响 被引量:16
2
作者 宋波涛 谢从华 柳俊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1439-1446,共8页
通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导将CaMV35S驱动的正/反义sAGP基因导入马铃薯(SolanumtuberosumL.)品种鄂马铃薯3号(E3)和南中552(N552)以研究sAGP基因对马铃薯块茎淀粉-糖代谢的影响。PCR扩增和Southern杂交证明正/反义s... 通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导将CaMV35S驱动的正/反义sAGP基因导入马铃薯(SolanumtuberosumL.)品种鄂马铃薯3号(E3)和南中552(N552)以研究sAGP基因对马铃薯块茎淀粉-糖代谢的影响。PCR扩增和Southern杂交证明正/反义sAGP基因已整合到马铃薯基因组中。Northern杂交分析表明,该正/反义基因在转基因植株中均能正常转录。转基因植株块茎分析显示,导入正义基因的株系中除4个与转反义基因表现相同外,其余19个株系AGPase酶活性平均上升约25%,还原糖含量下降20%左右,淀粉含量增加5%~6%。其中3个测定指标与各自对照相比,差异均达到显著水平的有A8、C1和C5,最大变化幅度分别为酶活性上升53.5%,还原糖含量下降60.1%,淀粉含量增加33.9%。转反义sAGP基因的15个株系中,AGPase酶活性平均下降约27%,还原糖含量上升近36%,淀粉含量下降亦达27%,其中株系B5、B6、B8和D7的这3个指标均与各自未转基因对照差异显著。本研究结果表明,sAGP基因与AGPase酶活性直接相关,而AGPase很大程度上调节着马铃薯块茎淀粉-糖代谢,通过增强sAGP表达,能有效改良块茎的加工品质。 展开更多
关键词 还原糖含量 块茎淀粉 基因表达 Southern杂交 NORTHERN杂交 agpase AGP基因 转基因植株 鄂马铃薯3号 淀粉含量 根癌农杆菌 PCR扩增 CaMV 基因导入 反义基因 基因表现 正义基因 测定指标 显著水平 变化幅度 差异显著 研究结果
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Effects of Variation in Activities of Starch-Sugar Metabolic Enzymes on Reducing Sugar Accumulation and Processing Quality of Potato Tubers 被引量:10
3
作者 CHENGShan-han SUZhen-hong XIECong-hua LIUJun 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2004年第7期519-527,共9页
The experiment was designed, via storing potato tubers of cv. E-Potato1 and E-Potato3 indifferent temperatures, to explore the variation patterns of reducing sugar (RS) andtotal sugar (TS) contents and enzyme activiti... The experiment was designed, via storing potato tubers of cv. E-Potato1 and E-Potato3 indifferent temperatures, to explore the variation patterns of reducing sugar (RS) andtotal sugar (TS) contents and enzyme activities that are involved in the pathway ofstarch-sugar metabolism aiming at identifying the main factors that influence the chipcolor. The results showed that low temperature in storage was a main factor thataccelerated the accumulation of RS of the stored tubers and a very significant linearrelationship existed between RS content and chip color index (CCI) of the tubers. Furtheranalysis elucidated that when tubers stored at 4℃, the activities of ADP glucosepyrophosphorylase (AGPase), UDP glucose pyrophosphorylase (UGPase) and sucrose synthase(SuSy) were negatively exponential to the RS content significantly while that of acidinvertase and alkaline invertase was significantly linear to RS content. It suggestedthat these enzymes could play main roles in the cold sweetening of potato tubers throughregulating starch-sugar metabolism. 展开更多
关键词 POTATO RS TS CCI agpase UGPASE SUSY INVERTASE
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木薯栽培种与野生种叶片光合器官结构和酶学差异 被引量:6
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作者 张杨 卢诚 王文泉 《中国农学通报》 CSCD 2012年第25期144-149,共6页
为探究栽培型木薯高光效的机理,采用石蜡切片法和酶活测定等方法分别对木薯栽培品种Arg7(Manihot esculenta)和野生种W14(Manihot esculenta subsp.flabellifolia)进行了叶片解剖结构、光合淀粉累积关键酶活性、净光合效率和叶绿素含量... 为探究栽培型木薯高光效的机理,采用石蜡切片法和酶活测定等方法分别对木薯栽培品种Arg7(Manihot esculenta)和野生种W14(Manihot esculenta subsp.flabellifolia)进行了叶片解剖结构、光合淀粉累积关键酶活性、净光合效率和叶绿素含量的测定。对比分析2个木薯种试验结果,发现栽培型木薯较野生种具有独特的叶片维管束鞘细胞结构,较高的PEPCase(50.41NADHμmol/(mg·protein·h)活性和净光合速率[36.82μmol/(m2·s)]以及低于野生种的叶绿素含量。另外,木薯种Arg7叶片中Rubisco、PEPC、AGPase和SuSy这4个酶活性动态变化与净光合速率变化趋势基本一致,表明木薯光合作用、淀粉合成以及光合产物的运输是个协同作用的过程。最后推断出栽培型木薯高光效的原因可能是叶片中存在一定程度的C4光合模式以及较野生种通畅的光合产物运输通路。 展开更多
关键词 木薯 净光合速率 rubisco PEPC agpase SUSY
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芋ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)基因家族的克隆、生物信息学及表达分析 被引量:5
5
作者 何芳练 刘莉莉 +3 位作者 蒋慧萍 邱祖杨 黄诗宇 董伟清 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1554-1564,共11页
芋(Colocasia esculenta)为天南星科芋属成员,在世界范围内广泛种植,其球茎主要贮藏物质为淀粉。ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉合成的第一个关键酶和限速酶,在植物淀粉合成中发挥关键作用,但目前关于芋AGPase基因家族的分子结构... 芋(Colocasia esculenta)为天南星科芋属成员,在世界范围内广泛种植,其球茎主要贮藏物质为淀粉。ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉合成的第一个关键酶和限速酶,在植物淀粉合成中发挥关键作用,但目前关于芋AGPase基因家族的分子结构特征和表达模式还不清楚。本研究以芋新品种‘荔浦芋1号’为试材,从全长转录组注释信息中筛选到6个AGPase基因家族成员,利用RT-PCR技术克隆了6个基因的编码区,利用生物信息学对其理化性质、进化关系和保守motif进行分析;同时利用转录组学和荧光定量RT-PCR技术对6个基因在不同组织和球茎不同发育阶段的表达模式进行分析。结果表明:克隆获得6个芋AGPase基因编码区的cDNA序列,序列长度为1398~2028bp,编码的蛋白大小为350~543 aa,其中4个基因(CeAGPL1~CeAGPL4)编码AGPase的大亚基,2个基因(CeAGPS1,CeAGPS2)编码AGPase的小亚基。系统进化分析显示,所有的AGPase分成了大亚基和小亚基2个群组,4个大亚基分在了大亚基组,2个小亚基分在了小亚基组。CeAGP家族蛋白分子质量范围为38753.22~59743.05kDa,等电点范围为5.64~8.82,亚细胞定位为叶绿体、淀粉体和细胞质等。蛋白的保守motif分析发现,CeAGP家族蛋白共预测到11个保守motif,6个motif功能注释为NTP_transferase,除CeAGPS2外,另外5个CeAGP蛋白均包含11个motif。在不同组织中,6个CeAGP基因均能在所有组织中表达,其中CeAGPL3和CeAGPS1基因在叶片和叶柄中高表达,CeAGPL1和CeAGPS1基因在球茎中高表达,6个CeAGP基因在根的表达量均较低。在球茎不同发育阶段中,CeAGPL1和CeAGPS1高表达且均表现先升高后降低的趋势,2个基因分别在4月龄和5月龄阶段的表达量最高。该研究结果为后续阐明芋淀粉合成的分子机制提供依据。 展开更多
关键词 agpase 基因克隆 表达分析
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亚洲百合及东方百合AGPase酶活性及表达量与淀粉含量的相关性 被引量:1
6
作者 张达 李莲莲 +4 位作者 莫江玲 李缘 张超超 吴学尉 王丽花 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期137-143,共7页
【目的】探明两类百合不同发育时期的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活性、AGPase基因表达量与淀粉含量的相关性。【方法】使用qPCR、连续监测法、蒽酮法分别测定材料AGPase基因的表达量、酶活性及淀粉含量,再对比两类百合的异同,... 【目的】探明两类百合不同发育时期的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活性、AGPase基因表达量与淀粉含量的相关性。【方法】使用qPCR、连续监测法、蒽酮法分别测定材料AGPase基因的表达量、酶活性及淀粉含量,再对比两类百合的异同,以得到两类百合AGPase基因的表达量、酶活性与淀粉含量各自的特点及各因素间的相关性。【结果】所有克隆到的AGPase基因都具有PLN02241家族蛋白结构特征;定量结果表明,两类百合AGPase大亚基基因表达模式相同,总体趋势类似。小亚基基因表达模式存在差异,且小亚基基因的表达量低于大亚基基因;淀粉及酶活性测定结果表明,两类百合总体趋势一致。相关性分析表明,AGPase小亚基基因的表达量、AGPase酶活性与淀粉含量在鳞片中高度线性相关,且叶片中的酶活性与鳞片中的淀粉含量也高度线性正相关。【结论】两类百合不同时期的淀粉含量及酶活性变化趋势相同,但同一发育时期不同类型百合的淀粉含量及酶活性存在差异。两类百合大小亚基基因的表达量在鳞茎不同时期的表达模式相似,但同一发育时期不同类型百合的基因表达量存在差异。AGPase小亚基基因的表达量与淀粉含量正相关。 展开更多
关键词 百合 agpase 淀粉 相关性分析
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水稻粉质胚乳突变体ws的表型分析及基因克隆 被引量:5
7
作者 潘鹏屹 朱建平 +6 位作者 王云龙 郝媛媛 蔡跃 张文伟 江玲 王益华 万建民 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期447-457,共11页
从甲基亚硝基脲(1-Methyl-1-Nitrosourea,MNU)处理的粳稻品种滇粳优1号突变体库中,筛选到一个稳定遗传的胚乳粉质突变体ws,其籽粒的千粒重、籽粒大小、总淀粉含量、直链淀粉含量等指标均降低,淀粉在尿素溶液中的膨胀能力减弱。对成熟及... 从甲基亚硝基脲(1-Methyl-1-Nitrosourea,MNU)处理的粳稻品种滇粳优1号突变体库中,筛选到一个稳定遗传的胚乳粉质突变体ws,其籽粒的千粒重、籽粒大小、总淀粉含量、直链淀粉含量等指标均降低,淀粉在尿素溶液中的膨胀能力减弱。对成熟及发育中的胚乳淀粉结构进行观察,发现ws突变体的胚乳中产生大量小而不规则排布的单淀粉颗粒。利用F2群体中分离出的92个隐性极端个体将突变基因连锁在第8染色体近着丝粒位置,随后共用2025个极端个体将目标基因定位于95kb的区间。测序发现ws突变体中编码腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(Adenosine diphosphate glucose pyrophosphorylase,AGPase)小亚基S2的基因发生点突变,导致编码氨基酸的替换。基因表达分析发现,突变体胚乳中编码AGPase各亚基的相关基因表达量没有发生显著改变,而Western杂交分析显示突变体中AGPS2b的蛋白含量下降。同时,ws突变体的胚乳中AGPase活性下降为野生型的一半。研究结果表明,OsAGPS2的突变导致水稻胚乳中AGPase活性降低,从而影响了淀粉合成。 展开更多
关键词 胚乳粉质突变体 agpase 淀粉 基因表达 理化性质 水稻
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AGPase及其基因表达研究 被引量:3
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作者 姚新灵 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期34-38,共5页
ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉生物合成的限速酶,本文讨论了到目前为止对不同植物AGPase基因及其表达的研究结果。其中包括AG-Pase大小亚基编码基因表达的分布及调控。其结论为:完整AGPase两个大亚基和两个小亚基对合成正常含量... ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉生物合成的限速酶,本文讨论了到目前为止对不同植物AGPase基因及其表达的研究结果。其中包括AG-Pase大小亚基编码基因表达的分布及调控。其结论为:完整AGPase两个大亚基和两个小亚基对合成正常含量的淀粉缺一不可;有多个等位基因编码植物AGPase大小亚基,它们表现发育阶段、组织器官、细胞质体内外及诱导条件的分化表达;尽管各亚基表达于含淀粉的组织,但它们在储藏组织内的表达量远高于其他组织;对调控不敏感的外源AGPase基因导入淀粉植物将会成为提高淀粉含量的重要途径。提出了进一步研究中存在的问题及可能的解决途径。 展开更多
关键词 agpase 植物 淀粉合成 基因表达
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小麦籽粒内AGPase质体型小亚基的克隆和序列分析 被引量:3
9
作者 康国章 沈丙权 +3 位作者 王永华 刘超 郭天财 朱云集 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2008年第4期705-709,共5页
文章从小麦籽粒中克隆了淀粉合成关键酶AGPase的质体型小亚基(SSU Ⅱ)的cDNA序列。其中间部分与3'端序列与大麦SSU Ⅱ(Z48563)的同源性高达97%,但在5'端特异的转移肽切割位点却比Z48563缺失一段113bp序列。本文克隆的SSU Ⅱ其特... 文章从小麦籽粒中克隆了淀粉合成关键酶AGPase的质体型小亚基(SSU Ⅱ)的cDNA序列。其中间部分与3'端序列与大麦SSU Ⅱ(Z48563)的同源性高达97%,但在5'端特异的转移肽切割位点却比Z48563缺失一段113bp序列。本文克隆的SSU Ⅱ其特异5'端序列与已报道的大麦(Z48563)、小麦(536819)、玉米(AF334960)进行多序列比对和同源性比较显示,它们的亲缘关系较远,表明这可能是一个新的SSU Ⅱ基因。另外,在检测的22个现今推广面积较大的小麦品种中,SSU Ⅱ 5'端缺失序列的现象都普遍存在。 展开更多
关键词 小麦 淀粉 agpase 质体型小亚基 转移肽切割位点
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一个新的玉米Bt2基因突变体的遗传分析和分子鉴定 被引量:2
10
作者 徐宁坤 李冰 +5 位作者 陈晓艳 魏亚康 刘子龙 薛永康 陈洪宇 王桂凤 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期572-579,共8页
玉米籽粒发育调控机制的研究对于玉米产量与品质性状的遗传改良十分重要。本研究鉴定了一个新的转座子插入的籽粒皱缩突变体5601Q,遗传分析表明其籽粒缺陷稳定遗传且为单基因隐性突变。构建其B73背景的F_(2)分离群体,通过图位克隆将该... 玉米籽粒发育调控机制的研究对于玉米产量与品质性状的遗传改良十分重要。本研究鉴定了一个新的转座子插入的籽粒皱缩突变体5601Q,遗传分析表明其籽粒缺陷稳定遗传且为单基因隐性突变。构建其B73背景的F_(2)分离群体,通过图位克隆将该突变定位于玉米4号染色体上60.19~62.58 Mb的区间。基因注释分析发现,区间内存在一个已报道参与玉米籽粒发育的基因BRITTLE ENDOSPERM2(Bt2),其编码玉米胚乳淀粉合成途径中的一个限速酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase)的小亚基。籽粒储藏物质分析表明,该突变体百粒重及淀粉含量显著降低,但可溶性糖含量增加为野生型的4.67倍。利用本实验室已确定的Bt2基因突变体1774与5601Q进行等位测验,确认了5601Q是Bt2的一个新的等位突变体。分子鉴定表明,5601Q突变体中Bt2基因的第2个外显子存在一个Mutator 19转座子的插入。综上,5601Q籽粒发育缺陷是由Bt2基因的突变导致,本研究为解析玉米Bt2基因在胚乳储藏物质积累中的作用机制提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 玉米 籽粒突变 图位克隆 agpase Bt2
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玉米AGPase胞质型小亚基ZmSSUI基因的克隆及在籽粒发育过程中的表达 被引量:2
11
作者 沈丙权 郑贝贝 +2 位作者 彭慧芳 郭天财 康国章 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期61-65,共5页
利用RT-PCR方法从普通玉米浚单20中克隆出淀粉合成关键酶-腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-Glucose Pyrophosphorylase,AGPase)胞质型小亚基(cytosolic small subunit,SSUI)基因的cDNA序列,命名为ZmSSUI(GenBank登录号:GU550073... 利用RT-PCR方法从普通玉米浚单20中克隆出淀粉合成关键酶-腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-Glucose Pyrophosphorylase,AGPase)胞质型小亚基(cytosolic small subunit,SSUI)基因的cDNA序列,命名为ZmSSUI(GenBank登录号:GU550073)。序列分析表明,该cDNA序列长度1554 bp,包含一个完整的开放阅读框(2~1 429 bp),长度为1 428 bp,编码476个氨基酸,克隆基因编码的氨基酸序列与其他植物SSUI氨基酸序列有较高同源性。半定量RT-PCR分析表明,在籽粒发育过程中,ZmSSUI基因的表达呈单峰状变化,与已报道的AGPase酶活性及淀粉积累速率趋势基本一致,推测其在玉米淀粉合成中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 玉米 agpase 胞质型小亚基 淀粉
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苦荞AGPase编码基因FtAGPL和FtAGPS全基因组鉴定和表达分析 被引量:2
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作者 石桃雄 唐彬 +5 位作者 任蓉蓉 朱丽伟 邓娇 梁成刚 汪燕 黄娟 《贵州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第4期52-57,共6页
AGPase是植物淀粉合成的第一个限速酶,直接决定淀粉的合成速率和积累量,是由2个大亚基(AGPL)和2个小亚基(AGPS)构成的异源四聚体。研究从苦荞全基因组水平鉴定到4个AGPL编码基因(命名为FtAGPL1~4)和2个AGPS编码基因(命名为FtAGPS1~2)。... AGPase是植物淀粉合成的第一个限速酶,直接决定淀粉的合成速率和积累量,是由2个大亚基(AGPL)和2个小亚基(AGPS)构成的异源四聚体。研究从苦荞全基因组水平鉴定到4个AGPL编码基因(命名为FtAGPL1~4)和2个AGPS编码基因(命名为FtAGPS1~2)。这6个基因编码蛋白质的长度在515~532个氨基酸之间,分子量在56.6~59.4 kDa之间,均为亲水蛋白,定位于细胞质和线粒体中。基因结构分析表明,4个FtAGPL和2个FtAGPS基因具有较多的外显子(9~14个)。氨基酸多重序列比对表明,6个蛋白均含有葡糖磷酸腺苷酰基转移酶保守结构域(PLN02241)。进化关系分析表明,苦荞FtAGPL和FtAGPS与双子叶植物拟南芥AtAGPL和AtAGPS蛋白的亲缘关系更近。表达分析表明,4个苦荞AGPL和2个AGPS基因在苦荞不同发育时期的种子中均有表达,其中FtAGPL2、FtAGPL4和FtAGPS1在种子中优势表达。以上研究结果为从分子水平上解析苦荞种子淀粉合成调控机制提供了重要线索。 展开更多
关键词 苦荞 agpase FtAGPL FtAGPS 系统进化 表达分析
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百合鳞茎发育过程中淀粉合成相关酶基因的克隆及表达分析 被引量:4
13
作者 张进忠 孙嘉曼 +2 位作者 李朝生 韦莉萍 范燕萍 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期446-452,共7页
该研究通过同源克隆技术克隆腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、颗粒结合淀粉合酶(GBSS)和可溶性淀粉合酶(SSS) 3类百合淀粉合成关键酶基因,分析这三类淀粉合成关键酶基因的表达变化,测定百合鳞茎膨大发育中淀粉含量变化。结果表明:(... 该研究通过同源克隆技术克隆腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、颗粒结合淀粉合酶(GBSS)和可溶性淀粉合酶(SSS) 3类百合淀粉合成关键酶基因,分析这三类淀粉合成关键酶基因的表达变化,测定百合鳞茎膨大发育中淀粉含量变化。结果表明:(1) AGPase具有GlgC家族蛋白PLN02241蛋白结构特征及cl11394家族蛋白ADP_Glucose_PP与NTP_transferase结构域,获登录号KP751443; GBSS与SSS具有cl10013家族蛋白Glyco_transf_5,GT1_Glycogen_synthase_DULL1_like结构域,获登录号分别为KP751444、KP751445。(2)百合鳞茎形成与膨大发育过程中,淀粉含量呈现递增趋势,鳞茎盘开始分化茎杆时其淀粉含量最高,达到44.52%。鳞茎与叶片部位的三个淀粉合成相关酶基因表达量均逐渐增加;在鳞茎膨大后茎杆分化阶段,三个淀粉合成相关酶基因表达量达到最高,AGPase、GBSS、SSS在鳞片中的表达量分别为10.79,6.92和5.12,叶片中的表达量分别为6.79,5.22和4.41,鳞片中的表达量大幅度高于叶片;淀粉合成相关酶基因的表达量变化与淀粉含量、鳞茎的膨大发育成正相关。这为鳞茎的繁殖生产提供了可通过调节淀粉合成关键酶基因表达促进百合鳞茎膨大发育的思路。 展开更多
关键词 百合 淀粉合成 鳞茎膨大 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 荧光定量PCR
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小麦AGPase基因LSU Ⅱ的克隆及反义表达与RNAi干扰载体的构建 被引量:1
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作者 刘超 康国章 +2 位作者 郭天财 岳彩风 沈丙权 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期1-6,共6页
采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶—AGPase质体型大亚基(AGPase plastidial large subunit,LSU Ⅱ)cDNA一段特异保守序列,长度为535 bp(GenBank No.EF378944),与DQ409820(小麦)、U66876(大麦)、AK0... 采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶—AGPase质体型大亚基(AGPase plastidial large subunit,LSU Ⅱ)cDNA一段特异保守序列,长度为535 bp(GenBank No.EF378944),与DQ409820(小麦)、U66876(大麦)、AK069296(水稻)和DQ406819(玉米)分别有98%,97%,88%,88%的同源性,表明克隆出了小麦LSU Ⅱ基因的部分cDNA序列。以pWM101质粒表达载体为基础,将LSU Ⅱ反向置于pWM101质粒的CaMV35S启动子之后,构建了LSU Ⅱ的反义表达载体pWM101LSUIIA;另外,用pFGC5941干扰载体构建了LSU Ⅱ基因的RNAi载体pFGC5941 LSU ⅡSA,这些载体的构建为研究LSU Ⅱ基因的功能打下了基础。 展开更多
关键词 小麦 agpase LSU 表达载体
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荧光发光测定AGPase活力方法初步建立及应用 被引量:1
15
作者 姚新灵 黄婷 +3 位作者 马一婧 王亚煦 贾慧萍 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1920-1923,共4页
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活力传统上采用32P同位素标记反应底物来测定,但因测定条件的限制而极大地影响了其应用。该研究依据荧光素酶催化荧光素生成发光氧化荧光素的原理,在优化基本反应体系、确立反应体系ATP浓度和荧光强... 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活力传统上采用32P同位素标记反应底物来测定,但因测定条件的限制而极大地影响了其应用。该研究依据荧光素酶催化荧光素生成发光氧化荧光素的原理,在优化基本反应体系、确立反应体系ATP浓度和荧光强度线性关系等基础上,初步建立了以荧光发光反应测定AGPase活力的新方法,并运用新方法测定了含有不同glgC基因拷贝数菌株的AGPase活力。测定结果显示,不同菌株AGPase活力随glgC拷贝数不同存在显著差异,且其变化趋势与理论预期一致,即新方法可用于AGPase活力的体外测定,且具有更加安全、灵敏、简便和成本低的特点。 展开更多
关键词 agpase 酶活力 测定 荧光反应 菌株
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马铃薯ADP-葡萄糖焦磷酸化酶基因多态性分析 被引量:3
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作者 甘晓燕 巩檑 +4 位作者 聂峰杰 石磊 陈虞超 张丽 宋玉霞 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1781-1787,共7页
ADP-葡萄糖-焦磷酸化酶(AGPase)是决定植物淀粉生物合成的关键酶,本研究以马铃薯AGP酶基因为候选基因,采用RT-PCR和测序技术检测22个不同类型马铃薯中该基因的遗传变异情况。结果表明,该基因存在多态性,22个品种马铃薯中存在5种类型的... ADP-葡萄糖-焦磷酸化酶(AGPase)是决定植物淀粉生物合成的关键酶,本研究以马铃薯AGP酶基因为候选基因,采用RT-PCR和测序技术检测22个不同类型马铃薯中该基因的遗传变异情况。结果表明,该基因存在多态性,22个品种马铃薯中存在5种类型的酶蛋白,酶蛋白基因型为ISQV时,马铃薯淀粉含量较高,AGP酶蛋白为VSKM和VLKM时,马铃薯淀粉含量较低。 展开更多
关键词 ADP-葡萄糖-焦磷酸化酶 基因多态性 淀粉生物合成
原文传递
马铃薯反义SSU原核表达载体的构建及其对大肠杆菌糖原合成的影响
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作者 万巧凤 姚新灵 丁海麦 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第36期11762-11763,共2页
[目的]为了鉴定马铃薯反义SSU的功能。[方法]利用分子生物学技术,构建了马铃薯反义SSUcDNA原核表达载体(pE-aS),通过0.1mol/LIPTG诱导pE-aS在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,测定糖原的相对含量。[结果]经连接、转化和酶切鉴定筛选出重组表达... [目的]为了鉴定马铃薯反义SSU的功能。[方法]利用分子生物学技术,构建了马铃薯反义SSUcDNA原核表达载体(pE-aS),通过0.1mol/LIPTG诱导pE-aS在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,测定糖原的相对含量。[结果]经连接、转化和酶切鉴定筛选出重组表达载体pE-aS,而pE-aS转化BL21(DE3)获得重组菌株BL21-aS。经IPTG诱导的BL21-aS糖原含量OD值为0.409,显著低于对照菌株BL21(DE3)和未经IPTG诱导的BL21-aS,而对照菌株BL21(DE3)和未经IPTG诱导的BL21-aS的糖原含量OD值差异不显著。这表明反义SSU在BL21内表达能够抑制glgC编码的AGPase的形成,从而减少其糖原合成量。[结论]该研究为构建马铃薯反义SSU植物转化载体奠定了基础。 展开更多
关键词 agpase 原核表达载体 糖原 植物转化载体
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Analysis of Gene Expression of Seven Isoforms of ADP-glucose Pyrophosphorylase in Rice Endosperm under Different Temperature Conditions
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作者 袁定阳 孙志忠 +1 位作者 谭炎宁 段美娟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第6期1226-1229,1233,共5页
[Objective] This study aimed to analyze the effects of temperature on the expression of AGPase isoform genes in rice endosperm during milk stage. [Method] Different temperature treatments (33 and 25 ℃ of daily mean ... [Objective] This study aimed to analyze the effects of temperature on the expression of AGPase isoform genes in rice endosperm during milk stage. [Method] Different temperature treatments (33 and 25 ℃ of daily mean temperature for high and normal temperature treatments, respectively) and the real-time fluorescence quantitative PCR ( FQPCR) were used to analyze the expression patterns of seven isoforms (AGPS1, AGPS2a, AGPS2b, AGPL1, AGPL2, AGPL3 and AGPL4) of ADPglucose pyrophosphorylase (AGPase) which was the key enzyme in starch synthesis and metabolism in rice endosperm of two rice varieties Teqing and Thai Fragrant Rice. [Result] The AGPase isoforms AGPS2b, AGPL2 and AGPL3 had much higher expression than the other four isoforms, thus they were thought to be the main expression patterns of AGPase in rice endosperm. The relative expressions of AGPL2 was the highest among all the isoforms. The relative expressions of AGPS2b, AGPL2 and AGPL3 were higher in the normal temperature treatment than in the high temperature treatment in both rice varieties. The relative expression of the three enzyme genes in milk stages in Teqing was higher than those in Thai Fragrant Rice under different temperature treatments. [Conclusion] This study provides a theoretical basis for further use of molecular biology techniques to cultivate stable high-quality rice varieties. 展开更多
关键词 RICE ADP-glucose pyrophosphorylase agpase isoforms Gene expression characteristics Real-time fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR)
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紫色马铃薯sAGP基因的克隆及其生物信息学分析 被引量:2
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作者 何姗 申蕾阳 +3 位作者 青芸 吴楠 黄玉碧 余国武 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期4894-4899,共6页
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是植物内淀粉合成的限速酶。sAGP基因编码AGPase的小亚基。本研究使用同源克隆法,以NCBI中已知马铃薯sAGP基因(GenBank:AY186620.1)序列设计引物,克隆紫色马铃薯‘蓉紫芋5号’的AGPase小亚基基因sAG... 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是植物内淀粉合成的限速酶。sAGP基因编码AGPase的小亚基。本研究使用同源克隆法,以NCBI中已知马铃薯sAGP基因(GenBank:AY186620.1)序列设计引物,克隆紫色马铃薯‘蓉紫芋5号’的AGPase小亚基基因sAGP的编码区序列。结果显示,克隆的序列与普通马铃薯一致性达99%,成功获得了紫色马铃薯的c DNA;该片段具有一个1 425 bp的开放阅读框,编码475个氨基酸残基;预测蛋白质分子量为52.43 kD,等电点为6.23。sAGP同源性分析表明紫色马铃薯与番茄、辣椒、烟草的同源性均达到90%以上。用氨基酸序列构建三维模型,发现克隆得到的sAGP包含10个α螺旋,25个β折叠,并存在NTP transferase domain与pbH1两个结构域,符合NTP转移酶家族特征,推测其为AGPase小亚基。本研究克隆了紫色马铃薯sAGP基因并对其序列特征进行了初步分析,为今后进一步了解研究紫色马铃薯中的淀粉合成机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 紫色马铃薯 agpases sAGP 克隆
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木薯AGPase大亚基MeAGPL3基因启动子调控区域鉴定 被引量:1
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作者 马平安 陈新 +3 位作者 沈佳琦 张帅兵 胡元森 王文泉 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第21期7122-7131,共10页
木薯是重要的热带作物,具有高淀粉积累等特点,但其高效积累机制尚不明确。为研究腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)大亚基对木薯淀粉积累的调控作用,本研究通过RT-PCR技术对木薯AGPase5个大亚基基因(MeAGPL1~MeAGPL5)进行筛选,发现MeA... 木薯是重要的热带作物,具有高淀粉积累等特点,但其高效积累机制尚不明确。为研究腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)大亚基对木薯淀粉积累的调控作用,本研究通过RT-PCR技术对木薯AGPase5个大亚基基因(MeAGPL1~MeAGPL5)进行筛选,发现MeAGPL3基因在木薯块根中高表达且受100μmol/L外源ABA正向调控;克隆了该基因2455 bp 5’侧翼序列,利用该序列及4个不同长度的5’端截短片段分别与β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因融合构建表达载体,转化本氏烟草,通过检测各转基因烟草GUS蛋白活性,发现-1至-1711 bp序列具有最佳的启动活性。利用100μmol/L外源ABA处理各转基因烟草株系,分析处理前后GUS蛋白活性变化,发现ABA信号响应元件分布于-1711至-2150区域。本研究为从转录调控角度阐释木薯淀粉高效积累机制提供理论支撑。 展开更多
关键词 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 MeAGPL3 启动子 5’端截短 GUS蛋白
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