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日本血吸虫32kDa蛋白质基因在真核表达载体中的亚克隆 被引量：4
1
作者 汪学龙 蒋作君 +1 位作者 沈际佳 姚涌 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期25-26,28,共3页
设计和合成特定寡核苷酸引物 ,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA ,RT—PCR法扩增日本血吸虫 32kDa蛋白质 (Sj32 )基因编码序列 ,将扩增产物连接pGEM—T克隆载体 ,再亚克隆到真核表达载体 pBKCMV中。结果 :RT—PCR法特异性扩增出Sj32编码基... 设计和合成特定寡核苷酸引物 ,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA ,RT—PCR法扩增日本血吸虫 32kDa蛋白质 (Sj32 )基因编码序列 ,将扩增产物连接pGEM—T克隆载体 ,再亚克隆到真核表达载体 pBKCMV中。结果 :RT—PCR法特异性扩增出Sj32编码基因片段 ,其大小约为1 2 70bp ,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM—Sj32和pBK—Sj32中含有目的基因。pBK—Sj32重组质粒的成功构建 ,为进一步表达Sj32及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 32kda蛋白质 基因克隆 真核表达载体
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日本血吸虫31/32KDa蛋白质基因扩增及克隆 被引量：4
2
作者 王维 汪学龙 +2 位作者 沈际佳 蒋作君 汤中圣 《疾病控制杂志》 2000年第4期302-306,共5页
目的　克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法　以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆... 目的　克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法　以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果　 RT- PCR扩增出一条约 12 70 bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出的条带大小相同。结论　日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质重组 p GEM- T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 31/32kda蛋白质 基因克隆
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裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达 被引量：16
3
作者 谢来平 石佑恩 +2 位作者 李传明 韩家俊 屈伸 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1997年第3期183-186,共4页
应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞... 应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 血吸虫病 裸露DNA疫苗 免疫
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日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究 被引量：32
4
作者 沈定文 李雍龙 +1 位作者 韩家俊 石佑恩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期241-243,共3页
本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且... 本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。 展开更多
关键词 血吸虫 分离 纯化 保护性免疫
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安神定志灵对ADHD模型大鼠前额叶、纹状体CDK5/DARPP32/PP1信号通路的影响 被引量：6
5
作者 孙继超 尤月 +3 位作者 周荣易 宋宇尘 雷爽 韩新民 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第17期81-86,共6页
目的:探讨中药复方安神定志灵对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型自发性高血压大鼠(SHR)前额叶、纹状体中细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)/32k Da多巴胺与环磷酸腺苷(c AMP)调节的磷蛋白(DARPP32)/蛋白磷酸酶1(PP1)信号通路的影响。方法:将5... 目的:探讨中药复方安神定志灵对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型自发性高血压大鼠(SHR)前额叶、纹状体中细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)/32k Da多巴胺与环磷酸腺苷(c AMP)调节的磷蛋白(DARPP32)/蛋白磷酸酶1(PP1)信号通路的影响。方法:将50只SHR大鼠运用随机区组设计分为模型组、利他林组(2 mg·kg-1)、安神定志灵低、中、高剂量(6.7,13.4,26.7 g·kg-1)组,每组10只,另设10只Wistar京都大鼠为正常组。各组ig相应药物,每日2次,治疗4周后取大鼠脑组织。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot),免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠前额叶和纹状体中CDK5,调节蛋白35(p35),DARPP32,PP1和c AMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白和mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠前额叶、纹状体中CDK5,p35及CREB的蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),PP1和DARPP32的表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。经治疗后,与模型组比较,利他林组、安神定志灵各剂量组前额叶、纹状体中CDK5,p35,CREB蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),PP1和DARPP32的表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:SHR大鼠行为表现与CDK5/DARPP32/PP1信号通路密切相关,安神定志灵可以通过调控该信号通路中相关因子的表达发挥治疗作用。 展开更多
关键词 安神定志灵 注意缺陷多动障碍 SHR大鼠 细胞周期素依赖性蛋白激酶5/32kda多巴胺与环磷酸腺苷调节的磷蛋白/蛋白磷酸酶1信号通路
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卡介苗D2株分泌蛋白基因植物表达载体的构建 被引量：3
6
作者 刘凤娟 俞守义 +7 位作者 聂军 陈清 朱丽 芮勇宇 李建栋 江晓玲 吴敏 李志锋 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1193-1195,共3页
目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。 方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过... 目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。 方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过单菌落PCR法、BamHⅠ、SacⅠ和HindⅢ单 /双酶切、DNA序列分析鉴定后 ,将fb pA基因亚克隆入植物表达载体 pBI 12 1,得到重组载体pBI 12 1-fbpA ,并转化根癌农杆菌株EHA10 5 ,用PCR法对其进行鉴定。结果　重组载体 pUCm -T -fbpA测序后证实fbpA基因由 10 4 1bp组成 ,包括 1个 10 14bp的开放阅读框。DNA序列上游由编码一段信号肽的 12 9bp组成 ,并对 32 -kDa蛋白的分泌起决定作用。相应的编码成熟蛋白的序列由 885个碱基组成。fbpA基因与来源于BCG1173P2株的同一基因序列完全一致。此外 ,构建的重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA成功转入根癌农杆菌株EHA10 5。结论　编码BCGD2株 32 -kDa分泌蛋白的fbpA基因分离成功 ,DNA序列分析证实fbpA基因在分枝杆菌中高度保守 ,为进一步深入分析fbpA基因以及研制抗结核病转基因植物疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 卡介苗 32-kda蛋白 tbpA 克隆 DNA序列分析 重组 植物表达载体
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