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可分泌表达Aβ阻断肽融合基因原核表达载体的构建
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作者 杨宇 杨欣 +2 位作者 孙欣 吴昊 吴江 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2609-2612,共4页
目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的A... 目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的ABAD-DP和HA2-TAT的cDNA,将其连接到NT3的信号肽3′端,组成融合基因NT3-ABAD-DP-HA2-TAT(NAHT),再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV220,构建原核表达载体pBV220/NAHT。结果经DNA测序证实成功克隆ABAD-DP和HA2-TATcDNA;经限制性内切酶酶切证实成功将ABAD-DP和HA2-TAT基因重组到NT3信号肽的3′端,并将融合基因亚克隆于pBV220载体内。结论成功构建了表达NT3信号肽、阻断肽ABAD-DP、融源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT。 展开更多
关键词 神经营养素3 abad-dp 基因治疗 原核表达载体
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分泌表达Aβ阻断肽的重组腺相关病毒的构建
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作者 王明宇 杨宇 +4 位作者 吴江 王旭 车丽赫 孙欣 杨弋 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期292-296,共5页
目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方... 目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方法检测重组病毒在Hela细胞中的表达。应用免疫荧光技术检测重组病毒与Aβ42在Hela细胞中的结合作用。结果 pGEM-T Easy/ABAD-DP经EcoR I酶切后,可以得到96bp的目的片段,ABAD-DP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;重组质粒pSSGH/NTA经EcoRⅠ与BamHⅠ联合酶切,可以得到384bp的目的片段;成功获得滴度为3.01×109PFU/ml的重组病毒;含有6×His标签的重组病毒在Hela细胞中实现表达;通过免疫荧光技术,可以分别观察到重组病毒组、Aβ42组和重组病毒+Aβ42组的绿色、红色和黄色荧光。结论成功获得能够稳定表达ABAD-DP并能够在细胞内与Aβ42结合的重组腺相关病毒,为阿尔茨海默病的治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 abad阻断肽 基因克隆 病毒包装 表达研究
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