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红景天苷对3T3-L1脂肪细胞糖代谢及细胞分化的影响 被引量:29
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作者 王树海 王文健 +1 位作者 汪雪峰 陈伟华 《中西医结合学报》 CAS 2004年第3期193-195,共3页
目的 :观察红景天苷对脂肪细胞糖代谢和细胞分化的影响 ,分析其改善糖代谢的可能机制。方法 :检测红景天苷干预的脂肪细胞对 3 H 葡萄糖的摄取 ,对红景天苷干预分化的细胞进行油红O染色后通过比色法分析脂肪细胞分化程度。逆转录多聚酶... 目的 :观察红景天苷对脂肪细胞糖代谢和细胞分化的影响 ,分析其改善糖代谢的可能机制。方法 :检测红景天苷干预的脂肪细胞对 3 H 葡萄糖的摄取 ,对红景天苷干预分化的细胞进行油红O染色后通过比色法分析脂肪细胞分化程度。逆转录多聚酶联反应 (RT PCR)检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体 γ(PPAR γ)、CAAT/增强子结合蛋白 α(C/EBP α)mRNA的表达。结果 :红景天苷组葡萄糖摄取率为 110 .4 % ,明显高于正常对照组 (P <0 .0 1) ;红景天苷明显抑制细胞分化及PPAR γ、C/EBP αmRNA表达 ,与对照组比较 ,P <0 .0 1。结论 :红景天苷促进3 H 葡萄糖摄取 ,可抑制脂肪细胞分化 ,下调分化相关基因的表达。 展开更多
关键词 红景天苷 3T3-L1 脂肪细胞 糖代谢 细胞分化 肥胖 胰岛素抵抗
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干扰素对小鼠α2(Ⅰ)型胶原基因启动子活性的影响 被引量:9
2
作者 高春芳 王皓 孔宪涛第二军医大学附属长征医院临床免疫中心 《华人消化杂志》 1998年第3期201-203,共3页
目的讨论干扰素的抗胶原蛋白合成作用的机制.方法以含小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游04kb,08kb,20kb启动片段为研究靶序列,应用CAT作报告基因,结合基因转染技术讨论IFNα,IFNγ对胶原基因的启动抑制活性... 目的讨论干扰素的抗胶原蛋白合成作用的机制.方法以含小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游04kb,08kb,20kb启动片段为研究靶序列,应用CAT作报告基因,结合基因转染技术讨论IFNα,IFNγ对胶原基因的启动抑制活性.结果IFNα,IFNγ单独应用对小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游不同长短启动序列转录活性无阻断作用,但IFNα,IFNγ与TNFα联合应用则具有较强的抑制活性.结论IFNα,IFNγ的抗纤维化活性与其对小鼠α2(Ⅰ)胶原-2kb~+54bp启动活性的作用无直接相关,但IFNα,IFNγ可协助TNFα的抑制活性. 展开更多
关键词 干扰素 药理学 纤维变性 3T3细胞
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3T3细胞中性红光毒性试验方法的建立与验证 被引量:6
3
作者 涂宏刚 黄鹏程 +1 位作者 欧红梅 常艳 《世界临床药物》 CAS 2015年第8期525-528,共4页
目的采用Balb/c小鼠成纤维细胞3T3建立新药体外3T3细胞中性红光毒性试验方法,并验证该方法的可靠性。方法利用盐酸氯丙嗪作为阳性药物,建立体外3T3细胞中性红光毒性试验方法 ;然后基于上述试验方法检测6个已知光毒性物质的光毒性,对方... 目的采用Balb/c小鼠成纤维细胞3T3建立新药体外3T3细胞中性红光毒性试验方法,并验证该方法的可靠性。方法利用盐酸氯丙嗪作为阳性药物,建立体外3T3细胞中性红光毒性试验方法 ;然后基于上述试验方法检测6个已知光毒性物质的光毒性,对方法的灵敏度和特异性进行验证。结果在本试验条件下,盐酸胺碘酮、诺氟沙星、蒽和原卟啉均表现出潜在光毒性;而六氯酚和L-组氨酸均无光毒性,试验结果与相关文献报道一致。结论在本试验条件下,本研究成功建立并验证了体外3T3细胞中性红光毒性试验方法,可用于新药的光毒性评价。 展开更多
关键词 3T3细胞 光毒性 试验方法
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重组白细胞介素13促进成纤维细胞增殖及胶原合成 被引量:5
4
作者 肖莉 敖然 +2 位作者 李振华 侯显明 于润江 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1579-1583,共5页
目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对3T3细胞的作用,探讨肺纤维化的发生机制。方法:3T3细胞分为实验组和对照组,分别加入rIL-13(80μg/L)及DMEM培养液,作用24h、48h,利用透射电镜观察成纤维细胞的超微结构,用Hoechst试剂盒观察细胞DNA... 目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对3T3细胞的作用,探讨肺纤维化的发生机制。方法:3T3细胞分为实验组和对照组,分别加入rIL-13(80μg/L)及DMEM培养液,作用24h、48h,利用透射电镜观察成纤维细胞的超微结构,用Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态;用MTT法测细胞增殖率,用Western blotting检测成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原以及用放免法检测细胞上清中IL-6、IL-8水平。结果:实验组细胞DNA合成增加,细胞核增大,细胞质中可见较多核糖体及线粒体;rIL-13呈剂量依赖方式刺激成纤维细胞增殖,当rIL-13浓度在40-160μg/L时,细胞增殖率几乎呈直线式增长。对照组及实验组均可检测到Ⅰ型胶原(CoⅠ),对照组分泌胶原的量显著高于对照组(P<0·01)。细胞培养上清中,实验组IL-6、IL-8含量显著高于对照组(P<0·01)。结论:rIL-13通过促进成纤维细胞增殖及分泌炎性介质和Ⅰ型胶原,可能在肺纤维化的发病机制中发挥关键作用。 展开更多
关键词 白细胞介素13 3T3细胞 胶原Ⅰ型 白细胞介素6 白细胞介素8
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APA-3T3细胞微囊的深低温保存 被引量:5
5
作者 田磊 高宇红 +2 位作者 李雁凌 崔忻 薛毅珑 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第3期225-227,共3页
目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜... 目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。 展开更多
关键词 3T3细胞 微囊化细胞 低温保存
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Piwil2基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化 被引量:4
6
作者 李跃波 冯定庆 +1 位作者 凌斌 程敏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期467-471,共5页
目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细... 目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细胞周期分析和裸鼠成瘤实验,观察Piwil2基因表达对NIH3T3细胞的生物学特性的影响。结果建立了稳定过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株。与对照组空白载体细胞系相比,过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞增殖和集落形成能力增强;细胞周期G0/G1期减少、S期明显升高;接种裸鼠后形成的肿瘤体积显著大于对照组。结论 Piwil2基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。 展开更多
关键词 Piwil2基因 基因表达 3T3细胞
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兔口腔黏膜细胞与灭活的3T3成纤维细胞的体外共培养 被引量:3
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作者 李超 徐月敏 +2 位作者 宋鲁杰 崔磊 尹烁 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1297-1300,共4页
目的探讨口腔黏膜细胞的培养方法,为进一步以口腔黏膜细胞为种子细胞构建组织工程化尿道提供实验依据。方法体外分离口腔黏膜细胞,取部分细胞与经丝裂霉素灭活的3T3成纤维细胞进行共培养(共培养组),定期观察细胞形态变化及生长增殖情... 目的探讨口腔黏膜细胞的培养方法,为进一步以口腔黏膜细胞为种子细胞构建组织工程化尿道提供实验依据。方法体外分离口腔黏膜细胞,取部分细胞与经丝裂霉素灭活的3T3成纤维细胞进行共培养(共培养组),定期观察细胞形态变化及生长增殖情况。以非共培养的口腔黏膜细胞作为对照(非共培养组)。同时,对体外培养获得的口腔黏膜细胞进行广谱角蛋白抗体(AE1/AE3)和K19免疫荧光染色鉴定;流式细胞仪检测第2代共培养组细胞的AE1/AE3阳性细胞百分比。结果共培养组口腔黏膜细胞,呈现典型的"铺路石"状,细胞形态均一,可传代至7-8代。非共培养组口腔黏膜细胞则形态多样,传至第2代时,即开始出现老化,细胞贴壁及增殖能力均明显减弱。免疫荧光染色显示,体外培养获得的口腔黏膜细胞AE1/AE3免疫荧光染色阳性,40%细胞K19染色阳性。流式细胞仪检测结果表明,第2代共培养组口腔黏膜细胞AE1/AE3阳性细胞百分比〉95%。结论口腔黏膜细胞在有灭活的3T3成纤维细胞存在时可成功培养和扩增,为进一步将其作为种子细胞构建组织工程化尿道奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 口腔黏膜细胞 3T3细胞 尿道 组织工程 中文摘要
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Ca^(2+)在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用
8
作者 王振岳 吴永恒 +1 位作者 邓永键 周一平 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第4期316-318,共3页
目的 了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响。方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率。 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间... 目的 了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响。方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率。 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异。 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导。UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+。 展开更多
关键词 成纤维细胞 细胞凋亡 钙离子 紫外线
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细菌纤维素的合成及其发酵培养改性 被引量:2
9
作者 苏文萍 王淑芳 +5 位作者 曹名锋 孙秀梅 李保宾 解慧 王利华 宋存江 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期50-56,共7页
分离到一株产细菌纤维素(Bacterial Cellulose,BC)的细菌,通过菌体形态、16S rRNA基因序列同源性分析鉴定,该菌株为葡糖醋杆菌,命名为Gluconacetobactersp.SC-01.通过正交试验确定最佳培养基配方为4%甘露醇、1%玉米浆干粉、0.27%Na2HPO4... 分离到一株产细菌纤维素(Bacterial Cellulose,BC)的细菌,通过菌体形态、16S rRNA基因序列同源性分析鉴定,该菌株为葡糖醋杆菌,命名为Gluconacetobactersp.SC-01.通过正交试验确定最佳培养基配方为4%甘露醇、1%玉米浆干粉、0.27%Na2HPO4、0.115%柠檬酸和0.025%MgSO4(pH4.0).热失重分析表明,BC热失重速率最快时的温度为365℃.将海藻酸钠(sodium alginate ALG)、羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose CMC)、聚谷氨酸(polyglutamic acid PGA)、壳聚糖(chitosan CS)、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol PVA)分别加入到发酵生产BC培养基中进行BC的发酵法合成,结果发现除CS外,ALG,CMC,PGA或PVA的加入均可提高BC的产量(最高产量达5.5g/L)和含水量(最高含水率达99.5%).选取未改性的BC及添加了0.5%ALG、1%PGA、1.5%CMC的改性BC作为培养3T3细胞的基质材料,实验结果表明,添加了0.5%ALG的改性BC最适于3T3细胞生长,因而具有更好的生物相容性. 展开更多
关键词 细菌纤维素(BC) 葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter sp.) 改性 3T3细胞
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人生长激素基因逆转录病毒载体的构建及其对3T3和ES细胞的转化与表达
10
作者 曾祎青 吴鹤龄 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1995年第1期12-21,共10页
为了研究生长激素基因在异源细胞中的表达,构建了携带人生长激素基因(hGH)的逆转录病毒载体pINS-GH,并将其导入小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞(ES细胞)CCE中。pINS-GH转化3T3细胞,获得了高效表... 为了研究生长激素基因在异源细胞中的表达,构建了携带人生长激素基因(hGH)的逆转录病毒载体pINS-GH,并将其导入小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞(ES细胞)CCE中。pINS-GH转化3T3细胞,获得了高效表达的克隆,即用放射免疫法检测到克隆培养基中有大量的人生长激素蛋白富积,如GHSNC20,富积率高达3784ng/ml,而且外源基因的整合很稳定。不同的3T3转化克隆的表达率有显著的差异,Southern杂交的结果表明,这种差异与外源基因整合的拷贝数无关。pINS-GH转化CCE细胞没有获得明显表达的克隆,而且外源基因的整合也不稳定。转化的ES细胞克隆总DNA的Southern杂交结果表明,hGH基因的确整合到细胞基因组中。目前尚未发现明显的外源DNA重排的迹象。 展开更多
关键词 生长激素基因 逆转录病毒 载体 3T3细胞 ES细胞
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五味子宁神口服液抗紫外辐射作用研究 被引量:1
11
作者 饶曼妮 常翠 +3 位作者 赵奎 陈秋玲 杨宁 付学军 《中国药师》 CAS 2014年第7期1086-1088,共3页
目的:研究五味子宁神口服液对3T3细胞紫外辐射损伤的保护作用。方法:建立3T3细胞紫外辐射模型,采用流式细胞术检测高、中、低剂量组(12.5,25.0,50.0 mg·ml-1)五味子宁神口服液作用前后细胞内活性氧浓度的变化,检测胞质匀浆中的超... 目的:研究五味子宁神口服液对3T3细胞紫外辐射损伤的保护作用。方法:建立3T3细胞紫外辐射模型,采用流式细胞术检测高、中、低剂量组(12.5,25.0,50.0 mg·ml-1)五味子宁神口服液作用前后细胞内活性氧浓度的变化,检测胞质匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量变化。结果:与中波紫外线辐射组(UVB组)比较,高、中、低剂量组五味子宁神口服液的活性氧含量和MDA含量显著降低(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.01或0.05)。结论:五味子宁神口服液能提高SOD、CAT、GSH-Px等酶活性,降低活性氧和MDA含量,对UVB辐射造成的细胞损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 五味子宁神口服液 紫外辐射 3T3细胞
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受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用 被引量:1
12
作者 李孟森 李平风 +2 位作者 贺师鹏 杜国光 李刚 《海南医学院学报》 CAS 2003年第2期72-77,共6页
目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察... 目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10~80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。 展开更多
关键词 受体介导 甲胎蛋白 NIH3T3细胞增殖 促进作用 肿瘤细胞增殖 新生细胞增殖
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人参皂甙Rg1对3T3细胞增殖作用的研究 被引量:1
13
作者 刘慧莲 《潍坊学院学报》 2007年第4期85-86,共2页
利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同浓度GRg1对3T3细胞增殖的影响。发现GRg1在适当浓度范围内可以促进3T3细胞的增殖,为进一步探讨GRg1的药理作用及对胚胎发育的作用机理提供一些研究基础。
关键词 人参皂甙RG1 3T3细胞 细胞增殖
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体外3T3细胞中性红摄取试验评价复方茜草增色液的光毒性作用
14
作者 贾海燕 邱海莹 +2 位作者 李晓旭 韦娜 吴燕 《解放军药学学报》 CAS 2022年第1期38-40,74,共4页
目的复方茜草增色液是根据我院临床经验方制备的搽剂,对治疗白癜风有很好的疗效,本研究采用体外BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验,评价复方茜草增色液是否具有光毒性。方法通过对比BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验中阳性对照(盐酸氯丙嗪)与... 目的复方茜草增色液是根据我院临床经验方制备的搽剂,对治疗白癜风有很好的疗效,本研究采用体外BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验,评价复方茜草增色液是否具有光毒性。方法通过对比BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验中阳性对照(盐酸氯丙嗪)与受试样品在有光照及无光照两种条件下的细胞活性、IC_(50)值、光刺激因子(PIF)和平均光效应(MPE),对样品产生光毒性的情况进行预测。结果阳性对照盐酸氯丙嗪出现明显的光毒性反应,而复方茜草增色液在有光照及无光照条件下,其PIF值均为*1,MPE值为-0.088<0.1,光毒性反应为阴性。结论表明复方茜草增色液在本试验条件下对BALB/c 3T3细胞无光毒性产生,安全性良好。 展开更多
关键词 复方茜草增色液 光毒性 3T3细胞
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重组人表皮生长因子生物活性检测方法的建立及与其他显色方法的比较 被引量:1
15
作者 于雷 史新昌 +3 位作者 刘兰 李响 裴德宁 饶春明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期985-989,共5页
目的建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较。方法参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rh EGF生物学活性的检测... 目的建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较。方法参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rh EGF生物学活性的检测方法,去除细胞饥饿的步骤,并用10%SDS代替DMSO,同时对培养3T3细胞的PRIM1640培养液的胎牛血清浓度(0、2%、5%、10%)进行优化。采用优化方法及药典方法同时检测rh EGF标准品,对灵敏度、信噪比、线性及孔间变异度进行比较。分别采用优化方法、MTS显色法、CCK-8显色法、结晶紫显色法、Cell Titer-Glo显色法检测同批rh EGF供试品,比较各方法的检测结果。结果优化方法的灵敏度(半数有效浓度为2.84 IU/m L)、信噪比(1.40)、线性(R2>0.99)和孔间变异度(95%可信区间为1.576%~3.334%)均优于药典方法,且实验周期由6 d缩短为5 d。5种显色方法对rh EGF供试品的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),CCK-8显色法检测结果的变异系数(CV)最小(16.8%),结晶紫显色法的CV值最大(23.3%)。结论优化方法更适用于rh EGF制品的常规生物学活性检测,且与其他4种显色方法等效。 展开更多
关键词 重组人表皮生长因子 生物学活性测定 3T3细胞 显色方法
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Hep G2培养条件的摸索及其与CHL、3T3细胞代谢能力的比较
16
作者 李欣 熊习昆 +2 位作者 张文改 王京滨 陈秀娟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第8期1384-1386,1399,共4页
目的:以MTT试验方法计算环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件。方法:用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血... 目的:以MTT试验方法计算环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件。方法:用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血清的培养液配制染毒液,按10.0、7.21、5.19、3.73、2.69、1.93、1.39、1.00 mg/ml浓度对CHL、3T3细胞和以不同培养液培养的Hep G2细胞染毒,在24 h时间点以MTT方法对细胞存活情况进行分析,计算LC50,比较各种细胞和不同培养条件下Hep G2细胞对CP的代谢活化水平,并观察不同培养条件下Hep G2细胞的生长状态。结果:MTT试验结果表明Hep G2细胞对CP的代谢能力最强,CHL细胞次之,而3T3细胞对CP的代谢能力最弱;3种不同培养液培养的Hep G2细胞无论染毒液是含血清的还是不含血清的均观察到CP对细胞的LC50:MEM>DMEM>RPMI 1640,Hep G2细胞在DMEM、RPMI 1640两种培养液中生长状态均良好,尤其是RPMI 1640培养的Hep G2细胞,在无血清的染毒液培养下既能获得较多的细胞又能表现出较强的代谢CP的能力。结论:Hep G2细胞对CP的代谢活化能力较CHL和3T3细胞强,以RPMI 1640培养的Hep G2细胞生长状态良好且较DMEM和MEM培养的细胞表现出更强的代谢活化CP的能力,能获得较理想的培养和试验结果。 展开更多
关键词 HEP G2细胞 CHL细胞 3T3细胞 环磷酰胺
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3T3细胞受照后微核及双核细胞的形成与细胞存活率的氧效应
17
作者 张鹏 郑秀龙 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期145-149,共5页
本文观察和比较了有氧及乏氧条件下,经^(60)Coγ线照射后3T3细胞微核及双核细胞的形成及其与细胞存活率之间的关系。结果表明,在一定剂量范围内,有氧及乏氧照后,3T3细胞的微核率、微核细胞百分率及双核细胞百分率均与照射剂量呈线性关... 本文观察和比较了有氧及乏氧条件下,经^(60)Coγ线照射后3T3细胞微核及双核细胞的形成及其与细胞存活率之间的关系。结果表明,在一定剂量范围内,有氧及乏氧照后,3T3细胞的微核率、微核细胞百分率及双核细胞百分率均与照射剂量呈线性关系。微核率、微核细胞百分率、双核细胞百分率及细胞存活率的氧增比分别为:2.02、1.96、1.87、及1.83。微核细胞百分率、双核细胞百分率及微核细胞与双核细胞之和的百分率均与细胞活存率之间有较好的相关性。本文还就3T3细胞辐射反应中的氧效应机制及微核及双核细胞形成的意义作了讨论。 展开更多
关键词 3T3细胞 微核 双核细胞 氧效应
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The Fate of Ochoa’s School in the Origins of Oncogenetics in US (I)
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作者 Enrique Wulff-Barreiro 《Open Journal of Genetics》 2014年第5期392-406,共15页
It was in the early eighties that a genuine school of spanish biochemists around Severo Ochoa participated in the oncogene races. Malignant cell transformation and oncogenes were put in relation during that era. Sever... It was in the early eighties that a genuine school of spanish biochemists around Severo Ochoa participated in the oncogene races. Malignant cell transformation and oncogenes were put in relation during that era. Several prominent scientists coming from Spain have established and maintained a strong tradition of studies in the enzymology of retroviruses and transcriptional events. In this short historical account, we briefly pay tribute to these famous forerunners, by emphasizing both the originality and quality of their work, as well as the many accompanying conceptual and methodological analysis. We start with àngel Pellicer (1948-) who, amongst other contributions, first established the landmark experimental transfection protocol and nucleated the onset of oncogenetics with his discovery that ras oncogenes were activated by mitogenic factors. Whereas Manuel Perucho (1948-) can be considered as one of the pioneers, if not the founder, of the cloning of human oncogene, through his experiments on H-ras, and he became a milestone in diagnostic detection to allow hospital technicians to screen for mutant ras genes. More known Mariano Barbacid (1949-) established that ras oncogene was a kind of common denominator for cancer, and clarified that their functional differences were by a single point mutation. In conclusion, this history demonstrates how eager spanish biochemists trained by Eladio Vi&#241uela were to maintain the tradition of Severo Ochoa’s long-standing scientific reputation in the US. 展开更多
关键词 NEOPLASM Molecular CLONING GAMMA-RAYS Point MUTATION ONCOGENES 3T3 cells
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p16真核表达载体的构建及其稳定表达的NIH3T3细胞株的建立
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作者 张守纯 王太一 +1 位作者 于业辉 李华 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期23-26,共4页
目的 构建pCR○R3 1 p16真核表达质粒 ,并建立其稳定表达的NIH3T3细胞株。方法 将人的p16cDNA亚克隆至pCR○R3 1,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌 ,筛选阳性克隆 ,进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定及DNA测序 ,将已鉴定的pCR○R3 1 ... 目的 构建pCR○R3 1 p16真核表达质粒 ,并建立其稳定表达的NIH3T3细胞株。方法 将人的p16cDNA亚克隆至pCR○R3 1,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌 ,筛选阳性克隆 ,进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定及DNA测序 ,将已鉴定的pCR○R3 1 p16经脂质体介导转染至NIH3T3细胞中。结果 重组质粒双酶切后 ,出现约 80 0bp片段 ,提示p16cDNA片断已插入pCR○R3 1多克隆位点内 ,DNA测序显示p16cDNA按照正确方向和阅读框插入表达载体pCR○R3 1。通过pCR○R3 1 p16转染NIH3T3细胞 ,获得 10个G4 18抗性克隆 ,其中 2个为RT PCR阳性。结论 成功构建pCR○R3 1 p16真核表达载体并建立了其稳定表达的NIH3T3细胞株。为建立p16转基因鼠奠定基础。 展开更多
关键词 P16基因 基因表达载体 NIH3T3细胞 抑癌基因 转基因小鼠模型
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VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能
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作者 贺俊 王慧明 姚航平 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第3期281-286,共6页
目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂... 目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入M C 3T 3-E 1细胞。细胞经G 418加压有限稀释筛选,采用EL ISA法、W estern b lot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV 304)的增殖活性影响。结果:通过基因测序表明获得的VEGF 165和VEGF 121与G eneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF 165/pcDNA 3.1(+)质粒和VEGF 121/pcDNA 3.1(+)质粒,EL ISA及W estern b lot检测结果均表明VEGF 165和VEGF 121基因转染M C 3T 3-E 1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV 304细胞生长。结论:基因转染的M C 3T 3-E 1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子类/代谢 血管内皮生长因子类/遗传 3T3细胞 基因表达 转染 质粒
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