期刊文献+
共找到118篇文章
< 1 2 6 >
每页显示 20 50 100
鸭肝炎病毒基因组3′末端序列的克隆和分析 被引量:73
1
作者 丁春宇 张大丙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期312-319,共8页
用3′RACE和RT-PCR扩增并克隆鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)Ⅰ型毒株C80和Ⅰ型变异株E63的3′末端序列。分析结果显示,C80株和E63株基因组3′末端均包含1 359 nt的3D、终止密码子TGA、长314nt的3′UTR,而poly(A)尾分别含18... 用3′RACE和RT-PCR扩增并克隆鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)Ⅰ型毒株C80和Ⅰ型变异株E63的3′末端序列。分析结果显示,C80株和E63株基因组3′末端均包含1 359 nt的3D、终止密码子TGA、长314nt的3′UTR,而poly(A)尾分别含18个A和19个A。由2株DHV 3D核苷酸序列所推导的3D蛋白均含453个氨基酸,均包含KDELR、DxxxxD、GxxCSGxxxTxxxNS、YGDD和FLKR等小RNA病毒RNA聚合酶的特征基序,该结果进一步证实Ⅰ型DHV属于小RNA病毒科的成员。两株DHV与小RNA病毒科9个已知属之间3D蛋白的氨基酸序列同源性为16%-37%,介于属间3D蛋白的氨基酸序列同源性范围(18%-60%)之内;此外,Ⅰ型DHV的3′UTR在小RNA病毒科是最长的。用3D蛋白进行进化分析的结果表明,Ⅰ型DHV可能属于小RNA病毒科的一个独立的病毒属。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 3D基因 3′UTR POLY(A) 3race
下载PDF
中国对虾抗菌肽成熟肽的cDNA克隆 被引量:19
2
作者 康翠洁 王金星 +1 位作者 赵小凡 相建海 《山东大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期552-556,565,共6页
利用RT -PCR、嵌套PCR(NestedPCR)和 3′ -RACE等方法 ,从中国对虾血细胞中克隆到 1种抗菌肽基因片段 ,称为中国对虾肽 (Chp)基因 .此基因片段长 5 4 3bp ,开读框共有 15 6个碱基 ,编码 5 2个氨基酸 .该基因所编码的氨基酸序列对应于凡... 利用RT -PCR、嵌套PCR(NestedPCR)和 3′ -RACE等方法 ,从中国对虾血细胞中克隆到 1种抗菌肽基因片段 ,称为中国对虾肽 (Chp)基因 .此基因片段长 5 4 3bp ,开读框共有 15 6个碱基 ,编码 5 2个氨基酸 .该基因所编码的氨基酸序列对应于凡那对虾抗菌肽成熟肽的序列 ,与其一致性为5 2 - 5 9% ,相似性为 61- 73% ,分子量为 5 65 2 .4Da ,理论等电点为 9.76,带正点荷的氨基酸 (Arg -Lys)为 8个 ,不含带负电荷的氨基酸 .上述这些特征 (分子量较小 ,带正点荷 )均为抗菌肽的普遍特征 . 展开更多
关键词 抗菌肽 CDNA克隆 嵌套PCR 3'-race 中国对虾
下载PDF
一种苦荞主要过敏原基因cDNA的克隆及序列分析 被引量:12
3
作者 侯晓军 畅文军 +3 位作者 陈立钊 张政 刘知学 王转花 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期436-440,共5页
为了获得苦荞中主要过敏原的cDNA和由此推导的蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,以苦荞幼根根尖为材料 ,提取总RNA并反转录mRNA为cDNA第一链 .通过RT PCR、3′RACE、基因克隆及序列测定 ,获得一种苦荞主要过敏蛋白基因的cDNA片段 (GenBank... 为了获得苦荞中主要过敏原的cDNA和由此推导的蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,以苦荞幼根根尖为材料 ,提取总RNA并反转录mRNA为cDNA第一链 .通过RT PCR、3′RACE、基因克隆及序列测定 ,获得一种苦荞主要过敏蛋白基因的cDNA片段 (GenBank登录号为AY0 4 4918) .该cDNA片段由 76 8bp组成 ,包括 3′端非编码区 180个bp ,开放阅读框 5 88bp .可编码一个由 195个氨基酸残基组成的功能蛋白及一个终止密码 .苦荞主要过敏原基因与甜荞 2 2kD过敏蛋白、豆球类蛋白的核苷酸序列分别有 95 %和 93%的同源性 .其推导的氨基酸序列与甜荞球蛋白、刀豆蛋白、甜橙柠檬素分别有 93%、83%和 5 7%的同源性 .该过敏蛋白 183~ 188位氨基酸残基KEEEKE在多数不同过敏原中均存在 。 展开更多
关键词 苦荞 过敏原基因cDNA 克隆 序列分析 过敏蛋白 荞麦
下载PDF
糙皮侧耳子实体发育相关基因fst3的克隆及分析 被引量:10
4
作者 申进文 粱思思 +1 位作者 邱立友 戚元成 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期15-20,共6页
采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆出糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)子实体发育相关基因fst3全长,并对其进行NCBI保守域分析,用pEASY-E2原核... 采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆出糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)子实体发育相关基因fst3全长,并对其进行NCBI保守域分析,用pEASY-E2原核表达系统进行原核表达,结果表明:基因全长cDNA大小为2549bp,其中5’端非编码区62bp,3’端非编码区99bp,含有一个2388bp的开放阅读框(ORF),共编码795个氨基酸;该基因属于真菌转录因子MHR超家族基因,是一类编码转录调控蛋白的基因;在原核细胞中具有表达活性,fst3基因在双核菌丝期、原基期、子实体成熟期的表达量依次增强,子实体成熟期最强。 展开更多
关键词 糙皮侧耳 fst3 race 原核表达 半定量RT-PCR
下载PDF
Cloning and Expression of a Profilin Gene from Rapeseed 被引量:4
5
作者 叶秋 李旭锋 +3 位作者 徐莺 王劲 林娟 陈放 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第7期727-730,共4页
Profilin has recently been identified as an actin-binding protein in higher plants. A cDNA clone (designated Repro) encoding profilin gene was isolated from rapeseed ( Brassica napus L. cv. canadian Tween) using RT-PC... Profilin has recently been identified as an actin-binding protein in higher plants. A cDNA clone (designated Repro) encoding profilin gene was isolated from rapeseed ( Brassica napus L. cv. canadian Tween) using RT-PCR technique. Sequence analysis showed 82% similarity to Zea mays L. ZmPro3, 85% to Arabidopsis AthPRF1, 82% to Nicotiana tabacum L. NTPRO, 81% to Oryza sativa L. profilin A. A new full-length cDNA was obtained by 5'-RACE and 3'-RACE techniques. Sequence analysis showed that the size of full-length cDNA is 672 bp which contains a major open reading frame of 134 amino, acids, 5' and 3' untranslated regions and a long Poly (A) tail. Northern blot analysis showed that the profilin gene is a pollen and anther specific gene. 展开更多
关键词 profilin gene 3 '-race 5 '-race rapeseed pollen RT-PCR
下载PDF
无核荔枝花发育相关MADS-box基因的克隆及结构分析 被引量:7
6
作者 禤维言 李明芳 郑学勤 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第3期6-9,共4页
目的:克隆与无核荔枝花发育相关的MADS-box基因。方法:根据多种植物的MADS-box保守区及其C-端序列设计一对简并性引物,利用RT-PCR及3’-RACE的方法分离目的基因。结果:经同源分析,所克隆到的基因的cDNA序列包含有完整的MADS-box保守区... 目的:克隆与无核荔枝花发育相关的MADS-box基因。方法:根据多种植物的MADS-box保守区及其C-端序列设计一对简并性引物,利用RT-PCR及3’-RACE的方法分离目的基因。结果:经同源分析,所克隆到的基因的cDNA序列包含有完整的MADS-box保守区与半保守的K区,是典型的MADS-box家族基因,命名为LMADS1。结论:成功地克隆到一个与无核荔枝花发育相关的MADS-box基因,以便进一步研究其对无核荔枝花发育的调控作用。 展开更多
关键词 无核荔枝 花发育 MADS-BOX基因 RT-PCR 3′-race
下载PDF
燕麦β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ基因3′端cDNA的克隆及分析 被引量:3
7
作者 何江峰 韩冰 +2 位作者 郭慧琴 张占雄 赵雅丽 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第1期5-8,共4页
实验利用3'-RACE技术进行燕麦β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ(Oglc13Ⅱ)3'末端cDNA的快速扩增并进行序列分析.将0.01%的HgCl2诱导处理24h之后的燕麦(Avena Sativa)幼叶作为材料,利用RT-PCR技术得到Oglc13Ⅱ的部分cDNA片段,根据此片 段设计一... 实验利用3'-RACE技术进行燕麦β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ(Oglc13Ⅱ)3'末端cDNA的快速扩增并进行序列分析.将0.01%的HgCl2诱导处理24h之后的燕麦(Avena Sativa)幼叶作为材料,利用RT-PCR技术得到Oglc13Ⅱ的部分cDNA片段,根据此片 段设计一条特异性上游引物,反转录引物中的部分序列即3'sites Adaptor Primer作为下游引物,按3'RACE试剂盒(Takara)操作流程进行Oglc13Ⅱ3'末端cDN A的快速扩增,成功获取837bp的3'-RACE反应产物,通过BLAST技术,发现该片段与 许多植物β-1,3-葡聚糖酶基因具有较高的相似性(50.0%~72.0%).因此认为成功 克隆了Oglc13ⅡcDNA的3'末端序列. 展开更多
关键词 β-1 3-葡聚糖酶Ⅱ基因 RT-PCR 3'race CDNA
下载PDF
苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因cDNA片段的克隆及序列分析 被引量:3
8
作者 张燕子 马锋旺 +1 位作者 张军科 梁东 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期179-183,共5页
以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水... 以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水稻、番茄中DHAR基因序列的同源性均大于70%,证明所克隆到的核苷酸片段确为苹果DHAR基因cDNA片段。 展开更多
关键词 苹果 脱氢抗坏血酸还原酶 克隆 3'-race 序列分析
下载PDF
薏苡乙醇脱氢酶基因(ADH1)3’末端序列的克隆 被引量:7
9
作者 朱云芬 陈大清 李亚男 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2008年第1期52-54,共3页
采用3’-RACE技术,根据前一阶段已克隆的的薏苡(Coix lacrymajobi L.)乙醇脱氢酶基因(ADH1)cDNA片段(Accession DQ455071)设计特异性引物,克隆出556bp的乙醇脱氢酶3’末端cDNA序列,利用DNAMEN软件将获得序列与已知序列进行拼接,得到了1... 采用3’-RACE技术,根据前一阶段已克隆的的薏苡(Coix lacrymajobi L.)乙醇脱氢酶基因(ADH1)cDNA片段(Accession DQ455071)设计特异性引物,克隆出556bp的乙醇脱氢酶3’末端cDNA序列,利用DNAMEN软件将获得序列与已知序列进行拼接,得到了1个1234bp的cDNA序列。 展开更多
关键词 薏苡(Coix lacrymajobi L.) 乙醇脱氢酶基因1(ADH1) 3’-race
下载PDF
药用真菌猪苓溶血素基因克隆和序列分析 被引量:7
10
作者 宋超 郭顺星 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期690-697,共8页
利用3'-RACE-PCR方法首次从药用真菌猪苓中克隆得到与真菌形态发育相关的溶血素基因。结果表明,猪苓溶血素基因的全长cDNA为744bp,其中编码区占447bp,共编码148个氨基酸,推测其分子量约为15.79kDa,理论等电点为4.89。推定的猪苓溶... 利用3'-RACE-PCR方法首次从药用真菌猪苓中克隆得到与真菌形态发育相关的溶血素基因。结果表明,猪苓溶血素基因的全长cDNA为744bp,其中编码区占447bp,共编码148个氨基酸,推测其分子量约为15.79kDa,理论等电点为4.89。推定的猪苓溶血素蛋白具有与杨树菇溶血素类蛋白家族相同的结构域和功能位点,两者同源性为60%。系统进化树结果显示猪苓溶血素隶属于担子菌类群。实时荧光定量PCR分析结果表明在菌核形成初期猪苓溶血素基因表达量较高,且显著高于菌丝体中猪苓溶血素基因的转录水平,说明溶血素基因参与了猪苓菌核的形态发育。 展开更多
关键词 猪苓 溶血素 3'-race 实时荧光定量PCR 菌核
原文传递
草原龙胆MADS-box基因的克隆及表达分析 被引量:6
11
作者 徐启江 关录飞 +4 位作者 吴笑女 孙丽 谭文勃 聂玉哲 李玉花 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期415-429,共15页
植物MADS-box基因家族编码高度保守的转录因子,参与了包括花发育在内的多种发育进程。为阐释双子叶植物草原龙胆(Eustoma grandiflorum)花器官发育的分子调控机制,根据MADS-box基因保守序列设计简并引物,用3'-RACE方法从草原龙胆中... 植物MADS-box基因家族编码高度保守的转录因子,参与了包括花发育在内的多种发育进程。为阐释双子叶植物草原龙胆(Eustoma grandiflorum)花器官发育的分子调控机制,根据MADS-box基因保守序列设计简并引物,用3'-RACE方法从草原龙胆中克隆了4个花器官特异表达的MADS-box家族基因。序列和系统进化树分析表明,这4个基因分别与金鱼草DEF基因、矮牵牛FBP3基因和FBP6基因以及拟南芥SEP3基因具有很高的同源性,分别属DEF/GLO、AG-like和SEP-like亚家族。从而将这4个基因分别命名为EgDEF1、EgGLO1、EgPLE1和EgSEP3-1。推导的氨基酸序列显示,这些基因编码的蛋白质都包含高度保守的MADS结构域、I结构域和K结构域,每个基因均有其亚家族特异的C-末端功能域。基因特异性RT-PCR检测结果显示:EgDEF1在萼片、花瓣、雄蕊及胚珠中高丰度表达,在心皮中微量表达;而EgGLO1在花瓣和雄蕊中高丰度表达,在萼片中微量表达;在根、茎、叶等营养器官中均未检测到上述2个基因的表达。EgPLE1在雌蕊、心皮和胚珠中特异表达,但表达的丰度存在差异,在雄蕊中的表达有所减弱。SEP-like亚家族基因EgSEP3-1在四轮花器官和胚珠中均特异表达,且表达丰度相对一致。 展开更多
关键词 花器官发育 草原龙胆 MADS-BOX基因 3'-race
下载PDF
异育银鲫促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析 被引量:4
12
作者 曲宪成 杨艳红 刘颖 《上海水产大学学报》 CSCD 北大核心 2006年第2期129-135,共7页
利用RT-PCR、RACE及克隆等方法获得了异育银鲫促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因全长cDNA序列。该cDNA全长926 bp,5’端非编码区68 bp;3’端非编码区372 bp;开放阅读框(ORF)486 bp,编码161个氨基酸。经序列分析显示,其编码的氨基酸序列与金... 利用RT-PCR、RACE及克隆等方法获得了异育银鲫促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因全长cDNA序列。该cDNA全长926 bp,5’端非编码区68 bp;3’端非编码区372 bp;开放阅读框(ORF)486 bp,编码161个氨基酸。经序列分析显示,其编码的氨基酸序列与金鱼[Carassius auratus(goldfish)]、鲤(Cyprinus carpio)、鳙(Aristichthysnobilis)、斑马鱼(Danio rerio)、虹鳟(Salmo gaidnerii)、鲑(Salmo salar)、鳗鲡(Anguilla anguilla)具有较高的相似性,其相似性分别为91.3%、87.6%、83.2%、77%、58.6%、56.1%、43.55%,同源性较高,这说明TSHβ亚基在长期的进化中具有较高保守性。而且在比较中还发现:异育银鲫和其它7种鱼类相比在5’端多11个氨基酸序列,并且都含有定位保守的12个半胱氨酸残基和一个N糖基化位点。 展开更多
关键词 异育银鲫 促甲状腺激素β亚基 5’-race 3’.race
下载PDF
富有柿果实ACC合成酶3′末端的cDNA克隆 被引量:2
13
作者 马俊莲 唐霞 +1 位作者 张子德 王国英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期4-7,共4页
利用3′RACE的方法对柿果实ACC合成酶基因的3′末端进行扩增,扩增产物克隆到pMD18-T Vector载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选重组质粒,并对插入片段进行序列测定。结果表明,3′RACE产物长912 bp,开放阅读框内核苷酸序... 利用3′RACE的方法对柿果实ACC合成酶基因的3′末端进行扩增,扩增产物克隆到pMD18-T Vector载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选重组质粒,并对插入片段进行序列测定。结果表明,3′RACE产物长912 bp,开放阅读框内核苷酸序列编码251个氨基酸,此氨基酸序列含有ACC合成酶中3个高度保守区,GenBank中登录的DK-ACS1(登录号AB073005)序列只有一个的氨基酸不同。终止子后面的3′非编码区的长度为155 bp,其中只有一个核苷酸与DK-ACS1的3′序列非编码区不同。序列分析结果显示,克隆的片段含有5′端GSP Inner Primer和3′端为RACE Inner Primer的引物。 展开更多
关键词 柿果 富有 ACC合成酶 3race
下载PDF
新疆盐生植物猪毛菜逆向运输蛋白基因SaNHX1 3’-RACE的克隆及序列分析 被引量:3
14
作者 张雨良 罗淑萍 +3 位作者 杨峰山 魏岩 袁辉 郭长奎 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期511-516,共6页
以新疆盐生植物猪毛菜(Salsola collina Pall.)为材料提取总RNA,根据NHX1家族同源序列保守区设计1对简并引物,进行RT-PCR扩增,得到猪毛菜逆向运输蛋白基因cDNA中间一段619 bp序列。再用快速扩增cDNA 3’末端(3’RACE)方法,得到约1 000 b... 以新疆盐生植物猪毛菜(Salsola collina Pall.)为材料提取总RNA,根据NHX1家族同源序列保守区设计1对简并引物,进行RT-PCR扩增,得到猪毛菜逆向运输蛋白基因cDNA中间一段619 bp序列。再用快速扩增cDNA 3’末端(3’RACE)方法,得到约1 000 bp 3’末端序列。将两段序列进行拼接,得到猪毛菜长为1 585bp(Gen Bank登陆号为EU072932)的逆向运输蛋白基因(SaNHX1)cDNA序列,编码370个氨基酸,其编码序列、氨基酸序列与同科耐盐植物盐角草相应序列同源性为85%和87%,研究为进一步克隆猪毛菜NHX1全基因序列和研究其功能打下基础。 展开更多
关键词 猪毛菜 逆向运输蛋白 SaNHX1基因 3’-race 克隆
下载PDF
桑泛素延伸蛋白基因片段的克隆及序列分析 被引量:4
15
作者 王利芬 陈正凯 陆小平 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第4期6-10,共5页
目的:利用3’RACE技术克隆植物泛素基因,是进一步研究其功能的基础。方法:本研究从桑树(丰驰桑)(Morus bomby-cis)幼叶中提取总RNA,反转录成cDNA,根据已报道的泛素基因序列设计1条正向引物,利用3’RACE(Rapid Amplification of cDNAEnd... 目的:利用3’RACE技术克隆植物泛素基因,是进一步研究其功能的基础。方法:本研究从桑树(丰驰桑)(Morus bomby-cis)幼叶中提取总RNA,反转录成cDNA,根据已报道的泛素基因序列设计1条正向引物,利用3’RACE(Rapid Amplification of cDNAEnd)技术进行扩增。结果:扩增出1条690 bp的泛素基因片段。该片段5’端为编码156个氨基酸残基的阅读框,3’末端有219bp的非翻译区。结论:同源分析表明,此cDNA序列为泛素延伸蛋白基因(Genebank登录号为DQ839403)。用Genedoc软件对该片段编码的氨基酸序列进行同源性分析的结果表明:桑树泛素延伸蛋白与马铃薯、烟草、陆地棉、黄瓜的泛素延伸蛋白以及苜蓿的核糖体S27A蛋白的同源性都在96%以上。 展开更多
关键词 桑树 3race 泛素延伸蛋白基因 序列分析
下载PDF
茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化 被引量:4
16
作者 陈啸天 高丽萍 +3 位作者 赵磊 刘亚军 王云生 夏涛 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期707-713,共7页
儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基... 儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基因的1 944 bp的全长序列,开放阅读框区域为55~1 587 bp,编码510个氨基酸,推测其分子量为57.1 kDa,等电点为9.06。该基因重组至pET-32a(+)表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中温度诱导条件;利用钴离子吸附柱纯化了目的蛋白。该研究为开展F3’5’H酶的反应动力学、酶的器官组织定位等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 类黄酮3 5’-羟化酶 race 原核表达
下载PDF
骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因全序列RACE扩增方法的建立 被引量:2
17
作者 唐博 曹贵方 +1 位作者 杨银凤 王秀梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期151-156,共6页
为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 c... 为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 cDNA的3′末端序列;采用反向嵌套PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素cDNA的部分序列,设计了1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1cDNA的5′末端序列。结果显示,获得了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因的全序列。证实,RACE技术用于防御素基因的扩增是可行的。 展开更多
关键词 Β-防御素 3race 5’race 锚定PCR 反向嵌套PCR 骆驼
下载PDF
大麦黄矮病毒GPV株系基因组末端序列的克隆和分析 被引量:1
18
作者 张文蔚 成卓敏 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第1期102-107,共6页
利用5′RACE、3′RACE和RT-PCR完成了大麦黄矮病毒GPV株系5′和3′末端序列的克隆和分析。分析结果显示,GPV株系5′末端长302 nt,包含起始密码子ATG和长100 nt的5′UTR。与马铃薯卷叶病毒属其他病毒比较,5′UTR的长度差异大且不保守。3... 利用5′RACE、3′RACE和RT-PCR完成了大麦黄矮病毒GPV株系5′和3′末端序列的克隆和分析。分析结果显示,GPV株系5′末端长302 nt,包含起始密码子ATG和长100 nt的5′UTR。与马铃薯卷叶病毒属其他病毒比较,5′UTR的长度差异大且不保守。3′末端长328 nt,包含终止密码子TGA和长93 nt的3′UTR。比RPV3′UTR短74 nt,同源性为40%,但末端较为保守,与RPV3′UTR末端序列同源性达84.34%。 展开更多
关键词 大麦黄矮病毒GPV株系 5′race 3race 5′UTR 3′UTR
下载PDF
鼻咽癌细胞系CNE2中NPCEDRG基因mRNA剪接变异体分析 被引量:2
19
作者 侯德富 关勇军 +5 位作者 关瑞 万恂恂 李国庆 欧阳咏梅 余艳辉 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期841-850,共10页
NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克... NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克隆、鉴定,发现NPCEDRG基因至少有7个转录起始位点,其中NM_032316的TSS位于ATG上游-85 nt处,AF538150和AK094248的TSS位于-25 nt处;AF538150不存在第2外显子中6核苷酸序列(3'-TTGCAG-3')的缺失,其CDs为516 bp,编码1种由171个氨基酸组成的蛋白质(而非GenBank中公布的CDs为510 bp,1种由169个氨基酸组成的蛋白质).本研究成功克隆得到1种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CDs为297 bp,编码1种由98个氨基酸组成的蛋白质. 展开更多
关键词 NPCEDRG基因 mRNA剪接变异体 5'-race 3'-race RT-PCR
下载PDF
骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增 被引量:1
20
作者 杨银凤 唐博 +1 位作者 曹贵方 王永胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期264-268,共5页
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设... 获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 5’race 3race Β-防御素 骆驼
下载PDF
上一页 1 2 6 下一页 到第
使用帮助 返回顶部