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纳米磁流体介导的重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用 被引量：3
1
作者 彭健 曾杰 +4 位作者 刘美洲 邹芬 刘路 汤伟 周健 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期847-851,共5页
目的探讨纳米磁流体作为肝癌基因治疗载体的可行性及AFP增强子能否使外来基因在AFP阳性细胞内高表达。方法构建重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的宫颈癌细胞Hela。转染12h... 目的探讨纳米磁流体作为肝癌基因治疗载体的可行性及AFP增强子能否使外来基因在AFP阳性细胞内高表达。方法构建重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的宫颈癌细胞Hela。转染12h后,于荧光显微镜下动态观察;48h后,RT-PCR和Westernblot分析HepG2细胞中hTNFα基因的表达情况,用MTT法检测HepG2细胞的存活,用流式细胞分析HepG2细胞的凋亡。结果纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα转入HepG2细胞,并且其转染效率高于脂质体;RT-PCR及Westernblot证明转染的HepG2细胞有hTNFα基因的表达;MTT及流式细胞分析说明hTNFα基因发挥杀伤细胞作用。结论纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα转染HepG2细胞并获得表达,可作为肝癌基因治疗的基因载体。采用AFP增强子可使目的基因在HepG2细胞中定向而特异性表达。 展开更多
关键词 纳米磁流体 afp增强子 hTNFα基因 肝癌 基因治疗
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反义AFP增强子/TK基因重组逆转录病毒载体的构建及在肝癌细胞中的专一性表达 被引量：2
2
作者 茅幼霞 陈迟 徐卫国 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期851-854,860,共5页
目的构建在肝癌细胞中特异性高表达的重组逆转录病毒载体,观察其对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响。方法应用DNA重组技术将α-甲胎蛋白増强子(AFE)核心区DNA与单纯性疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因融合,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,重组... 目的构建在肝癌细胞中特异性高表达的重组逆转录病毒载体,观察其对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响。方法应用DNA重组技术将α-甲胎蛋白増强子(AFE)核心区DNA与单纯性疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因融合,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,重组体命名为pL/TK/AFE/SN;经PA317细胞包装、G418筛选、病毒滴度测定,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩增培养,收获病毒上清,感染体外培养的Hap3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞。用Southernblot、Northernblot检测转染细胞的DNA、mRNA,以羟甲基无环鸟苷(GCV)对细胞的杀伤毒性检测外源基因在转染细胞中的表达。结果酶切及Southernblot证实插入pL/TK/AFE/SN的反义AFE/TK基因大小、方向及克隆位点正确。达到一定的产病毒滴度。Northernblot分析显示Hep3B肝癌细胞有TK基因mRNA水平表达;应用GCV后,导入反义AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论成功构建了含反义AFE/TK基因的重组逆转录病毒载体并包装出具有感染能力的假型逆转录病毒;重组载体所含的反义AFP増强子能调控外源性TK基因特异地在Hep3B肝癌细胞中高表达。 展开更多
关键词 afp增强子 逆转录病毒载体 肝癌细胞
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肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用
3
作者 傅强 王慧萍 +4 位作者 韦芳 李慧明 陈霞芳 王煜非 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期113-119,共7页
目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强... 目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。 展开更多
关键词 肝肿瘤 条件复制型腺病毒载体 HSV-1TK基因 甲胎蛋白基因启动子 甲胎蛋白基因增强子 病毒-基因治疗
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PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体-TK对肝癌细胞HepG2凋亡的影响
4
作者 吴凯 张阳德 +1 位作者 罗勇 彭健 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期661-664,共4页
目的:探讨PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:构建重组质粒PEGFP-AFP-TK并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的肝癌细胞SMMC7721。转染12h后,于荧光显微镜下动态观察;48h后,RT... 目的:探讨PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:构建重组质粒PEGFP-AFP-TK并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的肝癌细胞SMMC7721。转染12h后,于荧光显微镜下动态观察;48h后,RT-PCR和Western blot分析HepG2细胞中HSV-TK基因的表达情况,用MTT法检测HepG2细胞的存活,用流式细胞分析HepG2细胞的凋亡。结果:纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-TK转入HepG2细胞,并且其转染效率高于脂质体;RT-PCR及Western blot证明转染的HepG2细胞有HSV-TK基因的表达;MTT及流式细胞分析说明HSV-TK基因发挥杀伤细胞作用。结论:纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达,PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK可显著抑制HepG2细胞增殖,可望成为肝癌基因治疗的新型生物制剂之一。 展开更多
关键词 纳米磁流体 afp增强子 TK基因 肝癌 基因治疗
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人IL-2/IFNα2b融合基因在肝癌细胞中靶向表达 被引量：6
5
作者 贺平 汤钊猷 +1 位作者 刘彬彬 叶胜龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期636-641,共6页
根据细胞因子之间协同作用的特点，采用重组 Ｄ Ｎ Ａ 技术设计并构建了人 Ｉ Ｌ２ 与 Ｉ Ｆ Ｎα融合基因，并用肝癌组织特异的 Ａ Ｆ Ｐ增强子／ Ａ Ｌ Ｂ启动子调控融合基因在肝癌细胞中的靶向表达．实验结果表明，克隆的 Ｅ ... 根据细胞因子之间协同作用的特点，采用重组 Ｄ Ｎ Ａ 技术设计并构建了人 Ｉ Ｌ２ 与 Ｉ Ｆ Ｎα融合基因，并用肝癌组织特异的 Ａ Ｆ Ｐ增强子／ Ａ Ｌ Ｂ启动子调控融合基因在肝癌细胞中的靶向表达．实验结果表明，克隆的 Ｅ Ａ Ｆ Ｐ Ｐ Ａ Ｌ Ｂ联合转录调控序列能调控细胞因子基因在 Ａ Ｆ Ｐ阳性人肝癌细胞中靶向表达， Ｉ Ｌ２／ Ｉ Ｆ Ｎα２ｂ 融合基因的表达水平与感染肝癌细胞的 Ａ Ｆ Ｐ表达水平呈正相关性．实验证明表达的融合蛋白具有 Ｉ Ｌ２ 和 Ｉ Ｆ Ｎ 两种生物学活性的细胞因子．这可能为肝癌基因治疗开辟新途径． 展开更多
关键词 IFNΑ 融合基因 afp增强子 肝癌 血细胞介素2
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AFP增强型四元复合体介导N-ras反义RNA抑制HepG2.2.15细胞成瘤性的研究 被引量：1
6
作者 梁晓红 孙汶生 +7 位作者 马春红 孔建平 马亚斌 曹英林 刘素侠 高立芬 王晓燕 郭春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期311-314,共4页
目的　观察AFP增强型四元复合体介导的N ras反义RNA转移系统对HBV转基因肝癌细胞系HepG2 .2 .15致瘤性的体内外抑制作用。方法　构建含有N ras反义RNA的AFP增强型四元复合体 ,体外瞬时转染HBV转基因HepG2 .2 .15细胞 ,流式细胞术检测转... 目的　观察AFP增强型四元复合体介导的N ras反义RNA转移系统对HBV转基因肝癌细胞系HepG2 .2 .15致瘤性的体内外抑制作用。方法　构建含有N ras反义RNA的AFP增强型四元复合体 ,体外瞬时转染HBV转基因HepG2 .2 .15细胞 ,流式细胞术检测转染前后N ras蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞周期的变化 ,同时建立稳定表达N ras反义RNA的肝癌细胞系HepG2 .2 .15 /as ras,绘制转染前后生长曲线。体内抑瘤试验分别以HepG2 .2 .15或HepG2 .2 .15 /as ras细胞制备荷瘤裸鼠模型 ,比较二者成瘤率。HepG2 .2 .15成瘤组局部瘤内注射N ras反义RNA四元复合体 ,研究其对肿瘤的抑制作用。结果　AFP增强型四元复合体介导N ras反义RNA体外瞬时转染HepG2 .2 .15细胞可显著降低胞内N ras蛋白的表达水平 (P <0 .0 5 ) ,使细胞生长停滞于G0 /G1期 ,且可诱导细胞凋亡。体内抑瘤实验显示 ,HepG2 .2 .15 /as ras细胞注射组成瘤率 ( 4 0 % )显著低于HepG2 .2 .15细胞注射组( 10 0 % )。瘤内注射N ras反义RNA四元复合体可使肿瘤体积明显缩小。结论　AFP增强型四元复合体介导的N ras反义RNA转移系统可降低HBV转基因肝癌细胞HepG2 .2 .15N ras蛋白的表达水平 ,逆转其恶性行为 。 展开更多
关键词 肝细胞癌 N-RAS基因 反义RNA afp增强型四元复合体 肿瘤抑制 流式细胞术 基因治疗
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