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可分泌表达Aβ阻断肽融合基因原核表达载体的构建
1
作者
杨宇
杨欣
+2 位作者
孙欣
吴昊
吴江
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第18期2609-2612,共4页
目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的A...
目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的ABAD-DP和HA2-TAT的cDNA,将其连接到NT3的信号肽3′端,组成融合基因NT3-ABAD-DP-HA2-TAT(NAHT),再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV220,构建原核表达载体pBV220/NAHT。结果经DNA测序证实成功克隆ABAD-DP和HA2-TATcDNA;经限制性内切酶酶切证实成功将ABAD-DP和HA2-TAT基因重组到NT3信号肽的3′端,并将融合基因亚克隆于pBV220载体内。结论成功构建了表达NT3信号肽、阻断肽ABAD-DP、融源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT。
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关键词
神经营养素3
abad
-
dp
基因治疗
原核表达载体
下载PDF
职称材料
分泌表达Aβ阻断肽的重组腺相关病毒的构建
2
作者
王明宇
杨宇
+4 位作者
吴江
王旭
车丽赫
孙欣
杨弋
《中风与神经疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期292-296,共5页
目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方...
目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方法检测重组病毒在Hela细胞中的表达。应用免疫荧光技术检测重组病毒与Aβ42在Hela细胞中的结合作用。结果 pGEM-T Easy/ABAD-DP经EcoR I酶切后,可以得到96bp的目的片段,ABAD-DP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;重组质粒pSSGH/NTA经EcoRⅠ与BamHⅠ联合酶切,可以得到384bp的目的片段;成功获得滴度为3.01×109PFU/ml的重组病毒;含有6×His标签的重组病毒在Hela细胞中实现表达;通过免疫荧光技术,可以分别观察到重组病毒组、Aβ42组和重组病毒+Aβ42组的绿色、红色和黄色荧光。结论成功获得能够稳定表达ABAD-DP并能够在细胞内与Aβ42结合的重组腺相关病毒,为阿尔茨海默病的治疗提供新的思路。
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关键词
abad
阻断肽
基因克隆
病毒包装
表达研究
下载PDF
职称材料
题名
可分泌表达Aβ阻断肽融合基因原核表达载体的构建
1
作者
杨宇
杨欣
孙欣
吴昊
吴江
机构
吉林大学第一医院神经内科
上海交通大学瑞金医院神经内科
吉林大学第一医院肾病科
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第18期2609-2612,共4页
基金
国家自然科学基金资助课题(30872721)
国家自然科学青年基金资助课题(30801211)
+1 种基金
高等学校博士学科点专项科研基金新教师基金资助课题(200801831073)
吉林大学研究生创新研究计划(20101034)
文摘
目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的ABAD-DP和HA2-TAT的cDNA,将其连接到NT3的信号肽3′端,组成融合基因NT3-ABAD-DP-HA2-TAT(NAHT),再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV220,构建原核表达载体pBV220/NAHT。结果经DNA测序证实成功克隆ABAD-DP和HA2-TATcDNA;经限制性内切酶酶切证实成功将ABAD-DP和HA2-TAT基因重组到NT3信号肽的3′端,并将融合基因亚克隆于pBV220载体内。结论成功构建了表达NT3信号肽、阻断肽ABAD-DP、融源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT。
关键词
神经营养素3
abad
-
dp
基因治疗
原核表达载体
Keywords
NT3
abad
-
dp
Gene therapy
Prokaryotic expression vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
分泌表达Aβ阻断肽的重组腺相关病毒的构建
2
作者
王明宇
杨宇
吴江
王旭
车丽赫
孙欣
杨弋
机构
吉林大学白求恩第一医院神经内科
出处
《中风与神经疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期292-296,共5页
基金
国家自然科学青年基金(30800338)
文摘
目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方法检测重组病毒在Hela细胞中的表达。应用免疫荧光技术检测重组病毒与Aβ42在Hela细胞中的结合作用。结果 pGEM-T Easy/ABAD-DP经EcoR I酶切后,可以得到96bp的目的片段,ABAD-DP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;重组质粒pSSGH/NTA经EcoRⅠ与BamHⅠ联合酶切,可以得到384bp的目的片段;成功获得滴度为3.01×109PFU/ml的重组病毒;含有6×His标签的重组病毒在Hela细胞中实现表达;通过免疫荧光技术,可以分别观察到重组病毒组、Aβ42组和重组病毒+Aβ42组的绿色、红色和黄色荧光。结论成功获得能够稳定表达ABAD-DP并能够在细胞内与Aβ42结合的重组腺相关病毒,为阿尔茨海默病的治疗提供新的思路。
关键词
abad
阻断肽
基因克隆
病毒包装
表达研究
Keywords
abad
-
dp
Genes cloning
Virus packing
Secreted express
分类号
R743 [医药卫生—神经病学与精神病学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可分泌表达Aβ阻断肽融合基因原核表达载体的构建
杨宇
杨欣
孙欣
吴昊
吴江
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
下载PDF
职称材料
2
分泌表达Aβ阻断肽的重组腺相关病毒的构建
王明宇
杨宇
吴江
王旭
车丽赫
孙欣
杨弋
《中风与神经疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
已选择
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