酶抑制剂及其构效优化在阿尔茨海默病中的应用

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作者 储超扬 肖彪 +8 位作者 单江晖 陈是燏 张楚霞 周钰愉 方甜园 林志成 谢凯 徐淑君 李丽萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1510-1529,共20页

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变,而临床上缺乏有效治疗AD的药物。近些年来研究发现,多种酶抑制剂如胆碱酯酶抑制剂、单胺氧化酶抑制剂、分泌酶抑制剂等能... 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变,而临床上缺乏有效治疗AD的药物。近些年来研究发现,多种酶抑制剂如胆碱酯酶抑制剂、单胺氧化酶抑制剂、分泌酶抑制剂等能改善胆碱能系统的障碍、Aβ的产生和沉积、Tau蛋白的过度磷酸化、氧化应激损伤、突触可塑性下降等AD发生发展的不同环节,从而改善AD症状和认知功能。本文综述了近年来酶抑制剂或抑制剂构效优化靶向调节胆碱酯酶、单胺氧化酶、分泌酶等在AD治疗中的研究进展,以期为AD的治疗和药物研发提供新思路。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 乙酰胆碱酯酶抑制剂 单胺氧化酶抑制剂 β分泌酶抑制剂 γ分泌酶抑制剂 糖原合成酶激酶抑制剂 抑制剂构效优化

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NOTCH1/PI3K信号通路在T-ALL治疗中的研究进展 被引量：6

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作者 汤煜媛 李翔鹏 +1 位作者 黄羽 李彩霞 《医学综述》 2016年第5期877-881,共5页

急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）是进行性的血液系统恶性疾病,以T细胞克隆增生、积聚和组织浸润为特点,好发于儿童和青少年,占儿童急性淋巴细胞白血病的10%-15%。NOTCH1和磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路及... 急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）是进行性的血液系统恶性疾病,以T细胞克隆增生、积聚和组织浸润为特点,好发于儿童和青少年,占儿童急性淋巴细胞白血病的10%-15%。NOTCH1和磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路及两者之间通过下游靶基因和靶蛋白实现的交互作用在T-ALL发生和发展中扮演重要角色。随着对这两条信号通路的认识逐渐深入,NOTCH1和PI3K-Akt信号通路成为治疗T-ALL的新靶点。 展开更多

关键词 急性T淋巴细胞白血病 磷脂酰肌醇3-激酶 NOTCH1 γ分泌酶抑制剂

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γ-分泌酶抑制剂在乳腺癌治疗中的研究进展 被引量：1

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作者 贾辉 《沈阳医学院学报》 2023年第2期113-116,126,共5页

γ-分泌酶复合物是许多1型跨膜蛋白的关键水解酶。对于Notch受体的激活和靶基因转录的调节非常重要。Notch通路的异常激活和表达与包括乳腺癌等的许多肿瘤类型的发生和发展密切相关。本综述介绍了乳腺癌的治疗现状及研究进展、γ-分泌... γ-分泌酶复合物是许多1型跨膜蛋白的关键水解酶。对于Notch受体的激活和靶基因转录的调节非常重要。Notch通路的异常激活和表达与包括乳腺癌等的许多肿瘤类型的发生和发展密切相关。本综述介绍了乳腺癌的治疗现状及研究进展、γ-分泌酶复合物的基本情况、γ-分泌酶在Notch通路中的生物学功能和作用、过去5年中γ-分泌酶抑制剂在乳腺癌治疗中的进展、γ-分泌酶介导的乳腺癌的作用机制以及γ-分泌酶抑制剂的优缺点,提出了γ-分泌酶抑制剂进一步研究和发展的前景。 展开更多

关键词 γ-分泌酶抑制剂 乳腺癌 NOTCH通路

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DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及乙醛脱氢酶1、Notch信号通路受体和配体表达的影响 被引量：4

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作者 赵小芳 王红 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第15期5-8,共4页

目的观察γ-分泌酶抑制剂(GSIs)DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及结直肠癌肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)、Notch信号通路受体Notch4、Notch信号通路配体DLL1表达的影响。方法体外培养HT-29细胞,取对数生长期细胞用于实验。分别以0、... 目的观察γ-分泌酶抑制剂(GSIs)DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及结直肠癌肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)、Notch信号通路受体Notch4、Notch信号通路配体DLL1表达的影响。方法体外培养HT-29细胞,取对数生长期细胞用于实验。分别以0、5、10、20、40、80μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24、48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT比色法检测细胞增殖能力(以OD值表示)。分别以0、20、40μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24 h后,采用RT-PCR法检测细胞中的ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA,分别采用Western blotting法和免疫组化法检测ALDH1、Notch4、DLL1蛋白。分析HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA及蛋白表达的相关性。结果DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用呈一定剂量、时间依赖性,40、80μmol/L浓度组培养48、72 h时细胞增殖能力低于培养24 h时(P均<0.05)。DAPT处理后的细胞形态出现典型凋亡状态改变。20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA相对表达量低于0μmol/L组(P均<0.05)。0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。免疫组化染色图像分析结果示,0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白表达OD值依次降低(P均<0.05)。HT-29细胞中ALDH1、DLL1 mRNA表达与Notch4 mRNA表达均呈正相关关系(r分别为0.997、0.998,P均<0.05)。HT-29细胞中ALDH1、DLL1蛋白表达与Notch4蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.998、0.999,P均<0.05)。结论 DAPT作用后,细胞增殖受到抑制,细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA和蛋白表达下调;DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用可能与降低肿瘤干细胞特性、下调Notch信号通路受体与配体表达实现的。 展开更多

关键词 结肠癌 HT-29细胞 γ-分泌酶抑制剂 (2S)-N-N-(3 5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯 肿瘤干细胞 乙醛脱氢酶1 NOTCH信号通路 NOTCH4 DLL1

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Notch1信号通路与急性T淋巴细胞白血病关系的研究进展 被引量：3

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作者 秦永亮 李永军 史敏 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1067-1069,共3页

急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)是一类预后不良的恶性淋巴细胞增殖性疾病,是我国儿童和青少年常见的恶性疾病之一,现阶段主要采取化疗的方式予以治疗。近年来,传统的化疗手段与效果取得了显著改善,但仍存在诸多问题,例如化疗药物抵抗的患... 急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)是一类预后不良的恶性淋巴细胞增殖性疾病,是我国儿童和青少年常见的恶性疾病之一,现阶段主要采取化疗的方式予以治疗。近年来,传统的化疗手段与效果取得了显著改善,但仍存在诸多问题,例如化疗药物抵抗的患者预后差、化疗毒副作用明显、缺乏敏感的生物标记物判断预后等。T-ALL的发病机制有待于进一步研究,开发新的有效药物与更合理的用药方式迫在眉睫。近些年的研究表明Notch1信号通路的异常激活与T-ALL的发生与发展存在紧密的联系,这使得T-ALL发生、发展与治疗的Notch1机制逐渐成为研究的新热点。本文就Notch1与T-ALL的发生与发展以及针对Notch1的潜在的治疗手段进行综述。 展开更多

关键词 白血病 T细胞 NOTCH1 γ分泌酶抑制剂 白藜芦醇

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γ-分泌酶抑制剂DAPT对哮喘小鼠气道炎症的调控作用分析 被引量：3

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作者 辛娜 李敬梅 +2 位作者 王永峰 陈婕 王瑶 《临床医学研究与实践》 2017年第20期4-5,共2页

目的探究γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对哮喘小鼠气道炎症的调控作用。方法选择健康C57BL/6雌性小鼠120只,随机分成4组,每组30只,分别为健康对照组、哮喘模型组、二甲基亚砜(DMOS)溶剂对照组、DAPT组。除健康对照组,剩余3组小鼠创建哮喘模型。... 目的探究γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对哮喘小鼠气道炎症的调控作用。方法选择健康C57BL/6雌性小鼠120只,随机分成4组,每组30只,分别为健康对照组、哮喘模型组、二甲基亚砜(DMOS)溶剂对照组、DAPT组。除健康对照组,剩余3组小鼠创建哮喘模型。DAPT组在末次激发前0.5 h经气道使用DAPT,DMSO溶剂对照组给予相同体积的DMSO,健康对照组给予相同体积的生理盐水,哮喘模型组不给予任何处理。末次激发1 d后,脱颈法处死所有小鼠,收集气道内灌洗液(BALF),测定BALF内Th1/2细胞因子变化情况,对BALF中各种炎性细胞进行计数。结果健康对照组、哮喘模型组、DMOS溶剂对照组和DAPT组小鼠BALF内的IL-4和IFN-γ水平,白细胞总数、淋巴细胞计数、嗜酸性粒细胞计数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPT可一定程度纠正哮喘小鼠的免疫偏倚现象,减少肺组织炎性细胞浸润比例,是治疗哮喘的新药物,值得进一步深入研究。 展开更多

关键词 支气管哮喘 γ-分泌酶抑制剂 NOTCH信号通路

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引起阿尔茨海默病的γ-分泌酶作用机制 被引量：1

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作者 张锦巍 井丽娟 +2 位作者 孙亚平 李聪 董贵成 《生物技术世界》 2012年第12期8-10,共3页

γ-分泌酶剪切C99形成的Aβ在脑中的聚集认为是阿尔茨海默病的元凶,.GXGD结构域",含水腔隙"的发现使得对γ-分泌酶有了进一步认识。本文对γ-分泌酶的结构、作用机制及其抑制剂的研究做综述。

关键词 阿尔茨海默病 γ-分泌酶 GXGD结构域 含水腔隙 γ-分泌酶抑制剂

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芳基磺胺类γ-分泌酶抑制剂的三维定量构效关系研究 被引量：2

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作者 葛燕丽 张兵 +2 位作者 程瑾 姜凤超 巨修练 《计算机与应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期475-479,共5页

阿尔茨海默病的主要病理特征之一是β-淀粉样蛋白沉积,γ-分泌酶是β-淀粉样蛋白生成的关键性酶,因而成为开发阿尔茨海默病治疗药物的重要靶点。采用比较分子场分析法(CoMFA)研究一系列芳基磺胺类γ-分泌酶抑制剂的三维定量构效关系(3D-... 阿尔茨海默病的主要病理特征之一是β-淀粉样蛋白沉积,γ-分泌酶是β-淀粉样蛋白生成的关键性酶,因而成为开发阿尔茨海默病治疗药物的重要靶点。采用比较分子场分析法(CoMFA)研究一系列芳基磺胺类γ-分泌酶抑制剂的三维定量构效关系(3D-QSAR),建立CoMFA模型。所得模型的交叉验证相关系数(q^2)为0.580,非交叉验证相关系数(r^2)为0.970,标准偏差(s)为0.154,表明模型可靠性高、预测能力强。建立的模型可为设计高活性、高选择性的γ-分泌酶抑制剂提供理论依据。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 γ-分泌酶抑制剂 定量构效关系 比较分子场分析法

原文传递

体外脂肪变L02细胞Notch家族和脂质代谢变化研究 被引量：1

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作者 吴伟杰 陈源文 +1 位作者 丁雯瑾 范建高 《实用肝脏病杂志》 CAS 2021年第5期653-656,共4页

目的探讨脂肪变肝细胞Notch基因水平变化及其对脂质代谢的影响。方法使用棕榈酸(PA)处理人L02细胞,构建体外脂肪变性细胞模型,采用不同浓度(0 mM、0.1 mM、0.25 mM和0.5mM)PA处理,并在0.25mM PA处理细胞,给予不同浓度(0μM、1μM、2μM... 目的探讨脂肪变肝细胞Notch基因水平变化及其对脂质代谢的影响。方法使用棕榈酸(PA)处理人L02细胞,构建体外脂肪变性细胞模型,采用不同浓度(0 mM、0.1 mM、0.25 mM和0.5mM)PA处理,并在0.25mM PA处理细胞,给予不同浓度(0μM、1μM、2μM、5μM和10μM)的γ分泌酶抑制剂(DAPT)干预L02细胞24 h,分别以0mM PA为对照组和0μM DAPT为模型组,采用实时定量PCR法检测Notch家族中Notch1、-2、-3及其下游Hes-1和Hey-1mRNA水平,采用比色法测定细胞谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)水平。结果在0.25 mM和0.5 mM PA处理组,细胞Notch3 mRNA水平分别为(0.6±0.2)和(0.4±0.1),显著低于对照组【(1.0±0.1),P<0.01】,Hes-1 mRNA水平分别为(1.7±0.2)和(1.5±0.1),显著高于对照组【(1.0±0.1),P<0.01】;培养上清AST水平分别为(6.7±2.6)U/L和(12.4±1.6)U/L,显著高于对照组【(2.4±0.1)U/L,P<0.05】,ALT水平分别为(5.7±0.8)U/L和(10.3±0.7)U/L,显著高于对照组【(2.2±0.3)U/L,P<0.01】;细胞TG水平分别为(0.4±0.04)mmol/g和(0.4±0.04)mmol/g,显著高于对照组【(0.2±0.02)mmol/g,P<0.01】;在0.5mM PA处理组,细胞Notch1 mRNA、TC和FFA水平分别为(1.9±0.1)、(1.2±0.4)mmol/g和(0.07±0.004)mmol/g,显著高于对照组【分别为(1.0±0.1)、(0.2±0.02)mmol/g和(0.02±0.001)mmol/g,P<0.01】;采用不同浓度DAPT干预0.25mM PA处理细胞24 h,其中在2μM DAPT处理组,细胞Hes-1 mRNA、Hey-1 mRNA、培养上清AST和细胞TG水平分别为(0.5±0.1)、(0.6±0.3)、(6.4±2.9)U/L和(0.03±0.01)mmol/g,在5μM DAPT处理组分别为(0.4±0.2)、(0.6±0.1)、(7.3±1.3)U/L和(0.04±0.01)mmol/g,在10μM DAPT处理组分别为(0.3±0.2)、(0.4±0.1)、(4.9±0.7)U/L和(0.02±0.01)mmol/g,均显著低于模型组【分别为(1.0±0.1)、(1.0±0.04)、(12.2±0.3)U/L和(0.07±0.01)mmol/g,P<0.01】;在10μM DAPT干预细胞,TC水平为(0.2±0.03)mmol/g,显著高于模型组【(0.1±0.02)mmol/g,P<0.01】。结论通过抑制Notch� 展开更多

关键词 L02肝细胞 Notch家族 γ-分泌酶抑制剂 棕榈酸 体外

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应用GSI药物阻断Notch-1通路对骨肉瘤小鼠模型肿瘤生长及血管形成的影响 被引量：1

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作者 侯晓 李纯璞 +4 位作者 郭冬梅 倪梅 陈丽 程雪梅 张开刚 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第19期1808-1812,共5页

[目的]研究Notch-1通道阻断剂γ分泌酶抑制剂(gamma-secretase inhibitor,GSI)在抑制骨肉瘤小鼠模型中肿瘤增长以及其抑制肿瘤血管生成作用,进而探讨Notch-1信号通路在小鼠骨肉瘤模型中的作用及其作用机制。[方法]建立人骨肉瘤荷瘤SCID... [目的]研究Notch-1通道阻断剂γ分泌酶抑制剂(gamma-secretase inhibitor,GSI)在抑制骨肉瘤小鼠模型中肿瘤增长以及其抑制肿瘤血管生成作用,进而探讨Notch-1信号通路在小鼠骨肉瘤模型中的作用及其作用机制。[方法]建立人骨肉瘤荷瘤SCID小鼠模型,将荷瘤成功后小鼠随机分为三组,实验组肿瘤内注射Notch通路阻断药物GSI,对照组注射PBS和DMSO。研究各组小鼠生物学指标、肿瘤增长变化及肿瘤组织检测微血管密度(microvessel density,MVD)的表达情况与差异。[结果]处死小鼠测量瘤体,同对照组相比,GSI治疗组小鼠的生物学指标明显较好,其小鼠的体重、饮食、睡眠、运动情况、精神状态、对刺激的反应及小鼠的皮毛光泽度等优于对照组,其皮下肿瘤体积明显较小,实验组平均体积为(196.3 mm3)较DMSO对照组平均体积(650.3 mm3)及PBS对照组平均体积(694.6 mm3)明显缩小,差别具有统计学意义,P<0.01。实验组及对照组内瘤体切片内血管均见不同程度的CD31表达,其表达于血管内皮细胞内,与对照组相比实验组CD31表达均明显降低,实验组及PBS、DMSO对照组CD31平均秩次分别为4.03、28.9和32.5,P<0.05,差异具有统计学意义。[结论](1)证实GSI可抑制SCID小鼠骨肉瘤动物模型肿瘤的生长;(2)GSI对SCID小鼠骨肉瘤动物模型的治疗作用可通过抑制Notch通路进而干预肿瘤血管形成来实现;(3)应用GSI药物阻断Notch信号通路有望成为骨肉瘤抗肿瘤治疗的新方法。 展开更多

关键词 骨肉瘤 Notch信号转导通路 血管生成 γ-分泌酶抑制剂

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γ-分泌酶抑制剂对骨肉瘤细胞的作用 被引量：1

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作者 陈虎 郭卫春 +1 位作者 戢鹏 余铃 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期832-834,共3页

目的观察Notch通路抑制剂对骨肉瘤细胞U20S的作用。方法常规培养U20S细胞，应用R04929097处理U20S细胞，通过细胞计数试剂盒（CCK-8）法观察R04929097对U20S细胞的毒性作用，通过流式细胞仪检测R04929097对U20S细胞周期的影响及诱导凋... 目的观察Notch通路抑制剂对骨肉瘤细胞U20S的作用。方法常规培养U20S细胞，应用R04929097处理U20S细胞，通过细胞计数试剂盒（CCK-8）法观察R04929097对U20S细胞的毒性作用，通过流式细胞仪检测R04929097对U20S细胞周期的影响及诱导凋亡的作用。结果CCK-8检测结果显示不同浓度R04929097对U20S细胞有明显的抑制作用，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），流式细胞检测结果显示R04929097能促进U20S细胞凋亡而不影响细胞周期。结论Notch通路抑制剂可诱导U20S凋亡。 展开更多

关键词 U2OS细胞株 γ-分泌酶抑制剂 骨肉瘤

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γ-分泌酶抑制剂对体外培养的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Notch信号通路相关蛋白表达的影响 被引量：1

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作者 冯东凡 范东旭 +5 位作者 金松 韩梅 杨婷 刘彦东 王凯峰 孙瑶 《中国医药导报》 CAS 2017年第6期24-27,共4页

目的探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对体外培养糖尿病(DM)大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Notch信号通路相关蛋白表达的影响。方法体外培养DM大鼠VSMCs,随机分为两组:正常培养基组(con组)、加入不同浓度(0.15、2.50、7.50μmol/L)DAPT的培养基组... 目的探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对体外培养糖尿病(DM)大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Notch信号通路相关蛋白表达的影响。方法体外培养DM大鼠VSMCs,随机分为两组:正常培养基组(con组)、加入不同浓度(0.15、2.50、7.50μmol/L)DAPT的培养基组(实验组),72 h后收集细胞,分别用双向电泳方法和Western blot法检测Notch1、Notch3、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4蛋白的表达。结果 (1)双向电泳图谱证实提取的蛋白中含有目的蛋白。(2)Western blot检测结果显示:随DAPT浓度的增加,Nocth1、Nocth3、Nocth4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4各蛋白的表达均递减;7.50μmol/L组与对con组比较,差异有高度统计学意义(P<0.01);0.15、1.25μmol/L组与con组比较,差异有统计学意义(P<0.05);0.15、1.25μmol/L组与7.50μmol/L组比较,差异有统计学意义(P<0.05);0.15μmol/L组与1.25μmol/L组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DAPT作用于体外培养的DM大鼠VSMCs后,使其Notch信号通路相关蛋白表达减少,在一定浓度范围内(1.25~7.50μmol/L)呈浓度依赖性。 展开更多

关键词 NOTCH信号通路 γ-分泌酶抑制剂 血管平滑肌细胞 双向电泳

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新型γ-分泌酶抑制剂的设计与合成

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作者 鄢浩 李娟 +1 位作者 鄢嘉 姜凤超 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期784-788,共5页

目的通过在数据库中虚拟筛选,以期发现新的γ-分泌酶抑制剂。方法在MDL数据库中以γ-分泌酶抑制剂药效团模型为条件进行搜寻、设计并合成了一系列化合物。结果所设计的目标化合物均经类药性分析,具有类药性;合成的化合物结构均经IR、1H-... 目的通过在数据库中虚拟筛选,以期发现新的γ-分泌酶抑制剂。方法在MDL数据库中以γ-分泌酶抑制剂药效团模型为条件进行搜寻、设计并合成了一系列化合物。结果所设计的目标化合物均经类药性分析,具有类药性;合成的化合物结构均经IR、1H-NMR及13C-NMR等验证。结论设计并合成的新的γ-分泌酶抑制剂经药效团模型预测,具有更高的预测活性。其中最佳化合物的预测活性值为0.025 nmol/L,可作为先导化合物进一步研究。 展开更多

关键词 药效团模型 γ-分泌酶抑制剂 虚拟筛选 药物合成

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γ分泌酶抑制剂对乏氧环境下骨肉瘤细胞增殖及侵袭力影响的实验研究分 被引量：5

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作者 王淼 袁冰 +4 位作者 刘平 李贺伟 刘洋 邹利军 郭朗 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2019年第2期10-14,共5页

目的探讨乏氧状态下分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitors,DAPT)介导Notch1信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖、凋亡、侵袭、转移的影响及相关机制。方法以骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,分为正常组(NC)、乏氧组(Hypoxia)和含有DAPT的乏... 目的探讨乏氧状态下分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitors,DAPT)介导Notch1信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖、凋亡、侵袭、转移的影响及相关机制。方法以骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,分为正常组(NC)、乏氧组(Hypoxia)和含有DAPT的乏氧组作为实验组(Hypoxia+DAPT)。采用流式细胞仪检测处理后的细胞周期,CCK-8方法检测细胞的增殖能力,并使用Western Blot检测MG-63细胞株中Notch1、HIF-1、Hes-1蛋白的表达情况,通过Transwell实验来验证其转移能力。同时探讨DAPT在乏氧环境下对细胞增殖和细胞周期方面的影响,分析其介导的Notch1下调情况及其抑制乏氧对MG-63细胞的促增殖作用。结果与正常组相比较,乏氧组细胞的增殖能力及侵袭能力均较正常组有显著的提升,差异具有统计学意义(<0.05)。而实验组与乏氧组相比较,分泌酶抑制剂(DAPT)能显著降低其增殖及侵袭能力(<0.05)。Western Blot结果显示,与正常组相比,乏氧组和实验组均可上调Notch1、HIF-1、Hes-1相关蛋白的表达;但是与乏氧组对比,实验组可显著下调Notch1、HIF-1、Hes-1蛋白的表达水平(<0.05)。流式细胞仪结果显示:与正常组相比,乏氧组和实验组均可促进细胞由G1期转向G2期;而与乏氧组对比,实验组可显著抑制细胞由G1期转向G2期,使细胞周期停滞,差异具有统计学意义(<0.05)。增殖实验结果显示,与正常组相比,乏氧组和实验组均可促进细胞增殖;而与乏氧组对比,实验组可显著抑制细胞增殖,差异具有统计学意义(<0.05)。结论分泌酶抑制剂可通过下调Notch1通路显著抑制乏氧状态下骨肉瘤细胞株MG-63的增殖与侵袭,阻断Notch1表达可能是潜在的治疗骨肉瘤的机制之一。 展开更多

关键词 γ分泌酶抑制剂(DAPT) 乏氧环境 Notch1信号通路 骨肉瘤 细胞增殖

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γ-分泌酶抑制剂对毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞效率的影响

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作者 杜伟斌 全仁夫 +5 位作者 郑宣 李强 曹国平 庄伟 邵荣学 杨迪生 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期949-952,共4页

目的观察Notch信号通路的特异性阻断剂——γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对毛囊干细胞（rHFSCs）诱导分化为血管内皮细胞（ECs）效率的影响。方法运用改良的rHFSCs分离培养、纯化鉴定的方法得到种子细胞，并用透射电镜观察其内部结构。用10... 目的观察Notch信号通路的特异性阻断剂——γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对毛囊干细胞（rHFSCs）诱导分化为血管内皮细胞（ECs）效率的影响。方法运用改良的rHFSCs分离培养、纯化鉴定的方法得到种子细胞，并用透射电镜观察其内部结构。用10恤晷／L血管内皮生长因子165（VEGF165）作为诱导因子进行诱导，流式细胞仪检测分化效率。用不同浓度DAPT（0．5、1．0μmol／L）进行抑制，将他们分为诱导组和抑制组。两组细胞均处理1周，用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）和Western blot法分别检测两组CD31、血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）mRNA和蛋白表达，联合DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil—gc—LDL）吞噬功能检测和体外成血管实验形成实验进行对比，综合评价DAPT在抑制Notch信号通路后对rHFSCs诱导分化为ECs的影响。结果改良分离、培养、纯化的rHFSCs克隆能力好，活力强。流式细胞仪检测β1、α6整合素、细胞角蛋白15（CK15）、p63呈高表达，分别为98．9％、97．9％、68．1％和98．5％；低弱表达CD31、VE—cadherin，分别为13．6％和17．9％；透射电镜显示细胞处于原始状态。诱导1周后，流式细胞仪检测高表达内皮细胞标志物CD31和VE—cadherin，分别为61．5％和95．9％。抑制Notch信号通路后两组FQ-PCR结果显示，CD31变化差异无统计学意义（P=0．136）、VE-cadherinmRNA变化差异有统计学意义（P=0．003），Western blot法得到CD31、VE-cadherin蛋白表达明显降低（P=0．000），体外Dil—ac-LDL吞噬功能，成血管形成能力明显减弱。结论DAPT通过阻断Notch信号通路，虽没有显著影响CD31、VE—cadherinmRNA水平，但能较好抑制CD31、VE-cadherin蛋白表达，体外吞噬和成血管的能力，从而减低rHFSCs诱导分化为ECs的效率。 展开更多

关键词 毛囊干细胞 γ-分泌酶抑制剂DAPT NOTCH信号通路 血管内皮细胞 诱导 抑制

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Notch信号通路调控上皮-间质转化影响膀胱癌侵袭性和耐药性 被引量：13

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作者 刘志欢 王义兵 +4 位作者 王共先 黄亮 郎斌 许晓源 傅斌 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第2期145-151,共7页

目的体外探讨Notch信号通路对膀胱癌细胞侵袭性与耐药性的影响及分子机制。方法采用Notch信号通路受体完全阻断剂(γ分泌酶抑制剂)处理膀胱癌T24、5637和J82细胞48 h后,倒置显微镜观察膀胱癌细胞增生及形态;用RT-PCR和Western blot在mRN... 目的体外探讨Notch信号通路对膀胱癌细胞侵袭性与耐药性的影响及分子机制。方法采用Notch信号通路受体完全阻断剂(γ分泌酶抑制剂)处理膀胱癌T24、5637和J82细胞48 h后,倒置显微镜观察膀胱癌细胞增生及形态;用RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测上皮-间质转化(EMT)分子标志物E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Alpha-smooth muscle actin的表达;MTT、Transwell检测膀胱癌细胞耐药性及侵袭能力。结果完全阻断Notch信号通路后,镜下显示膀胱癌细胞形态变小,细胞分散;EMT分子标志物E-cadherin mRNA和蛋白水平表达上调(P<0.05),N-cadherin、vimentin、Alpha-smooth muscle actin mRNA和蛋白水平表达下调(P<0.05);膀胱癌细胞T24、5637和J82增殖明显被抑制(P<0.05);膀胱癌细胞T24、5637和J82穿过微孔膜的细胞数明显减少(P<0.05)。结论 Notch信号通路可通过调控EMT的变化而改变膀胱癌的侵袭性与耐药性。 展开更多

关键词 膀胱癌 NOTCH信号通路 上皮-间质转化 γ分泌酶抑制剂

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γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响 被引量：9

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作者 王燕芹 李新新 +3 位作者 薛海波 纪洪 孙大康 马蕾 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期801-807,共7页

目的探讨γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响.方法将45只健康雄性SPF级BALB/c小鼠按照简单随机抽样法等分为对照组、模型组和干预组,模型组和干预组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏6... 目的探讨γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响.方法将45只健康雄性SPF级BALB/c小鼠按照简单随机抽样法等分为对照组、模型组和干预组,模型组和干预组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏62.5 mg,干预组还在外用咪喹莫特后立即接受γ分泌酶抑制剂(DAPT)10 mg/kg腹腔注射,每日1次;对照组仅每日外涂等剂量白凡士林.共处理6d,采用银屑病皮损严重程度指数(PASI)评估皮损变化.第7天麻醉小鼠心脏取血,取脾脏及皮肤组织,制备单细胞悬液,比较计算各组小鼠脾指数,苏木精-伊红染色观察皮肤组织病理学改变.流式细胞仪检测脾脏及皮肤组织中γδT17细胞比例,实时定量反转录PCR检测脾细胞悬液中Hes1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验检测血清中白细胞介素17A(IL-17A)含量.采用单因素方差分析和重复测量的方差分析比较各组间指标差异,Pearson相关分析评价不同指标间的相关性.结果末次处理24h后,肉眼观察显示,干预组小鼠银屑病样皮炎改变明显轻于模型组,PASI显著低于模型组,且表皮增厚及真皮炎细胞浸润程度明显轻于模型组.模型组小鼠脾指数(12.534±1.636)、脾脏(24.659%±4.603%)及皮肤组织γδT17细胞比例(22.127%±5.670%)、脾脏Hes1 mRNA表达水平(4.867±0.543)、血清IL-17A含量[(22.478±2.776)ng/L]均明显高于对照组(P<0.01);干预组上述指标分别为9.449±1.040、14.966%±5.770%、13.631%±5.946%、2.541±0.347、(18.639±1.816)ng/L,均显著低于模型组(P<0.01).模型组及干预组小鼠脾脏γδT17细胞比例与血清IL-17A含量均呈正相关(r值分别为0.56和0.53,均P<0.05),皮损γδT17细胞比例与PASI均呈正相关(r值分别为0.56和0.52,均P<0.05),脾脏Hes1 mRNA表达水平与γδT17细胞比例(r值分别为0.61和0.58)、血清IL-17A含量(r值分别为0.60和0.54)均呈正相关(P<0.05).结论γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路 展开更多

关键词 银屑病 淀粉样前体蛋白分泌酶类 受体 NOTCH Th17细胞 白细胞介素17 HES1 γδT17细胞 γ分泌酶抑制剂

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丹参酮ⅡA联合DAPT对UUO模型大鼠肾组织 Notch/Jagged通路相关蛋白表达的影响 被引量：9

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作者 冯定浩 李均 +1 位作者 徐静雅 张力之 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期826-831,共6页

目的观察丹参酮ⅡA配伍γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸-t-丁酯(DAPT)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾组织Notch/Jagged通路相关蛋白NICD、Hey1、Rbp-Jk及ColⅠ表达的影响,探讨其防治肾纤维化的分子机制。方法取2... 目的观察丹参酮ⅡA配伍γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸-t-丁酯(DAPT)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾组织Notch/Jagged通路相关蛋白NICD、Hey1、Rbp-Jk及ColⅠ表达的影响,探讨其防治肾纤维化的分子机制。方法取24只大鼠结扎右侧输尿管建立UUO模型,随机分为模型组、丹参酮ⅡA组、DAPT组、配伍组,每组6只。另取6只大鼠设为正常组。正常组及模型组给予羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,其余各给药组分别给予丹参酮ⅡA(25 mg/kg)、DAPT(12 mg/kg)、丹参酮ⅡA(25 mg/kg)+DAPT(12 mg/kg)灌胃,2周后处死大鼠取右肾组织。采用Masson染色观察肾组织胶原纤维,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织NICD、Hey1表达,Western Blot技术检测各组大鼠肾组织Rbp-Jk、ColⅠ表达。结果与正常组比较,模型组Masson染色评分升高(P<0.05),NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组Masson染色评分、NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均降低(P<0.05)。与丹参酮ⅡA组及DAPT组比较,配伍组Masson评分、NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA配伍DAPT可改善UUO模型肾间质病理损害,减轻肾纤维化过程中胶原纤维合成沉积,其机制可能与抑制NICD、Rbp-Jk、Hey1及ColⅠ在肾组织中的表达,影响Notch/Jagged信号途径转导相关。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA γ-分泌酶抑制剂 配伍 肾间质纤维化

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γ-促分泌酶抑制剂对哮喘小鼠肺组织COX-2与NF-κB表达的影响 被引量：8

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作者 席洪刚 陈泽权 《解剖科学进展》 2016年第1期54-56,共3页

目的探讨γ-促分泌酶抑制剂对哮喘模型小鼠肺组织环氧合酶-2(COX-2)与核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。用卵蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型。免疫组织... 目的探讨γ-促分泌酶抑制剂对哮喘模型小鼠肺组织环氧合酶-2(COX-2)与核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。用卵蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型。免疫组织化学方法和ELISA方法检测各组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达。结果哮喘组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达水平显著高于正常对照组(P<0.01),但是在应用γ-促分泌酶抑制剂处理后,哮喘组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达水平显著下调(P<0.01)。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达。 展开更多

关键词 哮喘 NOTCH γ-促分泌酶抑制剂 环氧合酶-2 核转录因子-ΚB 小鼠

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γ分泌酶抑制剂MW167致呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞中GATA3降低 被引量：7

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作者 刘良宵 吴福玲 +1 位作者 张雪静 王海英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1035-1039,共5页

目的研究γ促分泌酶抑制剂(GSI)MW167阻断Notch信号后,呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC)中GATA结合蛋白3(GATA3)的变化。方法募集RSV毛细支气管炎30例,正常组25例。分离PBMC,分为正常对照组、RSV组、MW167处... 目的研究γ促分泌酶抑制剂(GSI)MW167阻断Notch信号后,呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC)中GATA结合蛋白3(GATA3)的变化。方法募集RSV毛细支气管炎30例,正常组25例。分离PBMC,分为正常对照组、RSV组、MW167处理组。ELISA检测培养细胞上清液中白细胞介素4(IL-4)水平,实时荧光定量PCR检测细胞中GATA3 mRNA水平,Western blot法检测细胞中Notch1胞内结构域(NICD)及GATA3蛋白的表达。结果与RSV组相比,MW167处理组IL-4水平降低,GATA3 mRNA、NICD及GATA3蛋白水平均显著降低。结论 GSI阻断Notch信号通路,可降低GATA3的水平。 展开更多

关键词 GATA结合蛋白3(GATA3) 毛细支气管炎 NOTCH信号通路 γ促分泌酶抑制剂 TH2细胞

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