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日本血吸虫中国大陆株23 kDa膜蛋白DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究 被引量：29
1
作者 任建功 朱荫昌 +7 位作者 D.A.Harn 余传信 殷旭仁 司进 何伟 徐明 华万全 许永良 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期336-339,F003,共5页
目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3kDa膜蛋白 (SjC2 3)DNA疫苗诱导C5 7BL/6小鼠免疫保护作用。方法　将全长的SjC2 3基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建DNA疫苗 pcDNA3.1 SjC2 3。制备SjC2 3及IL 12的两个亚单位 p35、p4 0的DNA疫... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3kDa膜蛋白 (SjC2 3)DNA疫苗诱导C5 7BL/6小鼠免疫保护作用。方法　将全长的SjC2 3基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建DNA疫苗 pcDNA3.1 SjC2 3。制备SjC2 3及IL 12的两个亚单位 p35、p4 0的DNA疫苗和对照 pcDNA3.1。 4 8只C5 7BL/6小鼠随机分为A、B、C 3组。A组小鼠肌注 10 0 μgpcDNA3.1;B组注射 10 0 μg pcDNA3.1 SjC2 3;C组肌注 pcDNA3.1 SjC2 3、pcDNA3.1 p35及pcDNA3.1 p4 0各 10 0 μg的混合物。每隔 2周各免疫 1次 ,共 3次。第 8周每鼠感染 4 5± 2条 /只尾蚴 ,4 5d后剖杀 ,计数成虫及肝内虫卵。采用免疫组化法检测SjC2 3及 p35、p4 0在小鼠局部组织内的表达 ;用脾细胞培养法检测经rSjC2 3 HD刺激后 ,攻击前、后小鼠脾细胞IL 2、IL 4、IL 10和IFN γ的水平。用Westernblotting检测血清中抗SjC2 3抗体。结果　SjC2 3以及p35、p4 0在免疫小鼠股四头肌细胞膜和细胞浆均获得表达。IL 2和IFN γ的水平攻击前、后在B组和C组均明显升高。Westernblotting检测抗SjC2 3抗体结果表明 ,免疫后两周 ,B组 8/10份血清为阳性 ,C组 9/10份血清阳性。B组和C组分别获得 2 6 .9%和 35 .4 %的减虫率 ,C组显著高于B组 (P <0 .0 5 ) ;减卵率分别为 2 2 .2 %和 2 8.4 %。 展开更多
关键词 日本血吸虫 23kda膜蛋白 DNA疫苗 保护性免疫
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日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白核酸疫苗对猪免疫保护作用的研究 被引量：25
2
作者 朱荫昌 任建功 +9 位作者 D.A.Harn 徐明 余传信 司进 叶萍 殷旭仁 何伟 许永良 曹国群 华万全1 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2002年第1期3-7,共5页
目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 (Sj C2 3) DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　构建并大量制备 pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA和 pc DNA3.1- p35 ,pc DNA3.1- p40(小鼠 IL - 12的 2个亚单位 )的 DNA疫苗。 30头 2 .5... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 (Sj C2 3) DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　构建并大量制备 pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA和 pc DNA3.1- p35 ,pc DNA3.1- p40(小鼠 IL - 12的 2个亚单位 )的 DNA疫苗。 30头 2 .5月龄的上海松江本地猪 (阉猪 )分为 A、B、C3组 ,每组 10头。 A组 (Sj C2 3组 )于每头猪两侧臀部肌肉注射 5 0 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA,B组 (Sj C2 3+IL- 12组 ) ,于每头猪肌肉注射 5 0 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3DNA及 5 0 0 μg pc DNA3.1- p35和 5 0 0μg pc DNA 3.1- p40的混和质粒 DNA ;C组 (对照组 )每头猪肌肉注射 5 0 0μg pc DNA3.1质粒DNA。共免疫 3次 ,每次间隔 3周。末次免疫后 30 d,每猪经背部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴 6 0 0条。攻击后 45 d剖杀 ,经胸主动脉灌冲 ,并从门静脉收集计算成虫。从肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 % KOH内消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 (EPG)。比较各组间减虫率、减雌率和减卵率。在免疫前 ,末次免疫后和攻击后从猪耳静脉采血 ,分离血清 ,用 EL ISA检测抗 Sj C2 3抗体。结果　Sj C2 3组与 Sj C2 3+IL - 12组与质粒对照组相比 ,分别获得 2 9.2 %和 5 8.6 %的减虫率、5 0 .8%和5 8.8%的减雌率以及 48.2 %和 5 6 .4% 展开更多
关键词 日本血吸虫 中国大陆株 23kda膜蛋白 核酸疫苗 猪 保护性免疫
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日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗保护性免疫及IL-12免疫佐剂作用的研究 被引量：19
3
作者 任建功 朱荫昌 +8 位作者 D.A.Harn 余传信 司进 殷旭仁 何伟 徐明 梁幼生 许永良 华万全 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第6期328-332,共5页
目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 (Sj C2 3) DNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫保护作用以及 IL- 12的免疫增强效果。方法　 5 6只 BAL B/ c雌性小鼠随机分为 A、B、C、D4组 ,每组 14只。 A组 (对照组 ) ,于每鼠两腿股四头肌... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 (Sj C2 3) DNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫保护作用以及 IL- 12的免疫增强效果。方法　 5 6只 BAL B/ c雌性小鼠随机分为 A、B、C、D4组 ,每组 14只。 A组 (对照组 ) ,于每鼠两腿股四头肌注射 10 0 μg pc DNA3.1质粒 DNA;B组 (Sj C2 3组 ) ,注射 10 0μg pc DNA 3.1- Sj C 2 3质粒 DNA;C组 (Sj C 2 3+IL - 12 DNA组 ) ,注射 10 0μg pc D-NA3.1- Sj C 2 3、10 0μg pc DNA 3.1- p35、10 0μg pc DNA3.1- p40质粒 DNA的混合液 ;D组 (Sj C2 3+r IL- 12蛋白组 ) ,免疫剂量同 Sj C2 3组。共免疫 3次 ,每次免疫间隔 2周 ,剂量和方法同第 1次。于末次免疫后 1个月 ,每鼠攻击感染 (4 5± 2 )条日本血吸虫中国大陆株尾蚴。但 D组的小鼠在攻击感染当天 ,及感染后第 2、4、6天经腹腔注射 0 .2 μg/鼠 r IL- 12蛋白。攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。于末次免疫后 2周对照组及 Sj C2 3组用 51 Cr释放法测定 Sj C 2 3介导的特异性细胞毒作用 ;用脾细胞培养法检测经重组日本血吸虫 2 3k Da膜蛋白亲水区大片段融合蛋白 (GST- HD)刺激后 ,在免疫后及攻击后小鼠脾细胞 IL - 2、IL - 4、IL - 10和 IFN -γ的水平。分别于攻击前后 2周经小鼠尾静脉采血 ,用 EL 展开更多
关键词 日本血吸虫 23kda膜蛋白 DNA疫苗 保护性免疫 白细胞介素12
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日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫 被引量：9
4
作者 李春艳 余龙江 +4 位作者 刘智 朱路 朱晓华 胡媛 石佑恩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期122-126,共5页
目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-... 目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 23K Da膜蛋白 脂肪酸结合蛋白 多价DNA疫苗 免疫保护
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日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白的基因克隆与序列分析 被引量：8
5
作者 朱荫昌 余传信 +1 位作者 殷旭仁 司进 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1997年第2期65-69,共5页
本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列，设计了一对引物，并通过聚合酶链反应（PCR）基因克隆技术，从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明，编码日本血吸虫中国大陆株Sj23... 本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列，设计了一对引物，并通过聚合酶链反应（PCR）基因克隆技术，从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明，编码日本血吸虫中国大陆株Sj23膜蛋白的基因含有657bp，与曼氏血吸虫Sm23的核着酸有79．5％的同源性，而与日本血吸虫菲律宾株的Sj23的同源性为100％。该研究为发展Sj23多肽疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫中国大陆株 23kda膜蛋白 基因克隆 DNA序列
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日本血吸虫SjC23 DNA疫苗基因枪免疫小鼠诱导免疫保护作用的研究 被引量：1
6
作者 赵松 朱荫昌 +7 位作者 D.A.Harn 司进 任建功 殷旭仁 何伟 梁幼生 徐明 许永良 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2004年第6期411-416,共6页
目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 DNA疫苗基因枪免疫诱导 BAL B/ c小鼠产生的抗血吸虫感染作用。方法　 6 0只雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 6组 :pc DNA3.1组 (对照组 ) ,每只小鼠用基因枪经腹部皮肤免疫 pc DNA3.1质粒 DNA... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 DNA疫苗基因枪免疫诱导 BAL B/ c小鼠产生的抗血吸虫感染作用。方法　 6 0只雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 6组 :pc DNA3.1组 (对照组 ) ,每只小鼠用基因枪经腹部皮肤免疫 pc DNA3.1质粒 DNA2次 ,共 2 μg;Sj C2 3基因枪 (gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA2 μg;Sj C2 3肌注 (im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA;Sj C2 3/ Cp G(gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA2 μg;Sj C2 3/Cp G(im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA;联合免疫组 ,每只小鼠先肌注 10 0μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA,第 2天用基因枪免疫 2 μg。各组小鼠隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周每鼠经腹部皮肤攻击感染 (45± 1)条日本血吸虫尾蚴 ,4 5 d后剖杀 ,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前 2天及感染前 2天经尾静脉采血检测 Ig G抗体水平及抗体亚类 Ig G1 、Ig G2 a。末次免疫后 3周检测脾细胞经 Con A和 r Sj C2 3- HD刺激后培养上清中鼠 IL- 2、IL- 4和 IFN- γ的水平。结果　 Sj C2 3(gg)组、Sj C2 3/ Cp G(gg)组及联合免疫组小鼠所检成虫数均低于对照组 (P均 <0 .0 1) 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 免疫刺激序列 DNA疫苗 23 kda膜蛋白 基因枪
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